分光光度法測(cè)定水果蔬菜及藥物中vc課件

1、分光光度法測(cè)定水果蔬菜及藥物中vc2022/7/24分光光度法測(cè)定水果蔬菜及藥物中vc一、背景知識(shí) 抗壞血酸，也叫維生素C，易溶于水。自然界存在兩種形式的維生素C：抗壞血酸（還原型VC）和脫氫抗壞血酸（氧化型DHVC），抗壞血酸易被氧化成脫氫抗壞血酸，脫氫抗壞血酸又易還原成抗壞血酸?；瘜W(xué)名稱為：L-3-氧代蘇己糖醛酸內(nèi)酯，分子式為C6H8O6，相對(duì)分子質(zhì)量：176.13。兩種天然形式都可被人體利用，體內(nèi)也能有效地利用兩種合成的L-抗壞血酸。分光光度法測(cè)定水果蔬菜及藥物中vc 維生素C是目前人類所知道的用途最為廣泛的治療藥，預(yù)防維生素C缺乏癥，提高動(dòng)物免疫力和抗應(yīng)急能力，小劑量維生素C可以預(yù)防和

2、治療壞血病，大劑量VC可以提高動(dòng)物在疾病、逆境和生理應(yīng)急等情況下的抵抗能力，它幫助人體對(duì)鐵的吸收，可防止有害(低密度)膽固醇的氧化。維生素也是非常有效的自由基清除劑。但維生素C極不穩(wěn)定，它很容易氧化，加熱、暴露于空氣中，堿性溶液及金屬離子Cu2、Fe3等,都能加速其氧化，易受光、濕和強(qiáng)力擠壓等因素影響而被破壞。維生素C廣泛存在于新鮮植物如水果、蔬菜中，由于植物中的有機(jī)酸及其他抗氧化劑的保護(hù)使它免受破壞。分光光度法測(cè)定水果蔬菜及藥物中vc二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握鐵（II）-鄰菲羅啉配合物測(cè)定抗壞血酸的原理與方法；2、理解鐵（II）-鄰菲羅啉配合物測(cè)定抗壞血酸的條件；3、掌握利用配位掩蔽法消除光還原作

3、用的方法；4、掌握用Excel電子表格法繪制吸收曲線及標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法；5、了解抗壞血酸測(cè)定的意義，6、了解樣品處理與制備、含量測(cè)定的全過(guò)程。分光光度法測(cè)定水果蔬菜及藥物中vc三、實(shí)驗(yàn)原理+ 2 Fe3+ =+ 2 Fe 2+ + 2H+Fe2+ +3 Phen（鄰菲羅啉） = Fe (Phen)3 2+ (紅色，max =510nm )Fe3+ (剩余) + 3 Phen（鄰菲羅啉）= Fe (Phen)3 3+ Fe (Phen)3 3+ + h = Fe (Phen)3 2+Fe (Phen)3 3+ + 6F- = FeF63- + 3 Phen分光光度法測(cè)定水果蔬菜及藥物中vc四、儀器

4、與試劑儀器： 電子天平；分光光度計(jì)（1厘米比色皿）； 移液管（5、10 mL）；比色管或容量瓶(25或50 mL)試劑： 100 g/L Fe3+ 標(biāo)準(zhǔn)溶液； 0.1%（W/V）鄰菲羅啉(Phen)溶液； 40g/mL抗壞血酸； 0.2 mol/L HAc-NaAc緩沖溶液（pH 4.75）； 1%（W/V） 氟化鈉溶液； 1% HAc溶液。分光光度法測(cè)定水果蔬菜及藥物中vc五、實(shí)驗(yàn)步驟1、吸收曲線的繪制 加入準(zhǔn)確吸取的40g/L抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液5.00 mL置于系列潔凈50 mL 容量瓶中，依次加入100 g/L Fe3+ 標(biāo)準(zhǔn)溶液2.0 mL，搖勻；再加入5.0mL0.1%（W/V）鄰菲羅

5、啉(Phen)溶液，搖勻；加入5.0 mLHAc-NaAc緩沖溶液，搖勻；再加入2.0 mL 1 %（W/V）氟化鈉溶液，用水稀釋至50 mL，搖勻。同時(shí)制作相應(yīng)的試劑空白。以相應(yīng)試劑空白作參比，測(cè)定不同波長(zhǎng)條件下的吸光度A，繪制吸收曲線，選擇最大測(cè)定波長(zhǎng)max。分光光度法測(cè)定水果蔬菜及藥物中vc2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 加入準(zhǔn)確吸取的40g/L抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00、8.00 mL分別置于系列潔凈50 mL 容量瓶中，依次加入100 g/L Fe3+ 標(biāo)準(zhǔn)溶液2.0 mL，搖勻；再加入5.0 mL 0.1%（W/V）鄰菲羅啉(Phen

6、)溶液，搖勻；加入5.0 mL HAc-NaAc緩沖溶液，搖勻；再加入2.0 mL 1 %（W/V） 氟化鈉溶液，用水稀釋至50 mL，搖勻。以相應(yīng)試劑空白作參比，在最大測(cè)定波長(zhǎng)max處測(cè)定吸光度As, 用Excel電子表格繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算回歸方程。分光光度法測(cè)定水果蔬菜及藥物中vc3、水果或蔬菜汁樣品溶液的制備 新鮮水果去皮、去核后準(zhǔn)確稱重組織搗碎機(jī)中搗碎轉(zhuǎn)移至燒杯中50 mL 1 % HAc 溶液浸泡、混勻脫脂棉粗濾精濾液轉(zhuǎn)移至250 mL容量瓶中1% HAc溶液定容搖勻，靜置蔬菜去根，洗干凈，瀝干待測(cè)或分光光度法測(cè)定水果蔬菜及藥物中vc4、藥片溶液的制備 VC片20片準(zhǔn)確稱重求平均片重后研細(xì)取適量(相當(dāng)于VC l00 mg)精確稱重后置1000 mL容量瓶加水到刻度搖勻，并過(guò)濾棄去初濾液，準(zhǔn)確吸取續(xù)濾液2 mL置50 mL容量瓶中待測(cè)分光光度法測(cè)定水果蔬菜及藥物中vc六、數(shù)據(jù)記錄和結(jié)果處理1、吸收曲線的繪制/nm420430440450460470480490A/nm500510520530540550560A分光光度計(jì)型號(hào)： 比色皿厚度： 年 月 日分光光度法測(cè)定水果蔬菜及藥物中vc 標(biāo)準(zhǔn)溶液水果Vc藥片吸取溶液/mL1.002.003.004.005.006.007.008.00V1V2Vc的含量/g.mL-1 吸光度A2、標(biāo)