2.2.25 紫外—可見分光光度吸收法

1、2.2.25紫外可見分光光度吸收法吸光度的檢測：溶液的吸光度可以定義為以10為底的單色光輻射的透光率的倒數(shù)的對數(shù)。A=log10（1/T）=log10（I0/I）T=I0/II0=單色光反射的入射光強度上單色光反射的透射光的強度吸光度A與輻射路徑的長度和溶液中物質(zhì)的濃度成正比:A=cb二摩爾吸光度，當b的單位是厘米，c的單位是摩爾每升時。A1%代表10g/L的溶液在1cm比色池中在特定波長下的吸光度。1cm10E%=1cmMr除另有規(guī)定外，用1cm的比色池在規(guī)定的波長下測得吸光度。除非另有規(guī)定，測定時對照采用相同的溶劑或者相同的混合溶劑。溶劑在規(guī)定波長處以空氣為空白對照的吸光度不應該超過0.4

2、，最好是小于0.2。將吸光度或者吸光度的函數(shù)作為縱坐標，波長或波長的函數(shù)作為橫坐標繪制吸收圖譜。如果專論中規(guī)定的最大吸收處的單一值，則可認為測得值不超過2nm。儀器適用于紫外及可見區(qū)光譜測定的分光光度計由一個能在200-800nm范圍內(nèi)提供單色光的光學系統(tǒng)和一個測定吸光度的測定裝置所組成。波長的控制用欽高氯酸鹽溶液R的最大吸收、氫或氘高壓燈、汞蒸汽來確認波長范圍的準確性。如表2.2.25-1所示。在紫外區(qū)域的偏差為1nm,在可見光區(qū)的偏差為土3nm.。也可以用已校驗過的標準物質(zhì)來確認波長范圍的準確性。表2.2.25-1控制波長范圍的最大吸收241.15nm(Ho)404.66nm(Hg)253

3、.7nm(Hg)435.83nm(Hg)287.15nm(Ho)486.0nm(Dp)302.25nm(Hg)486.1nm(Hp)313.16nm(Hg)536.3nm(Ho)334.15nm(Hg)546.07nm(Hg)361.5nm(Ho)576.96nm(Hg)365.48nm(Hg)579.07nm(Hg)吸光度的控制用合適的濾片或重鉻酸鉀溶液R來確認吸光度的準確性。表2.2.25-2給出了重鉻酸鉀溶液R的吸收波長的準確值和特征吸光度的允許范圍。表示根據(jù)吸光度的偏差為土0.01制定的。對于吸光度的控制，重鉻酸鉀在使用之前要在130下干燥至恒重。對于波長為235nm、257nm、31

4、3nm、350nm的吸光度的確認，取57.063.0mg的重鉻酸鉀R用0.005M的硫酸R溶解并稀釋至1000.0ml。對于波長為430nm的吸光度的確認，取57.063.0mg的重鉻酸鉀R用0.005M的硫酸R溶解并稀釋至100.0ml0也用已校驗過的標準物質(zhì)來確認吸光度的準確性。表2.2.25-2波長（nm）特征吸收A1%1cm最大接受限度235124.5122.9to126.2257144.5142.8to146.231348.647.0to50.3350107.3105.6to109.043015.915.7to16.1雜散光的限度可以用合適的濾片或溶液在規(guī)定的波長處檢定雜散光。例如：

5、用水作為補償溶液時，12g/L的氯化鉀R溶液在1cm比色池中的吸光度在220nm到200nm之間陡然增大，且比198nm處的吸光度大2.0。也用已校驗過的標準物質(zhì)來確認雜散光的限度。分辨能力（用于定量分析）當專論中規(guī)定時，按以下測量儀器的分辨能力：記錄0.02%（v/v）的甲苯正己烷溶液的圖譜。在最大吸收處269nm的吸光度與在最小吸收處266nm處的吸光度的比率的最小值應符合專論中的規(guī)定。也用已校驗過的標準物質(zhì)來確認分辨能力。光譜的狹縫寬度（用于定量分析）為了避免光譜狹縫寬度引起的誤差，當使用的儀器在選擇的波長時其狹縫寬度是變化的，則要求其狹縫寬度與吸收帶的半寬度相比應小一些，但是它又必須能

6、夠獲得較大的I0值（入射光強度）。所以應逐步降低狹縫寬度而不引起吸光度讀數(shù)的改變。比色池比色池的光路長度的偏差為0.005cm。當使用相同溶劑時，比色池中包含供試品溶液和參比溶液必須具有相同的透光率。否則必須進行校正。比色池必須潔凈并小心使用。分光光度法的衍生衍生分光光度法涉及吸收光譜（零級）轉(zhuǎn)化為一級、二級或更高級圖譜。一級衍生光譜圖是吸光度曲線（吸光度與波長的變化率dA/d入）與波長的梯度圖。二級衍生光譜圖是吸光光譜與波長的曲率圖（d2A/D入2）。在任何波長下的二級衍生圖通過以下方程與濃度建立關(guān)系：d2Ad2A1%c0dd2A1Qcb=icm?d入2d入210d入210c吸收溶液的濃度，g/L0儀器：使用符合以上要求的儀器，并且安裝有模擬耐電容區(qū)分組件或者數(shù)字微分器或其他產(chǎn)生衍射圖譜的裝置。一些產(chǎn)生二級圖譜的方法相對于零級圖譜產(chǎn)生一個波長轉(zhuǎn)移，這個是需要考慮的。分辨力：當在藥典中有規(guī)定時，記錄0.02%（v/v）甲苯的甲醇溶液的二級衍生圖譜，甲醇作