頭孢西丁耐藥的葡萄球菌mecA基因檢測(cè)及耐藥性分析

1、百度文庫(kù)-好好學(xué)習(xí)，天天向上 頭孢西丁耐藥的葡萄球菌mecA基因檢測(cè)及耐藥性分析作者：陳穎，宋明勝，周建黨，徐令清，伍勇【摘要】目的對(duì)頭抱西丁紙片擴(kuò)散法檢測(cè)耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的可靠性進(jìn)行評(píng)價(jià)，并分析頭抱西丁耐藥的葡萄球菌即MRS感染及耐藥性情況，以指導(dǎo)臨床合理用藥。方法臨床分離葡萄球菌310株，以PCR檢測(cè)葡萄球菌mecA基因?yàn)榕袛郙RS的標(biāo)準(zhǔn)，按美國(guó)國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所(CLSI/NCCLS)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行頭抱西丁、苯唑西林紙片擴(kuò)散法(KB法)藥敏試驗(yàn)檢測(cè)MRS，同時(shí)檢測(cè)MRS及甲氧西林敏感葡萄球菌(MSS)對(duì)10種常用抗生素的耐藥性。結(jié)果在310株葡萄球菌中金黃色葡萄球菌

2、198株，凝固酶陰性葡萄球菌112株，經(jīng)mecA基因檢測(cè)，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)為(113/198)，耐甲氧西林凝固酶陰性葡萄球菌(MRCNS)為(70/112)；頭抱西丁紙片擴(kuò)散法檢測(cè)MRSA的敏感性和特異性均為100%，檢測(cè)MRCNS敏感性為%，特異性為100%;除復(fù)方新諾明和萬(wàn)古霉素外，MRS對(duì)其余8種抗生素的耐藥率明顯高于MSS，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P&11;。結(jié)論頭抱西丁紙片擴(kuò)散法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果可靠，可作為臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)MRS的常規(guī)方法；MRS的感染發(fā)生率及耐藥性較高，且對(duì)各類(lèi)抗生素多重耐藥，需加強(qiáng)其耐藥性監(jiān)測(cè)?！娟P(guān)鍵詞】頭抱西丁；葡萄球菌；耐藥性分析；mecA基因葡萄

3、球菌是引起醫(yī)院感染的常見(jiàn)病原菌，其中耐甲氧西林葡萄球菌(methicillinresistantstaphylococcus,MRS)有逐漸上升的趨勢(shì)，并具有多重耐藥性，所造成的醫(yī)院感染一直是臨床普遍關(guān)注的問(wèn)題。為及時(shí)準(zhǔn)確地掌握MRS的感染率及耐藥率，我們采用PCR方法檢測(cè)葡萄球菌mecA基因?yàn)榕袛郙RS的標(biāo)準(zhǔn)，按照美國(guó)國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所(CLSI/NCCLS)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行頭抱西丁、苯唑西林紙片擴(kuò)散法(KB法)藥敏試驗(yàn)檢測(cè)了310株葡萄球菌，同時(shí)檢測(cè)了其對(duì)10種常用抗生素的耐藥性，并且進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。1材料與方法材料菌株我院2006年1月至2006年6月臨床分離葡

4、萄球菌310株,其中金黃色葡萄球菌198株、表皮葡萄球菌47株、腐生葡萄球菌36株、溶血葡萄球菌29株，標(biāo)準(zhǔn)菌株為湖南省臨檢中心提供的金黃色葡萄球菌ATCC25923。百度文庫(kù)-好好學(xué)習(xí)，天天向上百度文庫(kù)-好好學(xué)習(xí)，天天向上 一 試劑苯唑西林(0X)、頭抱西丁(FOX)、頭抱唑啉(CZO)、氨芐西林(AMP)、紅霉素(ERY)、克林霉素(CLI)、萬(wàn)古霉素(VA)、復(fù)方新諾明(SXT)、阿米卡星(AMK)、利福平(RA)、環(huán)丙沙星(CIP)、左氧氟沙星(LVX)紙片以及藥敏培養(yǎng)基(MH瓊脂)均購(gòu)自O(shè)XOID公司；PCR擴(kuò)增所需試劑均為上海生工工程公司產(chǎn)品，上游引物P1：5/TGGCTATCGT

5、GTCACAATCG3/,下游引物P2：5/CTGGAACTTGTTGAGCAGAG3，擴(kuò)增片段為310bp。儀器BioRadicycler熒光定量PCR系統(tǒng)。方法紙片擴(kuò)散法按CLSI/NCCLS標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行，檢測(cè)各菌株對(duì)每種藥敏紙片的敏感性，以ATCC25923為標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控菌株，藥敏結(jié)果依據(jù)CLSI/NCCLS(2006年)判斷。mecA基因檢測(cè)(PCR)模板的制備：將液體培養(yǎng)基中適量的指數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)菌(最多可達(dá)1X109CFU/mL)，離心后徹底棄凈上清液，用上海生工細(xì)菌基因組DNA抽提試劑盒提取DNA作為PCR的模板。反應(yīng)體系：總體積25uL,其中含10XPCRbufferuL、25mm

6、ol/LMg2+uL、10mmol/LdNTPuL、TaqDNA酶、25pmol/L的引物1和引物2各1uL、DNA模板5uL、無(wú)菌雙蒸水12uL。反應(yīng)條件：94C5min預(yù)變性，94C30s,57C30s,72C100s循環(huán)30次，72C延伸5min。擴(kuò)增時(shí)以ATCC25923作為陰性對(duì)照。結(jié)果判斷：5uLPCR產(chǎn)物點(diǎn)入含EB的20g/L瓊脂糖凝膠，XTBE為電泳緩沖液，用水平式電泳槽穩(wěn)壓100V，電泳4min，凝膠成像系統(tǒng)觀察結(jié)果、成像。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用WHONET5軟件統(tǒng)計(jì)葡萄球菌對(duì)10種抗生素的耐藥率，比較采用軟件進(jìn)行x2檢驗(yàn)，以P,MRS對(duì)其余8種抗生素的耐藥率明顯高于MSS，具有統(tǒng)計(jì)

7、學(xué)意義(P&11;oMRS的多重耐藥性除與產(chǎn)生B內(nèi)酰胺酶有關(guān)外,可能還與產(chǎn)生新的內(nèi)酰胺酶類(lèi)低親合力PBP2a改變抗菌藥物作百度文庫(kù)-好好學(xué)習(xí)，天天向上百度文庫(kù)-好好學(xué)習(xí)，天天向上一 一 用靶位、產(chǎn)生修飾酶、膜通透性降低及主動(dòng)外流泵等機(jī)制有關(guān)6。因此，準(zhǔn)確檢測(cè)MRS,對(duì)于指導(dǎo)臨床用藥有重要參考意義?？焖勹b定出攜帶mecA基因的MRS，可使臨床及時(shí)選擇治療有效的藥物，迅速控制以多重耐藥為特點(diǎn)的MRS所造成的感染，限制其播散。同時(shí)，也可以減少抗生素的濫用?？傊?，根據(jù)耐藥性的變遷，有計(jì)劃地將抗生素分期、分批交替使用，可能對(duì)減少M(fèi)RS有一定作用?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】FrancoisP,PittetD,Bento

8、M,etal.RapiddetectionofmethicillinresistancestaphylococcusaureusdivectlyfromsterileornonsterileclinicalsamplesbyanewmolecularassayJ.JClinMicrobiol,2003,41(1):254260.Performancestandardsforantimicrobialsusceptibilitytesting;fourteenthinformationalsupplementS.NCCLS,2004,M100S14,47.張險(xiǎn)峰，王琳.頭抱西丁紙片法篩查耐甲氧西林葡萄球菌的評(píng)價(jià)J.蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2008,28(1):142143.杜宗敏，楊瑞馥，郭兆彪，等.金黃色葡萄球菌及其甲氧苯青霉素耐藥性的MALDITOFMS鑒定J.分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2003,TOC o 1-5 h z22(1):6366.KatayamaY,ZhangHZ,ChambersHF.PBP2amutationsproducingveryhi