大腸桿菌的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)

1、河南農(nóng)業(yè)大學(xué)本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）題目雞大腸桿菌的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)學(xué)院牧醫(yī)工程學(xué)院專業(yè)班級(jí)2011屆動(dòng)物醫(yī)學(xué)專升本3班學(xué)生姓名王張凡指導(dǎo)教師許蘭菊（教授）撰寫日期：2011年5月10日河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院動(dòng)物醫(yī)學(xué)專業(yè)2011屆畢業(yè)論文 雞大腸桿菌的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)王張凡(2011屆動(dòng)物醫(yī)學(xué)專升本3班)摘要：為了對(duì)鞏義某雞場(chǎng)疑似雞大腸桿菌病的雞群進(jìn)行確診，并為有效防治提供依據(jù)，本研究利用細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)方法對(duì)采集的典型病料進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定和細(xì)菌藥敏試驗(yàn)。通過細(xì)菌分離培養(yǎng)、形態(tài)學(xué)觀察、生化試驗(yàn)、動(dòng)物試驗(yàn)和血清學(xué)試驗(yàn)。結(jié)果表明：該雞群中分離到的病原菌為雞大腸桿菌。動(dòng)物攻毒試驗(yàn)結(jié)果表明:分離的雞大腸

2、桿菌具有明顯的致病作用，雛雞發(fā)病率為100%(5/5)，死亡率達(dá)60%(3/5)。血清學(xué)鑒定結(jié)果顯示，該分離菌血清型為O。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明：該細(xì)菌對(duì)頭孢曲松、頭孢唑林、阿米卡星、復(fù)方新諾明(磺胺甲惡唑)、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、氧氟沙星、氨芐西林、米諾環(huán)素和慶大霉素均敏感，對(duì)阿莫西林和阿奇霉素為中度敏感;但對(duì)羅紅霉素和四環(huán)素耐藥。本研究結(jié)果對(duì)準(zhǔn)確診斷和有效防治該病提供了依據(jù)和條件。關(guān)鍵詞：雞；大腸桿菌；分離鑒定；藥敏試驗(yàn)Isolation,IdentificationandAntibioticSensitivityTestofChickenEscherichiaColiwangzhangfan(C

3、lass3ofVeterinaryMedicine,Graduatedin2011)Abstract：InordertomakeadefinitediagnosisforthesuspendChickenEscherichiaColiaboutchickenhousefromGongyiandprovideareferenceforeffectivepreventionandtreatment.Thebacteriawasisolatedandidentifiedfromtypicalsamplesandantibioticsensitivitytestwasalsoadopted.Bybac

4、terialseparatecultures,morphologicalobservation,biochemicaltests,animalexperimentandserologicaltests,thepathogenofthischickensispathogenicE.colibacteria.Theresultofanimalexperimentshowed:thisEscherichiacolihadobviouslypathogenic;themorbidityofchicklingswas100%(5/5)andthemortalitywas60%(3/5).Serologi

5、caltestingresultsindicated:theserotypeofthisstrainwas0】.Theantibioticsensitivitytestresultsilluminated:thesensitivityofthestraintoceftriaxone、cefazolinandother8kindsofdrugweresensitive;andthedrugsensitivitytoamoxicillinandazithromycinareintermediate;butthestrainweredrugresistanttoroxithromycinandach

6、eomycin.ThisresearchprovidedascientificbasisandqualificationforexactdiagnosisandeffectivepreventionandtreatmenttoEscherichiacoli.Keyword：Chicken,EscherichiaColi,IsolationandIdentification,AntibioticSensitivityTest雞大腸桿菌病是由禽致病性大腸桿菌(avianpathgenicityE.coli,APEC)引起的急性或慢性細(xì)菌性傳染病，各種日齡的雞均可發(fā)病，但雛雞和產(chǎn)蛋雞更易發(fā)病，其常與

7、其他疾病混合感染加重病情，該病表現(xiàn)不同的病型，常見的病型有急性敗血癥、氣囊炎、腹膜炎、卵巢炎、輸卵管炎、臍炎、肉芽腫等1，2?，F(xiàn)有的研究表明，APEC抗原性復(fù)雜、血清型多樣，不同種類之間和不同地區(qū)之間致病菌的血清型差別很大4。雞大腸桿菌病一年四季均可發(fā)生，各品種和各年齡的雞均可感染，尤其是雛雞發(fā)病率最高，可達(dá)55%以上。若不及時(shí)采取有效的防治措施，便會(huì)導(dǎo)致大量死亡，病死率可達(dá)75%100%；成雞一般為慢性或隱性感染。其造成的生長(zhǎng)發(fā)育遲緩、生產(chǎn)性能下降、飼料報(bào)酬下降、種雞及產(chǎn)蛋雞的蛋品品質(zhì)下降和孵化率的降低、死淘率及屠宰廢棄率增加以及藥費(fèi)的增加等,給養(yǎng)殖業(yè)造成了極大的經(jīng)濟(jì)損失。本研究對(duì)河南省鞏義

8、地區(qū)雞群發(fā)生的疑似雞大腸桿菌病進(jìn)行了臨床初步診斷，并采集典型病料進(jìn)行病原菌的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)，取得了理想效果，為該病的確切診斷和有效防治提供了可靠依據(jù)?，F(xiàn)將有關(guān)情況報(bào)告如下：1材料與方法1.1試驗(yàn)地點(diǎn)、時(shí)間2011年3月1日4月30日在河南農(nóng)業(yè)大學(xué)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室工程樓0909室進(jìn)行本研究。1.2病料來源與采集對(duì)來自鞏義地區(qū)的疑似雞大腸桿菌病的病例進(jìn)行臨床初步診斷，并無菌操作采集典型病料心、肝、脾、十二指腸等。1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組一日齡健康羅曼雛雞15只，購自于大河遺址孵化場(chǎng)。將雛雞按照每組五只隨機(jī)分為3組，其中攻毒組、空白對(duì)照組和普通營(yíng)養(yǎng)肉湯對(duì)照組各一組。以上三組雛雞均按正常飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)隔離飼養(yǎng)

9、，經(jīng)過3天觀察，各雛雞均正常，以備攻毒試驗(yàn)。1.4主要試劑1.4.1培養(yǎng)基和生化鑒定管制備普通肉湯培養(yǎng)基，營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基，麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，乳糖發(fā)酵管培養(yǎng)基，V-P培養(yǎng)基，MR培養(yǎng)基，以上培養(yǎng)基均按常規(guī)方法用配制。其所需試劑有：蛋白胨（批號(hào)：20100702），牛肉粉（批號(hào)：20080712），均由北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)；氯化鈉（批號(hào):20110104），由天津市瑞金特化學(xué)品有限公司生產(chǎn)；瓊脂粉由XinTaiinJapan生產(chǎn)；豬膽鹽（批號(hào)：20090823），由北京雙旋微生物培養(yǎng)基制品廠生產(chǎn)；乳糖（批號(hào):20070308），由天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠生產(chǎn)；中性

10、紅（批號(hào)：2-60-12-15），次甲基藍(lán)（美蘭）（批號(hào)：4-61-08-20），均由中國(guó)公私合營(yíng)新中化學(xué)廠生產(chǎn)；曙紅Y（伊紅）（批號(hào)：F20011209），由中國(guó)醫(yī)藥（上海）化學(xué)試劑公司生產(chǎn)；磷酸氫二鉀（批號(hào)：20050906），由廣西汕頭市西龍化工廠生產(chǎn)；葡萄糖（批號(hào):20070910），由中國(guó)鄭州派尼化工試劑廠生產(chǎn)；麥芽糖（批號(hào):19910926），由中科院上海生化所東風(fēng)生化技術(shù)公司生產(chǎn)；甘露醇（批號(hào)：20081015），由北京中聯(lián)化工試劑廠生產(chǎn)；蔗糖（批號(hào)：9840220），由北京化工廠生產(chǎn)。1.4.2革蘭氏染液自制革蘭氏染液，按文獻(xiàn)要求配制6。1.4.3藥敏紙片阿莫西林（10聘/片，

11、批號(hào)：100301），氨芐西林（10聘/片，批號(hào)：1009211），頭抱唑啉（30聘/片，批號(hào)：1009171），頭抱曲松（30聘/片，批號(hào)：1011031）,羅紅霉素（15聘/片，批號(hào)：100531），慶大霉素（10聘/片，批號(hào)：1001201），阿米卡星（30聘/片，批號(hào)：1010221），米諾環(huán)素（30gg/片，批號(hào)：1010132），阿奇霉素（15聘/片，批號(hào)：101213）,磺胺甲噁唑（23.75/1.25聘/片，批號(hào)：1009031），四環(huán)素（30聘/片，批號(hào)：1008311），環(huán)丙沙星（5聘/片,批號(hào)：100901），諾氟沙星（10聘/片,批號(hào)：1009252）和氧氟沙星（5片g

12、/片，批號(hào)：1009022），均由北京天壇藥物生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)。以上藥敏紙片均購自河南省生物所。1.4.4大腸桿菌診斷血清共26種O（5120*,批號(hào)20090416）,o（10240*,批號(hào)200901）,O5（2560*,批號(hào)200605）,O（2560*,批1號(hào)200901）,O（2560*,批號(hào)200901）,O（5120*,批號(hào)200904）,O（640*,批號(hào)200211）,O（5120*,批號(hào)200709）,O（5120*,批號(hào)200408）,Oin14151819（2560*,批號(hào)200709）,020（2560*,批號(hào)200407）,021（5120*,批號(hào)200901）

13、,O24（640*,批號(hào)200709）,O26（2560*,批號(hào)200709）,O35（5120*,批號(hào)200901）,O36（2560*,批號(hào)200505）,O50（2560*,批號(hào)200505）,O54（1280*,批號(hào)200709）,O74（1280*,批號(hào)200211）,O78（1280*,批號(hào)200612）,O（1280*,批號(hào)200901）,0“（10240*,批號(hào)200605）,On（640*,批號(hào)200104）,O（2560*,批號(hào)200901）,。（1280*,批號(hào)20080327）,0157（2560*,批號(hào)200901）,以上血清均購自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，均在有效期內(nèi)。用

14、時(shí)按照使用說明書要求進(jìn)行稀釋，4C保存?zhèn)溆谩?.5主要儀器.超凈工作臺(tái)（型號(hào)：SW-CJ-IC），中日合資蘇凈集團(tuán)安泰公司制造；高壓蒸餾滅菌器（型號(hào)：LDZX-30KBS）,上海申安醫(yī)療器械廠制造；顯微鏡（型號(hào):AC220VIN），重慶光電儀器總公司制造；恒溫培養(yǎng)箱（型號(hào)：PYX-DHS-50X65-BS-II）,上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠制造；電子天平（型號(hào)：11636920）,MadebySartoriusAG制造等。1.6分離鑒定方法1.6.1細(xì)菌分離培養(yǎng)用接種環(huán)無菌操作從病料中挑取病原菌，并接種于普通營(yíng)養(yǎng)肉湯中進(jìn)行增菌培養(yǎng)，然后分別在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板和伊紅美藍(lán)瓊脂平板劃線，于37C培養(yǎng)24h。

15、1.6.2抹片染色鏡檢挑取分離到的可疑單個(gè)菌落進(jìn)行抹片、革蘭氏染色和油鏡觀察細(xì)菌形態(tài)排列及染色特性，鏡檢后將可疑單個(gè)菌落的剩余部分接于普通肉湯中做純培養(yǎng)。染色方法按照文獻(xiàn)要求進(jìn)行9】。1.6.3生化試驗(yàn)參照文獻(xiàn)6-8進(jìn)行各項(xiàng)生化試驗(yàn)。將分離菌株分別接種于乳糖發(fā)酵管培養(yǎng)基、V-P培養(yǎng)基，MR培養(yǎng)基中，37C培養(yǎng)3d,觀察并記錄生化反應(yīng)結(jié)果。1.6.4動(dòng)物試驗(yàn)從分離的雞大腸桿菌株，采用平板表面散布法進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)后，吸取肉湯純培養(yǎng)物（平均濃度為30.7億個(gè)/mL活菌）分別接種于3日齡雛雞進(jìn)行攻毒，采用腹腔注射0.2mL/只；用同樣的方法給肉湯（介質(zhì)）對(duì)照組雛雞注射普通營(yíng)養(yǎng)肉湯0.2mL/只；空白對(duì)照

16、組不做任何處理。接種后隔離飼養(yǎng)，觀察每組發(fā)病和死亡情況，記錄結(jié)果，剖檢病變，并回收接種細(xì)菌。1.6.5血清學(xué)試驗(yàn)首先制備凝集抗原：將分離鑒定為大腸桿菌的菌株純培養(yǎng)物，接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯中37C培養(yǎng)24h后，在無菌環(huán)境下用咼壓滅菌過的棉球和鑷子蘸取試管中的菌液，涂布于事先準(zhǔn)備好的三個(gè)普通瓊脂上37C培養(yǎng)24h后，在無菌環(huán)境下用移液器移取5mL生理鹽水于平板上，再用高壓滅菌過的涂布棒刮取菌苔，待全部刮干凈后移入無菌三角瓶中；經(jīng)121C高壓滅活2h破壞細(xì)菌的K抗原；后將菌體抗原用4mL生理鹽水洗滌離心洗滌四次，每次4000r/min離心20min,棄上清；之后加入2mL生理鹽水反復(fù)吹打混勻，與標(biāo)準(zhǔn)麥?zhǔn)媳?/p>

17、濁管10比較，最終得到濃縮菌液（40億菌/mL）共1.8mL；最后按6%的比例加入堿性美蘭進(jìn)行染色，4C保存?zhèn)溆?。此方法制備的凝集抗原即為大腸桿菌0抗原。分離菌株的血清型鑒定參照參考文獻(xiàn)11所述方法進(jìn)行。用26種大腸桿菌單因子血清，對(duì)該大腸桿菌0抗原進(jìn)行平板凝集試驗(yàn)，同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)菌株陽性對(duì)照和抗原陰性對(duì)照。1.7藥敏試驗(yàn)采用平板表面散布法。將分離菌株的肉湯純培養(yǎng)物均勻地涂抹于事先準(zhǔn)備好的營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，再將各種藥敏片貼于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，貼好紙片的平板于37C倒置培養(yǎng)18h，觀察和測(cè)量藥敏試驗(yàn)的抑菌圈直徑，記錄結(jié)果。分離菌株對(duì)各種藥物的敏感性判定標(biāo)準(zhǔn)按有關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行12,13。2結(jié)果與分析2.1分

18、離培養(yǎng)特性采集病料經(jīng)分離培養(yǎng)所得到的細(xì)菌在各種培養(yǎng)基中的培養(yǎng)特性如下：普通營(yíng)養(yǎng)肉湯24h培養(yǎng)物，強(qiáng)混濁度，有菌膜有菌環(huán)，試管底部有粘稠絮狀沉淀；營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上生長(zhǎng)良好，37C24h后，形成凸起、表面光滑、濕潤(rùn)、半透明、灰白色、中等大小菌落（直徑約2-3mm）；在麥康凱平板上均生長(zhǎng)為表面光滑、邊緣整齊、鈍圓形、隆起的紅色菌落；伊紅美藍(lán)瓊脂平板上均生長(zhǎng)為圓形、隆起、邊緣整齊、表面光滑，黑色并有金屬光澤的小菌落（直徑1-2mm）。根據(jù)該株細(xì)菌的上述培養(yǎng)特性，初步判定其為雞大腸桿菌。2.2細(xì)菌形態(tài)及染色特性挑取該分離菌株的單個(gè)典型菌落，進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢。結(jié)果可見到2-3mm,兩端鈍圓，散在或成對(duì)存在

19、的卵圓形或短桿狀得紅色細(xì)菌。根據(jù)該株細(xì)菌的上述染色形態(tài)特征，進(jìn)一步判定其為雞大腸桿菌。2.3生化試驗(yàn)結(jié)果所分離菌株對(duì)葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露糖、MR試驗(yàn)均呈陽性；V-P試驗(yàn)呈陰性。該分離菌株符合大腸桿菌的生化反應(yīng)特性。詳情見表1。表1雞大腸桿菌生化試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果Table1BiochemistryTestsResultofIsolatedE.coliStrains菌株名稱甘露糖蔗糖MRVPStrainNames葡萄糖乳糖麥芽糖鞏義株（肝）+鞏義株（脾）+注：“+”為產(chǎn)酸；“-”為不分解；“”為產(chǎn)酸產(chǎn)氣。Note:“+”meansacid-producing;“”meansnegativerea

20、ction;“”meansacid-producingandgas-forming.根據(jù)細(xì)菌形態(tài)染色特性，結(jié)合分離培養(yǎng)及生化特性鑒定結(jié)果，判定該分離到的菌株為大腸桿菌。2.4動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果攻毒組雛雞腹腔注射3h后開始發(fā)病。6h后個(gè)別雞出現(xiàn)食欲不振、呆滯不動(dòng)、精神沉郁、縮頸垂翅等，并呈現(xiàn)典型的腹瀉，重者出現(xiàn)褐紅色血便等癥狀。8h后開始死亡，瀕死期的雞陸續(xù)出現(xiàn)，表現(xiàn)為呼吸衰竭、抽搐蹬腿等嚴(yán)重癥狀。病死雞均生長(zhǎng)發(fā)育不良，身體瘦弱。連續(xù)觀察7d,各攻毒組雛雞的發(fā)病率為100%，死亡率60%。各組死亡情況詳見表2。對(duì)全部病雞、死雞及時(shí)進(jìn)行剖檢觀察，呈現(xiàn)不同程度病理變化，病情較輕者出現(xiàn)肝臟腫大變黃，腸道卡他

21、性炎癥；重者則有氣囊炎，腹膜炎，心包積液，肝臟、脾臟點(diǎn)狀或散在出血，腸道黏膜出血。病程愈長(zhǎng)者，病變愈明顯。經(jīng)伊紅美藍(lán)瓊脂平板劃線接種，均回收到原接種細(xì)菌。對(duì)照組雛雞其臨床表現(xiàn)和剖檢均正常，未見任何肉眼變化，肝、脾等處也未分離出任何細(xì)菌。表2雞大腸桿菌動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果Table2ResultsofAnimalExperiment單位：h,只，%菌株名稱StrainGroups68雛雞死亡時(shí)間及數(shù)量TimeandAmountofDeadChicken168死亡總數(shù)Total死亡率Mortality101214204876104132160鞏義菌株010101000000360空白對(duì)照組00000000

22、000000肉湯對(duì)照組00000000000000根據(jù)上述動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果可知，該攻毒組雛雞的臨床癥狀及病理變化與自然感染后表現(xiàn)一致。2.5血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果見表3。表3分離菌株血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果Table3ResultsofSerologicalTests菌株名稱00000000000000000000000000StrainName1258911141518192021242635365054747888111119141147157鞏義+菌株注：“+”為凝集；“”為不凝集。Note:“+”meansagglutination;“一”meansnoagglutination.2.6藥敏試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)結(jié)果

23、的判定標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)12,13報(bào)道的國(guó)家衛(wèi)生部制定的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定：經(jīng)檢測(cè)，該雞大腸桿菌對(duì)14種藥物呈現(xiàn)出不同程度的藥物敏感性。該株雞大腸桿菌對(duì)頭抱曲松、頭抱唑林、阿米卡星、復(fù)方新諾明（磺胺甲惡唑）、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、氧氟沙星、氨芐西林、米諾環(huán)素和慶大霉素均敏感，對(duì)阿莫西林和阿奇霉素為中度敏感，但對(duì)羅紅霉素和四環(huán)素耐藥。詳見表4。表4分離菌株藥敏試驗(yàn)結(jié)果Table4ResultsofAntibioticSensitivityTest單位；d=mm抗菌藥名稱NamesofAntibiotics分離菌株Strain藥物敏感性DrugSensitivity阿莫西林（AMX）17中度敏感氨芐西林/舒

24、巴坦17敏感(AM/SU)頭抱唑啉（CZ）18敏感頭抱曲松（CR0）22敏感羅紅霉素（R0X）0耐藥慶大霉素（GM）16敏感阿米卡星（AN）19敏感米諾環(huán)素（MN0）19耐藥阿奇霉素（AZI）16中度敏感復(fù)方新諾明（SXT）23敏感四環(huán)素（TE）9耐藥環(huán)丙沙星（CIP）28敏感諾氟沙星（N0R）27敏感氧氟沙星（0FL）26敏感3小結(jié)和討論3.1本研究對(duì)鞏義地區(qū)某發(fā)病雞群的病料進(jìn)行了細(xì)菌分離鑒定，結(jié)果判定為大腸桿菌，并證明該雞群為雞大腸桿菌感染引起的雞大腸桿菌病，存在有0血清型，且毒力較強(qiáng)。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，該菌株對(duì)不同的藥物敏感性存在一定的差異，但總體來說，對(duì)其敏感的藥物較多。綜上所述，該地

25、區(qū)應(yīng)更加注重“防”，一旦發(fā)生該病，雖可用藥物很多，但該地區(qū)菌株毒力強(qiáng)，仍可造成慘重?fù)p失。因此，對(duì)于雞大腸桿菌病所造成的損失和影響，應(yīng)引起大家的重視，采取有效措施進(jìn)行綜合防制。3.2通過動(dòng)物攻毒試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)大腸桿菌對(duì)雛雞具有較強(qiáng)的致病作用：雛雞的發(fā)病率為100%，死亡率60%。與唐一鳴14等報(bào)道華東地區(qū)肉雞的發(fā)病特點(diǎn)有所差異，其發(fā)病率死亡率均較低。但與王貴升15等所報(bào)道的其他血清型（O147、O138等）的致病力相比，該血清型的死亡率較低，當(dāng)然，不同血清型的致病力也有可能隨著發(fā)病地區(qū)、雞群品種等的不同而存在差異?？梢?，不同地區(qū)、不同品種的雞感染不同血清型的大腸桿菌后的發(fā)病率和死亡率均有所不同?？傊?，

26、該血清型的菌株毒力較強(qiáng)，因此可引起臨床上較高的發(fā)病率和死亡率，造成嚴(yán)重的損失。3.3血清學(xué)鑒定結(jié)果顯示所分離菌株為大腸桿菌，對(duì)該株大腸桿菌血清學(xué)試驗(yàn)鑒定已鑒定出型，即0。此結(jié)果與DozoisCM16，田勇17等報(bào)道禽病原性大腸桿菌常見血清型為0、02、078結(jié)果基本一致，同時(shí)又與王麗榮岡等報(bào)道的豫北地區(qū)大腸桿菌主要血清型為0、02、078、011的結(jié)果相符。但不同地區(qū)又有不同的血清型，同一地區(qū)不同雞群的血清型可能相同也可能不同16,17,18。由于大腸桿菌不同血清型之間的交叉保護(hù)率低，因此，針對(duì)不同發(fā)病地區(qū)應(yīng)選擇與該地區(qū)相對(duì)應(yīng)的血清型或含有相同血清型的雞大腸桿菌疫苗（即單一或多價(jià)疫苗）進(jìn)行免疫

27、預(yù)防接種，才能起到有效的預(yù)防效果。因此，本試驗(yàn)的血清學(xué)鑒定結(jié)果，為本病的診斷和血清流行病學(xué)調(diào)查以及人工免疫防制提供了可靠的依據(jù)。3.4藥敏試驗(yàn)結(jié)果為臨床合理用藥提供了可靠依據(jù)。藥敏試驗(yàn)結(jié)果證明，本次分離到的大腸桿菌對(duì)多種藥物具有很強(qiáng)的敏感性。這可能與該地區(qū)臨床上不經(jīng)常使用這些藥物有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，該地區(qū)可使用頭抱類藥物、喹諾酮類藥物（諾氟沙星、氧氟沙星以及環(huán)丙沙星）以及氨基糖苷類藥物（慶大霉素和阿米卡星），但是該地區(qū)不可以使用如羅紅霉素、阿奇霉素等大環(huán)內(nèi)酯類藥物來治療其大腸桿菌病。此結(jié)果與MelzerM凹等所報(bào)道的人大腸桿菌耐受頭抱類藥物有所不同，但與R.Sharada20等所報(bào)道的大腸桿菌對(duì)

28、喹諾酮類藥物敏感，對(duì)四環(huán)素、羅紅霉素等耐藥的結(jié)果一致?？梢姡煌貐^(qū)的大腸桿菌對(duì)同種藥物的敏感性不同。同時(shí)用此結(jié)果與其他不同血清型大腸桿菌的耐藥性進(jìn)行比較，又有所不同：據(jù)王貴升等報(bào)道，山東省部分地區(qū)的O2、O35、O78、O147型大腸桿菌對(duì)環(huán)丙沙星（氟喹諾酮類藥物）、慶大霉素、磺胺類藥物等的敏感性比較低；據(jù)魏蕻21等報(bào)道，四川成都市的O37型大腸桿菌對(duì)諾氟沙星、環(huán)丙沙星、氨芐西林、阿莫西林、氧氟沙星、復(fù)方新諾明100%耐藥（5/5）,對(duì)慶大霉素、頭抱氨芐和頭抱唑啉60%耐藥（2/5），對(duì)阿米卡星20%耐藥（1/5）；據(jù)楊明凡凹等報(bào)道，河南省部分地區(qū)的O78型大腸桿菌株對(duì)環(huán)丙沙星高度敏感，對(duì)頭

29、抱唑啉、恩諾沙星、/8阿米卡星為中度敏感，對(duì)慶大霉素、紅霉素、氟哌酸、四環(huán)素、卡那霉素均有耐藥性。從以上對(duì)比可見，不同血清型大腸桿菌對(duì)同種藥物的敏感性不同；對(duì)于省內(nèi)的雞大腸桿菌，即使血清型不同，仍具有較高的藥物敏感度相似性，只有個(gè)別藥物具有較大差異（如慶大霉素、氟哌酸等），但對(duì)于省外，大腸桿菌對(duì)大多數(shù)藥物的敏感性都與省內(nèi)有明顯不同，由此可見，不同省之間的大腸桿菌耐藥性差異很大。因此在臨床治療上，應(yīng)注意不同地區(qū)選擇不同的敏感藥物，并且交替輪換使用，才能有效減少耐藥性的產(chǎn)生?？傊煌昊虿煌貐^(qū)的同一菌株的藥物敏感性均有所差異。因此，建議在生產(chǎn)實(shí)踐中要選擇敏感藥物用于治療，避免因細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性

30、而帶來的不必要損失。綜上所述，本研究試驗(yàn)結(jié)果對(duì)疑似雞大腸桿菌病進(jìn)行了確切診斷，并為有效防治該病提供了科學(xué)依據(jù)和有利條件，對(duì)指導(dǎo)養(yǎng)殖生產(chǎn)具有重要意義和應(yīng)用價(jià)值。致謝：本試驗(yàn)研究是在指導(dǎo)老師的悉心指導(dǎo)下完成的，期間金鉞老師、苗銀蘋等師姐給予了大力支持和幫助，在此表示衷心感謝！參考文獻(xiàn)：1師福山，趙德明禽大腸桿菌的分離與16SrRNA的鑒定J.中國(guó)畜牧獸醫(yī),2009,36（2）:111-113.韓偉，張鐵，王春光，等禽治病性大腸桿菌的分離鑒定與耐藥性監(jiān)測(cè)J中國(guó)獸醫(yī)雜志,2007,43(7):41-42.于學(xué)輝，程安春,汪銘書，等鴨源致病性大腸桿菌的血清型鑒定及其相關(guān)毒力基因分析J畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),200

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