實驗動物毒理學(xué)基礎(chǔ)

1、1毒理學(xué)實驗基礎(chǔ) The Basic Theory of Toxicological Test2第一節(jié) 毒理學(xué)實驗的原則與局限性第二節(jié) 毒理學(xué)實驗的基本目的 第三節(jié) 實驗動物 *第四節(jié) 動物實驗基本方法 *第五節(jié) 毒理實驗質(zhì)量控制第六節(jié) 動物實驗的職業(yè)道德 3第四節(jié)* 動物實驗基本方法4(一)理論準備 正確選題立項和設(shè)定假設(shè)實驗研究計劃和方案的制訂實驗方法的選定了解有關(guān)實驗動物方面的基礎(chǔ)知識一、動物實驗前準備5(二)條件準備 儀器設(shè)備方面準備 飼養(yǎng)場所的準備 動物的準備 6(三) 預(yù)試驗?zāi)康模?. 檢查各項準備工作是否完善； 2. 檢查實驗方法或步驟是否可行； 3. 測試指標是否穩(wěn)定、試劑是否

2、齊全； 4. 練習(xí)操作、檢測技術(shù)。7二、動物實驗基本操作技術(shù)實驗動物的捕捉與固定實驗動物編號、標記、分組實驗動物染毒方法實驗動物的麻醉方法實驗動物生物材料的采集法實驗動物處死方法8（一）實驗動物的捕捉與固定 原則： 以方便實驗操作為主； 保證操作者安全； 防止動物意外受到損傷； 禁止所有粗暴方法對待動物。9 小鼠抓取固定方法 抓取A10固定方法 手固定法 11大鼠抓取固定方法 抓取B12固定方法1314 先用手掌迅速扣住鼠背，抓住其肩胛上方，以拇指和食指環(huán)握頸部，另一只手托住臀部。豚鼠的抓取固定方法 C1516兔的抓取固定方法 1可損傷兩腎2可造成皮下出血3可傷兩耳 D1718(二）實驗動物稱

3、重、標記、分組 1.稱重 根據(jù)體重來判斷動物大致年齡2. 標記 染色法用化學(xué)試劑在動物體表的不同部位進行涂染。編號原則：先左后右或先右后左，從上到下。可用兩種顏色。1920常用的染色劑：3%5%的苦味酸（黃色）2%的硝酸銀溶液（咖啡色）0.5%的中性品紅溶液（紅色）煤焦油酒精溶液（黑色） 212218769523423 耳緣剪孔法 在動物的耳邊緣剪出不同的缺口或打成不同的小孔進行標記。 2425烙印法 用烙印鉗或刺針將號刺在或烙印在動物無體毛或明顯部位，再用溶在酒精中的黑墨在針刺處涂抹。 26號牌法用特制的金屬號牌固定在動物的耳上或頸項部籠子編號法在裝動物的籠子進行標記編號27 3. 分組 所

4、有動物分配到各組的機會均等，避免主觀選擇傾向。 （1）隨機數(shù)字表：完全隨機和隨機區(qū)組； （2）計算機軟件：28 染毒（administration exposure）為研究受試化學(xué)物對實驗動物的毒性作用，模擬人體的主要接觸途徑，將受試物經(jīng)過某種途徑進入動物體內(nèi)，這種過程叫做染毒。（三）實驗動物染毒方法291. 各種染毒途徑 經(jīng)口染毒 經(jīng)呼吸道染毒 經(jīng)皮染毒 注射途徑30直腸給藥脊髓腔給藥關(guān)節(jié)腔給藥延髓給藥 其他方式31經(jīng)口染毒 灌胃 喂飼 膠囊吞服323334灌胃 優(yōu)點：a.受試物不與口腔接觸， b.接觸受試物劑量準確 缺點： a. 工作量大 b.可能損傷氣管和食道3536 動物一次灌胃能耐受

5、的最大容積 動物種類 體重（g） 最大容積（ml） 小 鼠 30 1.0 2530 0.8 2024 0.5 豚 鼠 300 6.0 250300 4.05.0 大 鼠 300 8.0 250300 6.0 200249 4.05.0 100199 3.0 家 兔 3500 200 25003500 150 20002400 100 貓 3000 100150 2500 3000 5080 犬 10000 15000 200500 37喂飼 優(yōu)點：符合人類接觸外來化合物的實際情況 缺點：a.如受試物有異味，動物可能拒食。 b.如受試物易揮發(fā)，染毒劑量可能降低 c.如受試物易水解或與飼料中某些成

6、分 發(fā)生反應(yīng)，可改變化學(xué)物毒性38膠囊吞服 優(yōu)點：a.劑量準確。 b.適于易揮發(fā)、易水解和有異味的 化學(xué)物。 缺點：不適于小動物。3940經(jīng)呼吸道染毒 吸入染毒 氣管內(nèi)注入染毒靜式吸入染毒動式吸入染毒41定義：在密閉容器內(nèi)，加入一定量的毒物使之揮發(fā)并與容器內(nèi)空氣充分混合，形成一定濃度的含毒空氣環(huán)境，放入動物，在規(guī)定的時間內(nèi)觀察動物的毒性反應(yīng)。 靜式吸入染毒染毒裝置：有機玻璃染毒柜或大的玻璃瓶。 4243 動式吸入染毒定義：采用機械通風(fēng)裝置，連續(xù)地將新鮮空氣和毒物送入染毒柜，并排出等量的污染空氣，使染毒濃度相對穩(wěn)定。 染毒裝置：a.染毒柜 b.機械通風(fēng)系統(tǒng) c.配氣系統(tǒng)44靜態(tài)染毒柜動態(tài)染毒柜4

7、5靜式染毒與動式染毒的比較靜式吸入染毒動式吸入染毒優(yōu)點1. 設(shè)備簡單，操作容易；2. 消耗毒物少；3. 用于急性毒性實驗，毒物來源少也用于其它毒性試驗。. 染毒柜內(nèi)毒物濃度恒定. 隨時間延長，容器內(nèi)O2和CO2濃度恒定；3. 空氣中溫度和濕度恒定；. 適用于較長時間、反復(fù)染毒的實驗。缺點隨時間延長，1. 容器內(nèi)O2下降、CO2含量升高；2. 毒物濃度下降；3. 氣溫、氣濕升高。. 設(shè)備裝置復(fù)雜、昂貴；. 毒物消耗量大。46經(jīng)皮膚染毒）備皮：機械脫毛、化學(xué)脫毛 脫毛區(qū)體表面積15%）染毒方法浸尾涂皮47經(jīng)注射途徑 腹腔注射； 肌肉注射； 靜脈注射； 皮下注射；484950515253常用實驗動物

8、經(jīng)不同方式注射染毒時的注射劑量（ml）注射方式小鼠大鼠豚鼠兔狗腹 腔0.21.01325510515肌 肉0.10.20.20.50.20.50.5125靜 脈0.20.51215310515皮 下0.10.50.510.5213310542. 染毒前準備受試物的準備： 了解受試物的一般情況。 了解受試物的純度和雜質(zhì)成分； 了解受試物的結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)； 用同一種，同一批號的受試物； 按染毒途徑不同，將受試物配成一定的劑型。55溶劑或助溶劑的選擇： 無毒； 與受試物不起反應(yīng)； 不影響毒物的吸收； 不影響受試物的毒作用和觀察指標56劑型的選擇： 喂飼法：無特殊氣味或味道，性質(zhì)穩(wěn)定，不易氧化； 灌胃

9、法：為液體，無明顯的局部損傷或刺激作用； 靜脈注射法：水溶液； 腹腔注射法：水溶液； 呼吸道染毒：均勻穩(wěn)定分布的氣體； 經(jīng)皮染毒：為液體、膏狀或糊狀。 57（四）實驗動物的麻醉方法 1.常用的麻醉劑揮發(fā)性麻醉劑：乙醚、氯仿等。 非揮發(fā)性麻醉劑：苯巴比妥鈉、戊巴比妥鈉、硫噴妥鈉、氨基甲酸乙脂、水合氯醛。中藥麻醉劑：洋金花、氫溴酸東莨菪堿等。 582. 麻醉方法 全身麻醉 吸入麻醉：多采用乙醚做麻醉藥。 注射麻醉：腹腔注射也可靜脈注射局部麻醉 表面麻醉 區(qū)域阻滯麻醉 局部浸潤麻醉591.血液采集2. 尿液采集3.膽汁采集4.糞便采集（五）實驗動物血液、體液采集法601.血液采集61 大、小鼠采血

10、剪尾采血眼眶靜脈叢采血心臟采血斷頭采血腹主動脈采血62 豚鼠采血 耳緣剪口采血心臟采血股動脈采血背中足靜脈采血63 兔采血 耳靜脈采血耳中央動脈采血心臟采血股動脈、頸靜脈采血 646566采血部位及采血量 采血方式 采血部位 采血量(ml) 采血前處置 小 鼠 大 鼠 部 尾靜脈 0.030.05 0.30.5 分 尾動脈 0.10.3 0.51.0 采 足背中靜脈 0.10.3 血 眼窩靜脈叢 0.050.1 0.51.0 麻醉(不麻亦可) 頸靜脈 0.51.0 35 麻醉手術(shù) 全 頸動脈 0.51.0 35 斷 頭 0.51.0 510 麻醉(不麻亦可) 采 心 臟 0.50.8 35 麻

11、醉、手術(shù) 后大靜脈 0.51.0 24 同上 血 腹大動脈 58 同上67682.尿液采集 代謝籠法導(dǎo)尿管法壓迫膀胱法膀胱穿刺法反射排尿法剖腹采尿法69703.膽汁采集：直接插管進入膽總管4.糞便采集：大小鼠用代謝籠，大動物直接?。嶒瀯游锾幩婪椒ò矘匪婪?安樂死是使實驗動物在沒有痛苦的情況下死亡的處置。7172 化學(xué)致死法 脊椎脫臼法 空氣栓塞法 急性失血法 擊打法 斷頭法 破壞腦脊髓法 其他方法73第五節(jié) 毒理學(xué)實驗質(zhì)量控制74人事方面。實驗動物。實驗儀器和設(shè)備。實驗應(yīng)有嚴格的標準化操作程序和要求。受試物的完整資料。實驗記錄。實驗室工作人員。GLP：good laboratory pr

12、actice 優(yōu)良實驗研究規(guī)范SOP：standard operating procedure 標準操作方法 75第六節(jié) 動物實驗的職業(yè)道德76動物實驗與動物保護之間的爭論 醫(yī)學(xué)界對動物實驗支持的態(tài)度堅定 科學(xué)界對動物實驗的態(tài)度逐漸變?yōu)榉磳?哲學(xué)界絕大多數(shù)支持動物保護、反對動物實驗 公眾對動物實驗的支持率正在下降，婦女比男人更反對動物實驗 動物實驗中提倡的“3Rs”概念替代（Replace） 減少（Reduction） 優(yōu)化（Refinement）7778 替代（Replace） 應(yīng)用無知覺材料的科學(xué)方法來代替使用活的有知覺脊椎動物的方法；低級動物代替高級動物、小動物代替大動物。用組織學(xué)實驗代

13、替整體動物實驗。用分子生物學(xué)方法替代動物實驗。人工合成材料替代動物實驗。計算機模擬替代動物實驗。7980減少（Reduction） 指在能夠保證獲取一定數(shù)量與精確度的數(shù)量信息的前提下，減少動物的使用數(shù)量； 盡量使動物一體多用 用低等動物代替高等動物 盡量使用高質(zhì)量動物 使用恰當(dāng)?shù)脑囼炘O(shè)計和統(tǒng)計學(xué)方法 81優(yōu)化（Refinement） 指通過改善動物實驗設(shè)施、飼養(yǎng)管理和實驗條件，精細地選擇、設(shè)計實驗路線和手段，優(yōu)化實驗操作技術(shù)，使動物實驗得出科學(xué)的結(jié)果。 82改善動物實驗設(shè)施條件，提高動物實驗質(zhì)量 改善控制操作技術(shù)，減少對動物機體的干擾 控制疼痛 減少社會和環(huán)境因素對動物實驗的影響 改進動物實驗操作技術(shù) 從已有數(shù)據(jù)中捕捉信息，優(yōu)化動物使用83 毒理學(xué)實驗