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認(rèn)證信息

認(rèn)證類型：個(gè)人認(rèn)證

認(rèn)證主體：鐘**（實(shí)名認(rèn)證）

IP屬地：北京

IP屬地：北京 上傳時(shí)間：2022-07-27 格式：DOCX 頁(yè)數(shù)：4 大小：211.85KB 積分：6 舉報(bào) 版權(quán)申訴

1、人瘤6,11型核酸檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（PCR熒光探針?lè)ǎ?.目的：規(guī)范人瘤(HPV)6,11型核酸檢測(cè)操作流程，保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。2.應(yīng)用范圍：PCR。3.職責(zé)：3.1文件編寫：技術(shù)員。3.2文件審核：主管。3.3文件：。3.4執(zhí)行：PCR所有。4. 參考文獻(xiàn)：4.1中山大學(xué)人瘤（6,11型）核酸定量檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光法）說(shuō)明書(shū)4.2中山大學(xué)DA7600核酸序列檢測(cè)系統(tǒng)用戶手冊(cè)5. 內(nèi)容：5.1 檢測(cè)方法：PCR-熒光探針?lè)ā?.2 實(shí)驗(yàn)原理：采用一對(duì)特異性引物和一條特異性熒光探針，配以PCR反應(yīng)液、耐熱DNA聚合酶（Taq酶）、核苷酸單體（dNTPs）等成分，通過(guò)PCR體外擴(kuò)增法，即

2、高溫變性、低溫退火、適溫延伸進(jìn)行DNA擴(kuò)增，并對(duì)PCR全過(guò)程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，從而定量檢測(cè)人瘤（HPV）6,11型DNA。5.3 性能參數(shù)：5.3.1 檢測(cè)下限： 5.0102拷貝/ml。5.3.2 線性范圍：5.01025.0108拷貝/ml。5.4 標(biāo)本：由合作按照以下要求進(jìn)行。5.4.1 標(biāo)本類型：泌尿生殖道物棉拭子、生殖道刮片、組織活檢標(biāo)本等。5.4.1.1物：用細(xì)小棉拭子約24厘米，捻動(dòng)拭子物，將棉拭子置于無(wú)菌試管中，密封送檢（物前2小時(shí)禁小便）。5.4.1.2 女性生殖道物：用無(wú)菌生理鹽水棉球洗去宮頸外物，再用宮頸刷或無(wú)菌棉拭子宮頸內(nèi)，停5秒后旋動(dòng)宮頸刷或棉拭子宮頸物，將宮頸刷或棉拭子

3、置于無(wú)菌試管中，密封送檢。5.4.1.3 女性物：用無(wú)菌生理鹽水棉球洗凈口，再用無(wú)菌棉拭子約2厘米，捻動(dòng)拭子物，將棉拭子置于無(wú)菌試管中，密封送檢。5.4.1.4 生殖道刮片：用刮片刮取宮頸病灶處脫落細(xì)胞，置于無(wú)菌玻璃管中，密封送檢。5.4.1.5 組織活檢標(biāo)本（包括宮頸組織、組織、疣狀組織等）：取可疑組織適量置于無(wú)菌玻璃管中，密封送檢。5.4.2 標(biāo)本保存：標(biāo)本后保存于28。5.4.3 運(yùn)送條件：標(biāo)本運(yùn)送采用冰壺。5.5 設(shè)備和試劑：5.5.1 設(shè)備： DA7600熒光定量PCR儀、低速水平離心機(jī)、生物安全柜、臺(tái)式高速離心機(jī)、移液器、混勻器、恒溫水浴箱/干式恒溫器、冰箱（4、-20）、移動(dòng)/固

4、定紫外燈、冷凍離心機(jī)。5.5.2 試劑：5.5.2.1試劑品牌：中山大學(xué)結(jié)結(jié)核分支桿菌核酸擴(kuò)增（PCR）熒光檢測(cè)試劑盒5.5.2.2試劑批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字 S20060097。5.5.2.3試劑組成：DNA 提取液（500L/管）2 管；（HPV） 6,11-PCR 反應(yīng)管（未貼）20人份；（HPV ）6,11陽(yáng)性質(zhì)控品（50L/管）1 管；質(zhì)控品（500L/管）1 管。5.5.2.4 試劑包裝規(guī)格：?jiǎn)喂軉稳朔荩?0人份/盒。5.5.2.5 試劑保存和有效期：保存于-20；有效期6個(gè)月。5.6 操作過(guò)程：5.6.1 標(biāo)本的處理：5.6.1.1打開(kāi)恒溫水浴槽或加熱器，設(shè)定溫度 100。5.6.1

5、.2從試劑盒中取出DNA提取液，讓其在室溫下完全融化。5.6.1.3泌尿生殖道物棉拭子的處理：5.6.1.3.1向無(wú)菌試管中加入1ml滅菌生理鹽水，充分振蕩混勻，擠干棉拭子。5.6.1.3.2吸取全部液體轉(zhuǎn)至1.5ml 離心管中，12,000rpm離心5min。5.6.1.3.3去上清，沉淀中加入50ul DNA提取液充分混勻，100恒溫處理101min。5.6.1.3.412,000rpm離心5min，待用。5.6.1.4 生殖道刮片的處理：5.6.1.4.1 向無(wú)菌試管中加入1ml滅菌生理鹽水，充分振蕩混勻。5.6.1.4.2 吸取全部液體轉(zhuǎn)至1.5ml EP管中，12,000rpm離心5

6、min。5.6.1.4.3 其余步驟同泌尿生殖道分泌物棉拭子處理的3、4步驟。5.6.1.5 組織活檢標(biāo)本的處理：5.6.1.5.1 用適量滅菌生理鹽水送檢組織沾帶的血液。5.6.1.5.2 取約50毫克組織置于干凈器皿中，加1ml滅菌生理鹽水用勻漿器研磨成組織勻漿，轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管中，12,000rpm離心5min。5.6.1.5.3 去上清，沉淀中加入50ul DNA提取液充分混勻，100恒溫處理101min。5.6.1.5.4 12,000rpm離心5min，備用。5.6.2 排版：在DA7600熒光定量擴(kuò)增儀的上機(jī)面板表里設(shè)置面板。5.6.3 加樣： 從-20冰箱取出HPV 6,

7、11-PCR 反應(yīng)管若干管轉(zhuǎn)移至加樣區(qū)，根據(jù)上機(jī)面板的位置放好后，直接加入處理好的樣本DNA 5L，2,500rpm 離心1 min。5.6.4 DA7600熒光定量擴(kuò)增儀的設(shè)置及結(jié)果分析：參見(jiàn)PCR擴(kuò)增檢測(cè)及結(jié)果分析操作規(guī)程。5.6.5實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。5.6.6 取出結(jié)束后擴(kuò)增儀內(nèi)擴(kuò)增產(chǎn)物需用手套包好、后，丟入醫(yī)療廢物桶內(nèi)，以防止擴(kuò)增管破裂而導(dǎo)致污染。5.6.7 關(guān)閉擴(kuò)增儀電源和計(jì)算機(jī)電源。5.7 臨床意義：直接反映內(nèi)人瘤（HPV）6,11型是否存在及其活躍程度，可作人乳頭瘤（HPV）6,11型的輔助及其療效監(jiān)測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)。5.8 安全防護(hù)措施：5.8.1 試劑處理：5.8.1.1使用或更換試劑時(shí)，務(wù)

8、必戴手套；不要用身體直接接觸試劑，以免損傷皮膚。5.8.1.2如果皮膚接觸了試劑，立即用大量清水沖洗并。5.8.1.3如果眼睛接觸了試劑，立即用噴淋器沖洗，并緊急就醫(yī)。5.8.2 儀器使用：5.8.2.1儀器運(yùn)轉(zhuǎn)中不要觸摸加樣機(jī)構(gòu)、試劑分注機(jī)構(gòu)、攪拌機(jī)構(gòu)、反應(yīng)容器機(jī)構(gòu)等可動(dòng)部分。5.8.2.2 儀器通電時(shí)不能打開(kāi)儀器上面、背面、側(cè)面的蓋板，不能觸摸光源燈的玻璃面。5.8.3 生物安全防護(hù)：參見(jiàn)生物安全防護(hù)手冊(cè)。5.9 注意事項(xiàng)：5.9.1PCR熒光定量檢測(cè)法比較容易受污染，所以實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)避免反復(fù)開(kāi)蓋，所用耗材均需高壓滅菌。5.9.2試劑使用前要完全解凍，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。5.9.3試劑盒DNA提取液內(nèi)含不溶于水的物質(zhì)，取樣時(shí)需用加樣器充分混勻后吸取。如出現(xiàn)因吸頭嘴部太細(xì)不能吸取或取樣后堵塞吸頭的現(xiàn)象，可先用潔凈無(wú)污染的剪刀將吸頭嘴部剪去一截。6.相關(guān)表格：6.1LAB-SOP-PCR-005-T01-001PCR實(shí)驗(yàn)、交表6.2LAB-SOP-PCR-015-T01-001PCR遲發(fā)登記表6.3LAB-SOP-PCR-014-T01-001PCR不