植物激素對愈傷組織形成和分化的影響

1、實驗植物激素對愈傷組織形成和分化的影響在植物組織培養(yǎng)中，原已分化的外植體(根、莖、葉、花、果實、種子、花粉等)細胞， 又能重新進行分裂生長，形成沒有組織結構的細胞團，即愈傷組織，這個過程稱為脫分化。 愈傷組織經(jīng)過繼代培養(yǎng)后又可分化形成根和芽，稱為再分化。植物激素在“再分化”中起重 要作用。【原理】愈傷組織分化根和芽受培養(yǎng)基中生長素和細胞分裂素的相對濃度的影響，生長素/細胞 分裂素比值高時，促進根的分化；比值低時，則促進芽的分化；兩種激素比值適中時，則愈 傷組織生長占優(yōu)勢或不分化。這樣，通過改變兩種激素的相對濃度即可有效地調節(jié)愈傷組織 再分化的進程?！緝x器與用具】超凈工作臺；高壓滅菌鍋1個；手術

2、刀一把；長柄鑷子1把；三角瓶4支；容量瓶： 25ml、50ml、500ml、1000ml 各 1 支；吸量管：1ml、2ml、5ml、10ml 各 1 支；培養(yǎng)皿 1 個；下口杯1個；燒杯1000ml 1個；酒精燈1個；牛皮紙；白線繩；培養(yǎng)室?！驹噭?5%乙醇；1%次氯酸納；1mol/L HCI；瓊脂；6-芐基腺嘌吟；萘乙酸；MS培養(yǎng)基中各 種化合物(配方見附錄七)?！痉椒ā颗渲婆囵B(yǎng)基按MS培養(yǎng)基配方(見附錄七)，先配制各母液。(1)按表36-1，配置10倍的大量元素母液：表36-1 10倍的大量元素母液配置表無機鹽NH4NO3KNQCaCl2 . 2H2OMgSO4 7H2OKH2PO4重

3、量(g)16.5194.43.71.7用蒸餾水溶解并定容至1000ml。按表36-2配置100倍的微量元素母液：用蒸餾水溶解并定容至1000ml。無機鹽重量(mg)KI83HBO.62034MnSO4 4H2O2230ZnSO4 7H2O860Na2MoO4 2H2O25CuSO4 5H2O2.5CoCl2 6H2O2.5(4)有機成分：20mg/ml的肌醇溶液 稱取2g肌醇表35-2 100倍的微量元素母液配置表200倍的鐵鹽母液：稱EDTA-Na2 3.37g，F(xiàn)eSO4 - 7H2O 2.78g，用蒸餾水溶解并定容 至 500ml。用蒸餾水溶解后定容至100ml。0.5mg/ml的煙酸溶

4、液 稱取12.5mg的 煙酸，用蒸餾水溶解后定容至25ml。1 mg/ml的甘氨酸溶液 稱取25mg甘 氨酸，用蒸餾水溶解后定容至25ml。0.5mg/ml的鹽酸毗哆醇(維生素B6) 稱取12.5mg鹽酸毗哆醇，用蒸餾水溶解后定 容至25ml。0.1mg/ml的鹽酸硫胺素（維生素B1） 稱取10mg鹽酸硫胺素，用蒸餾水溶解后定 容至100ml。（5）植物激素：0.1mg/ml的萘乙酸溶液稱取10mg NAA，用少量95%乙醇溶解后，用蒸餾水定容 至 100ml。1mg/ml 6-芐基腺嘌吟 稱取50mg6-BA,用少量1mol/L的HCl溶解后，用蒸餾水定 容至50ml。將各種元素的母液混合，

5、配制成MS培養(yǎng)基，其中1升體積中所含各種元素的母液含量 如表36-3：表36-3 1L MS培養(yǎng)基中各種元素的母液含量大量元素母液100ml微量元素母液10ml鐵鹽母液5m l肌醇母液5 ml甘氨酸母液2ml煙酸母液1ml鹽酸毗哆醇母液1ml蔗糖30g鹽酸硫胺素母液1ml瓊脂9g再按表36-4分別加入NAA和6-BA母液:表36-4 培養(yǎng)基14加入NAA、6-BA配置表培養(yǎng)基1234NAA母液0.1ml0.2ml0.1ml06-BA母液3 ml3 ml03 ml先在三角燒杯（或不銹鋼鍋）加入600ml蒸餾水，加入所需的瓊脂和糖，在水浴鍋里 將瓊脂溶化，如果直接加熱應不停地攪拌，防止在瓶底（或鍋

6、底）燒焦或沸騰溢出。再將溶 解的瓊脂糖溶液倒入盛有上述各種物質母液的下口杯中，混勻，用1mol/L NaOH或1mol/L HCl調pH至5.8，用蒸餾水定容至1升。將培養(yǎng)基分注到三角瓶或試管中，按容器的大小 和培養(yǎng)要求放入適當量的培養(yǎng)基。分裝時注意不要把培養(yǎng)基沾附到瓶口或管口附近的內壁 上，以免培養(yǎng)過程中發(fā)生污染。分裝中還要不時攪動下口杯中的培養(yǎng)基，否則先后分裝的各 瓶培養(yǎng)基凝固能力不同。蓋上棉塞，用牛皮紙包扎好后，放入高壓滅菌鍋，1.2大氣壓下滅 菌15min，冷卻后備用。材料的滅菌與接種取開花前23天已露白的菊花花蕾，先用自來水沖洗花蕾，然后在75%乙醇中浸泡15 秒鐘，后用無菌水沖洗2次，再用1%次氯酸納溶液浸泡15min，并不時輕輕攪動。用無菌 水清洗三次，再轉入放有濾紙而又無菌的培養(yǎng)皿中，用剪刀剪取舌狀花，用解剖刀切取舌狀 花的5毫米見方大小的小塊，一個100ml的三角瓶中68個小塊。接種后放到培養(yǎng)室中培 養(yǎng)。培養(yǎng)室內的溫度為252C，日光燈每天照明12h，光照強度約2000lx。結果觀察和記錄接種后注意觀察記錄外植體上愈傷組織和根芽出現(xiàn)的時間和數(shù)量，加以分析比較。【注意事項】在配制植物激素時，溶解試劑的乙醇和鹽酸用量要少，用蒸餾水稀釋時，慢慢沿燒杯 內壁加入。對培養(yǎng)基和材料