植物組織培養(yǎng)試題 第6章

1、第6章 細(xì)胞培養(yǎng)復(fù)習(xí)題及參考答案一、填空：1、一般平板培養(yǎng)要求細(xì)胞密度每毫升為1X103S100X103個(gè)。2、條件培養(yǎng)基是懸浮培養(yǎng)過(guò)一段時(shí)間組織或細(xì)胞的液體培養(yǎng)基。3、細(xì)胞懸浮培養(yǎng)主要應(yīng)用于植物有用物質(zhì)的生產(chǎn)、誘發(fā)和篩選突變體、原生質(zhì)體培 養(yǎng)和細(xì)胞器分離、食品生產(chǎn)等。4、中植物葉片分離單細(xì)胞的方法有機(jī)械法和酶解法。5、細(xì)胞懸浮培養(yǎng)方法：成批培養(yǎng)：連續(xù)培養(yǎng)6、連續(xù)培養(yǎng)的種類：(1)半連續(xù)培養(yǎng)；(2)連續(xù)培養(yǎng)7、連續(xù)培養(yǎng)的方法：(1)濁度恒定法；(2)化學(xué)恒定法二、名詞：1、看護(hù)培養(yǎng)法(nurse culture):是指用一塊活躍生長(zhǎng)的愈傷組織塊來(lái)看護(hù)單個(gè)細(xì)胞， 并使其生長(zhǎng)和增殖的方法。2、平板

2、培養(yǎng)法(plante culture)：是把單細(xì)胞懸浮液與融化的瓊脂培養(yǎng)基均勻混合， 平鋪一薄層在培養(yǎng)基底上的培養(yǎng)方法。3、細(xì)胞懸浮培養(yǎng)(suspension culture)：是指將單個(gè)游離細(xì)胞或小細(xì)胞團(tuán)在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)增殖的技術(shù)。4、初始植板密度(inital planting density)：?jiǎn)渭?xì)胞固體平板培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞懸浮液接種 到瓊脂培養(yǎng)基上最初細(xì)胞密度。5、臨界密度(critical density)：?jiǎn)渭?xì)胞培養(yǎng)時(shí)，初始植板密度低于某值培養(yǎng)細(xì)胞就不能 進(jìn)行分裂和發(fā)育成細(xì)胞團(tuán)，則該值就是臨界密度。(課件沒有)6、植物細(xì)胞培養(yǎng)(plant cell culture)：是指對(duì)植物器

3、官或愈傷組織上分離出的單細(xì)胞(或 小細(xì)胞團(tuán))進(jìn)行離體培養(yǎng)，形成單細(xì)胞無(wú)性系或再生植株的技術(shù)。7、條件培養(yǎng)基：曾懸浮培養(yǎng)過(guò)一段時(shí)間組織或細(xì)胞的液體培養(yǎng)基。8、植板率：是指已形成細(xì)胞團(tuán)的單細(xì)胞與接種總細(xì)胞數(shù)的百分?jǐn)?shù)三、問答題：1、如何得到單細(xì)胞無(wú)性系？在細(xì)胞培養(yǎng)中，常由分散性較好的愈傷組織或懸浮培養(yǎng)物來(lái)制備單細(xì)胞，也可以用機(jī)械 法和酶解法從植物器官直接制備單細(xì)胞。由分離的單細(xì)胞經(jīng)看護(hù)培養(yǎng)法、微室培養(yǎng)法或平板培養(yǎng)法，即可得到單細(xì)胞無(wú)性系2、單細(xì)胞培養(yǎng)有哪些方法？各有何含義及特點(diǎn)單細(xì)胞培養(yǎng)：看護(hù)培養(yǎng)；微室培養(yǎng)；平板培養(yǎng)看護(hù)培養(yǎng)法：指用一塊活躍生長(zhǎng)的愈傷組織塊來(lái)看護(hù)單個(gè)細(xì)胞，并使其生長(zhǎng)和增殖 的方法。特

4、點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便易行。效果好，易于成功。缺點(diǎn)：不能在顯微鏡下直接觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)過(guò)程。用途：誘導(dǎo)形成單細(xì)胞系。微室培養(yǎng)：即將細(xì)胞培養(yǎng)在很少量的培養(yǎng)基中。特點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：在培養(yǎng)過(guò)程中，可以連續(xù)進(jìn)行顯微觀察一個(gè)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分裂和形成 細(xì)胞團(tuán)的全部過(guò)程缺點(diǎn)：培養(yǎng)時(shí)間較短用途:主要用來(lái)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)、分裂、形成細(xì)胞團(tuán)的過(guò)程。平板培養(yǎng)法：把單細(xì)胞懸浮液與融化的瓊脂培養(yǎng)基均勻混合，平鋪一薄層在培養(yǎng)基底上的培養(yǎng)方法。特點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：可以定點(diǎn)觀察；分離單細(xì)胞系容易;缺點(diǎn)：培養(yǎng)細(xì)胞氣體交換不暢。用途:分離單細(xì)胞無(wú)性系，研究其生理、生化、遺傳上的差異而設(shè)計(jì)的一種單細(xì)胞培 養(yǎng)技術(shù)。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞、原生質(zhì)體及融合產(chǎn)物的培養(yǎng)。（4）

5、條件培養(yǎng)3、什么是植板率？小細(xì)胞團(tuán)的計(jì)數(shù)方法有哪幾種？植板率是指已形成細(xì)胞團(tuán)的單細(xì)胞與接種總細(xì)胞數(shù)的百分?jǐn)?shù)。小細(xì)胞團(tuán)計(jì)數(shù)方法：低倍顯微鏡直接計(jì)算；細(xì)胞團(tuán)顯影法4、什么是細(xì)胞懸浮培養(yǎng)？簡(jiǎn)述成批培養(yǎng)和連續(xù)培養(yǎng)的的特點(diǎn)？細(xì)胞懸浮培養(yǎng)：是使離體的植物細(xì)胞懸浮在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行的無(wú)菌培養(yǎng)。（1）成批培養(yǎng)的特點(diǎn)：細(xì)胞生長(zhǎng)在固定體積的培養(yǎng)基上，直至養(yǎng)分耗盡用攪拌的方法使細(xì)胞團(tuán)和細(xì)胞均勻分布細(xì)胞數(shù)目呈現(xiàn)慢一快一慢一停止生長(zhǎng)的變化，但必須更換新鮮培養(yǎng)基才能進(jìn)行下一批 培養(yǎng)（2）連續(xù)培養(yǎng)的特點(diǎn)：由于不斷加入新鮮培養(yǎng)基，保證了養(yǎng)分的充分供應(yīng)，不會(huì)出現(xiàn)懸浮培養(yǎng)物發(fā)生營(yíng)養(yǎng)不 足的現(xiàn)象可在培養(yǎng)期間使細(xì)胞保持在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期中

6、。細(xì)胞增殖速度快適于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)5、影響單細(xì)胞培養(yǎng)的因子/ 1、條件培養(yǎng)基：條件培養(yǎng)基可有利于單細(xì)胞的生長(zhǎng)與分裂/ 2、細(xì)胞密度（臨界密度）：臨界密度：?jiǎn)渭?xì)胞培養(yǎng)時(shí)，初始植板密度低于某值培養(yǎng) 細(xì)胞就不能進(jìn)行分裂和發(fā)育成細(xì)胞團(tuán)，則該值就是臨界密度。初始植板密度應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)狀況而改變，培養(yǎng)基越復(fù)雜則植板細(xì)胞的臨界密度越低， 反之則相反。一般要求每毫升在1000個(gè)細(xì)胞以上。/ 3、生長(zhǎng)激素：生長(zhǎng)激素加1種細(xì)胞分裂素和幾種氨基酸（如：丙氨酸、谷氨酸、半 胱氨酸、谷氨酰胺）。臨界密度只需25-30細(xì)胞/毫升。/ 4、pH：偏酸。/ 5、CO2:可誘導(dǎo)細(xì)胞分裂。6、細(xì)胞懸浮培養(yǎng)主要應(yīng)用1）、植物有用物質(zhì)的生產(chǎn)：在植物組織培養(yǎng)研究中，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)細(xì)胞中含有各種特殊的 代謝產(chǎn)物。2）、誘發(fā)和篩選突變體：在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生一些突變體，常采用不同培養(yǎng)基來(lái)進(jìn) 行選擇，也就是把懸浮細(xì)胞培養(yǎng)于缺少某種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)或生長(zhǎng)因子，或是添加某種抑制劑的培 養(yǎng)基里，使突變細(xì)胞和正常細(xì)胞區(qū)別開來(lái)3）、原生質(zhì)體培養(yǎng)和細(xì)胞分離：利用細(xì)胞懸浮培養(yǎng)方法，對(duì)細(xì)胞原生質(zhì)進(jìn)行分離，在適 宜的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，使之生成完整植株，或?qū)υw的生理特性進(jìn)行觀察、研究。