氟喹諾酮類(lèi)藥物殘留的檢測(cè)課件

1、有害物質(zhì)動(dòng)物性食品中獸藥殘留的測(cè)定食品理化檢驗(yàn)技術(shù)主講教師：劉丹赤04食品中有毒有害成分的檢驗(yàn)任務(wù)三 氟喹諾酮類(lèi)藥物殘留的測(cè)定 獸藥殘留1目錄頁(yè)CONTENTS PAGE 氟喹諾酮類(lèi)藥物殘留的測(cè)定2 學(xué)習(xí)目標(biāo)知識(shí)目標(biāo)： 1. 理解獸藥的種類(lèi)、獸藥殘留的概念及在動(dòng)物性食品中的最高殘留限量。 2. 了解食品中獸藥殘留常用的檢測(cè)方法。 3. 掌握食品中氟喹諾酮類(lèi)藥物殘留量的測(cè)定方法和操作要點(diǎn)。技能目標(biāo)： 1. 能正確處理和準(zhǔn)備樣品。 2. 能用高效液相色譜儀對(duì)食品中獸藥殘留進(jìn)行檢測(cè)。1 獸藥殘留食品理化檢驗(yàn)技術(shù)獸藥：用于預(yù)防、治療、診斷動(dòng)物疾病或者有目的地調(diào)節(jié)動(dòng)物生理機(jī)能的物質(zhì)（含藥物飼料添加劑）。

2、獸藥殘留：食品動(dòng)物用藥后，動(dòng)物產(chǎn)品的任何食用部分中與所有藥物有關(guān)的物質(zhì)的殘留，包括原型藥物或/和其代謝產(chǎn)物。最高殘留限量：對(duì)食品動(dòng)物用藥后產(chǎn)生的允許存在于食物表面或內(nèi)部的該獸藥殘留的最高量/濃度（以鮮重計(jì)，表示為mg/kg）。抗生素類(lèi)驅(qū)腸蟲(chóng)藥類(lèi)生長(zhǎng)促進(jìn)劑類(lèi)抗原蟲(chóng)藥類(lèi)滅錐蟲(chóng)藥類(lèi)鎮(zhèn)靜劑類(lèi)-腎上腺素能受體阻斷劑臨床應(yīng)用最多的一類(lèi)抗菌藥物，青霉素類(lèi)、-內(nèi)酰胺類(lèi)、氨基糖苷類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)、氯霉素類(lèi)等獸藥殘留分類(lèi)獸藥殘留1234567獸藥殘留的來(lái)源防治畜禽疾病用藥飼料添加劑中獸藥的使用動(dòng)物性食品保鮮休藥期過(guò)短自停止給藥到動(dòng)物獲準(zhǔn)屠宰或其動(dòng)物性產(chǎn)品獲準(zhǔn)上市的間隔時(shí)間 獸藥殘留的危害毒性：急性中毒、慢

3、性中毒三致：致癌、致畸、致突變誘導(dǎo)耐藥菌株：過(guò)敏反應(yīng)激素樣作用污染環(huán)境、影響生態(tài)：中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告 第235號(hào) A.不需要制定最高殘留限量的藥物：88 B.需要制定最高殘留限量的藥物：94 C.可以使用，但不得在食品中檢出的藥物：9 D.禁止使用，且不得在食品中檢出的藥物：31 D9BA C948831目的：為加強(qiáng)獸藥殘留監(jiān)控工作，保證動(dòng)物性食品衛(wèi)生安全獸藥殘留檢測(cè)方法常用方法氣相色譜法（GC）：常規(guī)分析法液相色譜法（HPLC)：常規(guī)分析法，最多采用酶聯(lián)免疫法（ELISA)：選擇性強(qiáng)、靈敏度高、 簡(jiǎn)單、快速儀儀器聯(lián)用 GC-MS、LC-MS、TLC-MS2氟喹諾酮類(lèi)藥物殘留的檢測(cè)食品理

4、化檢驗(yàn)技術(shù)喹諾酮類(lèi)藥物是一類(lèi)化學(xué)合成抗菌藥，由于具有抗菌譜廣、抗菌作用強(qiáng)、使用安全及易于制造等優(yōu)點(diǎn)，發(fā)展迅速。基本母核結(jié)構(gòu)：6-氟-4-喹諾酮-3-羧酸 環(huán)丙沙星 氧氟沙星常用藥物結(jié)構(gòu)諾氟沙星培氟殺星殘留危害過(guò)敏反應(yīng)肝毒性和腎毒性軟骨損傷潛在的致癌性破壞消化道微生物的群落結(jié)構(gòu)耐藥性氟喹諾酮類(lèi)藥物殘留氟喹諾酮類(lèi)藥物在動(dòng)物體內(nèi)分布很廣，一般肝、腎組織中濃度最高，肌肉、血漿中濃度最低。組織中氟喹諾酮類(lèi)殘留物主要是原形藥物，一般選擇原形藥物作為殘留標(biāo)示物，但恩諾沙星的殘留標(biāo)示物為恩諾沙星及其主要代謝產(chǎn)物環(huán)丙沙星。動(dòng)物性食品中氟喹諾酮類(lèi)藥物的最高殘留限量可查找農(nóng)業(yè)部235號(hào)公告動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限

5、量。藥物名 標(biāo)志殘留物 動(dòng)物種類(lèi) 靶組織殘留限量達(dá)氟沙星Danofloxacin ADI：0-20 Danofloxacin牛/綿羊/山羊 家禽 其他動(dòng)物肌肉脂肪肝腎奶 肌肉皮+脂肝腎 肌肉脂肪肝腎 20010040040030 20010040040010050200200藥物名 標(biāo)志殘留物 動(dòng)物種類(lèi) 靶組織殘留限量恩諾沙星Enrofloxacin ADI：0-2Enrofloxacin +Ciprofloxacin牛/羊 牛/羊 豬/兔 禽（產(chǎn)蛋雞禁用） 其他動(dòng)物肌肉脂肪肝腎 奶 肌肉脂肪肝腎 肌肉皮+脂肝腎 肌肉脂肪肝腎100100300200 100 100100200300 1001

6、00200300 100100200200農(nóng)業(yè)部1025號(hào)公告-14-2008 動(dòng)物性食品中氟喹諾酮類(lèi)藥物殘留檢測(cè) 高效液相色譜法農(nóng)業(yè)部781號(hào)公告-6-2006 雞蛋中氟喹諾酮類(lèi)藥物殘留量的測(cè)定 高效液相色譜法農(nóng)業(yè)部1025號(hào)公告-8-2008 動(dòng)物性食品中氟喹諾酮類(lèi)藥物殘留檢測(cè) 酶聯(lián)免疫吸附法SB/T 10925-2012 動(dòng)物組織中氟喹諾酮類(lèi)藥物殘留的快速篩查檢測(cè)農(nóng)業(yè)部783號(hào)公告-2-2006 水產(chǎn)品中諾氟沙星、鹽酸環(huán)丙沙星、恩諾沙星殘留量的測(cè)定 液相色譜法農(nóng)業(yè)部1025號(hào)公告-25-2008 動(dòng)物源食品中恩諾沙星殘留檢測(cè) 酶聯(lián)免疫吸附法農(nóng)業(yè)部1077號(hào)公告-7-2008 水產(chǎn)品中恩諾

7、沙星、諾氟沙星和環(huán)丙沙星殘留的快速篩選測(cè)定 膠體金免疫滲濾法適用于豬的肌肉、脂肪、肝臟和腎臟，雞的肝臟和腎臟組織中達(dá)氟沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星和沙拉沙星藥物殘留量檢測(cè)規(guī)定了動(dòng)物性食品中達(dá)氟沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星和沙拉沙星藥物殘留檢測(cè)的制樣和高效液相色譜測(cè)定方法測(cè)定原理用磷酸鹽緩沖溶液提取試樣中的藥物，C18柱凈化，流動(dòng)相洗脫。以磷酸-乙腈為流動(dòng)相，用高效液相色譜-熒光檢測(cè)法測(cè)定，外標(biāo)法定量。儀器設(shè)備所需試劑除特別注明者外均為分析純?cè)噭?，水為符合GB/T 6682規(guī)定的二級(jí)水。（1）達(dá)氟沙星：含達(dá)氟沙星（C19H20FN3O3）不得少于99.0%。（2）恩諾沙星：含恩諾沙星（C19H22FN3

8、O3）不得少于99.0%。（3）環(huán)丙沙星：含環(huán)丙沙星（C19H18FN3O3）不得少于99.0%。（4）沙拉沙星：含沙拉沙星（C20H17F2N2O3）不得少于99.0%。（5）乙腈：色譜純。（6）甲醇。（7）三乙胺。所需試劑（8）5.0mol/L氫氧化鈉溶液（9）0.03mol/L氫氧化鈉溶液（10）0.05mol/L磷酸/三乙胺溶液（11）磷酸鹽緩沖溶液（用于肌肉、脂肪組織）（12）磷酸鹽溶液（用于肝臟、腎臟組織）（13）達(dá)氟沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星和沙拉沙星標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（14）達(dá)氟沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星和沙拉沙星標(biāo)準(zhǔn)工作液色譜柱進(jìn)樣器檢測(cè)器分析步驟樣品制備稱(chēng)樣提取凈化標(biāo)準(zhǔn)曲線制備數(shù)據(jù)處理

9、樣品制備樣品的制備取適量新鮮或冷凍的空白或供試組織，絞碎并使均勻。樣品的保存-20以下冰箱中貯存?zhèn)溆谩Ｔ嚇又苽湓嚵系闹苽浒ǎ喝〗g碎后的供試樣品，作為供試試料；取絞碎后的空白樣品，作為空白試料；取絞碎后的空白樣品，添加適宜濃度的對(duì)照溶液，作為空白添加試料。提 取取(20.05)g試料，置30mL勻漿機(jī)中，加磷酸鹽緩沖溶液10.0mL，勻漿1min。勻漿液轉(zhuǎn)入離心管中，中速振蕩5min，離心，取上清液，待用。用磷酸鹽緩沖溶液10.0mL洗刀頭及勻漿杯，轉(zhuǎn)入離心管，洗殘?jiān)?，混勻，中速振?min，離心。合并兩次上清液，混勻備用。凈 化固相萃取柱先依次用甲醇、磷酸鹽緩沖溶液各2mL預(yù)洗。取上清液5.

10、0mL過(guò)柱，用水1mL淋洗，擠干。用流動(dòng)相1.0mL洗脫，擠干，收集洗脫液。經(jīng)濾膜過(guò)濾后作為試樣溶液，供高效液相色譜法測(cè)定。準(zhǔn)確量取適量達(dá)氟沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星和沙拉沙星標(biāo)準(zhǔn)工作液，用流動(dòng)相稀釋成濃度分別為0.005g/mL、0.01g/mL、0.05g/mL、0.1/mL、0.3g/mL、0.5g/mL的對(duì)照溶液，供高效液相色譜分析。標(biāo)準(zhǔn)曲線制備色譜柱：C18 250mm4.6mm（i.d），粒徑5m，或相當(dāng)者；流動(dòng)相：0.05mol/L磷酸溶液/三乙胺-乙腈（82+18，v/v），使用前經(jīng)微孔濾膜過(guò)濾；流速：0.8mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：激發(fā)波長(zhǎng)280nm；發(fā)射波長(zhǎng)450nm；柱溫：室

11、溫；進(jìn)樣量：20L。設(shè)置色譜參數(shù)取試樣溶液和相應(yīng)的對(duì)照溶液，作單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。對(duì)照溶液及試樣溶液中達(dá)氟沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星和沙拉沙星響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍之內(nèi)除不加試料外，采用完全相同的測(cè)定步驟進(jìn)行平行操作。上機(jī)檢測(cè)色譜峰：1-環(huán)丙沙星；2-達(dá)氟沙星；3-恩諾沙星；4-沙拉沙星。氟喹諾酮類(lèi)藥物対照溶液色譜圖色譜峰：1-環(huán)丙沙星；2-達(dá)氟沙星；3-恩諾沙星；4-沙拉沙星。豬肝臟組織中氟喹諾酮類(lèi)藥物色譜圖式中：X試料中達(dá)氟沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星和沙拉沙星的殘留量，ng/g； A試樣溶液中相應(yīng)藥物的峰面積； AS對(duì)照溶液中相應(yīng)藥物的峰面積； cS對(duì)照溶液中相應(yīng)藥物的濃度，ng/mL； V1提取用磷酸鹽緩沖液的總體積，mL； V2過(guò)C18固相萃取柱所用備用液體積，mL； V3洗脫用流動(dòng)相體積，mL； m供試試料的質(zhì)量，g。結(jié)果計(jì)算計(jì)