水體衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)27張幻燈片

1、第六章 環(huán)境中微生物的檢測(cè)第一節(jié) 水體中的微生物一、水體是微生物的天然生境 無(wú)論是海水還是淡水水體中，都有著微生物生長(zhǎng)所必需的營(yíng)養(yǎng)，有著土壤所具備的條件。 二、水體中微生物的數(shù)量和分布 1. 污染淡水 處于城鎮(zhèn)等人口聚集地區(qū)的湖泊、河流等淡水。 108109個(gè)/mL水 主要是一些能分解各種有機(jī)物的腐生菌，如芽孢桿菌、生孢梭菌、變形桿菌、大腸桿菌、糞鏈球菌等。有的甚至還含有傷寒、痢疾、霍亂、肝炎等人類(lèi)病原菌。2. 清潔淡水（1）溪流及貧營(yíng)養(yǎng)湖 10100個(gè)/mL水 以自養(yǎng)型種類(lèi)為主。常見(jiàn)細(xì)菌有綠硫細(xì)菌、紫色細(xì)菌、藍(lán)細(xì)菌、柄細(xì)菌、赭色纖發(fā)菌、球衣菌和螢光假單胞菌等。此外，還有許多藻類(lèi)（如綠藻、硅藻

2、等）、原生動(dòng)物（如鐘蟲(chóng)及其他固著型纖毛蟲(chóng)、變形蟲(chóng)、鞭毛蟲(chóng)等）和后生動(dòng)物（如枝角類(lèi)、橈足類(lèi)等）。（2）地下水、自流井、山泉及溫泉 有機(jī)物和微生物都很少 石油巖石地下水含分解烴的細(xì)菌，含鐵泉水有鐵細(xì)菌，含硫溫泉有硫磺細(xì)菌。3. 影響微生物在淡水水體中分布的因素 水體類(lèi)型、污染程度、有機(jī)物的含量、溶解氧量、水溫、pH及水深等。4. 海水 除了一些從河水、雨水及污水等帶來(lái)的臨時(shí)種類(lèi)外，絕大多數(shù)是耐鹽、嗜冷、耐高滲透壓和耐高靜水壓力的種類(lèi)。海水中常見(jiàn)的微生物有假單胞菌屬、弧菌屬、黃色桿菌屬、無(wú)色桿菌屬及芽孢桿菌屬等。 一般在港口，每毫升海水含菌量為1105個(gè)，在外海每毫升含菌為10250個(gè)。 各種用途的

3、水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn) 標(biāo)準(zhǔn)名稱(chēng)及標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)值生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB5749-85細(xì)菌總數(shù)(個(gè)/mL)100總大腸菌群(個(gè)/L)3生活飲用水源水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)CJ3020-93總大腸菌群(個(gè)/L)一級(jí)1000二級(jí)10000地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)GB3838-2019糞大腸菌群(個(gè)/L)200 2000 10000 20000 40000地下水質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)GB/T14848-93細(xì)菌總數(shù)(個(gè)/mL)100 1000 1000總大腸菌群(個(gè)/L)3 100 100景觀娛樂(lè)用水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)GB12941-91總大腸菌群(個(gè)/L)糞大腸菌群(個(gè)/L)A類(lèi)10000A類(lèi)2000農(nóng)業(yè)灌溉水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)GB5084-92糞大腸菌群(個(gè)/L)

4、10000漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)GB11607-89總大腸菌群(個(gè)/L)5000500（貝類(lèi)養(yǎng)殖水質(zhì)）海水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)GB3097-2019總大腸菌群(個(gè)/L)10000 700（貝類(lèi)養(yǎng)殖水質(zhì)）（一） 細(xì)菌總數(shù)測(cè)定 菌落總數(shù)需氧情況下，37培養(yǎng)48h，能在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板 上生長(zhǎng)的細(xì)菌菌落總數(shù).作用：判定水體被細(xì)菌污染的程度基本操作一般包括： 樣品的稀釋傾注平皿培養(yǎng)48小時(shí)計(jì)數(shù)報(bào)告。 三、水的細(xì)菌學(xué)檢測(cè)1、樣品的處理和稀釋 操作要求：“無(wú)菌操作”貫徹始終。充分振搖或研磨25g或25ml檢樣225mL稀釋液含有玻璃珠的滅菌玻璃瓶或乳缽1：10稀釋液。1ml1ml1ml9ml稀釋液1：1009ml稀釋液1：10

5、009ml稀釋液1：10000減少誤差：每遞增稀釋一次即換用1支1ml滅菌吸管，將吸管內(nèi)液體沿管壁流入， 勿使吸管尖端伸入稀釋液內(nèi)，并且稀釋液應(yīng)充分振搖。環(huán)境要求：瓊脂平板在工作臺(tái)暴露15分鐘，每個(gè)平板不得超過(guò)15個(gè)菌落。 代表性：取固體樣品時(shí)需多采幾個(gè)部位，且經(jīng)過(guò)均質(zhì)或研磨； 液體樣品須經(jīng)過(guò)振搖，以獲得均勻稀釋液。 2、稀釋樣品的取樣和傾注平皿 每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿將涼至46營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基注入平皿約15ml，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿，混合均勻。1.取樣傾注平皿1：10稀釋液225mL無(wú)菌水1mL1mL9mL稀釋液1：1009mL稀釋液1：10001mL1mL1mL1mL1mL1mL1ml無(wú)菌水25g或25

6、ml檢樣3、培養(yǎng)及計(jì)數(shù)培養(yǎng)條件：倒置于361溫箱內(nèi)培養(yǎng)482h計(jì)數(shù)時(shí)間：到達(dá)規(guī)定培養(yǎng)時(shí)間，應(yīng)立即計(jì)數(shù)。如果不能立即計(jì)數(shù)，應(yīng)將平板放 置于04，但不得超過(guò)24h。菌落總數(shù)報(bào)告方式計(jì)平皿中菌落數(shù)：肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡檢查。記下各平板的菌落總數(shù)，求出同稀 釋度的各平板平均菌落數(shù)。規(guī)律：不同稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)與稀釋倍數(shù)成反比（同一稀釋度的二個(gè)平板的菌落 數(shù)應(yīng)基本接近），即稀釋倍數(shù)愈高菌落數(shù)愈少，稀釋倍數(shù)愈低菌落數(shù)愈 多。 如出現(xiàn)逆反現(xiàn)象，則應(yīng)視為檢驗(yàn)中的差錯(cuò)（有的食品有時(shí)可能出現(xiàn)逆反現(xiàn) 象，如酸性飲料等），不應(yīng)作為檢樣計(jì)數(shù)報(bào)告的依據(jù)。報(bào)告原則菌落總數(shù)報(bào)告方式例次不同稀釋度的平均菌落數(shù)兩個(gè)稀釋度菌落數(shù)

7、之比菌落數(shù)(個(gè)/mL)報(bào)告方式(個(gè)/mL)10-110-210-3113651642022760295461.632890271602.24無(wú)法計(jì)數(shù)46505135271156無(wú)法計(jì)數(shù)305127無(wú)法計(jì)數(shù)無(wú)法計(jì)數(shù)無(wú)法計(jì)數(shù)164001.6104377503.8104271002.71045130005.11052702.7102305003.110410-3無(wú)法計(jì)數(shù)菌落總數(shù)報(bào)告方式計(jì)數(shù)原則：選平均菌落數(shù)在30300之間者進(jìn)行計(jì)算2.若有2個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)在30300之間時(shí)，則按兩者的菌落總數(shù)之比來(lái)決 定，若比值小于2應(yīng)報(bào)告兩者的平均數(shù)；若大于2則報(bào)告其中較小的菌落總數(shù)。3.若所有稀釋度的平均

8、菌落數(shù)均大于300，以稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍 數(shù)報(bào)告之。4.若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀 釋倍數(shù)報(bào)告之。5.若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30300之間，則以最接近300或30的平均菌 落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。6.若所有的菌落數(shù)勻?yàn)椤盁o(wú)法計(jì)數(shù)”時(shí)，應(yīng)注明水樣的最大稀釋倍數(shù)。7.在求同稀釋度的平均數(shù)時(shí)，若其中1個(gè)平板上有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為該稀釋度的平均菌落數(shù)。若片狀菌落約為平板的一半，而另一半平板上菌落分布很均勻，則可按半平板上的菌落計(jì)數(shù)，然后乘以2作為整個(gè)平板的菌落數(shù)。1.僅1個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)在

9、此范圍時(shí)，則以該平均菌落數(shù)乘其稀釋倍數(shù)報(bào) 告之。4、菌落總數(shù)報(bào)告方式 菌落數(shù)的報(bào)告，按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法規(guī)定菌落數(shù)在1100時(shí)，按實(shí)有數(shù)字報(bào)告，如大于100時(shí)，則報(bào)告前面兩位有效數(shù)字，第三位數(shù)按四舍五入計(jì)算。為了縮短數(shù)字后面的零位，可用10的指數(shù)來(lái)表示。 固體檢樣以克（g)為單位報(bào)告，液體檢樣以毫升（mL）為單位報(bào)告，表面涂擦則以平方厘米（cm2）報(bào)告。(二) 大腸菌群測(cè)定 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)采用三步法 1、檢驗(yàn)查表方法 大腸菌群 需氧及兼性厭氧、在37能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革 蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌。 乳糖發(fā)酵試驗(yàn)分離培養(yǎng)證實(shí)試驗(yàn)樣品稀釋后，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種三管乳糖膽鹽發(fā)酵管。361培養(yǎng)482h，觀

10、察是否產(chǎn)氣。 將產(chǎn)氣發(fā)酵管培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，361培養(yǎng)18-24h，觀察菌落形態(tài)。挑取平板上的可疑菌落，進(jìn)行革蘭氏染色觀察。同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管361培養(yǎng)242h，觀察產(chǎn)氣情況。 根據(jù)證實(shí)為大腸桿菌陽(yáng)性的管數(shù)，查MPN表，報(bào)告每100ml（g）大腸菌群的MPN值。 較清潔樣品的三步法圖示 100mL50mL三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液100mL5mL5mL5mL5mL5mL5mL5mL5mL5mL5mL水樣10mL10mL10mL10mL10mL10mL10mL10mL10mL10mL三步法圖示 取產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管中培養(yǎng)液在伊紅美蘭平板上進(jìn)行劃線取有核心和帶金屬光澤的深紫色菌落進(jìn)行革蘭

11、氏染色乳糖蛋白胨培養(yǎng)液鏡檢（革蘭氏陰性菌）37 培養(yǎng)48h證實(shí)產(chǎn)氣（陽(yáng)性）結(jié)果與否37 培養(yǎng)24h37培養(yǎng)24h 大腸菌群測(cè)定 2、計(jì)算方法 挑選菌落特征：黑紫色、有光澤或無(wú)光澤菌落； 紅色、粉紅色菌落。抑制劑：膽鹽、煌綠、十二烷基硫酸鈉。 為陰性結(jié)果的水樣體積（mL）全部水樣體積（mL） MPN 1000為陽(yáng)性結(jié)果的發(fā)酵管（瓶）的數(shù)目 產(chǎn)酸判斷：紫色培養(yǎng)液變成黃色產(chǎn)氣判斷：發(fā)酵導(dǎo)管內(nèi)有小氣泡，如輕輕打動(dòng)試管有氣泡沿管壁 上浮，應(yīng)考慮可能有氣體產(chǎn)生，需進(jìn)一步試驗(yàn)。 練 習(xí)：如對(duì)一自來(lái)水廠出水進(jìn)行檢驗(yàn)，初發(fā)酵一般在10支小發(fā)酵管和兩支大發(fā)酵瓶?jī)?nèi)進(jìn)行，復(fù)發(fā)酵在5支小發(fā)酵管內(nèi)進(jìn)行。以300mL進(jìn)行初

12、發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，其中100mL的水樣2份（分狀于2個(gè)大發(fā)酵瓶中），10mL水樣10份，（分狀于10支個(gè)小發(fā)酵管中）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：100mL的2份水樣為陰性結(jié)果，無(wú)大腸桿菌存在；10mL的水樣中有5份為陽(yáng)性結(jié)果，存在大腸桿菌。則：為陰性結(jié)果的水樣體積（mL）全部水樣體積（mL） 1000為陽(yáng)性結(jié)果的發(fā)酵管（瓶）的數(shù)目 MPN =MPN 1000 5250（mL）300（mL） 第二節(jié) 空氣中的微生物 空氣的生態(tài)條件不適合微生物生長(zhǎng)繁殖。（營(yíng)養(yǎng)不足、紫外線照射、水分少）。 一、空氣微生物的來(lái)源 空氣中的微生物主要來(lái)自土壤飛起來(lái)的灰塵、水面吹起的水滴、生物體體表脫落的物質(zhì)、人和動(dòng)物的排泄物等。 二、空氣中微

13、生物的數(shù)量和分布 空氣中的微生物大部分是腐生的種類(lèi)，但是不同的空氣環(huán)境中微生物的種類(lèi)不同。有些種類(lèi)是普遍存在的，如某些霉菌、酵母菌、真菌孢子。細(xì)菌主要是來(lái)自于土壤的腐生性種類(lèi)，常見(jiàn)的為各種球菌、芽孢桿菌、產(chǎn)色素細(xì)菌等。 空氣中微生物的分布隨環(huán)境條件及微生物的抵抗力不同而呈現(xiàn)不同的分布規(guī)律?？諝庵形⑸锏臄?shù)目決定于塵埃的總量?？諝庵袎m埃含量越高，微生物的種類(lèi)數(shù)量越多。表4-2 不同條件下1m3空氣的含菌量 條 件數(shù) 量畜舍12106宿舍20000城市街道5000市區(qū)公園200海洋上空12北極（北緯80o）0三、空氣微生物的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) 室內(nèi)空氣污染的指標(biāo)：5001000個(gè)/m3。清潔程度細(xì)菌總數(shù)（個(gè)/m3）清潔程度細(xì)菌總數(shù)（個(gè)/m3）最清潔空氣12臨界環(huán)境150清潔空氣30輕度污染301四、空氣中微生物的檢測(cè)方法常用的檢驗(yàn)方法是沉降平板法，即測(cè)定在一定時(shí)間內(nèi)從空氣中降落到單位面積地面上的微生物個(gè)數(shù)。操作過(guò)程如下：