相同的粘性末端可以連接目的基因受體細(xì)胞運(yùn)載體

1、第一章 基因工程海淀實(shí)驗(yàn)中學(xué) 張可文紅色熒光蛋白紅色熒光蛋白基因基因表達(dá) 把一種生物的基因轉(zhuǎn)入另一種生物體中， 使其產(chǎn)生我們需要的基因產(chǎn)物，或讓它獲得新的遺傳性狀，定向改造生物的新技術(shù)。目的基因轉(zhuǎn)基因生物概念：“剪刀”“運(yùn)載體” “針線”DNA20世紀(jì)50年代，相繼有兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室在研究噬菌體宿主范圍時(shí)發(fā)現(xiàn)：噬菌體寄生于天然宿主A品系的大腸桿菌將噬菌體轉(zhuǎn)移于B品系大腸桿菌時(shí)不能繁殖A品系大腸桿菌B品系大腸桿菌1962年，arber發(fā)現(xiàn)，噬菌體DNA在B品系中，DNA被切割成片段（降解） 1968年，兩位科學(xué)家從B品系大腸桿菌中發(fā)現(xiàn)一種酶-可識(shí)別特定的脫氧核苷酸序列，并切割外源DNA分子。推測這種酶

2、對于大腸桿菌有何作用？ 限制性內(nèi)切酶對抗外來DNA細(xì)菌細(xì)胞病毒病毒DNA限制性內(nèi)切酶病毒注入DNA分子限制性內(nèi)切酶切割入侵的DNA切 割細(xì)菌的自我保護(hù)系統(tǒng)限制性內(nèi)切酶DNA片斷DNA磷酸二酯鍵氫鍵BamHI GGATCCCCTAGG EcoRI GAATTCCTTAAG AAGCTT TTCGAAHindIII NotI SacI GAGCTCCTCGAG SalI GTCGACCAGCTG XbaI TCTAGAAGATCT ApaI GGGCCC CCCGGG部分限制性內(nèi)切酶識(shí)別序列SmaI AluI AGCTTCGACCCGGGGGGCCC限制酶名稱限制酶名稱識(shí)別序列識(shí)別序列回文序列GC

3、GGCCGCCGCCGGCG Bam HGGATCCCCTAGGHindGTCGACCAGCTG平末端黏性末端回文序列：一條鏈正向讀的堿基順序與另一條鏈反向讀的順序完全一致 +GTCCAGGACCTG+GCCTAGGATCC G（EcoRI）A A G C T TT T C G A A A A G C T TT T C G A A DNAABCDDNAHind切割位點(diǎn)出現(xiàn)概率：1/46各種型號(hào)“剪刀”限制性內(nèi)切酶1967年，世界上有五個(gè)實(shí)驗(yàn)室?guī)缀跬瑫r(shí)發(fā)現(xiàn)了DNA連接酶，這種酶能夠參與DNA裂口的修復(fù)。迄今已從近300種微生物中分離出了約4000種限制酶。DNA連接酶連接的部位：磷酸二酯鍵下列片

4、斷在DNA連接酶的作用下能連接起來嗎？平末端與平末端平末端與粘性末端粘性末端與粘性末端不一定，相同的粘性末端可以連接？目的基因受體細(xì)胞運(yùn)載體問：運(yùn)載體具備什么特點(diǎn)才能完成此操作？基因很難進(jìn)入受體細(xì)胞中，即使進(jìn)入也不能進(jìn)行復(fù)制和表達(dá)運(yùn)載體的特點(diǎn)1： 能進(jìn)入并在宿主細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定保存并大量復(fù)制； 自然界生物可以將自身的遺傳物質(zhì)注入其他生物體內(nèi)，并進(jìn)行復(fù)制表達(dá)？常用的運(yùn)載體：質(zhì)粒、病毒細(xì)菌的質(zhì)粒：自主復(fù)制的雙鏈、閉合、環(huán)狀DNA分子；可以在細(xì)胞間轉(zhuǎn)移？重組質(zhì)粒DNA連接酶受體細(xì)胞運(yùn)載體的特點(diǎn)2： 有限制酶酶切位點(diǎn)相同限制酶CTTAAGCTTAAGCTTAAGCTTAAG目的基因目的基因所在片段運(yùn)載體PStDNA連接酶重組DNA運(yùn)載體自連目的基因 自連CTTAAGCTTAAGCTTAACTTAAGGPSt 運(yùn)載體的特點(diǎn)3： 有標(biāo)記基因 pBR322質(zhì)粒結(jié)構(gòu)如果外源DNA插入，氨卞青霉素抗性基因失活標(biāo)記基因