細胞毒理學(xué)實驗四小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能損傷的檢測

1、細胞毒理學(xué)實驗小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能損傷的檢測山東師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院實驗?zāi)康牧私庑∈蟾骨痪奘杉毎淌涩F(xiàn)象的原理。了解細胞吞噬作用的基本過程。了解吞噬百分?jǐn)?shù)和吞噬指數(shù)的計算方法及其在物質(zhì)毒性檢測中的應(yīng)用。實驗原理吞噬是單細胞動物攝取營養(yǎng)物質(zhì)的主要方式，也是高等動物的一種非特異性免疫防護機制。高等動物內(nèi)的巨噬細胞、單核細胞和中性粒細胞等具有吞噬功能，當(dāng)病原微生物或其他異物侵入機體時，巨噬細胞由于具有趨化性，會向異物處聚集，將其內(nèi)吞入細胞質(zhì)，形成吞噬泡，然后吞噬泡與溶酶體融合，將異物消化分解。吞噬泡的形成需要有微絲及其結(jié)合蛋白的幫助，如果用降解微絲的藥物細胞松弛素B處理細胞，則可阻斷吞噬泡的形成

2、；免疫抑制劑環(huán)磷酰胺（CYP）對巨噬細胞的吞噬作用也有影響。通過觀察細胞對雞紅細胞、酵母菌等的吞噬，計算吞噬百分?jǐn)?shù)和吞噬指數(shù)，可以分析判斷機體的免疫水平。實驗原理實驗用品1器材：顯微鏡、解剖盤、剪刀、鑷子、注射器、 載玻片、蓋玻片、吸管等2試劑： 0.85%生理鹽水；阿氏（Alsever）血液保存液；蛋白胨2.0g加水100ml滅菌備用，環(huán)磷酰胺。3材料：小白鼠；1%雞紅細胞懸液實驗步驟雞翼下靜脈取血后，加生理鹽水離心兩次，然后根據(jù)獲得的紅細胞的體積加入適量的生理鹽水，調(diào)至雞紅細胞濃度為1%。將小鼠分成實驗組和對照組，實驗組小鼠大劑量注射環(huán)磷酰胺溶液一次。實驗前三天，每天向小鼠（實驗組和對照組

3、）腹腔注射2%的蛋白胨溶液1ml，實驗前30min，向腹腔內(nèi)注射1%雞紅細胞1ml。引頸處死吸取腹腔液分別取實驗組和對照組小鼠各1只，同時準(zhǔn)備好玻片，做好標(biāo)記，分別取材，制備腹腔液涂片。在干凈的載玻片上滴加一滴生理鹽水，向其中滴加一滴腹腔液，靜置10分鐘，使腹水細胞貼壁，棄去生理鹽水，待其稍干后，進行瑞氏染色(濃染1-2min，淡染3-5min)。未被吞噬的雞紅細胞吞噬了雞紅細胞的吞噬細胞實驗報告鏡檢時，你能在視野中看到幾種類型的細胞？計算吞噬細胞的吞噬指數(shù)和吞噬百分?jǐn)?shù)。 活化的吞噬細胞的數(shù)量吞噬百分?jǐn)?shù)= 100個吞噬細胞 活化的吞噬細胞中吞噬的雞紅細胞的總量吞噬指數(shù)= 100個活化的吞噬細胞實驗組對照組吞噬百分?jǐn)?shù)吞噬百分?jǐn)?shù)平均值吞噬指數(shù)吞噬指數(shù)平均值在實驗組和對照組小鼠腹腔液涂片上各隨機選取多個視野，統(tǒng)計各視野內(nèi)的吞噬百分?jǐn)?shù)和吞噬指數(shù)，并對結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析（獨立樣本T檢驗），比較兩組數(shù)據(jù)有無顯著性差異。思考與討論在實驗過程中如何保