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文檔簡(jiǎn)介
1、四、真實(shí)性和品種純度鑒定(jindng)(一)種子真實(shí)性和品種純度鑒定的意義1、相關(guān)概念(1)種子真實(shí)性:一批種子所屬品種、種或?qū)倥c文件描述(品種證書(shū)、標(biāo)簽等)是否相符。這是鑒定種子樣品的真假問(wèn)題。(2)品種純度:品種個(gè)體之間在特征特性方面典型(dinxng)一致的程度,用本品種的種子數(shù)占供檢本作物樣品種子數(shù)的百分率表示,這是鑒定品種一致性程度高低的問(wèn)題。共四十二頁(yè)四、真實(shí)性和品種純度鑒定(jindng)(一)種子真實(shí)性和品種純度鑒定的意義2、意義(1)保證良種(lingzhng)優(yōu)良性狀充分發(fā)揮的有效措施;(2)正確評(píng)定種子等級(jí)的主要依據(jù);(3)品種權(quán)保護(hù)的重要依據(jù)。利用分子標(biāo)記技術(shù)鑒定品種
2、純度共四十二頁(yè)四、真實(shí)性和品種純度鑒定(jindng)(二)種子真實(shí)性和品種純度鑒定的原理檢驗(yàn)品種的特異性(Distinctness)、一致性(Uniformity)、穩(wěn)定性(Stability),即DUS測(cè)試特異性:每個(gè)品種都具有明顯區(qū)別其他品種的特征,包括表型特征、解剖特征、代謝(dixi)特征、分子特征等一致性:每個(gè)品種不同個(gè)體之間具有相同的特征穩(wěn)定性:采用合理的繁殖方式,品種的特征是可以穩(wěn)定遺傳的借助各種有效手段,找出不同品種在形態(tài)學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、解剖學(xué)、生理學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)等方面的差異共四十二頁(yè)四、真實(shí)性和品種純度鑒定(jindng)(三)種子真實(shí)性和品種純度的監(jiān)控途徑影響種
3、子真實(shí)性和品種純度的因素有遺傳分離、自然(zrn)變異、生物學(xué)混雜、機(jī)械混雜和其他不可預(yù)知的因素等。針對(duì)以上因素,監(jiān)控種子真實(shí)性和品種純度的主要途徑有:1、田間檢驗(yàn):在種子田植株生長(zhǎng)期間監(jiān)控種子真實(shí)性和品種純度,不符合田間標(biāo)準(zhǔn)的種子田不準(zhǔn)收獲2、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)3、田間小區(qū)種植檢驗(yàn)防止機(jī)械混雜共四十二頁(yè)四、真實(shí)性和品種純度鑒定(jindng)(四)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)各種方法在準(zhǔn)確性、經(jīng)濟(jì)性、可操作性等方面均有不同程度差異,可根據(jù)實(shí)際檢驗(yàn)?zāi)康暮鸵筮x擇合適的技術(shù)和方法??偟脑瓌t:簡(jiǎn)單、易行、經(jīng)濟(jì)、準(zhǔn)確、快速。1、種子形態(tài)鑒定法根據(jù)不同品種在種子形態(tài)特征方面的差異進(jìn)行鑒定,如種子花紋、大小(dxio)、形狀、光
4、澤、蠟質(zhì)、種臍等鑒定時(shí),需備好標(biāo)準(zhǔn)樣品的相關(guān)資料,必要時(shí)可借助放大鏡等工具逐粒檢驗(yàn)共四十二頁(yè)四、真實(shí)性和品種純度鑒定(jindng)(四)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)1、種子形態(tài)(xngti)鑒定法優(yōu)點(diǎn):簡(jiǎn)單易行,不需要復(fù)雜設(shè)備缺點(diǎn):可供鑒別的種子形態(tài)特征有限,有時(shí)不易區(qū)分環(huán)境因素對(duì)種子形態(tài)特征的影響,且受主觀(guān)因素影響較大鑒定方法:隨機(jī)從送驗(yàn)樣品中數(shù)取4份種子,每份100粒種子,逐粒觀(guān)察,區(qū)分出本品種和異品種種子,計(jì)數(shù),并按下列公式計(jì)算品種純度百分率。共四十二頁(yè)四、真實(shí)性和品種純度鑒定(jindng)(四)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)2、幼苗形態(tài)(xngti)鑒定法在合適的發(fā)育條件下,讓幼苗發(fā)育到一定階段,根據(jù)幼苗的形態(tài)特征區(qū)別
5、不同品種,或在一定的逆境條件下,根據(jù)品種對(duì)逆境的反應(yīng)來(lái)鑒別不同品種。鑒定方法:隨機(jī)從送驗(yàn)樣品中數(shù)取4份種子,每份100粒。在培養(yǎng)室或溫室中種植,當(dāng)幼苗長(zhǎng)到適宜評(píng)價(jià)的階段時(shí),根據(jù)不同品種之間幼苗形態(tài)上的差異,對(duì)幼苗進(jìn)行鑒定。如葉緣形狀、下胚軸顏色、子葉形狀等。共四十二頁(yè)四、真實(shí)性和品種純度鑒定(jindng)(四)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)(jinyn)2、幼苗形態(tài)鑒定法甜菜不同品種的葉柄顏色共四十二頁(yè)四、真實(shí)性和品種純度鑒定(jindng)(四)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)3、物理鑒定法應(yīng)用較多的是熒光分析法,其原理是不同類(lèi)型(lixng)和品種的種子,其種皮結(jié)構(gòu)和化學(xué)成分不同,在紫外線(xiàn)照射下發(fā)出的熒光也不同。鑒定方法:取試樣
6、4份,每份100粒,分別排列在黑紙上,放于波長(zhǎng)365nm的紫外光下照射,數(shù)分鐘后即可觀(guān)察。菜用豌豆發(fā)淡藍(lán)色或粉紅色熒光,谷實(shí)豌豆發(fā)褐色熒光白菜綠色,白芥鮮紅色,黑芥深藍(lán)色,田芥鮮藍(lán)色共四十二頁(yè)四、真實(shí)性和品種純度鑒定(jindng)(四)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)4、化學(xué)鑒定法根據(jù)不同品種皮殼成分和化學(xué)物質(zhì)對(duì)不同化學(xué)試劑反應(yīng)顯色的差異來(lái)鑒定品種。鑒定方法(fngf):取試樣2份,每份100粒,將每粒種子放入直徑為8mm的小試管中,每管加入3滴10%的NaOH,25-28下放置2h,取出種子鑒定浸出液顏色結(jié)球甘藍(lán)櫻桃色,花椰菜櫻桃色至玫瑰色,抱子甘藍(lán)和皺葉甘藍(lán)濃茶色,油菜、芥菜和蕓薹淺黃色,蕪菁白色小麥種子Na
7、OH共四十二頁(yè)四、真實(shí)性和品種純度鑒定(jindng)(四)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)5、田間小區(qū)種植鑒定法鑒定品種真實(shí)性和純度最常用、最可靠、最準(zhǔn)確的方法(fngf),適用于種子質(zhì)量糾紛的仲裁試驗(yàn),并作為賠償損失的依據(jù)。(1)標(biāo)準(zhǔn)樣品的使用為了鑒定品種真實(shí)性,應(yīng)在鑒定的各個(gè)階段與標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行比較。標(biāo)準(zhǔn)樣品應(yīng)代表品種原有的特征、特性,最好是育種家種子。共四十二頁(yè)四、真實(shí)性和品種純度鑒定(jindng)(四)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)5、田間小區(qū)種植鑒定法(2)田間小區(qū)的設(shè)置為使品種特征、特性充分表現(xiàn),試驗(yàn)的設(shè)計(jì)和布局上要選擇氣候環(huán)境條件適宜、土壤均勻、肥力一致、前茬無(wú)同類(lèi)作物和雜草的田塊,并有適宜的栽培管理措施。每個(gè)樣品最少
8、有2個(gè)重復(fù),為了避免失敗,重復(fù)應(yīng)適當(dāng)布置在不同(b tn)田塊上。小區(qū)的大小應(yīng)為準(zhǔn)確鑒定提供足夠的植株數(shù)。共四十二頁(yè)四、真實(shí)性和品種純度鑒定(jindng)(四)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)5、田間小區(qū)種植鑒定法(3)種植密度的確定和種植株數(shù)的計(jì)算播種時(shí)應(yīng)有足夠(zgu)的株距和行距,大株作物可適當(dāng)增加行株距,必要時(shí)可用點(diǎn)播和點(diǎn)栽。種植株數(shù)要根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求而定。一般用公式 表示,b為標(biāo)準(zhǔn)品種純度。如標(biāo)準(zhǔn)純度為98%時(shí),N為200株即可達(dá)到要求。共四十二頁(yè)四、真實(shí)性和品種純度鑒定(jindng)(四)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)5、田間小區(qū)種植鑒定法(4)鑒定時(shí)期許多種在幼苗(yumio)期就有可能鑒別出品種真實(shí)性
9、和純度,但成熟期,花期和食用器官成熟期是品種特征、特性表現(xiàn)最明顯的時(shí)期,必須進(jìn)行鑒定。共四十二頁(yè)四、真實(shí)性和品種純度鑒定(jindng)(四)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)6、生理(shngl)生化鑒定法根據(jù)品種所特有的蛋白質(zhì)或同工酶(電泳法、免疫技術(shù))和代謝產(chǎn)物(色譜法)來(lái)進(jìn)行品種純度鑒定。比較簡(jiǎn)單和常用的是電泳法,根據(jù)蛋白譜帶的組成及一致性,來(lái)區(qū)分本品種和異品種。共四十二頁(yè)四、真實(shí)性和品種純度鑒定(jindng)(四)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)7、分子標(biāo)記鑒定法在DNA和RNA等分子水平上鑒別不同品種,最常用(chn yn)的是SSR、RAPD、AFLP、ISSR、SCAR、SRAP等。其中,SSR標(biāo)記應(yīng)用最多,為共顯性標(biāo)記
10、,可區(qū)分雙親和F1。甘藍(lán)種子純度鑒定共四十二頁(yè)共四十二頁(yè)四、真實(shí)性和品種純度鑒定(jindng)(四)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)8、檢驗(yàn)結(jié)果(ji gu)報(bào)告共四十二頁(yè)六、種子生活(shnghu)力測(cè)定(一)種子生活力測(cè)定的意義1、概念種子生活力指種子發(fā)芽的潛在能力或種胚所具有的生命力。2、意義(1)休眠(ximin)種子必須通過(guò)測(cè)定生活力才能了解其真正品質(zhì)和潛在發(fā)芽能力。(2)種子貿(mào)易中可以快速預(yù)測(cè)種子發(fā)芽能力。共四十二頁(yè)六、種子(zhng zi)生活力測(cè)定(二)種子生活力測(cè)定的方法1、四唑(TTC)染色法(1)原理:有活力(hul)種子的胚在呼吸過(guò)程中會(huì)發(fā)生氧化還原反應(yīng),三苯基四氮唑(TTC)為無(wú)色指示劑
11、,被種子活組織吸收后,會(huì)參與活細(xì)胞的還原反應(yīng),從脫氫酶接受H+,在活細(xì)胞中產(chǎn)生紅色、穩(wěn)定、不擴(kuò)散、不溶于水的三苯基甲臜。而無(wú)活力(hul)組織無(wú)此反應(yīng)故不染色。判斷種子有無(wú)活力,主要取決于染色部位和染色面積,而不一定在于顏色的深淺。共四十二頁(yè)六、種子生活(shnghu)力測(cè)定(二)種子(zhng zi)生活力測(cè)定的方法1、四唑(TTC)染色法(2)應(yīng)用范圍:測(cè)定休眠種子的發(fā)芽潛力測(cè)定收獲后馬上播種的種子發(fā)芽潛力測(cè)定發(fā)芽緩慢種子的發(fā)芽潛力測(cè)定發(fā)芽末期未發(fā)芽種子的發(fā)芽潛力測(cè)定因收獲或加工而受損種子的發(fā)芽潛力,并探明原因查明發(fā)芽試驗(yàn)中不正常幼苗的原因查明種子貯藏期間劣變衰老程度為種子貿(mào)易快速測(cè)定種子
12、活力共四十二頁(yè)六、種子(zhng zi)生活力測(cè)定(二)種子生活力測(cè)定的方法1、四唑(TTC)染色法(3)測(cè)定方法 扦取試樣:從凈種子中隨機(jī)取樣4份,每份100粒。 預(yù)處理:使種子加快和充分吸濕,軟化種皮,方便樣品準(zhǔn)備和促進(jìn)活組織酶系統(tǒng)的活化(huhu)。預(yù)措:除去種子外部的附屬物,包括剝?nèi)ス麣ず团品N皮,但不能損傷種子內(nèi)部胚的主要構(gòu)造。預(yù)濕:包括快速水浸預(yù)濕(活力強(qiáng)、不易破裂種子)、緩慢紙床預(yù)濕(活力弱、易破裂種子) 、H2O2溶液浸種預(yù)濕等(加速酶系統(tǒng)活化)。共四十二頁(yè)六、種子(zhng zi)生活力測(cè)定(二)種子生活力測(cè)定的方法1、四唑(TTC)染色法(3)測(cè)定方法 樣品準(zhǔn)備:去掉種皮,
13、沒(méi)種胚縱切成兩半,使種胚的主要構(gòu)造暴露在切面上,便于染色和鑒別。 TTC染色:將每份100-200個(gè)半粒種子,分別浸入TTC溶液,室溫下染色10-12h。為加快(ji kui)染色,可放入30-45的溫箱內(nèi)染色或采用抽真空技術(shù)。如在規(guī)定時(shí)間內(nèi)樣品的染色不夠充分,可適當(dāng)延長(zhǎng)染色時(shí)間,以確定是TCC滲入速度問(wèn)題,還是種子胚的缺陷共四十二頁(yè)六、種子生活(shnghu)力測(cè)定(二)種子生活力測(cè)定的方法1、四唑(TTC)染色法(3)測(cè)定方法 鑒定:取出染色的種子并用清水沖洗干凈,放在白色濾紙上逐粒觀(guān)察(gunch)胚和胚乳的染色情況。有生活力種子:胚被染成有光澤 的鮮紅色不正常種子:胚的主要構(gòu)造局部 不
14、染色或染色異常死種子:完全不染色或染成無(wú) 光澤的淡紅色或灰白色共四十二頁(yè)六、種子生活(shnghu)力測(cè)定(二)種子生活力測(cè)定(cdng)的方法1、四唑(TTC)染色法(3)測(cè)定方法 結(jié)果計(jì)算:統(tǒng)計(jì)有生活力種子的個(gè)數(shù),并計(jì)算種子生活力百分率,如果重復(fù)間差距超過(guò)最大容許差距(P116,表4-4),需重新進(jìn)行測(cè)定。 測(cè)定結(jié)果填報(bào)在檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告單的規(guī)定空格中,精確度為1%。共四十二頁(yè)六、種子生活(shnghu)力測(cè)定(二)種子生活(shnghu)力測(cè)定的方法共四十二頁(yè)六、種子(zhng zi)生活力測(cè)定(二)種子生活力測(cè)定的方法2、靛藍(lán)染色法和紅墨水染色法(1)測(cè)定原理衰老種子或死種子的原生質(zhì)膜失去
15、選擇性透性,細(xì)胞外的染色劑容易進(jìn)入細(xì)胞,故細(xì)胞被染色,而活細(xì)胞不能被染色,所以根據(jù)(gnj)胚組織的染色反應(yīng)可區(qū)分無(wú)活力種子和有活力種子。靛藍(lán)染色法:死胚染成藍(lán)色,活胚不染色紅墨水染色法:死胚染成紅色,活胚不染色應(yīng)用范圍:豆類(lèi)、谷類(lèi)和瓜類(lèi)等大粒種子共四十二頁(yè)六、種子(zhng zi)生活力測(cè)定(二)種子生活力測(cè)定的方法2、靛藍(lán)染色法和紅墨水染色法(2)測(cè)定方法種子準(zhǔn)備與TTC法相同。將每份100-200個(gè)半粒種子放入培養(yǎng)皿中(剖面向下(xin xi)),立即注入靛藍(lán)溶液或紅墨水,淹沒(méi)種胚進(jìn)行染色。到規(guī)定時(shí)間將種子取出、洗凈,再進(jìn)行鑒定。種子活力鑒定方法與TTC法相同。共四十二頁(yè)第三節(jié) 種子田間
16、(tin jin)檢驗(yàn)技術(shù)在植物生長(zhǎng)期間,到種子生長(zhǎng)田進(jìn)行檢驗(yàn),是保證種子質(zhì)量的重要措施,具有可操作性好且鑒定結(jié)果可靠等優(yōu)點(diǎn)。一、田間檢驗(yàn)的內(nèi)容(1)檢查種子生產(chǎn)田是否符合要求(如隔離、前茬作物等)(2)檢查種子生產(chǎn)程序是否符合要求(3)檢查異作物情況(4)檢查雜草情況(5)檢查病蟲(chóng)害情況(6)檢查植株(zhzh)生長(zhǎng)狀況(7)計(jì)算判定是否符合種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),能否作為種用種子。共四十二頁(yè)二、對(duì)田間(tin jin)檢驗(yàn)員的要求田間檢驗(yàn)是通過(guò)田間檢驗(yàn)員來(lái)完成的,必須滿(mǎn)足以下條件(1)必須經(jīng)過(guò)培訓(xùn),通過(guò)田間檢驗(yàn)原理和程序知識(shí)的書(shū)面考核、田間檢驗(yàn)技能的實(shí)踐考核(2)必須熟悉田間檢驗(yàn)方法和田間標(biāo)準(zhǔn)、品種
17、特征特性、種子生產(chǎn)的方法和程序等方面的知識(shí)(3)必須具備能依據(jù)(yj)品種特征特性證實(shí)品種真實(shí)性,能鑒別種子田混雜株并使之量化的能力(4)對(duì)被檢品種有豐富的知識(shí),熟悉被檢種品種間差異的特征特性共四十二頁(yè)二、對(duì)田間(tin jin)檢驗(yàn)員的要求(5)有良好的健康,每年保持一定田間檢驗(yàn)工作量,技能一直保持良好的狀態(tài)(6)應(yīng)獨(dú)立(dl)地根據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告田間狀況并作出評(píng)價(jià),評(píng)價(jià)結(jié)果只對(duì)檢查機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)種子田間檢驗(yàn)共四十二頁(yè)三、田間檢驗(yàn)的次數(shù)(csh)及時(shí)期田間檢驗(yàn)(jinyn)可按苗期、開(kāi)花期、成熟期等3個(gè)時(shí)期分多次進(jìn)行如果條件不允許,也可在品種性狀表現(xiàn)最充分時(shí)進(jìn)行1次檢查。如雜交制種田在開(kāi)花期,蔬菜植
18、物在產(chǎn)品器官成熟期共四十二頁(yè)四、田間檢驗(yàn)的一般(ybn)程序(一)了解情況和檢查標(biāo)簽1、了解情況通過(guò)與生產(chǎn)者面談與檢查,全面了解:種子田編號(hào)、申請(qǐng)者姓名、作物、品種、類(lèi)別(等級(jí))、農(nóng)戶(hù)姓名和電話(huà)、種子田位置、田塊號(hào)碼、面積、前作詳情(檔案)、種子批號(hào)。2、檢查標(biāo)簽為了證實(shí)品種的真實(shí)性,有必要核查標(biāo)簽,了解種子來(lái)源詳情。為此(wi c),生產(chǎn)者至少應(yīng)保留種子批的兩個(gè)標(biāo)簽,一個(gè)樹(shù)立在田間,另一個(gè)留用備查。生產(chǎn)雜交種包括父、母本的種子標(biāo)簽和田間分布圖。共四十二頁(yè)四、田間(tin jin)檢驗(yàn)的一般程序(二)檢查隔離情況和種子田總體狀況1、檢查隔離情況檢驗(yàn)員根據(jù)生產(chǎn)者提供種子田和周邊田塊的地圖,繞種子
19、田外圈行走,核查隔離情況。隔離距離應(yīng)達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的最低距離,其中包括收獲期間機(jī)械混雜隔離以及已受種傳病害感染(gnrn)的其他田塊的隔離。檢驗(yàn)員也應(yīng)該觀(guān)察種子田和周?chē)飰K的自生苗、其他作物或雜草,這也可能是污染的花粉源如果隔離距離達(dá)不到標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定要求,田間檢驗(yàn)員必須要求生產(chǎn)者在作物開(kāi)花前全部或部分破壞混雜花粉源,使該田塊符合要求,或淘汰達(dá)不到隔離條件的部分田塊。共四十二頁(yè)四、田間檢驗(yàn)的一般(ybn)程序(二)檢查隔離情況和種子田總體狀況2、檢查種子田總體狀況對(duì)種子田狀況進(jìn)行總體評(píng)價(jià)將決定是否有必要進(jìn)行品種純度的詳細(xì)檢查,檢驗(yàn)員必須仔細(xì)觀(guān)察:田塊入口處或邊界:是否播有不同的種子;田塊開(kāi)始播種處:播
20、種機(jī)械在使用前是否經(jīng)過(guò)清潔;其他作物種雜草、種傳病害與污染花粉源隔離的情況。已經(jīng)嚴(yán)重倒伏、長(zhǎng)滿(mǎn)雜草、由于病蟲(chóng)或其他原因?qū)е律L(zhǎng)受阻或生長(zhǎng)不良的種子田應(yīng)該淘汰,不能進(jìn)行品種純度的評(píng)定。田間狀況處于(chy)難以判別的中間狀態(tài)時(shí),檢驗(yàn)員應(yīng)該使用小區(qū)種植鑒定得出的證據(jù)作為田間檢驗(yàn)的補(bǔ)充信息。共四十二頁(yè)四、田間(tin jin)檢驗(yàn)的一般程序(三)檢查品種真實(shí)性和純度1、檢查品種真實(shí)性田間檢驗(yàn)員通常圍繞種子田走一圈,應(yīng)檢查不少于100個(gè)植株,確保它與官方描述給定的品種特征、特性一致。2、檢查品種純度(1)劃區(qū)設(shè)點(diǎn):為了評(píng)定品種純度,必須遵循取樣程序,即集中在種子田小范圍(fnwi)(即樣區(qū))進(jìn)行詳細(xì)檢
21、查。一般來(lái)說(shuō),同一品種、同一來(lái)源、同一繁殖世代設(shè)置一個(gè)檢驗(yàn)區(qū)。根據(jù)檢驗(yàn)區(qū)的面積,確定樣點(diǎn)數(shù)和樣點(diǎn)內(nèi)最低檢驗(yàn)的株數(shù)。最后綜合幾個(gè)取樣點(diǎn)的檢驗(yàn)結(jié)果,評(píng)價(jià)種子批的純度。共四十二頁(yè)四、田間檢驗(yàn)的一般(ybn)程序(三)檢查(jinch)品種真實(shí)性和純度2、檢查品種純度(1)劃區(qū)設(shè)點(diǎn):共四十二頁(yè)四、田間檢驗(yàn)(jinyn)的一般程序(三)檢查品種真實(shí)性和純度2、檢查品種純度(2)取樣:取樣點(diǎn)的位置應(yīng)該覆蓋整個(gè)田塊,要田塊形狀和大小、每一作物的特定特征,隨機(jī)、均勻(jnyn)地設(shè)置取樣點(diǎn)。檢驗(yàn)結(jié)果的代表性如何,不完全在于取樣點(diǎn)數(shù)的多少,關(guān)鍵在于設(shè)點(diǎn)要合理、均勻、有代表性。取樣方式:共四十二頁(yè)四、田間檢驗(yàn)(jinyn)的一般程序(三)檢查品種真實(shí)性和純度2
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