重組人白細(xì)胞介素2課件

1、基因工程藥物之 重組人白細(xì)胞介素-2基因工程藥物 定義：先確定對(duì)某種疾病有預(yù)防和治療作用的蛋白質(zhì)，然后將控制該蛋白質(zhì)合成過(guò)程的基因取出來(lái)，經(jīng)過(guò)一系列基因操作，最后將該基因放入可以大量生產(chǎn)的受體細(xì)胞中去，這些受體細(xì)胞包括細(xì)菌、酵母菌、動(dòng)物或動(dòng)物細(xì)胞、植物或植物細(xì)胞，在受體細(xì)胞不斷繁殖過(guò)程中，大規(guī)模生產(chǎn)具有預(yù)防和治療這些疾病的蛋白質(zhì)，即基因疫苗或藥物。一、基本信息 （一）白細(xì)胞介素： 是由多種細(xì)胞產(chǎn)生并作用于多種細(xì)胞的一類細(xì)胞因子。由于最初是由白細(xì)胞產(chǎn)生又在白細(xì)胞間發(fā)揮作用，所以由此得名，現(xiàn)仍一直沿用。白細(xì)胞介素interleukin 縮寫為IL。 現(xiàn)在是指一類分子結(jié)構(gòu)和生物學(xué)功能已基本明確，具有

2、重要調(diào)節(jié)作用而統(tǒng)一命名的細(xì)胞因子，它和血細(xì)胞生長(zhǎng)因子同屬細(xì)胞因子。兩者相互協(xié)調(diào)，相互作用，共同完成造血和免疫調(diào)節(jié)功能。白細(xì)胞介素在傳遞信息，激活與調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞，介導(dǎo)T、B細(xì)胞活化、增殖與分化及在炎癥反應(yīng)中起重要作用.（二）白細(xì)胞介素-2為多肽類免疫增強(qiáng)劑。是一種淋巴因子，能刺激T細(xì)胞增殖分化，誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL），增強(qiáng)自然殺傷（NK）細(xì)胞活性，激活產(chǎn)生淋巴因子的殺傷（LAK）細(xì)胞和腫瘤侵潤(rùn)淋巴細(xì)胞（TIL），刺激B細(xì)胞增殖分化和分泌抗體，誘導(dǎo)干擾素和多種細(xì)胞因子的分泌。用于腫瘤輔助治療和癌性胸、腹水的治療il-2分子：il-2分子量為15kd，是含有113個(gè)氨基酸殘基的糖蛋白，

3、在人類由第4號(hào)染色體上的一個(gè)基因編碼。il-2具有一定的種屬特異性，人類細(xì)胞只對(duì)靈長(zhǎng)類來(lái)源的il-2起反應(yīng)，而幾乎所有種屬動(dòng)物的細(xì)胞均對(duì)人的il-2敏感。il-2受體(il-2r)：il-2的靶細(xì)胞包括t細(xì)胞、nk細(xì)胞、b細(xì)胞及單核-巨噬細(xì)胞等。這些細(xì)胞表面均可表達(dá)il-2r。il-2r包含3條多肽鏈：1條為鏈，分子量55kd;1條為鏈，分子量75kd;另1條為鏈，分子量64kd。鏈的胞內(nèi)區(qū)較短，不能向細(xì)胞內(nèi)傳遞信號(hào)，而鏈和鏈的胞內(nèi)區(qū)較長(zhǎng)，具有傳遞信號(hào)的能力。3種肽鏈單獨(dú)與il-2結(jié)合親和力較低，只有同時(shí)表達(dá)才能產(chǎn)生高度親和力。二、生產(chǎn)制備生產(chǎn)制備的方式主要有兩種：1、傳統(tǒng)工藝制備2、基因工程

4、制備其中以第二種方法為主基因工程制備流程IL-2 cDNA 文庫(kù)的構(gòu)建IL-2表達(dá)利用mRNA雜交篩選IL-2 cDNA克隆與質(zhì)粒載體pLY-4連接，并轉(zhuǎn)入大腸桿菌純化的IL-2制備包涵體，并用凝膠過(guò)濾層析純化cDNA文庫(kù)的構(gòu)建IL-2 mRNA逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄成單鏈cDNA末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶DNA聚合酶I雙鏈cDNA蔗糖密度梯度離心G-C加尾法插入到pBR322質(zhì)粒的PstI位點(diǎn)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌得到IL-2 cDNA文庫(kù)cDNA末端連接dCMP殘基，寡聚（dG）1218為引物cDNA片段重組質(zhì)三、藥物信息 藥典中有以下三種藥物含有重組人白細(xì)胞素介素-2：1.注射用重組人白細(xì)胞介素-22.重組人

5、白細(xì)胞介素-2注射液3.注射用重組人白細(xì)胞介素-2（ ）注射用重組人白細(xì)胞介素-21.性狀及功效高效表達(dá)人白細(xì)胞介素-2的大腸桿菌，經(jīng)過(guò)發(fā)酵、分離和高度純化后獲得的重組人白細(xì)胞介素-2凍干制成，含有適宜穩(wěn)定劑，不含添加劑和抗生素。外觀為白色或者微黃色疏松體，加滅菌注射水后迅速溶解為澄明液體。用于治療成人轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌（RCC）及黑色素瘤等惡性腫瘤，也適用于癌性胸腹水的控制 2.用法用量（1）. 全身用藥?kù)o脈滴注：10萬(wàn)一80萬(wàn)國(guó)際單位；皮下注射：50萬(wàn)100萬(wàn)國(guó)際單位；介入動(dòng)脈灌注：40萬(wàn)l00萬(wàn)國(guó)際單位（2）.區(qū)域與局部給藥 胸腹腔注射：30萬(wàn)l00萬(wàn)國(guó)際單位；腫瘤灶局部給藥：根據(jù)瘤體大小決

6、定用藥劑量。一般劑量為一次20萬(wàn)國(guó)際單位(IU)。注：藥物采用氯化鈉溶解。重組人白細(xì)胞介素-2注射液1.性狀及功效(1).性狀高效表達(dá)人白細(xì)胞介素-2的大腸桿菌，經(jīng)過(guò)發(fā)酵、分離和高度純化后獲得的重組人白細(xì)胞介素-2制成，含有適宜穩(wěn)定劑，不含添加劑和抗生素。外觀為無(wú)色或者微黃色澄明液體。(2).功效1.用于腎細(xì)胞癌、乳腺癌、膀胱癌、肝癌、直腸癌、淋巴癌、肺癌等惡性腫瘤的治療，用于癌性胸腹水的控制，也可以用于淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞的培養(yǎng)。2.用于手術(shù)、放療及化療后的腫瘤患者的治療，可增強(qiáng)機(jī)體免疫功能。3.用于先天或后天免疫缺陷癥的治療，提高病人細(xì)胞免疫功能和抗感染能力。4.各種自身免疫病的治療，如

7、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等。5.對(duì)某些病毒性、桿菌性疾病、胞內(nèi)寄生菌感染性疾病，如乙型肝炎、麻風(fēng)病、肺結(jié)核等具有一定的治療作用。 2.用法用量（1）.全身用藥：1)皮下注射：重組人白介素-2（125 Ala）60100萬(wàn)IU/m2，皮下注射3次/周，6周為一療程。2) 靜脈注射：4080萬(wàn)U/m2加生理鹽水500ml，滴注時(shí)間不少于4小時(shí)。3) 介入動(dòng)脈灌注50100萬(wàn)IU/次，24周一次，24次為一療程 。(2).區(qū)域與局部用藥： 1)胸腔注入：用于癌性胸腔積液，重組人白介素2（125 Ala）100200萬(wàn)IU/m2次，盡量抽去腔內(nèi)積液后注入。2)腫瘤病灶局部給藥：根據(jù)瘤體大小決定用藥劑量，每次用量

8、不少于10萬(wàn)IU，隔日一次,46次為一療程。 注射用重組人白細(xì)胞介素-2（ ）1.性狀及功效高效表達(dá)人白細(xì)胞介素-2 （ ）基因的大腸桿菌，經(jīng)過(guò)發(fā)酵、分離和高度純化后獲得的重組人白細(xì)胞介素-2 （ ）凍干制成，含有適宜穩(wěn)定劑，不含添加劑和抗生素。外觀為白色或者微黃色疏松體，加滅菌注射水后迅速溶解為澄明液體。人白細(xì)胞介素-2 （ ）基因是人白細(xì)胞介素-2基因序列中原125位編碼半胱氨酸的序列突變?yōu)榫幋a絲氨酸的序列后的突變基因2.用法用量1.全身用藥：1)皮下(或肌肉)注射：重組人白介素-2()20-100萬(wàn)國(guó)際單位/次，加2毫升無(wú)菌生理鹽水溶解，皮下(或肌肉)注射，1-2次/天。2)靜脈注射：6

9、0-200萬(wàn)國(guó)際單位/次，加無(wú)菌生理鹽水500毫升，滴注時(shí)間不少于4小時(shí)。3)介入動(dòng)脈灌注：100-200萬(wàn)國(guó)際單位/次。2.區(qū)域與局部給藥：1)胸腹腔注入：用于癌性胸腹腔積液，重組人白介素-2()100-300萬(wàn)國(guó)際單位/次，盡量抽去腔內(nèi)積液后注入，2-3次/周。2)心包積液：心包內(nèi)注射，200萬(wàn)國(guó)際單位/次， 盡量抽去心包積液后注入，1次/周。3)腫瘤病灶局部給藥：根據(jù)瘤體大小決定用藥劑量，10-20萬(wàn)國(guó)際單位/次，隔日一次。四、注意事項(xiàng)不良反應(yīng)：各種不良反應(yīng)中最常見(jiàn)的是發(fā)熱、畏寒、疲乏等，多與用藥劑量有關(guān)；個(gè)別患者可出現(xiàn)惡心、嘔吐、類感冒癥狀；皮下注射者局部可出現(xiàn)紅腫、硬結(jié)、疼痛；使用較

10、大劑量時(shí)，可能會(huì)引起毛細(xì)血管滲漏綜合征，表現(xiàn)為低血壓、體重增加等。神經(jīng)系統(tǒng)受到影響，可發(fā)生行為變化、認(rèn)知障礙禁忌1、對(duì)本品成份有過(guò)敏史的病人。2、高熱、嚴(yán)重心臟病、低血壓者 嚴(yán)重心腎功能不全者、肺功能異?；蜻M(jìn)行過(guò)器官移植者。3、重組人白細(xì)胞介素-2既往用藥史中出現(xiàn)過(guò)與之相關(guān)的毒性反應(yīng)五、發(fā)展前景目前研究是對(duì)其在用藥前進(jìn)行化學(xué)修飾，主要采用PEG修飾：1.具體有三聚氯氰活MPEG修飾2.MPEG 硝基苯基碳酸鹽修飾。3.修飾物和rhlu-2的投入比、反應(yīng)環(huán)境的PH、修飾反應(yīng)的時(shí)間、1%PEG4000的加入都會(huì)影響到修飾產(chǎn)物的活性。修飾后的產(chǎn)物經(jīng)過(guò)疏水層析和凝膠過(guò)濾即可被提純。目前已經(jīng)證明rhIL

11、-2 經(jīng)不同的 PEG 化處理后，其循環(huán)半衰期均有不同程度的提高。其水溶性也得到極大提高，可不用 SDS 助溶在常溫下保持長(zhǎng)期穩(wěn)定。謝謝觀賞！一.白細(xì)胞介素1與白細(xì)胞介素2的區(qū)別？IL-1：又稱淋巴細(xì)胞刺激因子。1、細(xì)胞來(lái)源：主要由活化的單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生。2、存在形式：IL-1和IL-1。3、主要生物學(xué)功能：（1）、局部低濃度免疫調(diào)節(jié)：協(xié)同刺激APC和T細(xì)胞活化，促進(jìn)B細(xì)胞增殖和分泌抗體。（2）、大量產(chǎn)生內(nèi)分泌效應(yīng)：誘導(dǎo)肝臟急性期蛋白合成；引起發(fā)熱和惡病質(zhì)。IL-2：又稱T細(xì)胞生長(zhǎng)因子，TCGF。1、細(xì)胞來(lái)源：主要由T細(xì)胞產(chǎn)生。2、作用方式：以自分泌和旁分泌方式發(fā)揮效應(yīng)。3、主要生物學(xué)功能（1

12、）、活化T細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞因子產(chǎn)生；（2）、刺激NK細(xì)胞增殖，增強(qiáng)NK殺傷活性及產(chǎn)生細(xì)胞因子，誘導(dǎo)LAK細(xì)胞產(chǎn)生；（3）、促進(jìn)B細(xì)胞增殖和分泌抗體；（4）、激活巨噬細(xì)胞。二.白細(xì)胞介素2對(duì)自身免疫疾病的作用機(jī)理?IL-2除可作為T細(xì)胞生長(zhǎng)因子(TCGF) 促進(jìn)T細(xì)胞的增殖分化外，還能限制T細(xì)胞的反應(yīng)并產(chǎn)生免疫耐受.因而可用于自身免疫性疾病的防治。白細(xì)胞介素-2本身就是許多免疫抑制劑的作用靶點(diǎn), 白細(xì)胞介素-2受體亞單位也是重要的治療靶點(diǎn)。因此, 應(yīng)用特異的白細(xì)胞介素-2受體抗體進(jìn)行選擇性治療可以最大程度地殺傷病原細(xì)胞,而對(duì)非亞單位細(xì)胞的不良反應(yīng)限制到最小,因此用于治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。三.IL-2受體怎樣與IL-2結(jié)合？白細(xì)胞介素-2通過(guò)與效應(yīng)細(xì)胞膜上的專屬性受體( IL - 2R )結(jié)合而發(fā)揮作用。白細(xì)胞介素-2通過(guò)效應(yīng)細(xì)胞膜上的白細(xì)胞介素-2受體發(fā)揮作用。白細(xì)胞介素-2受體由鏈、鏈和鏈3種亞基組成, 只有三者的聚合體才能構(gòu)成完整的高親和力的IL - 2R?？扇苄园准?xì)胞介素-2受體( sIL- 2R )是活化淋巴細(xì)胞膜表面白細(xì)胞介素-2受體鏈成分的Tac抗原。當(dāng)IL- 2R從細(xì)胞膜上經(jīng)酶解脫落后進(jìn)入血液，就形成了可溶性IL-2R( sIL-2R) ，在體液中，s1L-2R 可以與細(xì)胞膜