hpv 主要競爭產(chǎn)品分析

1、HPV 競品分析市場部 王飛雁編輯課件HPV 檢測HPV DNA 檢測HPV E6，E7 mRNA 檢測分型不分型部分分型方法代表廠家PCR-反向點雜交法亞能、凱普、達(dá)安、港龍、珠海賽樂奇流式熒光雜交法上海透景雜交捕獲（HC2）QIAGEN(凱杰)PCR-熒光探針法港龍、凱普、達(dá)安、科華PCR-熒光探針法羅氏bDNA 技術(shù)科蒂亞酶切信號放大法（Cervista）HOLOGIC(英碩力) 不分型 PCR-反向點雜交法原理 PCR-反向點雜交法技術(shù)特點高靈敏度-PCR高特異性-核酸分子雜交高通量-膜上固定多種探針能實現(xiàn)HPV分型檢測 亞 能 凱 普技術(shù)原理PCR+反向點雜交PCR+膜雜交法（實質(zhì)為

2、PCR+反向點雜交）標(biāo)本類型宮頸脫落細(xì)胞，疣體組織，病理石蠟切片，液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本宮頸脫落細(xì)胞檢測HPV 種類23型無HPV 44，低危型21型無HPV73，83，MM4（82）而73、82型為IARC認(rèn)定的15種常見高危型之一DNA提取提取試劑只含裂解液一種成分提取試劑分溶液,提取步驟復(fù)雜PCRPCR反應(yīng)液已分裝PCR反應(yīng)液未分裝，需人工配制反應(yīng)液雜交全自動核酸分子雜交手工雜交結(jié)果判讀顯色斑點大，邊界清晰判讀結(jié)果方便快捷膜條小，顯色斑點小判讀結(jié)果時需與對照卡進(jìn)行比對內(nèi)部質(zhì)控有真正意義的內(nèi)部質(zhì)控?zé)o真正意義的內(nèi)部質(zhì)控亞能和凱普HPV基因分型產(chǎn)品對比亞能和凱普膜條顯色對比亞能凱普膜條尺寸：12mm7

3、8mm膜條尺寸：22mm22mm亞能產(chǎn)品與凱普HPV分型產(chǎn)品的比較優(yōu)勢有配套的全自動核酸分子雜交儀檢測HPV 型別多：23型有真正意義的內(nèi)部質(zhì)控可檢測更多類型的標(biāo)本，有文獻(xiàn)支持靈敏度、特異性、重復(fù)性好PCR擴(kuò)增體系預(yù)分裝顯色斑點大而清晰，易于進(jìn)行結(jié)果判讀HPV 檢測HPV DNA 檢測HPV E6，E7 mRNA 檢測分型不分型部分分型方法代表廠家PCR-反向點雜交法亞能、凱普、達(dá)安、港龍、珠海賽樂奇流式熒光雜交法上海透景雜交捕獲（HC2）QIAGEN(凱杰)PCR-熒光探針法港龍、凱普、達(dá)安、科華PCR-熒光探針法羅氏bDNA 技術(shù)科蒂亞酶切信號放大法（Cervista）HOLOGIC(英碩

4、力) 不分型代表廠家：上海透景高危型人乳頭瘤病毒核酸分型檢測試劑盒檢測的基因型：19種高危型（ 16,18,31,33,35,39,45, 51,52, 56,58, 59, 68,73,83，26, 55, 61,66 ）， 種低危型（ 6,11,40,42,44,53,54 ）(無注冊證)進(jìn)口專用儀器(美國Luminex多功能流式點陣分析儀）流式熒光雜交法流式熒光雜交法流式熒光雜交法是將PCR產(chǎn)物和微球雜交液進(jìn)行混合，并經(jīng)過雜交，熒光素標(biāo)記，Luminex流式分析儀閱讀得到相應(yīng)的檢測結(jié)果。微球雜交液中包含多種熒光編碼微球，每種編碼微球的表面都共價交聯(lián)有與HPV 型別對應(yīng)的探針，在雜交過程中

5、，探針特異性識別并結(jié)合相應(yīng)的靶序列，經(jīng)過熒光素反應(yīng)后形成微球-探針-PCR產(chǎn)物-熒光素的復(fù)合物，經(jīng)Luminex流式分析儀閱讀，可以獲得每種復(fù)合物的微球編碼及對應(yīng)的熒光信號強(qiáng)弱，得出檢測結(jié)果流式熒光雜交法操作流程PCR 擴(kuò)增DNA提取向微孔雜交板中加入微球雜交液，加入PCR產(chǎn)物PCR產(chǎn)物變性雜交，48，30 min加入熒光素SA-PE(鏈霉親和素標(biāo)記的藻紅蛋白)，15 minLuminex 流式分析儀檢測Luminex 100TM多功能流式點陣儀流式熒光雜交法-HPV 不定量流式熒光雜交法技術(shù)總結(jié)原理：普通PCR技術(shù)，核酸分子雜交技術(shù)和熒光標(biāo)記技術(shù)尚不成熟，靈敏度和特異性有待提高只分型，不定量

6、需價格昂貴的流式熒光檢測儀項目亞能透景技術(shù)原理基因芯片法流式熒光雜交法操作步驟DNA提取PCR雜交化學(xué)顯色判讀結(jié)果 DNA提取-PCR雜交熒光標(biāo)記激光判讀 檢測通量檢測23種HPV基因型（18種高危型和5種低危型) 檢測26種HPV基因型（ 19種高危型和7種低危型，注冊證只批檢19高危）基本設(shè)備離心機(jī)、PCR儀、普通雜交儀離心機(jī)、PCR儀、Luminex多功能流式點陣分析儀標(biāo)本類型宮頸脫落細(xì)胞、疣體組織、石蠟切片、液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本宮頸脫落細(xì)胞靈敏度高較低特異性高較低理論耗時6小時5小時標(biāo)本保存時間室溫下放置時間長（12小時） 室溫下放置時間短（1小時） PCR反應(yīng)液已配制并預(yù)分裝分成引物混合液

7、，PCR預(yù)混液，聚合酶三部分，需人工配制亞能與流式熒光雜交法對比亞能產(chǎn)品與上海透景產(chǎn)品的比較優(yōu)勢靈敏度，特異度更高通用儀器設(shè)備可檢測更多來源的標(biāo)本標(biāo)本保存時間更長PCR 反應(yīng)液預(yù)分裝亞能生物港龍技術(shù)原理基因芯片技術(shù)基因芯片技術(shù)檢測HPV型別18種高危，5種低危16種高危，10種低危主要儀器設(shè)備離心機(jī)、普通PCR儀、普通雜交儀離心機(jī)、普通PCR儀、HPV分型基因芯片檢測閱讀系統(tǒng)標(biāo)本類型宮頸脫落細(xì)胞、液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本、疣體組織、石蠟切片標(biāo)本宮頸脫落細(xì)胞靈敏度高（1103拷貝/毫升）低（1105拷貝/毫升）PCR 擴(kuò)增PCR反應(yīng)液已分裝，減少操作人員工作量，避免污染PCR反應(yīng)液未分裝，增加操作人員工作

8、量，帶來污染風(fēng)險雜交方式單管密封雜交，避免污染在96微孔板中雜交，敞開環(huán)境，易污染。結(jié)果判讀可直接用肉眼判讀結(jié)果，無需專用設(shè)備必須用配套的基因芯片檢測閱讀系統(tǒng)來判讀結(jié)果亞能生物與港龍HPV 基因分型對比HPV 檢測HPV DNA 檢測HPV E6，E7 mRNA 檢測分型不分型部分分型方法代表廠家PCR-反向點雜交法亞能、凱普、達(dá)安、港龍、珠海賽樂奇流式熒光雜交法上海透景雜交捕獲（HC2）QIAGEN(凱杰)PCR-熒光探針法港龍、凱普、達(dá)安、科華PCR-熒光探針法羅氏bDNA 技術(shù)科蒂亞酶切信號放大法（Cervista）HOLOGIC(英碩力) 不分型雜交捕獲二代（Hybrid Captur

9、e 2, HC2）HC2基本原理：利用對抗體捕獲信號的放大和化學(xué)發(fā)光信號的檢測13種高危HPV基因型,不能提示具體的基因型計算機(jī)判讀15 min雜交60 min抗體捕獲60 min第二抗體結(jié)合，化學(xué)發(fā)光30 minDNA變性45 minHC2 實驗步驟圖示吸取變性劑于對照和樣本管中旋渦振蕩10秒65孵育45分鐘，采用Microplate heater I HC2操作步驟-DNA 變性將已變性的樣本混勻，吸取75 ul 于“雜交微孔板”中20-25孵育10分鐘加入25 ul 高危HPV探針于微孔板中65孵育60分鐘置于Rotary Shaker I中，1100 rpm，32分鐘準(zhǔn)備HPV 探針混

10、合物HC2操作步驟-雜交將雜交產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至“捕獲微孔板”相應(yīng)的小孔中20-25孵育30-45分鐘20-25孵育60分鐘， 1100 rpm加入75 ul Detection Reagent 1（堿性磷酸酶偶聯(lián)的抗體）于“捕獲”微孔板相應(yīng)的小孔中HC2操作步驟-抗體捕獲及酶標(biāo)洗滌微孔板：采用Automated Plate Washer I或進(jìn)行手動洗板，重復(fù)洗6次加入75 ul Detection Reagent 2 （化學(xué)顯色底物）于“捕獲”微孔板相應(yīng)的小孔中20-25孵育15-30分鐘采用Digene microplate luminometer (DML2000)讀數(shù)HC2操作步驟-洗板及化

11、學(xué)顯色HC2如何進(jìn)行結(jié)果判讀?1.陰性對照 每次實驗必須同時做3份陰性對照。陰性對照的結(jié)果必須為10-250 RLU（相對光單位）。變異系數(shù)（%CV）應(yīng)該25%，如果25%，那么去掉偏離平均值最遠(yuǎn)的一個陰性對照，用剩下的兩個陰性對照計算平均值以及變異系數(shù)。 %CV必須25%，否則，本次實驗結(jié)果無效，必須重做，無法給病人出報告2.標(biāo)準(zhǔn)品 每次實驗必須同時做3份高危HPV標(biāo)準(zhǔn)品。 %CV應(yīng)該15%，如果15%，那么去掉偏離平均值最遠(yuǎn)的一個標(biāo)準(zhǔn)品，用剩下的兩個標(biāo)準(zhǔn)品計算平均值以及變異系數(shù)。 %CV必須15%，否則，本次實驗結(jié)果無效，必須重做，無法給病人出報告3. 用標(biāo)準(zhǔn)品平均值（MHRC）以及陰性對

12、照平均值MNC計算MHRC/ MNC比值.2.0MHRC/ MNC 15。如果2.0 或15，本次實驗結(jié)果無效，必須重做。4. 如果符合以上的標(biāo)準(zhǔn)，檢測結(jié)果是可靠的。此時的Cutoff值（陽性標(biāo)本評判的標(biāo)準(zhǔn)）就是MHRC陰性對照 （NC）高危HPV標(biāo)準(zhǔn)品(HRC)9731210133591307平均值96318%CV4.94.7HRC/ NC3.31Cutoff 值=318，所有標(biāo)本的相對光單位（RLU）應(yīng)該轉(zhuǎn)換為與Cutoff值的比值，比值大于1為陽性，比值小于1則為陰性結(jié)果的判定質(zhì)控對照HPV 基因型預(yù)期的結(jié)果（RLU/Cutoff值）最小值最大值QC1-LRHPV 60.0010.999

13、QC2-HRHPV 16283份陰性對照，3份高危HPV標(biāo)準(zhǔn)品，2份質(zhì)控，共需額外消耗8人份試劑！HC2-定性檢測以上為FDA 批準(zhǔn)的說明書中內(nèi)容截圖HC2技術(shù)總結(jié)原理：采用核酸分子雜交，抗體捕獲（吸附雜交體），化學(xué)顯色不分型不能檢測HPV多重感染不定量有交叉雜交反應(yīng)手動操作很多，步驟繁瑣每次實驗要額外消耗8人份試劑，試劑成本高需基因雜交信號放大系統(tǒng)，設(shè)備成本高項目基因芯片（亞能）HC2技術(shù)原理PCR+反向點雜交+化學(xué)顯色分子雜交抗體捕獲+化學(xué)顯色是否分型分型，確定具體的基因型不能分型，僅提示是否有HPV感染檢測HPV種類檢測23種HPV基因型，18種高危，5種低危檢測13種高危型標(biāo)本類型宮頸

14、脫落細(xì)胞、疣體組織、病理石蠟切片，液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本宮頸脫落細(xì)胞，液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本靈敏度高（1000 copies/mL）低（100000 copies /mL）交叉雜交無有基 本 設(shè) 備離心機(jī)、普通PCR儀、普通雜交儀（價格低廉）基因雜交信號放大系統(tǒng)（價格昂貴）檢測成本可單人份使用，一次可檢測標(biāo)本量96個或更多每次實驗需額外消耗8人份試劑，試劑成本高亞能HPV產(chǎn)品與HC2的比較優(yōu)勢能分型檢測23種HPV 基因型可檢測更多來源的標(biāo)本無交叉雜交反應(yīng)，特異性高通用儀器設(shè)備，如PCR儀和雜交儀檢測成本低 careHPV Test定性檢測14種高危型 HPV 16,18,31,33,35,39,45,51,

15、52,56,58,59,66,68產(chǎn)品名稱：高危型人乳頭瘤病毒（HPV）核酸檢測試劑盒方法：雜交捕獲-化學(xué)發(fā)光法商品名： careHPV Test該檢測技術(shù)專為缺少水、電或現(xiàn)代化實驗室等基礎(chǔ)設(shè)施落后的臨床環(huán)境設(shè)計，便于攜帶、易于使用，當(dāng)日可出檢查結(jié)果careHPV識別宮頸癌與高度病變的敏感度和特異度，都大大優(yōu)于醋酸染色后觀察法HPV 檢測HPV DNA 檢測HPV E6，E7 mRNA 檢測分型不分型部分分型方法代表廠家PCR-反向點雜交法亞能、凱普、達(dá)安、港龍、珠海賽樂奇流式熒光雜交法上海透景雜交捕獲（HC2）QIAGEN(凱杰)PCR-熒光探針法港龍、凱普、達(dá)安、科華PCR-熒光探針法羅氏

16、bDNA 技術(shù)科蒂亞酶切信號放大法（Cervista）HOLOGIC(英碩力) 不分型PCR-熒光探針法化 學(xué) 原 理原理： 在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號的積累,實時監(jiān)控整個PCR過程?；赥aqman探針PCR-熒光探針法總結(jié)靈敏度高不分型，或部分分型不能檢測HPV多重感染檢測HPV 種類有限，目前最多檢測14種高危型自動化程度高需價格昂貴的熒光定量PCR儀 項 目亞能生物基因分型PCR-熒光探針法技術(shù)原理PCR+反向點雜交+化學(xué)顯色PCR+熒光標(biāo)記+發(fā)光、讀數(shù)理 論 耗 時6小時3小時標(biāo)本類型宮頸脫落細(xì)胞、疣體組織、病理石蠟切片，液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本宮頸脫落細(xì)胞，液基細(xì)胞學(xué)標(biāo)本基

17、 本 設(shè) 備普通PCR儀、普通雜交儀（價格低廉） 熒光定量PCR儀（價格昂貴）檢測通量23型2/8/10/13型等是否分型分型，確定具體的基因型不分型，僅提示是否有HPV感染多重感染能檢測多重感染檢測不能檢測多重感染檢測亞能與PCR-熒光探針法對比亞能產(chǎn)品與PCR-熒光探針法的比較優(yōu)勢能分型檢測23種HPV 基因型能檢測HPV多重感染可檢測更多來源的標(biāo)本使用普通PCR儀特異性更高亞能生物HPV基因分型與羅氏對比亞能生物羅氏原理PCR-反向點雜交法PCR-熒光探針法儀器設(shè)備離心機(jī)、PCR儀、雜交儀。價格低廉，適合各級實驗室使用Combas 4800。價格昂貴檢測HPV型別數(shù)量23種14種能否分型

18、能僅能區(qū)分HPV 16,18型標(biāo)本類型宮頸脫落細(xì)胞、疣體組織、石蠟切片宮頸脫落細(xì)胞HPV 檢測HPV DNA 檢測HPV E6，E7 mRNA 檢測分型不分型部分分型方法代表廠家PCR-反向點雜交法亞能、凱普、達(dá)安、港龍、珠海賽樂奇流式熒光雜交法上海透景雜交捕獲（HC2）QIAGEN(凱杰)PCR-熒光探針法港龍、凱普、達(dá)安、科華PCR-熒光探針法羅氏bDNA 技術(shù)科蒂亞酶切信號放大法（Cervista）HOLOGIC(英碩力) 不分型酶切信號放大法代表廠家：美國Hologic，中國子公司-英碩力產(chǎn)品名稱（中文）：高危型人乳頭瘤狀病毒DNA 檢測試劑盒（酶切信號放大法）產(chǎn)品名稱（英文）：Cervista HPV HR亞能生物 HPV 基因分型英碩力 Cervista 技術(shù)原理PCR-反向點雜交法酶切信號放大法檢測HPV種類18種高危（HPV16，18，31，33，35，39，45，51，52，53，56，58，59，66，68，73，82，83），5種低危（HPV6，11，42，43，81）14種高危型（HP