吸光光度法概述和測量條件選擇

1、吸光光度法概述和測量條件選擇第九章 吸光光度法(Spectrometer)9.1 吸光光度法的基本原理 1 物質(zhì)對光的選擇性吸收 2 光的吸收基本朗伯比爾定律定義 3 偏離比爾定律的原因9.2 目視比色法及光度計(jì)的基本部件 1 目視比色法 2 光度計(jì)的基本部件9.3 顯色反應(yīng)及顯色條件的選擇 1 顯色反應(yīng)的選擇 2 顯色條件的選擇 3 顯色劑4 三元絡(luò)合物在光度分析中的應(yīng)用特性簡介9.4 吸光度測量條件的選擇 1 入射光波長的選擇 2 參比溶液的選擇 3 吸光度讀數(shù)范圍的9.5 吸光光度法的應(yīng)用 1 高含量組分的測定示差法 2 多組分分析 3 光度滴定 4 酸堿離解常數(shù)的測定 5 雙波長分光光

2、 2022/7/312作業(yè):P271: 1、2、4、5、9、10、132022/7/313前 言基于物質(zhì)對光的選擇性吸收而建立的分析方法稱為吸光光度法。包括比色法、可見分光光度法及紫外分光光度法等。比色法(Colorimetey)：比較顏色深淺來測定物質(zhì)濃度的方法。分光光度法(Spectrophtometer)：應(yīng)用分光光度計(jì)來進(jìn)行比色分析的方法。（又稱吸光光度法）分光光度法特點(diǎn)：1 靈敏度高：達(dá)10-510 -6 mol/L。適用于微量組分的測定。2 準(zhǔn)確度高：相對誤差為2 5%，滿足微量組分測定的要求 。3 速度快、儀器操作簡單、價(jià)格便宜。4 應(yīng)用廣泛:分析對象有無機(jī)物質(zhì)和許多有機(jī)物質(zhì)的微

3、量成分。用于化學(xué)平衡等理論的研究。2022/7/3149.1 吸收光度法基本原理(Basic Principle of Spectrophotometer)10.1.1 光的基本性質(zhì)光的電磁波性質(zhì)射線x射線紫外光紅外光微波無線電波10-2 nm 10 nm 102 nm 104 nm 0.1 cm 10cm 103 cm 105 cm可 見 光2022/7/315光的波粒二象性波動性粒子性 E光的折射光的衍射光的偏振光的干涉光電效應(yīng)E：光子的能量（J, 焦耳） ：光子的頻率（Hz, 赫茲） ：光子的波長（cm）c：1010 -1）h：Plank10-34 J.s 焦耳. 秒）2022/7/31

4、6單色光、復(fù)合光、光的互補(bǔ) 單色光復(fù)合光光的互補(bǔ)單一波長的光由不同波長的光組合而成的光若兩種不同顏色的單色光按一定的強(qiáng)度比例混合得到白光，那么就稱這兩種單色光為互補(bǔ)色光，這種現(xiàn)象稱為光的互補(bǔ)。藍(lán)黃紫紅綠紫黃綠綠藍(lán)橙紅藍(lán)綠2022/7/317表1 物質(zhì)顏色與互補(bǔ)光顏色的互補(bǔ)關(guān)系物質(zhì)顏色（透射光）吸收光顏色波長/nm黃綠黃橙紅紫紅紫藍(lán)綠藍(lán)藍(lán)綠紫藍(lán)綠藍(lán)藍(lán)綠綠黃綠黃橙紅4004504504804804904905005004605605805806006006506507802022/7/3189.1.2 物質(zhì)對光的選擇性吸收(Selectivity Absorption)物質(zhì)的顏色與光的關(guān)系完全吸收

5、完全透過吸收黃色光光譜示意表觀現(xiàn)象示意復(fù)合光2022/7/319 當(dāng)光束照射到物質(zhì)上時，光與物質(zhì)發(fā)生相互作用，于是產(chǎn)生反射、散射、吸收或透射。如下圖， 如被照射的是均勻溶液，則光的散射可以忽略。 界面反射損失入射光束透射光束界面反射損失溶液散射損失2022/7/3110物質(zhì)對光吸收的本質(zhì)一束光能量分子+h(原子)M + h = M*(基態(tài)) (激發(fā)態(tài)) 分子(原子)(離子)基態(tài)能級1能級2能級3h2(E)h332h11 僅當(dāng)照射光光子提供的能量(h)與被照物質(zhì)的基態(tài)與激發(fā)態(tài)能量之差E相等時才能發(fā)生吸收。不同的物質(zhì)微粒由于結(jié)構(gòu)不同而具有不同的量子化能級，其能量差也不相同。所以物質(zhì)對光的吸收具有選

6、擇性。E=h物質(zhì)或溶液2022/7/3111吸收光譜或吸收曲線(absorption,spectrum) 固定被測物質(zhì)的濃度和吸光厚度，在不同的波長處測定其吸光度。以吸度為縱坐標(biāo)，以測定波長為橫坐標(biāo)作圖，即為吸收曲線。定性分析與定量分析的基礎(chǔ)定性分析基礎(chǔ)定量分析基礎(chǔ)物質(zhì)對光的選擇吸收 不同物質(zhì)吸收光譜不同 相同物質(zhì)吸收光譜相同ABA在一定條件下，物質(zhì)對光的吸收與物質(zhì)的濃度成正比。一定的物質(zhì)，濃度增加，max不變，吸收程度成比例增加AC增大2022/7/3112吸收光譜 Absorption Spectrum純 電子能態(tài) 間躍遷S2S1S0S3hE2E0E1E3S2S1S0hAhhh分子內(nèi)電子躍

7、遷帶狀光譜銳線光譜A2022/7/3113(a)(b)(c)(d) 220 240 260 280 nm A0000(a) 聯(lián)苯(己烷溶劑)；一些典型的紫外光譜(b) 苯(己烷溶劑)；(c) 苯蒸汽；(d) Na蒸汽。2022/7/31149.1.3 光的吸收基本定律朗伯-比爾定律A：吸光度；I0：入射光強(qiáng)度；I：透射光強(qiáng)度；k1 ：比例常數(shù)； b：液層厚度（光程長度） 1729年，Bouguer首先發(fā)現(xiàn)物質(zhì)對光的吸收與吸光物質(zhì)的厚度有關(guān)。 1760年他的學(xué)生Lambert更明確地指出：如果溶液的濃度一定，則光的吸收程度與液層的厚度成正比，這個關(guān)系稱為朗伯定律。表示 為： 一、吸光度(abso

8、rbance)入射光 I0透射光 Ib2022/7/3115 1852年，Beer指出：光的吸收與吸光物質(zhì)的數(shù)量有關(guān)；如吸光物質(zhì)溶于不吸光的溶劑中，則吸光度與吸光物質(zhì)的濃度成正比。即當(dāng)單色光通過液層厚度一定的有色溶液時，溶液的吸光度與溶液的濃度成正比。這個關(guān)系稱為比爾定律。式中c：有色溶液濃度 k2：比例常數(shù)2022/7/3116 a-為吸光系數(shù)，單位為 L/g cm, b單位cm, c單位g / L。 -為摩爾吸光系數(shù)，單位為 L/mol.cm, c單位為mol/L兩項(xiàng)合并得：朗伯-比爾定律與a 的關(guān)系式中M為物質(zhì)的摩爾質(zhì)量。經(jīng)研究：當(dāng)一束單色光，通過任何均勻、非散射的固體、液體或氣體介質(zhì)時

9、，其吸光度與吸光厚度和物質(zhì)濃度成正比。 是吸光物質(zhì)在特定波長和溶劑的情況下的一個特征常數(shù)，數(shù)值上等于1mol/L吸光物質(zhì)在1cm光程中的吸光度，是吸光物質(zhì)吸光能力的量度。它可作為定性鑒定參數(shù)，也可反映方法靈敏度。測定波長不同時，不同。2022/7/3117二、透光度T(transmittance)吸光度與透光率的關(guān)系T ： 透光率A： 吸光度1.00.50ACA100500T %TT = 0.0 %A = T = 100.0 %T = 36.8 %2022/7/3118四、工作曲線 工作曲線又稱標(biāo)準(zhǔn)曲線或較正曲線。繪制時先配制一系列具有不同濃度吸光物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后在確定的波長和吸光厚度(光

10、程)等條件下，分別測量其吸光度。以吸光度A為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度c為橫坐標(biāo)作圖，即為工作曲線。AccxAx 在多組分體系中，如果各種吸收物質(zhì)之間沒有相互作用，體系的總吸光度等于各組分吸光度之和。三、吸光度的加和性：2022/7/3119例：Fe(II)的質(zhì)量濃度為5.010-4 g/L的溶液，與1，10-鄰二氮雜菲反應(yīng)，生成橙紅色配合物。該配合物在波長508nm，比色皿厚度為2cm時，測得A=0.19。計(jì)算1，2-鄰二氮雜菲亞鐵的 a 和 解：已知 c = 5.0 10-4 g/L, A=0.19, MFe或：2022/7/31209.1.4 偏離朗伯比爾定律的原因 實(shí)際測定時，標(biāo)準(zhǔn)曲線往往

11、不成直線，如圖4，發(fā)生正偏移或負(fù)偏移，這種現(xiàn)象稱為對朗伯-比爾定律的偏移。一、物理因素LB定律基本假設(shè)：入射光為單色。 實(shí)際上儀器發(fā)出的入射光是波長范圍較窄的光帶組成的復(fù)合光。設(shè)由1和2兩束光組成，其吸光度分別為A和A”對1對2偏離的原因有：1 非單色光引起的偏離2022/7/3121 測定時入射光的總強(qiáng)度為(I0+I”0）,透射光的總強(qiáng)度 為(I1+I2)，因此所得吸光度值為：將I1和I2代入得：可見，1=2 時，A=bc，A與c成直線關(guān)系。如果12 ，A與c則不成直線關(guān)系。 1，2 差別愈大，A與c之間的線性關(guān)系偏離也愈大。2022/7/3122 盡量選取吸光度隨波長變化不大的譜帶A的復(fù)合

12、光進(jìn)行測量，則A隨波長變化小，的變化小，引起的偏離小，A與c基本為直線。若選用譜帶B的復(fù)合光進(jìn)行測量， 的變化大，A與c的線性關(guān)系也差。 選取譜帶A處作入射波長，還可保證吸光度最大，靈敏度最好。故在選用入射光波長時，我們應(yīng)考慮：2022/7/31232、非平行入射光引起的偏離 朗伯-比爾定律要求入射光平行垂直入射。若入射光束為非平行光，可能導(dǎo)致工作曲線產(chǎn)生正偏離。bb3、介質(zhì)不均引起的偏離 朗伯-比爾定律要求吸光物質(zhì)溶液：均勻的、非散射的。 若溶液不均，如產(chǎn)生膠體或渾濁，當(dāng)入射光通過該溶液時，除了一部分光被吸收外，還有一部分因散射而損失，使實(shí)測的吸光度偏高，從而使工作曲線產(chǎn)生正偏離。2022/

13、7/3124 L-B定律的基本假設(shè)要求溶液中吸光質(zhì)點(diǎn)是獨(dú)立的，彼此間無相互作用，因此稀溶液能很好地服從該定律。 高濃度時(0.01 mol/L)，由于吸收組分粒子之間的平均距離減小，相互影響鄰近粒子的電荷分布，使吸光能力發(fā)生變化。即改變物質(zhì)的摩爾吸光系數(shù)()。 其相互作用的程度與濃度有關(guān)，濃度增大，吸光度與濃度之間的關(guān)系偏離線性關(guān)系越大。所以一般認(rèn)為比爾定律僅適用于稀溶液。二、化學(xué)因素引起的偏離1、高濃度引起的偏離2022/7/3125Cr2O72- + H2O = 2H+ + 2CrO42-（橙色） （黃色） L-B中濃度(c) 應(yīng)指吸光物質(zhì)的平衡濃度，即吸光型體的平衡濃度。 實(shí)際常用吸光物

14、質(zhì)的分析濃度。只有當(dāng)平衡濃度等于或正比于分析濃度時，其吸光度符合比爾定律。但溶液中吸光物質(zhì)常因締合、離解、互變異構(gòu)，絡(luò)合物的逐級形成，以及與溶劑的相互作用等而形成新的化合物或改變吸光物質(zhì)濃度，這些都將導(dǎo)致偏離比爾定律。如2、化學(xué)反應(yīng)引起的偏離2022/7/31269.2 目視比色法及光度計(jì)的基本部件c1c2c3c4以眼睛比較溶液顏色的深淺以測定物質(zhì)含量的方法，稱為目視比色法。常用的目視比色法是標(biāo)準(zhǔn)系列法比色管優(yōu)點(diǎn)：設(shè)備簡單，操作簡便，不要求有色溶液服從比爾定律，廣泛用于準(zhǔn)確度要求不高的常規(guī)分析中。缺點(diǎn)：準(zhǔn)確度不高，如溶液中存在第二種有色物質(zhì)，無法測定。許多有色溶液不穩(wěn)定，標(biāo)準(zhǔn)系列不能久存，經(jīng)常

15、用時配制，麻煩。cx一、 目視比色法2022/7/3127二、光度計(jì)及基本部件 兩種方法的測定原理相同，只是獲得單色光的方法不同，前者用濾光片，后者用棱鏡或光柵等單色器。 由于兩者均基于吸光光度測定，統(tǒng)稱為光度分析法。 國產(chǎn)分光光度計(jì)類型主要有：72、721和725型。其主要部件和光路示意圖如下。光源單色器吸收池檢測系統(tǒng)參比池光電比色法：使用光電比色計(jì)測定溶液A進(jìn)行定量分析的方法分光光度法：使用分光光度計(jì)測定溶液A進(jìn)行定量分析的方法2022/7/31282022/7/3129比色池盒2022/7/3130紫外可見分光光度計(jì)2022/7/3131 光度計(jì)的基本部件和光學(xué)示意圖1234567891

16、01112圖6 72型分光光度計(jì)光學(xué)系統(tǒng)圖 1-光源 2-進(jìn)光狹縫 3-反光鏡 4,7-透鏡 5-棱鏡 8-出光狹逢 9-比色皿 10-光量調(diào)節(jié)器 11-硒光電池 12-檢流器2022/7/3132各部件的作用及主要性能1光源可見光區(qū)：使用鎢燈，加熱到白熾時發(fā)出波長約為3202500nm的連續(xù)光譜。光強(qiáng)度與溫度成正比，一般工作溫度為26002870K(熔點(diǎn)3680K)。溫度與電源電壓有關(guān)，電壓穩(wěn)定，光強(qiáng)度穩(wěn)定。近紫外光區(qū)：使用氫燈或氘燈，產(chǎn)生180375nm連續(xù)光譜。2022/7/3133將光源發(fā)出的連續(xù)光譜分解為單色光的裝置。由棱鏡或光柵等單色元件及狹縫和透鏡組成。2 單色器棱鏡 棱鏡單器由

17、棱鏡、透鏡和狹縫組成。單色的純度決定于棱鏡的色散率和出射狹縫的寬度。 玻璃棱鏡對4001000nm波長的光色散較大，適用于可見光分光光度計(jì)。 光柵 光柵是利用光的衍射和干涉原理而進(jìn)行分光作用。 具有色散均勻、工作波長范圍寬、分辨率高等特點(diǎn)，一般用于中高檔儀器中。2022/7/3134濾光片三棱鏡分光2022/7/3135各部件的作用及主要性能3吸收池有玻璃和石英兩種?？梢姽鈪^(qū)：用無色透明、耐腐蝕的玻璃比色皿；紫外光區(qū)：用石英比色皿。其厚度分別為 0.5、1、2、3 cm的長方形或園柱形。2022/7/31364檢測系統(tǒng) 測吸光度時，透過比色池的光強(qiáng)度先轉(zhuǎn)為電流，這種光電轉(zhuǎn)換器件稱為檢測器。要求

18、檢測器對測定波長范圍的光有快速、靈敏的響應(yīng)。且產(chǎn)生的光電流與光強(qiáng)度應(yīng)成正比。 光電比色計(jì)及可見光分光光度計(jì)常使用硒光電池或光電管作檢測器，采用檢流計(jì)作讀數(shù)裝置，兩者組成檢測系統(tǒng)。123e-e-+e-4圖7 硒光電池示意圖1-Fe片 2-半導(dǎo)體硒 3-金屬薄膜 4-入射光線常用硒光電池，如圖7。一般可產(chǎn)生10-100A光電流。電流大小與照射光強(qiáng)度成正比。長時間強(qiáng)光照射時，會產(chǎn)生“疲勞”。具有堅(jiān)固、價(jià)廉和無需外接電源等優(yōu)點(diǎn)。光電池.光電管光電二極管陣列2022/7/3137三、分光光度計(jì)的類型單色器參比池R樣品池S檢測器光源1 單光束單色器RS檢測器光源2 雙光束I0It單色器單色器樣品池檢測器1

19、2光源123 雙波長2022/7/31389.3 顯色反應(yīng)及顯色條件的選擇9.3.1 顯色反應(yīng)的選擇 待測組分轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩衔锏姆磻?yīng)叫顯色反應(yīng)。與待測組分反應(yīng)形成有色化合物的試劑叫顯色劑。 顯色反應(yīng)可分為兩大類：絡(luò)合和氧化還原反應(yīng)。前者是主要的。1. 靈敏度高 一般為104105時，可認(rèn)為反應(yīng)較靈敏。2. 選擇性好 顯色劑僅與一個組分或少數(shù)幾個組分反應(yīng)顯色。3. 顯色劑在測定波長處無明顯吸收 通常把兩種有色物質(zhì)最大吸收波長之差稱為“對比度”，一般要求顯色劑與有色化合物的對比度在60nm以上。顯色劑應(yīng)具備條件:4. 反應(yīng)生成的有色化合組成恒定，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定2022/7/31391 顯色劑用量圖8

20、 吸光度與顯色劑濃度的關(guān)系Mo(V)與SCN-反應(yīng)情況就如圖8(3)。9.3.2 顯色條件的選擇 M + R MR （待測組分） （顯色劑） （有色絡(luò)合物）2022/7/31402 酸 度 酸度改變引起平衡移動，影響顯色劑及有色配合物的濃度，還可能引起配位基團(tuán) (R)數(shù)目的改變，從而改變?nèi)芤旱念伾?酸度還與金屬離子水解有關(guān)。 適宜酸度范圍是通過實(shí)驗(yàn)來選擇的。3 顯色溫度顯色反應(yīng)一般在室溫下進(jìn)行，有時加熱可使顯色反應(yīng)完全，一般是通過實(shí)驗(yàn)找出適宜溫度。4 顯色時間大多數(shù)顯色反應(yīng)需要一定時間，時間長短有時與溫度有關(guān)，一般可由吸光度時間關(guān)系曲線得到。R- + Mn+ = MRn+H+HR顯色劑有色配

21、合物ApH吸光度與pH值關(guān)系A(chǔ)t吸光度與時間關(guān)系2022/7/3141 光度分析中，共存離子如本身有顏色，或與顯色劑作用生成有色化合物，都將干擾測定。消除方法：(1)加入絡(luò)合掩蔽劑或氧化還原掩蔽劑，使干擾離子生成無色絡(luò)合物或無色離子。(2)選擇適當(dāng)?shù)娘@色條件以避免干擾。(3)分離干擾離子。(4)可選擇適當(dāng)?shù)墓舛葴y定條件(波長和參比)，消除干擾離子的影響。5、干擾的消除2022/7/31429.3.3 顯色劑無機(jī)顯色劑與金屬離子生成的配合物不穩(wěn)定，靈敏度和選擇性不高，應(yīng)用不多。 與金屬離子可形成螯合物，顯色反應(yīng) 的選擇性和靈敏度都較無機(jī) 顯色反應(yīng)高。研制高靈敏度和選擇性的顯色劑仍是吸光光度法研

22、究中的重要課題。 有機(jī)顯色劑一般都含有生色基團(tuán)和助色基團(tuán)。 生色基團(tuán)是指某些含不飽鍵的基團(tuán)。如偶氮基(-N=N-)、醌基、亞硝基(-N=O)、硫羰基(=C=S)等基團(tuán)。 助色基團(tuán)是某些含孤對電子的基團(tuán)，如-NH2、-NR2、-OH、-OR、-SH、-Cl及-Br等，影響生色基團(tuán)對光的吸收，使產(chǎn)物的max向長波方向移動，顏色加深。這種現(xiàn)象稱為“紅移”。其影響見表3。有機(jī)顯色劑表3 鐵（III）與有助色團(tuán)和無助色團(tuán)的有機(jī)試劑反應(yīng)所得產(chǎn)物顏色的比較2022/7/3143有機(jī)顯色劑的類型1。偶氮類顯色劑：分子中含有偶氮基。這類化合物都是有色的。具有性質(zhì)穩(wěn)定、顯色反應(yīng)靈敏度高、選擇 性好、對比度大等優(yōu)點(diǎn)

23、。是目前應(yīng)用最為廣泛的一類顯色劑。如偶氮胂III和PAR。 偶氮伸III 偶氮胂特別適合于鈾、釷、鋯等元素總量的測定。其衍生物偶氮氯膦III是我國目前廣為采用的測定微量稀土元素的較好的試劑。 PAR在不同條件下，與很多金屬離子生成紅色或紫紅色的絡(luò)合物，如用于銀、Hg、Ga、U、鋼鐵中的鈮、釩、銻等元素的比色測定。也應(yīng)用于三元配合物。PAR：4-(2-吡啶偶氮)-間苯二酚2022/7/3144鉻天青S結(jié)構(gòu)式2。三苯甲烷類顯色劑： 這是一類應(yīng)用很廣的分析試劑，種類很多。鉻天青可與許多金屬離子形成三元配合物，用于吸光度測定，常用來測鈹和鋁。2022/7/3145多元配合物及應(yīng)用特性簡介特性1、比較穩(wěn)

24、定，可提高分析測定的準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性。2、對光有較大的吸收容量，進(jìn)行光度測定時，它比二元絡(luò)合物具有更高的靈敏度和更大的對比度。3、形成三元配合物的顯色反應(yīng)比二元體系具有更高的選擇性。 多元絡(luò)合物是三種或三種以上的組分所形成的絡(luò)合物。目前應(yīng)用較多的是由一種金屬離子與兩種配體所形成的三元絡(luò)合物。1、三元混配配合物2、離子締合物3、金屬離子-絡(luò)合劑-表面活性劑體系4、雜多酸其主要類型2022/7/31469.4 吸光度測定條件的選擇一、入射光波長的選擇原則：1、最大吸收max 2、吸收最大，干擾最小A配合物顯色劑max配合物顯色劑二、參比溶液的選擇 測定時，用參比溶液調(diào)節(jié)儀器零點(diǎn)，可消除由于吸收池壁及

25、溶劑對入射光的反射和吸收帶來的誤差，并扣除干擾的影響。參比類型：1、純?nèi)軇┳鲄⒈取?只有待測物質(zhì)與顯色劑的反應(yīng)產(chǎn)物有吸收)2、試劑空白作參比。(除試樣外的其它溶劑)3、試樣溶液作參比。(顯色劑無吸收，試樣中其它組分有吸收，但不與顯色劑反應(yīng))此時通過參比溶液的透射光2022/7/3147三、吸光度讀數(shù)范圍的選擇0 20 40 60 80 100 0.10.30.200.50.41.00.61.5AT 在不同吸光度范圍內(nèi)讀數(shù)對測定帶來不同程度的誤差?？赏谱C如下：設(shè)試液服從比爾定律，微分，得：(2)/(1)，整理后得：以有限值表示，可寫為：(2)(1)式中：c/c表示濃度的相對誤差;T表示透光度的讀

26、數(shù)誤差.即濃度的相對誤差取決于透光率的讀數(shù)誤差T和透光度T的大小。2022/7/3148假設(shè)T為常數(shù)，上式可以寫為：當(dāng)T=36.8%時，時測量誤差最小。百分透光度在1080%（即A1.0）范圍內(nèi)的C/C比較小。因此測定時應(yīng)使被測試液的吸光度在此范圍內(nèi)才能得到較好的結(jié)果。C/C與T的關(guān)系C/C0.368T2022/7/31499.5 吸光光度法的應(yīng)用 主要用于微量組分的測定，也用于高含量組分的測定、多組分分析及化學(xué)平衡、絡(luò)合物組成等理論研究。一、高含量組分的測定示差法方法原理：若測定試液濃度為(Cx) ，用稍低于試液濃度的(Cs)標(biāo)準(zhǔn)溶液作參比溶液，調(diào)節(jié)儀器透光度讀數(shù)為100%（A=0)，然后測

27、定其吸光度(Ar)(相對吸光度)，對應(yīng)的透光率稱相對透光率(Tr)，則有：示差法要求：儀器光源有足夠的發(fā)射強(qiáng)度或能增大光電流放大倍數(shù),以便能調(diào)節(jié)參比溶液透光率為100%。100%T%Tr%TS%普通光度法示差光度法Tx%2022/7/3150二、多組分分析 (1)吸收光譜不重疊，或至少可以找到某一波長時X有吸收而Y不吸收，在另一波長時，Y吸收而X不吸收。如圖12-1，可分別在波長1和2時，測定組分X和Y而相互不干擾。(2)吸收光譜重疊：找出兩個波長，在該波長下，二組分的A較大，如圖12-2，在波長1和2時測定吸光度A1和A2，由加和性得方程式：解方程可得：cx 和 cy 假定溶液中同時存在兩種

28、組分X和Y，它們的吸收光譜一般有如下兩種情況：2022/7/3151三、絡(luò)合物組成及穩(wěn)定常數(shù)的測定1、摩爾比法M + nL MLn 固定Cm，逐漸增加CL，測定一系列Cm一定、 CL不同的溶液的吸光度A。 以A為縱坐標(biāo)， CL/ Cm為橫坐標(biāo)作圖。 當(dāng)CL/CMn時，A不再改變。 兩條切線的交點(diǎn)所對應(yīng)的橫坐標(biāo)CL/CM比值為n，則絡(luò)合物的絡(luò)合比為1:n。122022/7/31522、等摩爾連續(xù)變化法方法原理：保持(cM+cR)一定，連續(xù)改變cR/cM，配制出一系列顯色溶液，分別測定系列溶液的吸光度A，以A對cM/(cM+cR)作圖(下圖)。 曲線的折點(diǎn)所對應(yīng)的cR/cM值就等于絡(luò)合物的絡(luò)合比n。當(dāng)絡(luò)合物較穩(wěn)定時，曲線的折點(diǎn)明顯，反之，則應(yīng)用切線外推法得到折點(diǎn)。適合于