抗生素類藥物分析

1、關(guān)于抗生素類藥物的分析第一張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第三節(jié) 氨基糖苷類抗生素鏈霉素 雙氫鏈霉素新霉素 卡那霉素慶大霉素 巴龍霉素代表藥物 Aminoglycosids第二張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)鏈霉胍 + 鏈霉糖 + N-甲基-L-葡萄糖胺1.鏈霉素 第三張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2.巴龍霉素 巴龍胺+巴龍二糖胺巴龍胺(苷元)巴龍二糖胺(糖)第四張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3.慶大霉素 絳紅糖胺+ 2-脫氧鏈霉胺 + 加洛糖胺 慶大霉素C1 R=H R1、R2=CH3 慶大霉素C2 R=R2=H R1=CH3 慶

2、大霉素C1a R、R1、R2=H 慶大霉素C2a R=CH3 R1= R2=H主要成分第五張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月奈替米星（netilmicin）脫氧鏈霉胺（氨基糖）絳紅糖胺（氨基糖）加洛糖胺第六張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月理化性質(zhì)結(jié)構(gòu)相似 理化性質(zhì)相似1.溶解度與堿性堿性: 堿性中心鏈霉素 3個(gè)慶大霉素 5個(gè)多與硫酸成鹽溶解性:水溶性多羥基化合物易溶于水，不溶于乙醇、氯仿。2個(gè)強(qiáng)堿性胍基（PKa=11.5）1個(gè)甲胺基（PKa=7.7）第七張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2.旋光性結(jié)構(gòu)中氨基糖的手性碳原子.慶大霉素、巴龍霉素等均有旋光性。硫酸慶大霉素硫

3、酸巴龍霉素硫酸卡那霉素50mg/ml水溶液第八張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月結(jié)合較弱結(jié)合較強(qiáng)3.苷的水解與穩(wěn)定性第九張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月鏈霉素 pH57.5時(shí)穩(wěn)定過(guò)酸過(guò)堿則水解。慶大霉素、奈替米星對(duì)光、熱空氣均穩(wěn)定。 水溶液 pH212時(shí)穩(wěn)定。4. 紫外吸收慶大霉素、奈替米星等無(wú)UV吸收第十張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 (二)鑒別試驗(yàn)1.茚三酮反應(yīng) ChP：硫酸慶大霉素、硫酸核糖霉素氨基糖苷結(jié)構(gòu) 具有羥基胺類和 氨基酸的性質(zhì)+第十一張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2. Molisch試驗(yàn) 五碳糖和六碳糖的特征反應(yīng)五碳糖氨基糖苷化合物六碳

4、糖氨基糖苷化合物H+濃H2SO4/HCl-萘酚/蒽酮紅紫色或藍(lán)紫色硫酸核糖霉素 0.1%蒽酮/濃H2SO4藍(lán)色藍(lán)綠色第十二張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月紅紫色羥甲基糠醛(含六碳糖結(jié)構(gòu)氨基糖苷類酸性水解產(chǎn)物)藍(lán)紫色第十三張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月坂口反應(yīng)麥芽酚反應(yīng)N-甲基葡萄糖胺反應(yīng)鏈霉素水解產(chǎn)物反應(yīng)第十四張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月N甲基葡萄糖胺反應(yīng)(ElsonMorgan反應(yīng))乙酰丙酮OH-吡咯衍生物對(duì)二甲氨基苯甲醛H+櫻桃紅色 第十五張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月(縮合)第十六張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月紅色對(duì)二甲氨基苯甲

5、醛H+第十七張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月例 硫酸新霉素 Ch.P（2010） 【鑒別】（1）取本品約10mg，加水1ml溶解后，加鹽酸溶液（9100）2ml，在水浴中加熱10分鐘，加8%氫氧化鈉溶液2ml與2%乙酰丙酮水溶液1ml，置水浴中加熱5分鐘，冷卻后，加對(duì)二甲氨基苯甲醛試液1ml，即顯櫻桃紅色。第十八張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月麥芽酚反應(yīng)鏈霉糖特有反應(yīng)分子重排六元環(huán)脫N甲基葡萄糖胺脫鏈霉胍H+硫酸鐵銨H+ Fe3+分子重排麥芽酚第十九張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第二十張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月坂口反應(yīng)（Sakaguchi反應(yīng)）鏈

6、霉胍特有反應(yīng)（或-萘酚）加入尿素使顏色穩(wěn)定可比色測(cè)定硫酸鏈霉素0.5mg，加水4ml溶解后，加氫氧化鈉試液2.5ml與0.1的 8羥基喹林的乙醇溶液1ml，放冷至約15，加次溴酸鈉試液3滴，即顯橙紅色。第二十一張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月坂口反應(yīng)+OH-第二十二張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月硫酸鹽反應(yīng)H+TLC法硫酸鏈霉素和硫酸慶大霉素鑒別色譜條件特點(diǎn)：吸附劑: 硅膠展開劑：氯仿甲醇濃氨水顯色劑：茚三酮或碘蒸氣第二十三張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月HPLC法鑒別BP硫酸慶大霉素?fù)?jù)色譜圖中慶大霉素C1、C2 、C1a、C2a的保留時(shí)間鑒別。光譜法鑒別1.IR

7、ChP鑒別妥布霉素 USP 鑒別硫酸慶大霉素。2.UVBP硫酸慶大霉素 飽和結(jié)構(gòu) 240330nm無(wú)吸收第二十四張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月例 【鑒別】HPLC法 Ch.P（2010） 硫酸依替米星 硫酸卡那霉素 硫酸小諾霉素 硫酸奈替米星 硫酸阿米卡星 硫酸慶大霉素 硫酸西索米星 硫酸巴龍霉素 妥布霉素第二十五張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月三、特殊雜質(zhì)檢查及組分分析（一）鏈霉素雜質(zhì)鏈霉素B（甘露糖鏈霉素）活性低來(lái)源： 反應(yīng)中間體殘留 TLC（對(duì)照品法）BP（2000）甘露糖鏈霉素D-甘露糖對(duì)照品D-甘露糖水解TLC展開、顯色，比較(3.0%)方法 ：HPLC法 (C

8、hP 2010)第二十六張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月(二)、硫酸奈替米星中的有關(guān)物質(zhì)檢查特殊雜質(zhì)：西梭米星來(lái)源：合成原料殘留方法： TLC對(duì)照品法與高低濃度對(duì)照法同時(shí)控制雜質(zhì)限量(三)、慶大霉素C組分的測(cè)定C組分比例不一致發(fā)酵菌種不同工藝差別第二十七張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月對(duì)微生物的活性無(wú)明顯差異不同的C組分毒副作用和耐藥性不同ChP JPBP USP規(guī)定控制各組分的相對(duì)百分含量方法：柱前衍生化離子對(duì)HPLC法慶大霉素?zé)oUV吸收Gentamycin-NH2+ OPA+HSCH2COOHmax = 330nm第二十八張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月1-烷

9、基硫代-2-烷基異吲哚衍生物max = 330nm第二十九張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月HPLC條件色譜柱：ODS流動(dòng)相：水冰醋酸甲醇(25:5:70)配制的0.02mol/L庚烷磺酸鈉溶液檢測(cè)波長(zhǎng): 330nm計(jì)算: 峰面積歸一化法規(guī)定 C1 2040% C1a 1030% C2a + C2b+ C2 4060%第三十張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月慶大霉素C組分的測(cè)定實(shí)驗(yàn)條件的討論1、OPA的作用是什么？2、冰醋酸的作用是什么？3、庚烷磺酸鈉的作用是什么？第三十一張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（四）硫酸鹽測(cè)定剩余滴定法空白滴定第三十二張，PPT共七十三頁(yè)，

10、創(chuàng)作于2022年6月四、含量測(cè)定1.免疫分析法2.微生物檢定法（各國(guó)藥典普遍采用）利用抗生素在瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)的擴(kuò)散作用量反應(yīng)平行線原理的設(shè)計(jì)，比較標(biāo)準(zhǔn)品與供試品兩者對(duì)接種的試驗(yàn)菌產(chǎn)生抑菌圈的大小，以測(cè)定供試品效價(jià)的一種方法。第三十三張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3.HPLC法優(yōu)點(diǎn): 高靈敏度、專屬性 廣泛應(yīng)用于抗生素穩(wěn)定性研究及體內(nèi)分析氨基糖苷類一般無(wú)吸收 柱前(后)衍生化【含量測(cè)定】 Ch.P規(guī)定方法 微生物檢定法 鹽酸大觀霉素，硫酸新霉素，硫酸鏈霉素， 硫酸核糖霉素，硫酸奈替米星，硫酸阿米卡星，硫酸慶大霉素，硫酸西索米星，硫酸巴龍霉素， 硫酸小諾霉素 HPLC 法 硫酸依替米星，

11、硫酸卡那霉素 第三十四張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月生物樣品中氨基糖苷類分析的原則1、OPA、FMOC-Cl、FDNB柱前衍生化反應(yīng)重要意義：2、樣品預(yù)處理：（1）離子對(duì)試劑（2）固相萃取柱3、柱前衍生化反應(yīng)是否完全需要考查第三十五張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第四節(jié) 四環(huán)素類抗生素結(jié)構(gòu)上具有氫化駢四苯環(huán)，統(tǒng)稱為四環(huán)素族抗生素一、基本結(jié)構(gòu)與化學(xué)性質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu): 四駢苯或萘駢萘的衍生物。取代基不同而構(gòu)成不同的四環(huán)素.name R R R R四環(huán)素 TC H OH CH3 H金霉素 CTC Cl OH CH3 H土霉素 OTC H OH CH3 OH脫氧土霉素 DOTC H

12、H CH3 OH第三十六張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 多西環(huán)素 （DOTC）（doxycycline）（脫氧土霉素）（強(qiáng)力霉素）第三十七張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月A環(huán)B環(huán)C環(huán)D環(huán)二甲氨基N(CH3)2酚羥基酰胺基CONH2酮基與烯醇基共軛雙鍵系統(tǒng)酮基與烯醇基共軛雙鍵系統(tǒng)第三十八張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與分析方法之間的關(guān)系1.共軛雙鍵，剛性結(jié)構(gòu)：具有紫外吸收，可產(chǎn)生熒光，可進(jìn)行鑒別和含量測(cè)定。 2具有酚羥基、烯醇基：可發(fā)生三氯化鐵反應(yīng)、可與金屬離子絡(luò)合，用于鑒別。 3.具有手性碳原子：具旋光性，用于鑒別。 第三十九張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作

13、于2022年6月理化性質(zhì)1.酸堿性與溶解度兩性: 酚羥基、烯醇羥基 弱酸性 二甲胺基 弱堿性1.與酸、堿均能成鹽2.強(qiáng)酸或強(qiáng)堿中溶解度3.游離組分在水中溶解度很小溶解度:第四十張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2、含結(jié)晶水四環(huán)素：6個(gè)結(jié)晶水占19.6%土霉素：2個(gè)結(jié)晶水占7.5%加熱時(shí)可失去結(jié)晶水,當(dāng)含水量低于19.6%的四環(huán)素和低于7.5%的土霉素,置于空氣中要吸收水分第四十一張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2.旋光性用于鑒別、定量分析ChP 鹽酸土霉素：-188-200 鹽酸四環(huán)素：-240-258 3.UV吸收和熒光共軛雙鍵系統(tǒng)：具有紫外吸收，可產(chǎn)生熒光降解產(chǎn)物的熒光可

14、供鑒別用。土霉素 綠色熒光；金霉素 藍(lán)色熒光；四環(huán)素 黃色熒光H+OH-第四十二張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月4.與金屬離子形成配位化合物酚羥基、烯醇基的性質(zhì)。Ca2+ Mg2+ Fe3+ Al3+等pH3 7.5 強(qiáng)烈熒光第四十三張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月5.不穩(wěn)定性: 水溶液對(duì)酸、堿、氧化劑均不穩(wěn)定。1）差向異構(gòu)化淡黃黑藍(lán)色熒光土霉素、多西環(huán)素不易差向異構(gòu)化第四十四張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月A環(huán)上手性C4構(gòu)型的改變差向四環(huán)素第四十五張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（土霉素、多西環(huán)素不易差向異構(gòu)化）第四十六張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于20

15、22年6月多西環(huán)素不發(fā)生（C環(huán)無(wú)羥基）第四十七張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（2）堿性下降解（熒光）多西環(huán)素不發(fā)生第四十八張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月TCETCATCEATC差向脫水差向脫水第四十九張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月二、鑒別試驗(yàn)1.濃H2SO4反應(yīng)2.FeCl3反應(yīng)酚-OH反應(yīng)氧化、脫水第五十張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3.TLC法正相分配薄層色譜對(duì)照品法載體：硅藻土（中性）+EDTA展開劑：乙酸乙酯-氯仿-丙酮(2:2:1)+EDTA顯色：UV：365nm熒光ChP，BP方法克服痕量金屬造成的拖尾現(xiàn)象4.HPLC法ChP，USP

16、方法保留時(shí)間鑒別（pH7）鹽酸土霉素，鹽酸金霉素，鹽酸多西環(huán)素，鹽酸美他環(huán)素第五十一張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月5.熒光反應(yīng)： 四環(huán)素類在紫外燈下產(chǎn)生熒光，其降解產(chǎn)物也具有熒光，可供鑒別。UV綠色熒光H+UV第五十二張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月6. UV法溶劑:1mol/L鹽酸-甲醇（1100）濃度:0.01mg/ml第五十三張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月三、特殊雜質(zhì)檢查1.有關(guān)物質(zhì)4-差向四環(huán)素（ETC）4.0%脫水四環(huán)素（ATC） 0.5%差向脫水四環(huán)素（EATC） 0.5%鹽酸金霉素（CTC） 8）流動(dòng)相：pH8.3的堿性溶液系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 4-

17、差向脫水四環(huán)素 四環(huán)素第五十七張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月中國(guó)藥典規(guī)定用HPLC法測(cè)定的四環(huán)素類藥物鹽酸四環(huán)素鹽酸土霉素鹽酸金霉素鹽酸多西環(huán)素鹽酸美他環(huán)素第五十八張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月五、高分子雜質(zhì)的檢查（了解）內(nèi)源性：藥物自身聚合物 來(lái)源于生產(chǎn)過(guò)程、貯存過(guò)程、使用不當(dāng)外源性：蛋白、多肽、多糖及其與藥物的結(jié)合物 來(lái)源于發(fā)酵過(guò)程高分子雜質(zhì)凝膠色譜法：葡聚糖凝膠 Sephadex G-10雜質(zhì)控制方法控制重點(diǎn)!第五十九張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月1.基本結(jié)構(gòu)青霉素族多肽（青霉素噻唑多肽）聚合物母核參于反應(yīng)側(cè)鏈參于反應(yīng)頭孢菌素族與母核有關(guān)的N型聚合反應(yīng)

18、側(cè)鏈參與反應(yīng)的L型聚合反應(yīng)第六十張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2.特點(diǎn)（1）發(fā)酵中產(chǎn)生的任何蛋白及蛋白碎片均可帶入產(chǎn)品中，相同的蛋白或蛋白碎片上可以結(jié)合不同數(shù)目的藥物分子，形成青霉素噻唑多肽類雜質(zhì)。（2）有不同聚合度和不同機(jī)理聚合反應(yīng)形成的聚合物，聚合物發(fā)生不同程度的降解作用。（3）以異構(gòu)體存在樣品，同聚和異聚反應(yīng)可同時(shí)發(fā)生。（4）高分子雜質(zhì)的種類、數(shù)量與生產(chǎn)工藝密切相關(guān)（溶媒結(jié)晶、噴霧干燥）第六十一張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第六十二張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月1、下列哪個(gè)藥物會(huì)發(fā)生羥肟酸 鐵反應(yīng) A. 青霉素 B. 慶大霉素 C. 紅霉素 D. 鏈霉

19、素 E. 維生素C 第六十三張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2、中國(guó)藥典測(cè)定頭孢菌素類藥物的含量時(shí)，最多采用的方法是 A. 微生物法 B. 碘量法 C. 汞量法 D. 正相高效液相色譜法 E. 反相高效液相色譜法第六十四張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3、屬于-內(nèi)酰胺類的抗生素藥物有 A. 青霉素 B. 紅霉素 C. 頭孢菌素 D. 慶大霉素 E. 四環(huán)素第六十五張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月4、能和茚三酮發(fā)生呈色反應(yīng)的物質(zhì)有 A鏈霉素 B慶大霉素 C土霉素 D氨基酸 E苯巴比妥第六十六張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月6、能發(fā)生重氮化-偶合反應(yīng)的抗生素類藥物是 A. 青霉素 B. 慶大霉素 C. 芐星青霉素 D. 鹽酸四環(huán)素 E. 普魯卡因青霉素第六十七張，PPT共七十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月7、四環(huán)素在酸性條件下的降解產(chǎn)物是 A.