不同產(chǎn)地老鸛草的比較及其軟膏提取工藝優(yōu)化(共20頁(yè))

1、武漢生物工程學(xué)院學(xué)士學(xué)位論文PAGE II武漢生物(shngw)工程學(xué)院畢業(yè)(b y)論文（設(shè)計(jì)(shj)）題 目：不同產(chǎn)地老鸛草的比較及其軟膏提取工藝優(yōu)化類 別：科研型畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）系 別：制藥工程系專業(yè)班級(jí)：10034101學(xué) 號(hào)：1003410102學(xué)生姓名：朱 鑫指導(dǎo)教師：孫桂芝時(shí) 間：2013年9月至2014年5月武漢生物工程學(xué)院學(xué)士學(xué)位論文PAGE III武漢生物工程學(xué)院學(xué)士學(xué)位論文 II目 錄TOC o 1-3 h u HYPERLINK l _Toc7619 學(xué)位論文(lnwn)作者聲明 PAGEREF _Toc7619 II HYPERLINK l _Toc13841 摘

2、要 PAGEREF _Toc13841 III HYPERLINK l _Toc30660 關(guān)鍵字 PAGEREF _Toc30660 III HYPERLINK l _Toc22791 Abstract PAGEREF _Toc22791 III HYPERLINK l _Toc12185 Key words PAGEREF _Toc12185 III HYPERLINK l _Toc13443 1 前言(qin yn) PAGEREF _Toc13443 1 HYPERLINK l _Toc25808 2 不同產(chǎn)地(chnd)老鸛草藥材的比較 PAGEREF _Toc25808 1 HYP

3、ERLINK l _Toc19448 2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器 PAGEREF _Toc19448 1 HYPERLINK l _Toc20169 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料 PAGEREF _Toc20169 1 HYPERLINK l _Toc31790 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 PAGEREF _Toc31790 1 HYPERLINK l _Toc30308 2.2 實(shí)驗(yàn)方法 PAGEREF _Toc30308 1 HYPERLINK l _Toc21694 2.2.1 藥材的性狀鑒別 PAGEREF _Toc21694 1 HYPERLINK l _Toc5682 2.2.2 藥材中浸出物含量的

4、測(cè)定 PAGEREF _Toc5682 2 HYPERLINK l _Toc12801 2.2.3 藥材中沒(méi)食子酸含量的測(cè)定 PAGEREF _Toc12801 2 HYPERLINK l _Toc7425 2.3 結(jié)果與分析 PAGEREF _Toc7425 2 HYPERLINK l _Toc17381 2.3.1 藥材的性狀比較 PAGEREF _Toc17381 2 HYPERLINK l _Toc28160 2.3.2 藥材中浸出物含量的比較 PAGEREF _Toc28160 2 HYPERLINK l _Toc20490 2.3.3 藥材中沒(méi)食子酸含量的比較 PAGEREF _T

5、oc20490 3 HYPERLINK l _Toc4814 2.4 小結(jié) PAGEREF _Toc4814 3 HYPERLINK l _Toc12810 3 老鸛草軟膏提取工藝優(yōu)化 PAGEREF _Toc12810 3 HYPERLINK l _Toc30510 3.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器 PAGEREF _Toc30510 3 HYPERLINK l _Toc29417 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料 PAGEREF _Toc29417 3 HYPERLINK l _Toc17210 3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 PAGEREF _Toc17210 3 HYPERLINK l _Toc22766 3.2 實(shí)

6、驗(yàn)方法 PAGEREF _Toc22766 3 HYPERLINK l _Toc20553 3.2.1 加水倍數(shù)的選擇 PAGEREF _Toc20553 3 HYPERLINK l _Toc7043 3.2.2 提取工藝的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) PAGEREF _Toc7043 3 HYPERLINK l _Toc21987 3.2.3 水提醇沉浸膏的制備 PAGEREF _Toc21987 4 HYPERLINK l _Toc713 3.2.4 浸膏率的測(cè)定 PAGEREF _Toc713 4 HYPERLINK l _Toc6007 3.2.5 沒(méi)食子酸含量的測(cè)定 PAGEREF _Toc6007

7、 4 HYPERLINK l _Toc14587 3.3 結(jié)果與分析 PAGEREF _Toc14587 4 HYPERLINK l _Toc24759 2.3.1 提取工藝正交試驗(yàn)結(jié)果與分析 PAGEREF _Toc24759 4 HYPERLINK l _Toc993 2.3.2 提取工藝正交驗(yàn)證試驗(yàn) PAGEREF _Toc993 6 HYPERLINK l _Toc19897 4 結(jié)論與討論 PAGEREF _Toc19897 6 HYPERLINK l _Toc3806 4.1 結(jié)論 PAGEREF _Toc3806 6 HYPERLINK l _Toc1368 4.2 討論 PAG

8、EREF _Toc1368 6 HYPERLINK l _Toc29274 參考文獻(xiàn) PAGEREF _Toc29274 7 HYPERLINK l _Toc32621 致 謝 PAGEREF _Toc32621 8 HYPERLINK l _Toc19357 文獻(xiàn)綜述 PAGEREF _Toc19357 9學(xué)位論文作者(zuzh)聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行(jnxng)研究所取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫的成果作品。本人完全(wnqun)了解有關(guān)保障、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向有關(guān)學(xué)

9、位論文管理機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，同意本論文被編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索和查閱。本學(xué)位論文內(nèi)容不涉及國(guó)家機(jī)密。論文題目：不同產(chǎn)地老鸛草的比較及其軟膏提取工藝優(yōu)化作者單位：武漢生物工程學(xué)院作者簽名： 年 月 日不同產(chǎn)地老鸛草的比較及其軟膏(rungo)提取工藝優(yōu)化摘 要目的：確定最佳產(chǎn)地老鸛草藥材，優(yōu)選老鸛草軟膏的提取工藝，并進(jìn)行提取工藝驗(yàn)證。方法：從性狀、浸出物和沒(méi)食子酸含量三方面，對(duì)三個(gè)產(chǎn)地老鸛草藥材進(jìn)行比較。采用煎煮法提取老鸛草藥材，醇沉法來(lái)純化，以浸膏(jn o)率和沒(méi)食子酸含量為指標(biāo)，選取加水倍數(shù)、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)為因素，用正交試驗(yàn)對(duì)老鸛草軟膏的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果：產(chǎn)自江蘇的老

10、鸛草為優(yōu)質(zhì)藥材，老鸛草軟膏的最佳提取工藝為加14倍水量，每次煎煮60min，煎煮2次。結(jié)論：該產(chǎn)地藥材可作為老鸛草軟膏的原料.；該提取工藝合理可行，為提高老鸛草軟膏質(zhì)量的穩(wěn)定性提供了科學(xué)依據(jù)。關(guān)鍵字老鸛草；老鸛草軟膏；提取工藝(gngy)；正交試驗(yàn)Comparison of Geranium herb from different areas and Optimization of extraction process for Geranium ointmentAbstractObjective: To determine the high quality Geranium herb from

11、 different areas, to optimize the extraction process of Geranium ointment and to verify the optimum extraction process. Methods: The paper compares the Geranium herb from different areas in three aspects, such as the character, the extraction and the content of gallic acid. decoction as extraction m

12、ethod and Purifying by ethanol precipitation, orthogonal test was conducted to optimize the extraction process taking extraction ratio and the content of gallic acid as indexes with watering quantity, the decoction time and the decoction times as factors. Results: from JiangSu is the high quality Ge

13、ranium herb. the optimum extraction process was decocted twice with 12 times amount of water for 60min each time. Conclusion: the determinate Geranium herb is regarded as the material of Geranium ointment; the extraction process is reasonable and feasible, providing a scientific basis for improving

14、the quality stability of Geranium ointment.Key wordsGeranium herb; Geranium ointment; extraction process; orthogonal testPAGE 20 1 前言(qin yn)老鸛草始載于明代(mn di)蘭茂的滇南本草1，中藥大辭典記載老鸛草為牻牛兒苗、韋氏老鸛草、尼泊爾老鸛草、鼠掌老鸛草、野老鸛草、粗根老鸛草、大根老鸛草及高山(o shn)塊根老鸛草帶果實(shí)的全草2。中國(guó)藥典2010版一部收載的老鸛草為牻牛兒苗科植物牻牛兒苗Erodium stephanianum Willd.、老鸛草G

15、eranium wilfordii Maxim.或野老鸛草Geranium carolinianum L.的干燥地上部分，前者習(xí)稱“ 長(zhǎng)嘴老鸛草”，后兩者習(xí)稱“短嘴老鸛草”。老鸛草（Herba Erodii、Herba Geranii）具有祛風(fēng)濕、通經(jīng)絡(luò)、止瀉痢的功效，用于風(fēng)濕痹痛，麻木拘攣，筋骨酸痛，泄瀉痢疾3。老鸛草的藥用品種較多,產(chǎn)地復(fù)雜，藥典中的牻牛兒苗科植物牻牛兒苗主產(chǎn)北京、東北三省；老鸛草（韋氏老鸛草）主產(chǎn)湖南、江蘇；野老鸛草主產(chǎn)安徽、湖南4。老鸛草主要化學(xué)成分有鞣質(zhì)、黃酮類、有機(jī)酸和揮發(fā)油等；老鸛草中有豐富的鞣質(zhì)，含量達(dá)2.2%，水解產(chǎn)物有沒(méi)食子酸和鞣花酸5-7?，F(xiàn)代藥理研究證明

16、，老鸛草還廣泛應(yīng)用于抗病毒、抗氧化、抗菌、降糖8、免疫、鎮(zhèn)咳、抗腫瘤、保肝9、止瀉、抗炎和鎮(zhèn)痛10等領(lǐng)域。在臨床上，老鸛草也被廣泛應(yīng)用，除以生藥入藥外，也有外用制劑老鸛草軟膏11。老鸛草軟膏系由單味藥材老鸛草提取制得，收載于中國(guó)藥典2010年版一部，為老鸛草藥材經(jīng)提取加工制成的軟膏劑，具有除濕解毒、收斂生肌的功效，用于濕毒蘊(yùn)結(jié)所致的濕疹、癰、疔、瘡、癤和小面積水、火燙傷12。老鸛草所含成分有黃酮類化合物、有機(jī)酸類成分、揮發(fā)油等，而沒(méi)食子酸為老鸛草中主要的有機(jī)酸類成分，幾乎存在于每一種老鸛草屬植物中13，也是老鸛草軟膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的主要含量的檢測(cè)指標(biāo)。由于品種來(lái)源不同，產(chǎn)地不同，采收季節(jié)、采收年限的

17、不同及生產(chǎn)參數(shù)等諸多影響，老鸛草藥材提取的浸膏出膏率及沒(méi)食子酸含量波動(dòng)較大，從而導(dǎo)致了藥品老鸛草軟膏質(zhì)量的不穩(wěn)定性。本實(shí)驗(yàn)是從藥材性狀、浸出物含量和沒(méi)食子酸含量三個(gè)方面，對(duì)不同產(chǎn)地藥典中老鸛草品種進(jìn)行比較，為加強(qiáng)老鸛草藥材的質(zhì)量控制提供了依據(jù)；并通過(guò)對(duì)老鸛草提取工藝參數(shù)的摸索確定最佳提取工藝,保障老鸛草浸膏的出膏率及沒(méi)食子酸含量，為確保老鸛草軟膏的成品質(zhì)量提供了依據(jù)。2 不同產(chǎn)地老鸛草藥材的比較2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料沒(méi)食子酸對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110831200803）老鸛草藥材購(gòu)自安徽亳州藥材市場(chǎng)，產(chǎn)地分別為浙江、江蘇、河南，共收集三批樣品，取樣根據(jù)均勻

18、分布、隨機(jī)的原則，每個(gè)產(chǎn)地藥材分別均勻選取適量，取其干燥地上部分，粉碎，全部過(guò)二號(hào)篩，并混合均勻，作為供試品粉末。乙腈、磷酸為色譜純，水為重蒸水，其余試劑均為分析純。2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器UltiMate 3000型高效液相色譜儀（美國(guó)Dionex），Chromeleon7色譜工作站（美國(guó)Dionex），BS224S型電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司），JH10500D型超聲波清洗器（荊州市津海化工科技有限公司），DG120型中藥材粉碎機(jī)（浙江省瑞安市飛達(dá)藥材器械廠），DK-98-11型電熱恒溫水浴鍋（天津市泰斯特儀器有限公司），101A1型干燥箱（上海市實(shí)驗(yàn)儀器總廠）2.2 實(shí)驗(yàn)(shy

19、n)方法2.2.1 藥材的性狀(xngzhung)鑒別取較完整植物體的藥材，先放在熱水中浸濕使軟化，展平，對(duì)其根、莖、葉、果實(shí)進(jìn)行觀察。根據(jù)觀察到的形態(tài)特征和藥材產(chǎn)地，查閱(chyu)中國(guó)藥典，植物分類方面著作中國(guó)植物志14、中國(guó)經(jīng)濟(jì)植物志15和中藥材方面著作中藥大辭典16，與標(biāo)本圖片進(jìn)行對(duì)照，鑒定藥材品種。2.2.2 藥材中浸出物含量的測(cè)定依據(jù)中國(guó)藥典中老鸛草品種檢查項(xiàng)下水分檢查的規(guī)定方法測(cè)定含水量、浸出物項(xiàng)下的規(guī)定方法測(cè)定浸出物含量。2.2.3 藥材中沒(méi)食子酸含量的測(cè)定2.2.3.1 色譜條件色譜柱：SinoChrom ODS-BP（250mm4.6mm，5m）；流動(dòng)相：乙腈0.025mo

20、l/L磷酸溶液（2:98）；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：274nm；柱溫：2517。2.2.3.2 對(duì)照品溶液的制備取沒(méi)食子酸對(duì)照品7.80mg，精密稱定，置100mL容量瓶中，加50%甲醇適量溶解定容至刻度，制成每1mL含78g的溶液，搖勻，即得。2.2.3.3 供試品溶液的制備取老鸛草藥材粉末約1.00g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25mL，稱定重量，超聲提取30分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。2.3 結(jié)果與分析2.3.1 藥材的性狀比較通過(guò)觀察軟化后的藥材，可看到各產(chǎn)地藥材都有帶形似鸛喙的宿存花柱的蒴果，花柱長(zhǎng)11

21、.5cm；根直立，圓柱狀，皮淡紅色；莖具節(jié)，表面有縱溝紋和稀疏茸毛；質(zhì)脆，斷面中空。通過(guò)核對(duì)文獻(xiàn)和標(biāo)本圖片，可以確定各產(chǎn)地藥材都為短嘴老鸛草。經(jīng)過(guò)武漢健民隨州藥業(yè)高級(jí)工程師聶一鑫鑒定為浙江、河南產(chǎn)地的樣品為牻牛兒苗科老鸛草屬植物老鸛草Geranium wilfordii Maxim.，產(chǎn)自江蘇的樣品為牻牛兒苗科老鸛草屬植物野老鸛草Geranium carolinianum L.。對(duì)各產(chǎn)地藥材進(jìn)一步觀察比較，從整體來(lái)看，浙江產(chǎn)地的藥材植株粗壯，長(zhǎng)，已截為兩段，葉少；江蘇產(chǎn)地的藥材植株矮小，完整，葉多；河南產(chǎn)地的藥材植株纖細(xì)，也截為兩段，果多。從各植物器官來(lái)看，比較結(jié)果見(jiàn)表1。表1 不同產(chǎn)地老鸛草

22、藥材的性狀比較產(chǎn)地根莖葉浙江粗長(zhǎng)4050cm,粗，直徑25mm,節(jié)明顯膨大，分枝少5深裂，裂片較寬江蘇較細(xì)長(zhǎng)2025cm，細(xì)短，多分枝掌狀57深裂，裂片條形，每裂又35深裂河南細(xì)略短，長(zhǎng)3040cm，纖細(xì)，無(wú)分枝3深裂，裂片較窄,中央裂片大2.3.2 藥材中浸出物含量(hnling)的比較取各產(chǎn)地老鸛草藥材粉末，依照上述2.2.2方法測(cè)定，每種平行操作3次，含水量以平均值計(jì)，浸出物含量(hnling)以干燥品計(jì)算式（2-1）其中(qzhng)，w1為含水量，m0為測(cè)水分時(shí)的取樣量，m1為干燥恒重的稱量瓶的質(zhì)量，m2為干燥恒重后稱量瓶和樣品的總質(zhì)量式（2-2）其中，w2為浸出物含量，m01為測(cè)浸

23、出物時(shí)的取樣量，m3為干燥恒重的蒸發(fā)皿的質(zhì)量，m4為干燥后蒸發(fā)皿和樣品的總質(zhì)量，V1為加水的體積，V2為量取濾液的體積計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表2。表2 不同產(chǎn)地老鸛草藥材中浸出物含量產(chǎn)地含水量w1/%浸出物含量w2/%平均值/%RSD/%123浙江10.36 20.98 20.87 21.11 20.99 0.6 江蘇11.20 23.09 23.35 23.95 23.46 1.9 河南10.80 25.81 25.23 24.90 25.31 1.8 2.3.3 藥材中沒(méi)食子酸含量的比較取不同產(chǎn)地老鸛草藥材粉末，按照上述2.2.3的條件和方法，自動(dòng)進(jìn)樣10L，進(jìn)行高效液相色譜法測(cè)定，每種平行操作3次，

24、以峰面積外標(biāo)法計(jì)算含量，計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表3。表3 不同產(chǎn)地老鸛草藥材中沒(méi)食子酸含量產(chǎn)地沒(méi)食子酸含量w/（mg/g）平均值/（mg/g）RSD/%123浙江0.2850.2770.282 = average(B4:D4) * MERGEFORMAT 0.2811.4江蘇0.8480.8390.820 = average(B5:D5) * MERGEFORMAT 0.8361.7河南0.6140.5910.599 = average(B6:D6) * MERGEFORMAT 0.6011.92.4 小結(jié)不同產(chǎn)地老鸛草藥材在性狀比較中，整體性狀明顯不同，莖的性狀差異明顯；據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道18，鼠掌老鸛草中沒(méi)食

25、子酸含量在各采收期均為葉莖，而產(chǎn)自江蘇的藥材有較多的葉，可考慮作為選定藥材。在浸出物含量的比較中，各產(chǎn)地藥材含量相當(dāng)，含量順序?yàn)楹幽辖K浙江。各產(chǎn)地藥材中沒(méi)食子酸含量存在顯著差異，其中江蘇的藥材含量最高。結(jié)合三方面的綜合考慮，選擇江蘇產(chǎn)地老鸛草藥材作為老鸛草軟膏的原料。3 老鸛草軟膏提取(tq)工藝優(yōu)化3.1 實(shí)驗(yàn)材料(cilio)與儀器3.1.1 實(shí)驗(yàn)(shyn)材料老鸛草藥材為前面選出的江蘇產(chǎn)地藥材，按照中國(guó)藥典2010年版一部中老鸛草飲片的炮制方法，除去殘根及雜質(zhì)，略洗，切段，干燥。均勻稱取若干份50g炮制后的藥材，作為投料。甲醇為分析純，其余試劑同上。3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器Waters

26、e2695-2489型高效液相色譜儀（美國(guó)Waters），Empower色譜工作站（美國(guó)Waters），DL-1型電子萬(wàn)用爐（北京市永光明醫(yī)療儀器廠），DW-2型調(diào)溫電熱器（南通市長(zhǎng)江光學(xué)儀器有限公司），3000mL燒杯等。3.2 實(shí)驗(yàn)方法3.2.1 加水倍數(shù)的選擇取炮制后的藥材50g，放入3000mL燒杯中，逐倍加水，至剛好浸住并浸潤(rùn)全部藥材，以此時(shí)的加水量為最低倍數(shù)，然后選擇其余倍數(shù)。3.2.2 提取工藝的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)根據(jù)預(yù)試驗(yàn)和文獻(xiàn)報(bào)道19，以加水倍數(shù)、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)為因素，每個(gè)因素選3個(gè)水平，以浸膏率和沒(méi)食子酸含量為指標(biāo)，按表5設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，優(yōu)選最佳提取工藝。表5 正交試驗(yàn)因素水平

27、表水平因素A加水倍數(shù)/倍B煎煮時(shí)間/minC煎煮次數(shù)/次11660123214803121003.2.3 水提醇沉浸膏的制備取50g炮制后的藥材，按照表6安排的正交實(shí)驗(yàn)條件，加入一定倍量水，煎煮一定時(shí)間，提取一定次數(shù)，煎液濾過(guò)，濾液合并，統(tǒng)一濃縮至200mL，加等量的95%乙醇使沉淀，靜置，濾取上清液，即得。3.2.4 浸膏率的測(cè)定精密量取醇沉后的上清液25ml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105干燥30min，置干燥器中冷卻至室溫，稱重，重復(fù)以上步驟直至恒重，計(jì)算浸膏率式（3-1）其中，為浸膏率，m5為得到的干膏質(zhì)量，V3為取樣體積，V4為上清液體積，m6為投料量3.2.5

28、沒(méi)食子酸含量的測(cè)定3.2.5.1 色譜條件色譜(s p)柱：Hypersil ODS2（250mm4.6mm，5m）；流動(dòng)(lidng)相：以甲醇為流動(dòng)相A，以0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相B，按下表4中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：273nm；柱溫：2512。表4 梯度洗脫時(shí)間/min流動(dòng)相A/%流動(dòng)相B/%015011100891516111008903.2.5.2 對(duì)照(duzho)品溶液的制備取沒(méi)食子酸對(duì)照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1ml含40g的溶液，即得。3.2.5.3 供試品溶液的制備取干膏粉末約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇

29、100mL，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。3.2.5.4 測(cè)定法 取對(duì)照品溶液和各號(hào)供試品溶液，自動(dòng)進(jìn)樣10L，進(jìn)行高效液相色譜法測(cè)定，以峰面積外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果以投料量計(jì)算式（3-2）其中，w4為沒(méi)食子酸含量，w3為干膏中沒(méi)食子酸含量，為浸膏率3.3 結(jié)果與分析2.3.1 提取工藝正交試驗(yàn)結(jié)果與分析按照3.2.3水提醇沉浸膏的制備方法及表5的因素水平表進(jìn)行正交試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表6。表6 正交試驗(yàn)方案和結(jié)果分析試驗(yàn)號(hào)ABC浸膏率/%沒(méi)食子酸w4/（mg/g)11118.802.67321227.353.08931337.05

30、3.16842129.073.75452236.693.19662317.022.81073135.841.92783219.212.99893326.232.849干膏率K123.2023.7125.03K222.7823.2522.65K321.2820.3019.58k17.737.908.34k27.597.757.55k37.096.776.53R0.641.131.81沒(méi)食子酸K18.9308.3548.481K29.7609.2839.692K37.7748.8278.291k12.9772.7852.827k23.2533.0943.231k32.5912.9422.764R0

31、.6620.3100.404正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果極差分析表明，三個(gè)因素對(duì)浸膏率指標(biāo)的主次(zhc)關(guān)系為CBA，各因素都在A1、B1、C1時(shí)浸膏(jn o)率的k值最高，但在A1B1C1提取條件下的實(shí)驗(yàn)結(jié)果不是最好的；以沒(méi)食子酸含量指標(biāo)的主次關(guān)系為ACB，在沒(méi)食子酸的k值最高時(shí)，最佳(zu ji)提取工藝為A2B2C2，在9個(gè)試驗(yàn)中與其相近提取條件A2B1C2下，沒(méi)食子酸含量最高，同時(shí)浸膏率也較高。故在確定最佳提取工藝時(shí)，以沒(méi)食子酸含量指標(biāo)為主，優(yōu)選的最佳工藝為A2B2C2，即加14倍水量，每次煎煮80min，煎煮2次。表7 方差分析方差來(lái)源偏差平方和自由度均方F值P值干膏率A（誤差）0.67920.

32、3401.000.1B2.28221.1413.360.1C4.97722.4897.330.1沒(méi)食子酸A0.66320.3324.600.1B（誤差）0.14420.0721.000.1C0.38520.1932.670.1注：F0.1(2,2)=9.00,F0.05(2,2)=19.00,F0.01(2,2)=99.00正交試驗(yàn)結(jié)果表7方差分析表明，以浸膏率來(lái)看，三個(gè)因素都無(wú)顯著影響，相對(duì)來(lái)說(shuō)各因素的影響大小為CBA；從沒(méi)食子酸來(lái)看，各因素也無(wú)顯著影響，相對(duì)的A因素影響較大，其次是C因素。此結(jié)果與極差分析結(jié)果一致，由于B因素對(duì)沒(méi)食子酸含量的影響相對(duì)不大，結(jié)合節(jié)約能源和提高效率的生產(chǎn)實(shí)際，選

33、B1適宜，最終確定最佳提取工藝為A2B1C2，即加14倍水量，每次煎煮60min，煎煮2次。2.3.2 提取工藝正交驗(yàn)證試驗(yàn)為保證重現(xiàn)性，對(duì)根據(jù)正交試驗(yàn)優(yōu)選的最佳提取工藝A2B1C2，進(jìn)行3次驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表8。結(jié)果表明優(yōu)選的工藝條件合理，重現(xiàn)性好，穩(wěn)定可行。表8 正交驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果組別序號(hào)浸膏率/%平均值/%RSD/%沒(méi)食子酸/（mg/g)平均值/%RSD/%A2B1C219.149.051.23.8213.7651.328.933.75039.083.7244 結(jié)論與討論4.1 結(jié)論通過(guò)對(duì)不同產(chǎn)地老鸛草藥材的比較，可知藥材的產(chǎn)地不同，其性狀和有效成分有明顯差異。藥材性狀上的差異，可為藥材檢

34、驗(yàn)員對(duì)老鸛草藥材進(jìn)行鑒別提供依據(jù)，加強(qiáng)老鸛草藥材真?zhèn)蔚亩ㄐ钥刂?。?duì)老鸛草藥材的有效成分進(jìn)行含量測(cè)定，從定量上加強(qiáng)了老鸛草藥材真?zhèn)蝺?yōu)劣的控制，而中國(guó)藥典2010年版中未收錄老鸛草藥材的含量測(cè)定方法，有大量的文獻(xiàn)報(bào)道了可靠的測(cè)定方法，生產(chǎn)企業(yè)可選其有效可行的方法作為內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)，保障老鸛草產(chǎn)品的質(zhì)量。中國(guó)藥典2010年版對(duì)老鸛草軟膏中沒(méi)食子酸含量有指標(biāo)要求，而對(duì)老鸛草藥材沒(méi)有控制要求。因此調(diào)查不同產(chǎn)地老鸛草藥材的沒(méi)食子酸含量，為老鸛草軟膏生產(chǎn)企業(yè)掌握藥材資源和質(zhì)量狀況提供了科學(xué)數(shù)據(jù)；從藥材源頭控制產(chǎn)品質(zhì)量，為加強(qiáng)老鸛草的質(zhì)量控制以及對(duì)老鸛草科學(xué)地開(kāi)發(fā)和可持續(xù)利用提供了科學(xué)依據(jù)。選出的最佳產(chǎn)地老鸛草藥材

35、可作為(zuwi)生產(chǎn)老鸛草軟膏的優(yōu)質(zhì)原料。采用水煎煮法提取老鸛草藥材，醇沉法來(lái)純化，以浸膏率和沒(méi)食子酸含量為指標(biāo)，選取加水倍數(shù)、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)為因素，用正交試驗(yàn)對(duì)老鸛草軟膏的提取工藝進(jìn)行優(yōu)選，確定(qudng)了最佳提取工藝為加14倍水量，每次煎煮60min，煎煮2次，為老鸛草軟膏的制備工藝提供了科學(xué)依據(jù)。本文對(duì)老鸛草軟膏(rungo)從藥材源頭到浸膏的整個(gè)過(guò)程的研究，為提高老鸛草軟膏質(zhì)量的穩(wěn)定性提供了科學(xué)依據(jù)。4.2 討論江蘇產(chǎn)地的老鸛草藥材因含葉較多，含水量大，在貯藏過(guò)程中要注意防霉，防蟲(chóng)，保持干燥。老鸛草藥材的粉碎過(guò)程中，相對(duì)濕度應(yīng)控制在60%以內(nèi)，時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)， 否則因粉末細(xì)，吸

36、濕快，使過(guò)濾時(shí)間延長(zhǎng)。加水倍數(shù)的選擇中，發(fā)現(xiàn)與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道20相比，各水平倍數(shù)較大，原因是所用藥材的產(chǎn)地和品種不同，其形態(tài)也有較大差異。本文提取用的原料為產(chǎn)自江蘇的野老鸛草的地上干燥部分，形態(tài)疏松，故浸潤(rùn)所需水量較大。如果各方面條件允許，在接下來(lái)的時(shí)間里，查看更多的書(shū)籍，文獻(xiàn)，根據(jù)優(yōu)選的最佳提取工藝條件制備浸膏，確定濃縮的最佳相對(duì)濃度，然后加入基質(zhì)，進(jìn)行成品配置的小試，觀察膏體的性狀，并檢測(cè)含量。小試合格后，再進(jìn)行投產(chǎn)試驗(yàn)，完成對(duì)老鸛草從藥材源頭到成品的整個(gè)過(guò)程的研究，提高老鸛草軟膏質(zhì)量的穩(wěn)定性，使試驗(yàn)更加的完整。參考文獻(xiàn)1 秦哲.野老鸛草有效成分含量測(cè)定及其乙醇提取物的毒性(d xn)試驗(yàn)研

37、究D.北京(bi jn):中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院，2008.2 徐放.老鸛草有效成分的提取(tq)及其藥效的研究D.黑龍江:東北林業(yè)大學(xué)，2011.3 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典M.一部北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:113.4 張豐華，黃秀深，賈波.藥用老鸛草原植物分布概述J.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2005,16(6)：540-542.5 魏玉明，羅宏，趙曉雨等.鼠掌老鸛草高效液相指紋圖譜及模式識(shí)別研究J.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2012,23(5):1167-1169.6 Ping Li,Luosha Zhao,Youyou Du,et al.Hydrolysable Tannins and Relat

38、ed Compound having Cytotoxic Activity of Geranium Wilfordii Maxim.Advance Journal of Food Science and Technology, 2013,5(3): 255-257.7 Qiuyue Wu,Yang zhou,Xin Jin,et al.Chromatographic Fingerprint and the Simultaneous Determination of Five Bioactive Components of Geranium carolinianum L.Water Extrac

39、t by High Performance Liquid Chromatography. International Journal of Molecular Sciences,2011,12: 8740-8749.8 王志剛，李青，王斌等.中藥老鸛草的成分和藥理學(xué)研究進(jìn)展J.中獸醫(yī)學(xué)雜志，2008(4):44-48.9 閆潤(rùn)紅，楊文珍老鸛草孕激素樣作用的實(shí)驗(yàn)觀察J中藥藥理與臨床，1998，14(4)：29.10 金晴昊.復(fù)方老鸛草浸膏對(duì)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的防治作用D.吉林：延邊大學(xué)藥學(xué)院，2006.11 王寶慶，李學(xué)彬，田志發(fā)等.老鸛草現(xiàn)代研究概況J.中國(guó)林副特產(chǎn)，2010(6):91-93.

40、12 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典M.一部北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:671.13 何文濤，金哲雄，王寶慶.老鸛草的研究進(jìn)展J.航空航天醫(yī)學(xué)雜志，2011,22(10)：1200-1202.14 中國(guó)(zhn u)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)(zhn u)植物志M.北京(bi jn):科學(xué)出版社,1998,43(1):22,29,32.15 中國(guó)科學(xué)院植物研究所.中國(guó)經(jīng)濟(jì)植物志M.北京:科學(xué)出版社,1961:800,1161,1780.16 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典(第一版上冊(cè))M.上海:上海人民出版社,1977:845-847.17 尹海波,何靜,王冰等.東北八種老鸛草沒(méi)食

41、子酸含量比較J.中藥材,2007,30(6):637-638.18 何靜，史國(guó)兵等鼠掌老鸛草中沒(méi)食子酸的積累動(dòng)態(tài)分析J山西醫(yī)藥雜志，2010，39(3)：269-270.19 曹穩(wěn)根,王曉梅，翟科峰等.正交試驗(yàn)優(yōu)選老鸛草中沒(méi)食子酸的提取工藝J.光譜試驗(yàn)室，2011，28(6):2905-2908.20 宮莉萍,趙懷清.老鸛草凝膠劑制備工藝J.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2011,17(24):19-22.致 謝本論文(lnwn)是在廠內(nèi)指導(dǎo)老師李麗娟部長(zhǎng)(b chn)和校內(nèi)指導(dǎo)老師孫桂芝教授的細(xì)心指導(dǎo)、大力支持下完成的。在論文的選題、資料搜集、實(shí)驗(yàn)方向的選擇、實(shí)驗(yàn)時(shí)間的安排(npi)以及論文的最后撰寫

42、等過(guò)程中，他們給予了我許多意見(jiàn)和幫助。論文完成的背后不僅有自己辛苦的不懈努力，還有實(shí)習(xí)期間同事們熱心的幫助和親切的關(guān)心，我衷心的感謝她們。同時(shí)也要感謝學(xué)校給我這樣的機(jī)會(huì)和平臺(tái)。武漢生物工程學(xué)院學(xué)士學(xué)位論文文獻(xiàn)綜述武漢生物工程學(xué)院學(xué)士學(xué)位論文文獻(xiàn)綜述文獻(xiàn)(wnxin)綜述中藥老鸛草的現(xiàn)代研究(ynji)概況摘 要：中藥老鸛草含有多種活性化學(xué)成分，具有優(yōu)越的藥理作用，臨床應(yīng)用比較廣泛。本文對(duì)目前中藥老鸛草本草考證、資源(zyun)分布、化學(xué)成分、提取方法、藥理作用、制劑及臨床應(yīng)用的研究概況進(jìn)行綜述，為中藥老鸛草的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)研究提供依據(jù)。關(guān)鍵詞：老鸛草；本草考證；資源分布；化學(xué)成分1 前言老鸛草為中

43、醫(yī)臨床常用藥，是牻牛兒苗科植物牻牛兒苗及多種老鸛草的全草，其性苦、辛、平，歸肝、腎、脾經(jīng)，具有祛風(fēng)濕、通經(jīng)絡(luò)、清熱毒、止瀉痢等功效。牻牛兒苗科植物在我國(guó)有牻牛兒苗屬、老鸛草屬、天竺葵屬、熏倒牛屬4屬，約80種，已知可供藥用的有37種，廣布于全國(guó)各地1。我國(guó)老鸛草品種繁多、資源豐富、療效肯定、毒副作用低。中國(guó)藥典2010版第一部記載，老鸛草為牻牛兒苗科植物牻牛兒苗Erodium stephania-num Willd.、老鸛草Geranium wilfordii Maxim.或野老鸛草Geranium carolinianum L.的干燥地上部分，前者習(xí)稱“長(zhǎng)嘴老鸛草”，后兩者習(xí)稱“短嘴老鸛草”

44、。用于風(fēng)濕痹痛，麻木拘攣，筋骨酸痛，泄瀉痢疾2。隨著老鸛草多種藥理作用的發(fā)現(xiàn)，其研究受到人們?cè)絹?lái)越多的關(guān)注。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)中藥老鸛草的本草考證、資源分布、化學(xué)成分、提取方法、藥理作用、制劑及臨床應(yīng)用等7個(gè)方面進(jìn)行了大量深入的研究。2 主體2.1 老鸛草的本草考證牻牛兒苗最早見(jiàn)于明代朱棣的救荒本草，該書(shū)載“牻兒苗又名斗牛兒苗，生田野中。就地拖秧而生，莖蔓細(xì)弱，其莖紅紫色。葉似芫荽，葉細(xì)瘦而稀疏。開(kāi)五瓣小紫花，結(jié)青蓇葖兒，上有一嘴甚尖銳，如細(xì)錐子狀，小兒取以斗戲”。以后清代吳其浚又將其收入植物名實(shí)圖考。根據(jù)形態(tài)描述及所附圖，當(dāng)為今之牻牛兒苗。根據(jù)歷代本草，清代以前均未有記載做藥用，因此牻牛兒

45、苗作為老鸛草藥用應(yīng)當(dāng)在民國(guó)以后3。老鸛草一名始見(jiàn)于明代蘭茂的滇南本草，該書(shū)記載“正名為五葉草，別名為老觀草、六陽(yáng)草、五瓣草、貓角跡、老官草?！惫糯玫睦消X草實(shí)際上是老鸛草屬的多種植物。據(jù)文獻(xiàn)記載及研究表明：目前商品“短嘴老鸛草”亦來(lái)源于老鸛草屬多種植物，與古代使用情況基本一致4。2.2 老鸛草的資源分布中藥老鸛草來(lái)源于牻牛兒苗科牻牛兒苗屬和老鸛草屬的不同種植物。目前我國(guó)老鸛草的藥用品種較多且較復(fù)雜，除了牻牛兒苗和老鸛草兩種外，還有常用的野老鸛草（G.carolinianum L.），尼泊爾老鸛草(G.nepalense Sweet)，鼠掌老鸛草(G.sibiricum L.)，粗根老鸛草（G

46、.dahuricum DC.），毛蕊老鸛草(G.eriostemon Fisch.et DC.),絨背老鸛草(G.vlassorianum Fisch.et LindL.)和童氏老鸛草(G.thunbergrii Sieb.et Zucc.)等，張豐華等總結(jié)了老鸛草的常用品種及同屬各原植物分布情況，其中中國(guó)藥典收載的3種正品中牻牛兒苗主產(chǎn)于北京、東北三??；老鸛草（韋氏老鸛草）主產(chǎn)于湖南、江蘇；野老鸛草主產(chǎn)于安徽、湖南5。2.3 老鸛草的化學(xué)成分中藥老鸛草的主要(zhyo)化學(xué)成分包括鞣質(zhì)類、黃酮類、有機(jī)酸類和揮發(fā)油類等6。2.3.1 鞣質(zhì)類老鸛草中有豐富(fngf)的鞣質(zhì)，含量達(dá)2.2%，是存

47、在(cnzi)于植物體內(nèi)的結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜的多元酚類化合物。國(guó)內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)從不同種老鸛草植物中分離出多種鞣質(zhì)化合物。鞣質(zhì)類成分主要有：沒(méi)食子酸、六羥聯(lián)苯二酸、鞣花酸、柯里拉京、云實(shí)酸、云酸素7、短葉蘇木酚、短葉蘇木酚酸乙酯、脫氫老鸛草素、芙蘆草寧、芙蘆素、云實(shí)素、elaeocarpusin、1,3-雙-O-酚-2-O-酰-4,6-（六羥基二苯）-D-葡萄糖、兒茶素。2.3.2 黃酮類黃酮類化合物在老鸛草類植物中大多以游離態(tài)或與糖結(jié)合成苷的形式存在。目前在不同中分離到的黃酮類成分主要有：槲皮素、山奈酚、楊梅素、木犀草素、山奈酚-3，7-L-鼠李糖苷、錦葵色素-3-O(6-O-乙酰基-吡喃葡萄糖苷)-

48、5-O-D-吡喃葡萄糖苷、錦葵色素-3,5-二葡萄糖苷、金絲桃苷8。2.3.3 有機(jī)酸類老鸛草屬植物中的有機(jī)酸類成分與其鞣質(zhì)有密切關(guān)系，老鸛草素水解產(chǎn)物就有沒(méi)食子酸和鞣花酸，而沒(méi)食子酸和鞣花酸幾乎存在于每一種老鸛草屬植物中9。從鼠掌老鸛草中分得原兒茶酸、沒(méi)食子酸和鞣花酸。從青島老鶴草中分得沒(méi)食子酸和鞣花酸10。尼泊爾老鸛草中亦含沒(méi)食子酸、鞣花酸、原兒茶酸和琥珀酸。從太白山地區(qū)老鸛草全草中分離得到?jīng)]食子酸乙酯、水楊酸11。2.3.4 揮發(fā)油類老鸛草全草含揮發(fā)油。揮發(fā)油以飽和脂肪烷烴為主12。研究報(bào)道的揮發(fā)油類成分有：香茅酸、香茅醛、玫瑰醇、香茅醇、香葉醇、里那醇、異薄荷酮、香茅醇甲酸酯和牻牛兒醇

49、13。2.3.5 其他成分比利時(shí)學(xué)者Nina從大根老鸛草的石油醚提取部位中分得兩種倍半萜酮(isogermacrone和germazone)和兩種新的立體異構(gòu)的三環(huán)倍半萜酮14。2.4 老鸛草的提取方法2.4.1 鞣質(zhì)的提取分離目前普遍釆用的提取方法有水回流法、水溫浸法、丙酮回流法、冷浸攪拌法和乙醇同流法5種，水溫浸法、丙酮回流法和乙醇同流法鞣質(zhì)得率和質(zhì)量分?jǐn)?shù)均較高，考慮經(jīng)濟(jì)因素則水溫浸法為好。采用水溫浸法提取老鸛草鞣質(zhì)，得出老鸛草鞣質(zhì)成分的最佳提取工藝條件是：料水比為1：30、浸提溫度為80、浸提時(shí)間為30min15。2.4.2 黃酮類的提取分離常用的提取方法有：（1）熱水提取法；（2）乙醇或甲醇提取法中高濃度的醇(如9095)適用于提取苷元，60左右的醇適用于提取苷類；（3）系統(tǒng)溶劑提取法，用極性由小至大的溶劑依次提??；（4）堿性水或堿性烯醇提取法16 。2.5 老鸛草的藥理作用近年來(lái)，隨著人們對(duì)老鸛草藥理活性深入研究，其應(yīng)用己遠(yuǎn)不止于祛風(fēng)通絡(luò)，收斂固澀，而有了更多的藥用價(jià)值，廣泛應(yīng)用于抗病毒、抗氧化、抗菌、降糖、免疫、鎮(zhèn)咳、抗腫瘤、保肝、止瀉、抗炎和鎮(zhèn)痛等領(lǐng)域1