藥物分析學(xué)課程教學(xué)課件全冊(cè)教學(xué)課件匯總

1、授課人：XX XX 藥物分析學(xué)XX學(xué)院 XX 專(zhuān)業(yè)【全套課件】 緒 論一、分析的性質(zhì)和任務(wù) 藥物分析是我國(guó)藥學(xué)專(zhuān)業(yè)規(guī)定設(shè)置的一門(mén)主要專(zhuān)業(yè)課程，是整個(gè)藥學(xué)科學(xué)領(lǐng)域中一個(gè)重要的組成部分。 它主要運(yùn)用化學(xué)、物理化學(xué)或生物化學(xué)的方法和技術(shù)研究化學(xué)結(jié)構(gòu)已經(jīng)明確的合成藥物或天然藥物及其制劑的質(zhì)量控制方法，也研究中藥制劑和生化藥物及其制劑有代表性的質(zhì)量控制方法。藥物分析任務(wù)是靜態(tài)的常規(guī)檢驗(yàn)運(yùn)用現(xiàn)代分析的方法和技術(shù)，深入到工藝流程、反應(yīng)歷程、生物體內(nèi)代謝過(guò)程和綜合評(píng)價(jià)的動(dòng)態(tài)分析監(jiān)控中。二、國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn) 藥典是國(guó)家監(jiān)督管理藥品質(zhì)量法定技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)。 中華人民共和國(guó)藥典為我國(guó)藥典的全稱(chēng),簡(jiǎn)稱(chēng)中國(guó)藥典，其后以括號(hào)注明是

2、哪一年版，如最新版藥典可以表示為中國(guó)藥典（2000年版）；如用英文表示，則Chinese Pharmaco-poeia（縮寫(xiě)Ch.P ）。 建國(guó)以來(lái)，我國(guó)已經(jīng)出版了七版藥典（1953、1963、1977、1985、1990、1995和2000年版）。 使用藥典需要注意的問(wèn)題： 1）、立法作用。 2）、與化學(xué)試劑的標(biāo)準(zhǔn)不能混淆使用。 3）、符合藥典質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的藥品是合格品而不是優(yōu)質(zhì)品。因?yàn)?藥典是藥物的最低標(biāo)準(zhǔn)而不是最高標(biāo)準(zhǔn)。 4）、新版藥典生效之日起、舊版藥典即自動(dòng)失去其法律意義 。 主要國(guó)外藥典 美國(guó)藥典（The United States Pharmacopoeia ，縮寫(xiě)為USP）2000

3、年為24版。 美國(guó)國(guó)家處方集（The National Formulary，縮寫(xiě)為NF)2000年為19版。 英國(guó)藥典（British Pharmacopoeia ，縮寫(xiě)為BP），目前版本為2000年版，本書(shū)以BP（2000）表示。 日本藥局方，目前為第十三版改正版，本書(shū)縮寫(xiě)為JP（13）。 歐洲藥典（European Pharmacopoeia，縮寫(xiě)為Ph. Eup），目前為第三版，分為三卷：第一卷（1979）為一般分析方法；第二卷（1981）和第三卷（1998）均為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格。 國(guó)際藥典(The International Pharmacopoeia，縮寫(xiě)為Ph.Int） 三、藥品質(zhì)量管

4、理規(guī)范 藥品非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)定（Good Laboratory Practice ，GLP ） 藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（Good Manufacture Practice，GMP ）藥品經(jīng)營(yíng)質(zhì)量管理規(guī)范（Good Supply Practice ，GSP ） 藥品臨床試驗(yàn)管理規(guī)范（Good Clinical Practice ，GCP ） GLP 、GMP 、GSP、 GCP 四個(gè)科學(xué)管理規(guī)范的執(zhí)行，加強(qiáng)了藥品的全面質(zhì)量控制，有利于加速我國(guó)醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，提高了藥業(yè)的國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力。分析質(zhì)量管理（Analytical Quality Control，AQC）。 四、藥物分析課程的學(xué)習(xí)要求 學(xué)生通

5、過(guò)藥物分析第五版教材的學(xué)習(xí)，應(yīng)努力掌握以下六個(gè)方面的基本內(nèi)容： 1、藥典的基本組成與正確使用： 2、藥物的鑒別、檢查和含量測(cè)定的基本規(guī)律與基本方法； 3、從藥物的結(jié)構(gòu)分析出發(fā)，運(yùn)用化學(xué)的、物理化學(xué)的以及其他必要的技術(shù)與方法進(jìn)行質(zhì)量分析的基本方法與原理； 4、化學(xué)藥物制劑分析的特點(diǎn)與基本方法。生化藥物和中藥制劑質(zhì)量分析的一般規(guī)律與主要的方法； 5、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制訂的基本原則、內(nèi)容與方法 ； 6、藥品質(zhì)量控制中的現(xiàn)代化分析方法與技術(shù)。 在藥物分析的整個(gè)學(xué)習(xí)過(guò)程中，要求學(xué)生學(xué)會(huì)自學(xué)，善于獨(dú)立思考，既重視藥品質(zhì)量分析的基礎(chǔ)理論知識(shí)的學(xué)習(xí)，也重視基本實(shí)驗(yàn)技能的嚴(yán)謹(jǐn)訓(xùn)練，同時(shí)加強(qiáng)創(chuàng)新能力的基本素質(zhì)培養(yǎng)。因

6、此學(xué)生不僅應(yīng)研究探討藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)、理化特征、存在狀況與分析方法選擇之間的關(guān)系，還應(yīng)重視不同分析樣本選取最佳分析方法的能力培養(yǎng)，最終要求學(xué)生在我國(guó)藥物研究從仿制為主到創(chuàng)制為主的歷史性轉(zhuǎn)變中，能夠具備為提高藥品質(zhì)量所需的獨(dú)立分析問(wèn)題和解決問(wèn)題的能力。 五、藥物分析的主要參考書(shū)目簡(jiǎn)介（一）、書(shū)籍 1、 藥物分析（第一版）、（第二版）、（第三 版）、 （第四版）人民衛(wèi)生出版社 、 濟(jì)南出版社 2、體內(nèi)藥物分析 3、生物藥制分析 4、醫(yī)院藥制分析 5、中藥制劑分析 6、藥典注釋 7、中成藥分析（二）、期刊藥學(xué)學(xué)報(bào)、中國(guó)藥學(xué)雜志、藥物分析雜志、中國(guó)中藥雜志、中草藥、中成藥、中藥 材、中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志

7、、中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志、中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志等等。 第一章 藥 典 概 況 一、中國(guó)藥典的內(nèi)容與進(jìn)展 中國(guó)藥典是國(guó)家監(jiān)督管理藥品質(zhì)量的法定技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)。中國(guó)藥典的內(nèi)容分為凡例、正文、附錄和索引四部 。（一）凡 例 “凡例”是解釋和使用中國(guó)藥典正確進(jìn)行質(zhì)量檢定的基本原則，并把與正文品種、附錄及質(zhì)量檢定有關(guān)的共性問(wèn)題加以規(guī)定，避免在全書(shū)中重復(fù)說(shuō)明。 1、名稱(chēng)與編排 2、檢驗(yàn)方法和限度 3、標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品 系指用于鑒別、檢查、含量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。 4、精確度 “精密稱(chēng)定”系指稱(chēng)取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一； “稱(chēng)定”系指稱(chēng)取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的百分之一； “精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中

8、對(duì)該體積移液管的精密要求； “量取”系指用量筒或按照量取體積的有效數(shù)位選用量具。 取用量為“約”若干時(shí)，系指取用量不得超過(guò)規(guī)定量的10%。 （二）正 文 （1）品名（包括中文名，漢語(yǔ)拼音名與英文名）； （2）有機(jī)藥物的結(jié)構(gòu)式； （3）分子式與分子量； （4）來(lái)源或有機(jī)藥物的化學(xué)名稱(chēng)； （5）含量或效價(jià)規(guī)定； （6）處方； （7）制法； （8）形狀； （9）鑒別； （10）檢查； （11）含量或效價(jià)測(cè)定； （12）類(lèi)別； （13）規(guī)格； （14）貯藏； （15）制劑等 。舉例：苯 巴 比 妥 Benbabtiuo Phenobarbital 【形狀】【鑒別】 【檢查】 酸度 ;乙醇溶液的澄清度中

9、性或堿性物質(zhì) ; 干燥失重 ; 熾灼殘?jiān)?.【含量測(cè)定】【類(lèi)別】【貯藏】【制劑】（三）附錄 1、附錄組成 2、附錄內(nèi)容舉例（四）索引 （五）2000年版中國(guó)藥典進(jìn)展 1、藥典凡例和正文部分的增修訂 2、藥典附錄的增修訂 3、配套叢書(shū) 二、主要國(guó)外藥典簡(jiǎn)介（一）美國(guó)藥典 1、凡例 （General Notices and Requirements） 2、正文 USP（24）-NF（19）收載藥物品種為世界第一位達(dá)到3777個(gè)。 3、附錄 USP（24）附錄中一般檢查和檢定共分為6類(lèi)。 （二）英國(guó)藥典 1、凡例 2、正文 3、附錄（三）日本藥局方 JP（14）分為兩部。 第一部包括凡例、制劑總則、

10、一般試驗(yàn)法和各醫(yī)藥品。 第二部包括通則、生藥總則、制劑總則、一般試驗(yàn)法和各醫(yī)藥品，還有原子量表、附錄和索引。三、藥品檢驗(yàn)工作的機(jī)構(gòu)和基本程序 藥品檢驗(yàn)工作的基本程序一般為: 取樣分析鑒別、檢查、含量測(cè)定記錄、寫(xiě) 出檢驗(yàn)報(bào)告。 1、取樣的基本原則均勻、合理；有代表性，科學(xué)性， 真實(shí)性。 2、分析的順序不能顛倒。 3、記錄必須真實(shí)、簡(jiǎn)明、完整、具體。 4、報(bào)告應(yīng)符合有關(guān)規(guī)定。 第二章 藥物的鑒別試驗(yàn)一、概述 藥物的鑒別試驗(yàn)（identification test）是根據(jù)藥物的分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)，采用化學(xué)、物理化學(xué)或生物化學(xué)方法來(lái)判斷藥物的真?zhèn)?。二、鑒別實(shí)驗(yàn)的項(xiàng)目（一）性狀 藥物的性狀（descri

11、ption ）反映了藥物特有的物理性質(zhì)，一般包括外觀、溶解度和物理常數(shù)等。 1、 外觀 2、 溶解度 3、物理常數(shù) 物理常數(shù)是鑒定藥品質(zhì)量的重要指標(biāo)。其測(cè)定結(jié)果不僅對(duì)藥品具有鑒別意義，也反映了該藥品的純雜程度。藥典收載的物理常數(shù)包括：相對(duì)密度、餾程、熔點(diǎn)、凝點(diǎn)、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羥值、碘值、吸收系數(shù)。 （二） 一般鑒別試驗(yàn) 一般鑒別試驗(yàn)（general identification test）是依據(jù)某一類(lèi)藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)或理化性質(zhì)的特征，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)來(lái)鑒別藥物的真?zhèn)?。?duì)無(wú)機(jī)藥物是根據(jù)其組成的陰離子和陽(yáng)離子的特殊反應(yīng)；對(duì)有機(jī)藥物則大都采用典型的官能團(tuán)反應(yīng)。 1、有機(jī)氟化物 2、有

12、機(jī)酸鹽 3、芳香第一胺類(lèi) 4、托烷生物堿類(lèi) 5、無(wú)機(jī)金屬鹽 6、無(wú)機(jī)酸根 （三）專(zhuān)屬鑒別試驗(yàn) 藥物的專(zhuān)屬鑒別試驗(yàn)（specific identification test ）是證實(shí)某一種藥物的依據(jù)，它是根據(jù)每一種藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異及其所引起的物理化學(xué)特性不同，選用某些特有的靈敏的定性反應(yīng)，來(lái)鑒別藥物的真?zhèn)巍?三、鑒別方法 （一）化學(xué)鑒別方法 1、呈色反應(yīng)鑒別法 2、沉淀生成反應(yīng)鑒別法 3、熒光反應(yīng)鑒別法 4、氣體生成反應(yīng)鑒別法 5、測(cè)定生成物的熔點(diǎn)（二） 光譜鑒別法 1、紫外光譜鑒別法 2、紅外光譜鑒別法 紅外光譜法是一種專(zhuān)屬性很強(qiáng)、應(yīng)用較廣（固體、液體、氣體樣品）的鑒別方法。主要用于組分單一

13、、結(jié)構(gòu)明確的原料藥、特別適用于用其他方法不易區(qū)分的同類(lèi)藥物，如磺胺類(lèi)、甾體激素類(lèi)和半合成抗生素類(lèi)藥品。 （三）色譜鑒別法 1、薄層色譜鑒別法 瑞士CAMAG SCANNER 3 薄層掃描儀島津CS-9000雙波長(zhǎng)薄層掃描儀2、高效液相色譜鑒別法 氣相色譜鑒別法 3、紙色譜鑒別法（四）生物學(xué)法（五）藥物鑒別方法新動(dòng)向 1、儀器方法用于藥物的鑒別數(shù)量大大增加，尤其是紅外光譜法和高效液相色譜法。 2、制劑廣泛采用IR法鑒別。 3、鑒別條目簡(jiǎn)練，選擇專(zhuān)屬的方法進(jìn)行鑒別，平均每個(gè)品種收載2條左右。 四、 鑒別試驗(yàn)條件 鑒別試驗(yàn)的目的是判斷藥物的真?zhèn)巍?（一）溶液的濃度 （二）溶液的溫度 （三） 溶液的酸

14、堿度 （四）試驗(yàn)的時(shí)間 （五）干擾成分的存在 五、鑒別試驗(yàn)的靈敏度（一）反應(yīng)靈敏度和空白試驗(yàn) 在一定的條件下，能在盡可能稀的溶液中觀測(cè)出盡可能少量的供試品，反應(yīng)對(duì)這一要求所能滿足的程度，即稱(chēng)為反應(yīng)的靈敏度（sensitivity）。它以兩個(gè)相互有關(guān)的量，即最低檢出量（minimum detectable quantity ）（又稱(chēng)檢出限量）和最低檢出濃度（minimum detectable concentration ）（又稱(chēng)界限濃度）來(lái)表示。 所謂空白試驗(yàn)，就是在供試品鑒別試驗(yàn)完全相同的條件下，除不加供試品外，其他試劑均同樣加入而進(jìn)行的試驗(yàn)。（二）提高反應(yīng)靈敏度的方法 1、加入與水互不相溶

15、的有機(jī)溶劑提取濃集 2、改進(jìn)觀測(cè)方法 附一、折光率測(cè)定法 定義： 利用測(cè)定物質(zhì)的折光率來(lái)進(jìn)行定性定量的分析方法，叫折光法。 折光率是用折光計(jì)來(lái)測(cè)定的，常用阿貝折光計(jì)測(cè)定。（一）折光的一般原理： 光線自一種透明介質(zhì)進(jìn)入另一個(gè)透明介質(zhì)的時(shí)候，由于兩種介質(zhì)密度不同，光進(jìn)行的速度發(fā)生變化，所以，光線就發(fā)生如圖折射：第三章 藥物的雜質(zhì)檢查 藥物的雜質(zhì)是指藥物中存在的無(wú)治療作用、或影響藥物的穩(wěn)定性和療效、甚至對(duì)人體健康有害的物質(zhì)。 第一節(jié) 概 述 一、藥物的純度要求 藥物的純度即純凈程度，是反映藥品質(zhì)量的一項(xiàng)重要指標(biāo)。 對(duì)藥物質(zhì)量的評(píng)價(jià) ： 三效：高效、長(zhǎng)效、速效; 三?。憾拘?、用量、副作用小。藥物的純度

16、 通?？梢詮?（）藥物的結(jié)構(gòu)，（）外觀性狀， （）理化常數(shù)，（）雜質(zhì)檢查，（）含量測(cè)定等方面作為一個(gè)有聯(lián)系的整體來(lái)表明和評(píng)定藥物的純度。所以在藥物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中就規(guī)定藥物的純度要求。但是雜質(zhì)多了： ）藥物的理化常數(shù)變化 ）外觀性狀變化 ）穩(wěn)定性下降 ）含量下降、活性下降 ）毒副作用上升 二、雜質(zhì)的來(lái)源和種類(lèi) （一）雜質(zhì)的來(lái)源 1、生產(chǎn)過(guò)程中引入的雜質(zhì)：來(lái)源 于制備 原料、溶劑 、試劑、中間產(chǎn)品、副產(chǎn)品、器械等等。 2、貯存過(guò)程中引入的雜質(zhì)：來(lái)源于外界條件 包裝、運(yùn)輸、保管不妥（受光線、溫度、空氣、微生物的影響等等）。 （二） 雜質(zhì)的種類(lèi) 藥物中的雜質(zhì)來(lái)源可分為一般雜質(zhì)和特殊雜質(zhì)。 一般雜質(zhì)是指在

17、自然界分布較廣泛，在多種藥物的生產(chǎn)和貯藏過(guò)程中容易引入的雜質(zhì)，如酸、堿、水分、氯化物、硫酸鹽、砷鹽、重金屬等。 特殊雜質(zhì)是指在特定藥物的生產(chǎn)和貯藏過(guò)程中引入的雜質(zhì)。容許量。三、雜質(zhì)的限量的檢查 （一）、沒(méi)有必要把藥物中的雜質(zhì)完全除去從雜質(zhì)的來(lái)源考慮，完全除去藥物中的雜質(zhì)，即不可能也沒(méi)有必要。 （二）、藥物中雜質(zhì)允許最大限度的原則： 在不影響藥物的療效和不發(fā)生毒性的前提下，允許藥物中存在有一定量的雜質(zhì)。這一允許量被稱(chēng)為雜質(zhì)的限量。 雜質(zhì)限量 指藥物中所含雜質(zhì)的最大容許量。 藥物中雜質(zhì)的檢查多數(shù)采用限量檢查（limit test ），該檢查不要求測(cè)定雜質(zhì)的含量，而只檢查其是否超過(guò)限量。 由于以上的

18、原因， 因此，藥物的雜質(zhì) 檢查又稱(chēng)純度檢查，限度（限量）檢查。 A、取一定量供試品 結(jié)果 （產(chǎn)生色或渾濁） B、取一定量與 被檢雜質(zhì)相同 同上處理 的純物質(zhì)或其他對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)液 結(jié)果 （色或渾濁 ） 藥物的限量檢查的方法：比色法或比濁法當(dāng) A B 時(shí)：本項(xiàng)不合格。當(dāng) A B 時(shí)： 本項(xiàng)合格。當(dāng) A = B 時(shí)： 重做。依法處理 然后比較A和B： 雜質(zhì)的限量 通常用百分之幾 (%) 或百萬(wàn)分之幾 ( 10-6 ) 來(lái)表示。 1 g = 10-6g = 10-3mg雜質(zhì)限量的計(jì)算： 雜質(zhì)限量（L）= 100% 雜質(zhì)限量= 100% L = 100%雜質(zhì)的最大允許量供試品量標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（V） 標(biāo)準(zhǔn)溶

19、液的濃度（C） 供試品的量（S）C V S 應(yīng)用示例一 對(duì)乙酰氨基酚中氯化物檢查 取對(duì)乙酰氨基酚2.0g ，加水100ml時(shí)，加熱溶解后冷卻，濾過(guò)，取濾液25ml ，依法檢查氯化物（中國(guó)藥典，附錄VIIIA），所發(fā)生的渾濁與標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液5.0ml（每1ml 相當(dāng)于10g的cl-）制成的對(duì)照液比較，不得更濃。問(wèn)氯化物的限量是多少？L =CVS 100% = 0.01 52 103 25100100% = 0.01%第二節(jié)一般雜質(zhì)的檢查方法 一、 氯化物的檢查法 1、原理：中國(guó)藥典對(duì)氯化物的檢查是利用氯化物在硝酸酸性溶液中與硝酸銀試液作用，生成氯化銀白色渾濁液，與一定標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液在相同的條件下

20、生成的氯化銀渾濁液比較，濁度不得更大。 Cl- AgCl （微量時(shí)渾濁 ） 稀 HNO3AgNO3 2、方法：比濁法 A、取一定量供試品 產(chǎn)生AgCl (渾濁） 依法處理稀HNO3 AgNO3同上處理 B、取一定量標(biāo)準(zhǔn)NaCI 液 同上 （標(biāo)準(zhǔn) NaCI 濃度C= 0.01 mg CI - /ml ） （如 A 濁度比B小則本項(xiàng)合格）。3、注意點(diǎn)：（1）加HNO 3 目的； A、AgCI 不溶于HNO 3 可在HNO 3 中 產(chǎn)生最好 的乳化渾濁； B、加速 AgCI 的 產(chǎn)生； C、防止產(chǎn)生Ag2 0 ，Ag3PO4 , Ag2CO3 因?yàn)?這些溶于HNO 3 這樣就可以防止CO 32 -，

21、 OH - ，PO43 - 干擾。（2）加HNO 3 的 量要合適 （3）CI - 濃度（4）溫度（6）有干擾物必須消除。 A、如：（有色） 取兩分等量供試品： a、 一份做供試液（A管） 依法檢查 b、另一份 AgCI 濾液（B 管加入 規(guī)定量的標(biāo)準(zhǔn)NaCI溶液作為對(duì)照管）。 加稀 HNO 3過(guò)濾B、用濾紙過(guò)濾時(shí)，濾紙中如含有氯化物，可預(yù)先用含 有硝酸的水溶液洗凈后使用。 C、Br - 、I - 與AgNO3 作用均能生成Ag（鹵化銀）； 硫氰酸鹽能與AgNO 3 作用生成硫氰酸銀 ， 以上均有干擾。因此，必須排除。（5）嚴(yán)格按照操作順序進(jìn)行AgNO3D、存在于有機(jī)物結(jié)構(gòu)中的氯化物檢查。 方

22、法： 必須 使結(jié)狀態(tài)的氯變?yōu)橛坞x狀態(tài)的氯。 如 有機(jī)破壞的方法： 某些藥物含有有機(jī)氯雜質(zhì)可以采用本法。 Cl Cl- （7）、溶于水的有機(jī)藥物（如有機(jī)酸堿金屬鹽）按藥典附錄方法直接檢查氯化物。不溶于水的有機(jī)藥物，多數(shù)加水振搖，使所含氯化物溶解，濾過(guò)，取濾液依法檢查（也有用丙酮溶解后檢查的）。 SO4 2 - BaSO 4 （SO 42 - 微量時(shí)渾濁）二、 硫酸鹽檢查法 1、原理：藥物中存在的微量硫酸鹽與氯化鋇在鹽酸酸性介質(zhì)中 生 成硫酸鋇白色渾濁，與一定量標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液在相同條件生 成的渾濁比較，濁度不得更大。2、方法：比濁法 依法處理A、供試品一定量 產(chǎn)生BaSO4 的渾濁 HCl，25%

23、 BaCI 2 同上B、取一定量K 2 SO 4 標(biāo)準(zhǔn)液 同上HCl25% BaCI 23、注意點(diǎn)： （1）加HCI 要 適量,防止BaCO 3 ,Ba 3（PO 4 ）2 等 的生成。 （2）本法適宜比濁濃度為0.10.5 mgSO4 2- /50 ml。 （3）BaCl2 試液濃度在10% 25% 范圍內(nèi)。 （4）供試液如需濾過(guò)，應(yīng)先用鹽酸使成酸性的蒸餾水洗凈濾紙中硫酸鹽。 （5）有色供試品溶液的處理及其他注意事項(xiàng)與氯化物檢查法相同。1 、原理 鐵鹽在鹽酸酸性溶液中與硫氰酸銨生成紅色可溶性硫氰酸鐵配位離子，再與一定量標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液用同法處理后所呈的顏色比較，顏色不得更深。 H+3 -移至50m

24、I納氏比色管稀HCI 4mI過(guò)硫酸銨50mg按上法三、鐵鹽檢查法：Fe3+ + 6 SCN-、方法：比色法 （）供試品 水mI加水稀釋或約35mI后 Fe（SCN）6液（30 100）3 mI，再加水適量稀釋成 50mI，搖均如顯色與標(biāo)準(zhǔn)溶液比較。（2）標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液處理顯色（一）硫氰酸鹽法加硫氰酸銨溶（二）巰基醋酸法 （“巰”音“球”） BP采用巰氰醋酸（mercaptoacetic acid）法檢查藥物中鐵鹽。 原理 硫氰醋酸還原Fe 3為Fe 2 ，在氨堿性溶液中進(jìn)一步與Fe2作用生成紅色配位離子，與一定量標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液經(jīng)同法處理后產(chǎn)生的顏色進(jìn)行比較，以限制鐵的量。3）注意點(diǎn)： 1）加HCI防止

25、鐵鹽水解 2）加過(guò)硫酸銨 （NH4）2S2O8 氧化劑，氧化供試品中 F2+生成 Fe3+ ; 防止光線使硫氰酸鐵還原或分解退色。 3）有干擾要排除。2Fe3 2HSCH2COOH 2Fe2SCH2COOH 2H SCH2COOH2Fe3 2HSCH2COOH Fe（SCH2COOH）2 HFe（SCH2COOH）2 Fe（SCH2COO）22 2H20 2OH- 紅色1、原理 H+（1）Pb2+ PbS （量少時(shí)，呈色 黃 黑） H2S（2）、凡溶于堿不溶于稀酸的藥物，如磺胺類(lèi)，巴比妥類(lèi)等，均在堿性溶液中以硫化鈉試液為顯色劑 。四、重金屬檢查法： OH- Pb2+ PbS Na2S（3）含芳

26、環(huán)或雜環(huán)的有機(jī)藥物，先進(jìn)行結(jié)構(gòu)破壞，使共價(jià)的鉛變?yōu)橛坞x的鉛，再采取上述的（1）或者（2）法檢查。 .方法 第一法 硫代乙酰胺法 原理 硫代乙酰胺在弱酸性（pH3.5醋酸鹽緩沖液）條件下水解，產(chǎn)生硫化氫，與微量重金屬離子生成黃色到棕黑色的硫化物均勻混懸液，與一定量標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液經(jīng)同法處理后所呈現(xiàn)顏色比較，顏色不得更深。 CH3CSNH2 H20 CH3CONH2H2S H2S Pb2 PbS 2H pH3.5操作方法（比色法）： 依法處理 A、一定量供試品 PbS HAC、H2S 注意點(diǎn)： pH：pH3.5 在此條件下沉淀完全 ；不溶于HAC的檢品在OH- 中進(jìn)行。 同上 B、取一定標(biāo)準(zhǔn)鉛液 PbS

27、Pb(NO3)2 第二法 適用于在水、乙醇中難溶，或能與金屬離子形成配位化合物的有機(jī)藥物。 原理 將供試品熾灼破壞后 ，加硝酸加熱處理，使有機(jī)物分解，破壞完全后，再按第一法進(jìn)行檢查。 第三法 適用于難溶于稀酸但能溶解于堿性水溶液的藥物，如磺胺類(lèi)、巴比妥類(lèi)藥物等。 原理 在堿性介質(zhì)中，以硫化鈉為顯色劑，使Pb2 生 成PbS 微粒的混懸液，與一定標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液經(jīng)同法處理后所呈顏色比較不得更深。注意點(diǎn)： A、加HNO3目的： 水解 鹽 + H 2 O 酸 + 堿 中和 B、臨用前配制：溶液愈釋愈易水解，所以臨用前稀釋。（3）排除干擾物質(zhì)（4）含芳環(huán)或雜環(huán)有機(jī)物，按藥典方法先熾灼破環(huán)使 與有機(jī)物分子結(jié)合

28、的重金屬游離，再依法檢查。（5）微孔濾膜過(guò)濾法 。 第四法 微孔濾膜法。 適用于重金屬限量低的藥物。（含25g重金屬）的檢查。 。 原理 使重金屬生成的硫化物富集于微孔濾膜上，比較供試品和一定量的標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液同法處理后產(chǎn)生的色斑深淺，確定重金屬是否超過(guò)限量 。 試驗(yàn)裝置圖見(jiàn)下頁(yè) 五、 砷鹽檢查法 （一）古蔡（Gutzeit）氏法 原理 金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)的氫，與藥物中微量砷鹽反應(yīng)生成具有揮發(fā)性的砷化氫，遇溴化汞試紙，產(chǎn)生黃色至棕色的砷斑，與一定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液所生成的砷斑比較，顏色不得更深。原理： ASO33 - （亞砷酸鹽） ASH3 AsH（HgBr）2 黃色 As（HgBr）3 棕色 Z

29、n + HCI新生態(tài)H2HgBr2試紙砷斑： As3 3Zn 3H 3Zn2 AsH3AsO3 - 3Zn9H 3Zn2+ 3H2O AsH3AsH3 3HgBr2 3HBr As（HgBr）3 （黃色）2As（HgBr）3 AsH3 3 AsH（HgBr）2 （棕色）As（HgBr）3 AsH3 3HBr As2 Hg3 （棕黑色）裝置: 方法 注意事項(xiàng) 供試品處理 含銻藥物，如葡萄糖酸銻鈉，用古蔡氏法檢查時(shí)， 銻鹽也可被還原為銻化氫，與溴化汞試紙作用，產(chǎn)生灰色銻斑，干擾砷斑的檢出： SbH3 HgBr2 SbH2（HgBr）HBr 可改用白道田夫（Betterdorff）法檢查砷鹽。方法原

30、理是氯化亞錫在鹽酸中將砷鹽還原成棕褐色的膠態(tài)砷，與一定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液用同法處理后的顏色比較，可控制 供試品中的砷量： 2As3 3SnCl2 6HCl 2As 3 SnCl4 6H 此法的反應(yīng)靈敏度以As2O3 計(jì)20g。少量二氯化汞的加入，能提高反應(yīng)靈敏度達(dá)20g/10ml。（二）二乙基二硫代氨基甲酸銀法（silve diethyldithiocarbamate）簡(jiǎn)稱(chēng)Ag （DDC）法 本法為中國(guó)藥典和USP（24）收載的方法。不僅可用于砷鹽的限量檢查，也可用作微量砷鹽的含量測(cè)定。原理 金屬鋅與酸作用，產(chǎn)生新生態(tài)的氫，與微量砷鹽反應(yīng)，生成具有揮發(fā)性的砷化氫； 砷化氫遇二乙基二硫代氨基甲酸銀，A

31、sH3 6Ag（DDC）3As（DDC）3 6Ag 3HDDC使其還原產(chǎn)生紅色的膠態(tài)銀，用目視比色法或在510nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，再以一定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液用同法處理后得到的有色溶液進(jìn)行比較。六、溶液顏色檢查法 有色雜質(zhì)可能在藥物的生產(chǎn)過(guò)程中引入，也可能由貯藏過(guò)程產(chǎn)生。對(duì)溶液顏色進(jìn)行檢查，可控制藥物中有色雜質(zhì)的含量。中國(guó)藥典采用的檢查方法有三種。 （一）目視比色法 （二）分光光度法 （三）色差法 原理 方法七、 易炭化物檢查法 易炭化物檢查法是檢查藥物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有機(jī)雜質(zhì)。這類(lèi)雜質(zhì)多數(shù)結(jié)構(gòu)未知，用硫酸呈色的方法可以簡(jiǎn)便地控制他們的總量。方法注意事項(xiàng)八、 溶液澄清度檢查法 澄

32、清度可反應(yīng)藥物溶液中的微量不溶性雜質(zhì)的存在情況，在一定的程度上可反映藥品的質(zhì)量和生產(chǎn)的工藝水平，對(duì)于供制備注射液用原料藥物的純度檢查尤為重要。 原理 烏洛托品在偏酸性條件下水解產(chǎn)生甲醛，甲醛與肼縮合生成不溶于水的甲醛白色渾濁。（CH2）6N4 6H2O 6HCHO4NHSHCHOH2N NH2 H2C = N NH2 H2O 方法 注意事項(xiàng)九、 熾灼殘?jiān)鼨z查法 中國(guó)藥典和美國(guó)藥典對(duì)熾灼殘?jiān)╮esidue on ignition ）的定義：有機(jī)藥物經(jīng)炭化或揮發(fā)性無(wú)機(jī)藥物加熱分解后，高溫?zé)胱?，所產(chǎn)生的非揮發(fā)性無(wú)機(jī)雜質(zhì)的硫酸鹽。英國(guó)藥典稱(chēng)去其為硫酸灰分（sulphated ash）。熾灼殘?jiān)鼨z查用

33、于控制有機(jī)藥物和揮發(fā)性無(wú)機(jī)藥物中存在的非揮發(fā)性無(wú)機(jī)雜質(zhì)。方法注意事項(xiàng)十、 干燥失重測(cè)定法 干燥失重系指藥品在規(guī)定的條件下，經(jīng)干燥后所減少的量，以百分率表示。干燥失重的量應(yīng)恒重。由干燥至恒重的第二次及各次稱(chēng)重均應(yīng)在規(guī)定的條件下繼續(xù)干燥1h后進(jìn)行。 （一）常壓恒溫干燥法 本法適用于受熱較穩(wěn)定的藥物。 方法 注意事項(xiàng) （二）干燥劑干燥法 本法適用于受熱分解、或易于揮發(fā)的供試品。干燥劑：（1）硅膠 ( 吸水力大于硫酸, 使 用方便, 價(jià)廉, 變色, 可以反復(fù)使用） （2）硫酸（吸水次之，較便宜） （3）五氧化二磷（吸水力強(qiáng)，但價(jià)高）（三） 減壓干燥法 本法適用于熔點(diǎn)低、受熱不穩(wěn)定或難驅(qū)除水分的藥物。原

34、理方法注意事項(xiàng)（四）熱分析法 在程序控制溫度的情況下，測(cè)定物質(zhì)的物理、化學(xué)變化與溫度關(guān)系的一類(lèi)儀器分析方法稱(chēng)為熱分析法。該方法具有樣品用量少，靈敏、快速等優(yōu)點(diǎn)，在藥物分析中廣泛用于物質(zhì)的熔點(diǎn)、多晶型、純度、溶劑化物、水分及熱解產(chǎn)物的測(cè)定。根據(jù)測(cè)定物理量的不同，熱分析法又有不同的名稱(chēng)。藥物分析中常用的熱分析方法是：熱重分析法、差示熱分析法、差示掃描量熱法。 1熱重分析法（thermogravimetric analysis，TGA） 2差示熱分析法（differential thermal analysis ） 3差示掃描量熱法（differential scanning calorimetry

35、，DSC ）十一、 有機(jī)溶劑殘留量測(cè)定 中國(guó)藥典附錄收載的殘留溶劑測(cè)定法有溶液直接進(jìn)樣法和頂空進(jìn)樣法兩種。第一法 溶液直接進(jìn)樣法 方法 注意事項(xiàng) 第二法 頂空進(jìn)樣法方法注意事項(xiàng)應(yīng)用示例一 壬苯醇醚中二氧六環(huán)檢查應(yīng)用示例 二 秋水仙堿中氯仿和醋酸乙酯的檢查 第三節(jié) 特殊雜質(zhì)檢查方法 一、利用藥物和雜質(zhì)在物理性質(zhì)上的差異 （一）臭味及揮發(fā)性的差異 （二） 顏色的差異 （三）溶解行為的差異 （四）旋光性質(zhì)的差異 （五）對(duì)光吸收性質(zhì)的差異 1紫外分光光度法 2原子吸收分光光度法 3紅外分光光度法 4熒光分析法（六）吸附或分配性質(zhì)的差異 1薄層色譜法 2 紙色譜法 3高效液相色譜法 4氣相色譜法二、利用

36、藥物和雜質(zhì)在化學(xué)性質(zhì)上的差異 （一）酸堿性的差異 1規(guī)定消耗滴定液的體積 2PH值法 3指試劑法（二） 氧化還原性的差異（三） 雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生沉淀（四）雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色（五）雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生氣體（六）藥物經(jīng)有機(jī)破壞后檢查雜質(zhì) 1硒檢查法 2氟檢查法第四章藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證第一節(jié) 定量分析樣品的前處理方法一、概述 含金屬或鹵素的藥物，如葡萄糖酸銻鈉，硬脂酸鎂、碘苯酯、磺溴酞鈉等，在分析前需要經(jīng)過(guò)不同方法處理之后，方可進(jìn)行測(cè)定。處理方法因金屬或鹵素在分子中結(jié)合的牢固程度而異，如：有機(jī)鹵素藥物，所含鹵素原子均直接與碳原子相連，但不同藥物中鹵素所處的位置不同，則與碳原子

37、結(jié)合的牢固程度就有差異。如果鹵素和芳環(huán)相連接，則結(jié)合牢固，與脂肪鏈的碳原子相連接，則結(jié)合不牢固；而含金屬的有機(jī)藥物，有兩種情況：一是金屬原子不直接與碳原子相連，通常為有機(jī)酸及酚的金屬鹽或配位化合物，稱(chēng)為含金屬的有機(jī)化合物，其分子結(jié)構(gòu)中的金屬原子結(jié)合不夠牢固，在水溶液中既可離解出金屬離子，如有機(jī)結(jié)構(gòu)部分不干擾分析時(shí)，可在溶液中直接進(jìn)行其金屬的鑒別或含量定；二是金屬原子直接與碳原子以共價(jià)鍵相連接，結(jié)合狀態(tài)比較牢，稱(chēng)為有機(jī)金屬藥物，在溶液中其金屬一般不能解離成離子狀態(tài)，應(yīng)該根據(jù)共價(jià)鍵的牢固程度，經(jīng)適當(dāng)處理，將其金屬轉(zhuǎn)變?yōu)檫m于分析的狀態(tài)，應(yīng)該根據(jù)共價(jià)鍵的牢固程度，經(jīng)適當(dāng)處理，將其金屬轉(zhuǎn)變?yōu)檫m于分析的狀

38、態(tài)（多轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)機(jī)的金屬鹽或離子），方可進(jìn)行其金屬的鑒別或含量測(cè)定。二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（一） 直接測(cè)定法 凡金屬原子不直接與碳原子相連的含金屬藥物或某些C-M（金屬原子直接與碳原子相連）鍵結(jié)合不牢固的有機(jī)金屬藥物，在水溶液中可以電離，因而不需有機(jī)破壞，可直接選用適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行測(cè)定 。（二）經(jīng)水解后測(cè)定法 1直接回流后測(cè)定法 2用硫酸水解后測(cè)定法（三）經(jīng)氧化還原后測(cè)定法 1 堿性還原后測(cè)定 2 酸性還原后測(cè)定 3 利用藥物中可游離的金屬離子的氧化性測(cè)定含量三、 經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（一） 濕法破壞 1 硝酸-高氯酸法 2 硝酸-硫酸法 3 硫酸-硫酸鹽法 4 其它濕法（二） 干法破壞 （三

39、） 氧瓶燃燒法氧瓶燃燒法（oxygen flask combustion method）系將有機(jī)藥物放入充滿氧氣的密閉的燃燒瓶中進(jìn)行燃燒，并將燃燒所產(chǎn)生的欲測(cè)物質(zhì)吸收于適當(dāng)?shù)奈找褐?，然后根?jù)欲測(cè)物質(zhì)的性質(zhì)，采用適宜的分析方法進(jìn)行鑒別、檢查或測(cè)定含鹵素有機(jī)藥物或含硫、氮、硒等其它元素的有機(jī)藥物。 本法是快速分解有機(jī)物的簡(jiǎn)單方法，它不需要復(fù)雜設(shè)備，就能使有機(jī)化合物中的待測(cè)元素定量分解成離子型。該方法被各國(guó)藥典所收載。 1 儀器裝置 燃燒瓶為500ml、1000ml、或2000ml磨口、硬質(zhì)玻璃錐形瓶，瓶塞應(yīng)嚴(yán)密、空心、底部熔封鉑絲一根（直徑為1mm），鉑絲下端做成網(wǎng)狀或螺旋狀，長(zhǎng)度約為瓶身長(zhǎng)度的

40、23 ，如圖 2 稱(chēng)樣3 燃燒分解操作法4 吸收液的選擇 第二節(jié) 定量分析方法特點(diǎn) 一、 容量分析法（一）容量分析法的特點(diǎn)（二）容量分析法的計(jì)算問(wèn)題 1滴定度 2滴定度（T）的計(jì)算 3百分含量計(jì)算 （1） 直接滴定法含量%=VT W100%=VTFW100% （2）回滴定法（剩余滴定法 ） 二、光譜分析法（一）紫外-可見(jiàn)分光光度法 1特點(diǎn) 紫外-可見(jiàn)分光光度法是根據(jù)物質(zhì)分子對(duì)波長(zhǎng)為200nm760nm 這一范圍的電磁波的吸收特性所建立起來(lái)的光譜分析方法。主要特點(diǎn)如下：（1）靈敏度高，可達(dá)10-4g/ml10-7g/ml 。（2）準(zhǔn)確度高，相對(duì)誤差為2% 5%。（3）儀器價(jià)格較低廉，操作簡(jiǎn)單，易

41、于普及。 含量%=（VAFAVBFB）T W100% 2郎伯-比耳定律 3儀器校正和檢定 4對(duì)溶劑的要求 5測(cè)定法（二）熒光分析法 1特點(diǎn) 2熒光分析儀 3含量測(cè)定 三、 色譜分析法 色譜分析法（又稱(chēng)層析法）根據(jù)其分離原理可分為：吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜與排阻色譜等。又可根據(jù)分離方法分為：紙色譜、薄層色譜法、柱色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法等。（一） 高效液相色譜法 1對(duì)儀器的一般要求系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) （1）色譜柱的理論塔板數(shù)（n） （2）分離度 .測(cè)定法 （1）內(nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定供試品中主成分含量：AS/CS AR/CR Ax校正因子（f）=含量（C）=fAS/CS （2）外標(biāo)法

42、測(cè)定供試品中主成分含量： 外標(biāo)法可分為標(biāo)準(zhǔn)曲線法和外標(biāo)一點(diǎn)法。 1）標(biāo)準(zhǔn)曲線法： 2）外標(biāo)一點(diǎn)法： (二) 氣相色譜法 1.對(duì)儀器的一般要求 2.系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn) 3.測(cè)定法 第三節(jié)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證 驗(yàn)證內(nèi)容有：準(zhǔn)確度、精密度（包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）、專(zhuān)屬性、檢測(cè)限、定量限、線性、范圍和耐用性。 一、 準(zhǔn)確度 （一）含量測(cè)定的準(zhǔn)確度 準(zhǔn)確度系指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般以回收率（%）表示。準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)建立。回收率的計(jì)算可按下式： 回收率%=測(cè)定平均值-空白值 加入量 100%(二) 數(shù)據(jù)要求二 、 精密度 精密度系指在規(guī)定的測(cè)定條件下，同一個(gè)均

43、勻樣品，經(jīng)過(guò)多次取樣測(cè)定所得的結(jié)果之間的接近程度。(一)精密度表示方法 1.偏差(deviation，d ) .標(biāo)準(zhǔn)偏差(standard deviation ，SD )S=（XiX）2n13. 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviation,RSD ),也稱(chēng)變異系數(shù)(coefficient of varation,CV )RSD=標(biāo)準(zhǔn)偏差 平均值100%=S X 100%(二) 重復(fù)性、中間精密度及重現(xiàn)性 1. 重復(fù)性 在相同的條件下，由一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的 精密度稱(chēng)為重復(fù)性。2中間精密度 同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不 同設(shè)備測(cè)定結(jié)果的精密度，稱(chēng)為中間

44、精密度。3重現(xiàn)性 在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度，稱(chēng)為重現(xiàn)性。 (三) 數(shù)據(jù)要求三、專(zhuān)屬性 專(zhuān)屬性系指在其他成分（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在下，采用的方能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性。(一)鑒別反應(yīng)(二) 含量測(cè)定和雜質(zhì)測(cè)定四、 檢測(cè)限 檢測(cè)限（limit of detection，LOD）是試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低濃度或量。LOD是一種限度檢驗(yàn)效能指標(biāo)，即反映方法與儀器的靈敏度和噪音的大小，也表明樣品經(jīng)處理后空白（本底）值的高低。它無(wú)需定量測(cè)定，只要指出高于或低于該規(guī)定的濃度或量即可。根據(jù)所采用的方法來(lái)確定檢測(cè)限。(一)常用的方法1. 非儀器分析目視法2. 儀器分析時(shí)的測(cè)定

45、法（二）數(shù)據(jù)要求五、定量限 定量限（limit of quantitation ，LOQ）是指樣品中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)具一定準(zhǔn)確度和精密度。雜質(zhì)和降解產(chǎn)物用定量測(cè)定方法研究時(shí)，應(yīng)確定定量限。 六、線性 線性 系指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。 七、范圍 范圍是指能到達(dá)一定精密度、準(zhǔn)確度和線性、測(cè)試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。八、耐用性 耐用性 系指在測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度，為常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。 1用于鑒別試驗(yàn) 2用于原料藥中雜質(zhì)測(cè)定或制劑中的降解產(chǎn)物測(cè)定的方法 3用于原料藥中主成分或制劑中有效組分含量測(cè)定及溶

46、出度測(cè)定 第四節(jié) 生物樣品分析方法的基本要求一、常用樣品的種類(lèi)、采集和儲(chǔ)貯藏 生物樣品包括各種體液和組織，但實(shí)際上最常用的是比較容易得到的血液（血漿、血清、全血）尿液、唾液。(一) 血樣 血漿（plasma）和血清（serum）是最常用的生物樣品。(二) 唾液(三) 尿液二、生物樣品分析前處理技術(shù)(一) 去除蛋白質(zhì)1加入與水相混溶的有機(jī)溶劑2加入中性鹽3加入強(qiáng)酸4加入含鋅鹽及銅鹽的沉淀劑5酶解法（二）綴合物的水解（三）分離、純化與濃集1液-液提取法(liquid-liquid extraction ,LLE)2液-固提取法(liquid solid extraction,LSE)3被測(cè)組分的濃

47、集(四) 化學(xué)衍生化1GC中化學(xué)衍生化法2HPLC中化學(xué)衍生化法三、 定量分析方法驗(yàn)證(一) 特異性 必須證明所測(cè)定的物質(zhì)是原形藥物或特定的活性代謝物，內(nèi)原性物質(zhì)和相應(yīng)的代謝物及同時(shí)服用的其他藥物不得干擾樣品的測(cè)定。對(duì)于色譜法至少要提供空白樣品色譜圖、空白生物樣品加標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)色譜圖及用藥后的樣品色譜圖。(二) 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍 所測(cè)定物質(zhì)的濃度與響應(yīng)的相關(guān)性，用回歸分析方法所得的回歸方程來(lái)評(píng)價(jià)。一般控制相關(guān)系數(shù)r0.9900。標(biāo)準(zhǔn)曲線高低濃度范圍為線性范圍，在線性范圍內(nèi)濃度測(cè)定結(jié)果應(yīng)達(dá)到試驗(yàn)要求的精密度和準(zhǔn)確度。(三) 精密度與準(zhǔn)確度 要求選擇三個(gè)濃度的質(zhì)控樣品同時(shí)進(jìn)行方法的精密度和準(zhǔn)確度考察

48、，低濃度選擇在最低定量限（LOQ）附近，高濃度在標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限附近，中間選一個(gè)濃度，每一個(gè)濃測(cè)定五個(gè)樣品。 精密度用質(zhì)控樣品的日內(nèi)和日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）表示，一般RSD 應(yīng)小于15%，在LOQ附近RSD應(yīng)小于20%。 準(zhǔn)確度是指用特定方法測(cè)得的生物樣品濃度與真實(shí)濃度的接近程度，可用相對(duì)回收率表示，即采用“回收率”或“加樣回收率”得到的藥物自樣品中回收率。其值一般應(yīng)在85%115%范圍內(nèi)，在LOQ附近應(yīng)在80%120%范圍內(nèi)。 (四) 最底定量限 最低定量限指標(biāo)準(zhǔn)曲線的最低濃度點(diǎn)，也稱(chēng)靈敏度，表示測(cè)定樣品中符合準(zhǔn)確度和精密度要求的最低藥物濃度，要求LOQ至少能滿足測(cè)定35個(gè)半衰期時(shí)樣品中的

49、藥物濃度或Cmax的1/101/20時(shí)的藥物濃度。(五) 樣品穩(wěn)定性(六) 提取回收率(七) 質(zhì)控樣品(八) 質(zhì)量控制第五章 巴比妥類(lèi)藥物的分析 一、巴比妥類(lèi)藥物的結(jié)構(gòu)剖析 巴比妥類(lèi)藥物為環(huán)狀酰脲類(lèi)鎮(zhèn)靜催眠藥，是巴比妥酸的衍生物，其基本結(jié)構(gòu)通式為：由于5位取代基R1和R2不同，形成不同的巴比妥類(lèi)藥物。NHNHOOOR1 R2 213456 二、巴比妥類(lèi)藥物的理化性質(zhì)（一）弱酸性：巴比妥類(lèi)藥物的母核環(huán)狀結(jié)構(gòu)中含有1，3-二酰亞胺基團(tuán)，能使其分子發(fā)生酮式-稀醇式互變異構(gòu)，在水溶液中發(fā)生二級(jí)電離。 +H+H+ pK1=8H+H+ pK2=12（二） 水解反應(yīng) 1巴比妥類(lèi)藥物的水解 本類(lèi)藥物的分子結(jié)構(gòu)

50、中含酰亞胺基團(tuán)，與堿溶液共沸即水解釋放氨氣，可使紅色石蕊試紙變藍(lán)。 2巴比妥類(lèi)藥物鈉鹽的水解 本類(lèi)藥物的鈉鹽，在吸濕的情況下也能水解。(三) 與重金屬離子的反應(yīng) 1與銀鹽的反應(yīng) 巴比妥類(lèi)藥物分子結(jié)構(gòu)中含有酰亞胺基團(tuán)，在碳酸鈉溶液中， 生成鈉鹽而溶解，再與硝酸銀反應(yīng)，首先生成可溶性的一銀鹽，加入過(guò)量的硝酸銀溶液，則生成難溶性的二銀鹽白色沉淀。此反應(yīng)可用于本類(lèi)藥物的鑒別和含量測(cè)定。+AgNO3Na2CO3+NaHCO3 NaNO3 +AgNO3NaNO3+ 2與銅鹽的反應(yīng) 3與鈷鹽的反應(yīng) 4與汞鹽的反應(yīng)（四）與香草醛(Vanillin)的反應(yīng) 巴比妥類(lèi)藥物分子結(jié)構(gòu)中丙二酰脲基團(tuán)中氫比較活潑，可與香

51、草醛在濃硫酸存在下發(fā)生縮合反應(yīng)，生成棕紅色產(chǎn)物。（五）紫外吸收光譜特征（六）薄層色譜行為特征 1薄層色譜法 2高效液相色譜法 （七）顯微結(jié)晶1藥物本身的晶形2反應(yīng)產(chǎn)物的晶形三、鑒別試驗(yàn) 巴比妥類(lèi)藥物的結(jié)構(gòu)特征和具有的理化特性，如分子結(jié)構(gòu)中含有的酰亞胺基，硫元素與不同取代基等均可用于本類(lèi)藥物的鑒別試驗(yàn)。常用的鑒別試驗(yàn)方法有丙二酰脲類(lèi)鑒別試驗(yàn)，制備衍生物測(cè)定熔點(diǎn)，芳環(huán)反應(yīng)，不飽和鍵反應(yīng)，硫和鈉元素等。另外，巴比妥類(lèi)藥物光譜和色譜行為特征也可用于本類(lèi)藥物的鑒別。（一）丙二酰脲類(lèi)鑒別反應(yīng)1銀鹽反應(yīng)的方法2銅鹽反應(yīng)的方法（二）測(cè)定熔點(diǎn)1司可巴比妥鈉的鑒別2苯巴比妥鈉的鑒別3巴比妥的鑒別（三）利用特殊取代

52、基或元素的鑒別試驗(yàn)1利用不飽和取代基的鑒別試驗(yàn)（1）與碘試液的反應(yīng)：（2）與高錳酸鉀的反應(yīng)2利用芳環(huán)取代基的鑒別試驗(yàn)（1）硝化反應(yīng)（2）與硫酸-亞硝酸鈉的反應(yīng)（3）與甲醛-硫酸的反應(yīng)3硫元素的鑒別試驗(yàn)四、特殊雜質(zhì)檢查(一) 苯巴比妥的特殊雜質(zhì)檢查 1酸度 2溶液的澄清度 3中性或堿性物質(zhì)(二) 司可巴比妥鈉的特殊雜質(zhì)檢查 1溶液的澄清度 2中性或堿性物質(zhì)五、 含量測(cè)定(一) 銀量法 基于巴比妥類(lèi)藥物在合適的堿性溶液中，可與銀離子定量成鹽。 其測(cè)定反應(yīng)見(jiàn)本章理化特征項(xiàng)下。因此，可采用銀量法測(cè)定本類(lèi)藥物及其制劑的含量。如苯比妥及其鈉鹽異戊巴比妥及其鈉鹽以及他們的制劑，中國(guó)藥典均采用銀量法測(cè)定其含量

53、。 在滴定過(guò)程中，巴比妥類(lèi)藥物首先形成可溶性的一銀鹽，當(dāng)被測(cè)定的巴比妥類(lèi)藥物完全形成一銀鹽后，稍過(guò)量的銀離子就與巴比妥類(lèi)藥物形成難溶性的二銀鹽沉淀使溶液變渾濁，以此指示滴定終點(diǎn)。(二) 溴量法 凡在5位取代基含有不飽和鍵的巴比妥類(lèi)藥物，其不飽和鍵能與溴定量地發(fā)生加成反應(yīng)，故可采用溴量法測(cè)定其含量。（三）酸堿滴定法 巴比妥類(lèi)藥物呈弱酸性，可作為一元酸以標(biāo)準(zhǔn)堿液直接滴定，或在非水溶液中用強(qiáng)堿溶液直接滴定。此法雖然未被中國(guó)藥典收載，但也可用于本類(lèi)藥物的含量測(cè)定，常用的方法如下： 1在水-乙醇混合溶劑中的滴定 基于本類(lèi)藥物在水中的溶解度較小，滴定時(shí)多在醇溶液或含水的醇溶液中進(jìn)行，這樣可避免反應(yīng)中產(chǎn)生的

54、弱酸鹽易水解而影響滴定終點(diǎn)。常以麝香草酚酞為指示劑，滴定至淡藍(lán)色為終點(diǎn)。 2膠束水溶液中的測(cè)定方法 本法是在有機(jī)表面活性劑的膠束水溶液中進(jìn)行進(jìn)行滴定，用指示劑或電位法指示終點(diǎn)。因表面活性劑能改變巴比妥類(lèi)藥物的離解平衡，使藥物的Ka 增大，即使巴比妥類(lèi)藥物酸性增強(qiáng)，因此使滴定終點(diǎn)的變化明顯。 3非水溶液滴定法 巴比妥類(lèi)藥物在非水溶液中的酸性增強(qiáng)，用堿性的標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定時(shí)，終點(diǎn)較為明顯，可獲得比較滿意的結(jié)果。（四）紫外分光光度法 巴比妥類(lèi)藥物在酸性介質(zhì)中幾乎不電離，無(wú)明顯的紫外吸收。但在堿性介質(zhì)中電離為具有紫外吸收特征的結(jié)構(gòu)， 因而可采用紫外分光光度法測(cè)定其含量。 1直接測(cè)定的紫外分光光度法 2提取

55、分離后的紫外分光光度法 3差示紫外分光光度法（五）高效液相色譜法 1色譜條件 2樣品預(yù)處理 3線性范圍和最底檢測(cè)限第六章 芳酸及其酯類(lèi)藥物的分析第一節(jié) 典型藥物分類(lèi)與理化性質(zhì)一、水楊酸類(lèi) (一) 典型藥物 (二) 主要理化性質(zhì)二、 苯甲酸類(lèi) (一) 典型藥物 (二) 主要理化性質(zhì)三、 其他芳酸類(lèi)（一）典型藥物（二）主要理化性質(zhì)第二節(jié) 鑒別試驗(yàn)一、與鐵鹽的反應(yīng) 1水楊酸及其鹽在中性或弱酸性條件下，與三氯化鐵試液反應(yīng)，生成紫堇色配位化合物。 2苯甲酸的堿性水溶液或苯甲酸的中性溶液，與三氯化鐵試液生成堿式苯甲酸鐵的赭色沉淀。 3丙磺舒加少量氫氧化鈉試液使生成鈉鹽后，在PH約5.06.0水溶液中與三氯

56、化鐵試液反應(yīng)，既生成米黃色沉淀。 4布落芬的無(wú)水乙醇溶液，加入高氯酸羥胺-無(wú)水乙 醇試液及N, N-雙環(huán)已基羧二亞胺(DCC)-無(wú)水乙醇試液，混合后，在溫水中加熱20min。冷卻后，加高氯酸鐵-無(wú)水乙醇液，即呈紫色JP(14)的方法。二、重氮化-偶合反應(yīng) 1貝諾酯具潛在的芳伯氨基，加酸水解后產(chǎn)生芳伯氨基結(jié)構(gòu)，在酸性溶液中，與亞硝酸鈉試液進(jìn)行重氮化反應(yīng)， 生成的重氮鹽與堿性-萘酚偶合生成橙紅色沉淀. 2甲芬那酸的甲醇溶液，與對(duì)-硝基苯重氮鹽試液在氫氧化鈉堿性條件下偶合產(chǎn)生橙紅色JP (13)的方法。三、 氧化反應(yīng)四、水解反應(yīng) 1阿司匹林與碳酸鈉試液加熱水解，得水楊酸鈉及醋酸鈉，加過(guò)量稀硫酸酸化后

57、，則生成白色水楊酸沉淀，并發(fā)生醋酸的臭氣。沉淀物于1000C1050C干燥后，熔點(diǎn)為1560C1610C。 2雙水楊酸酯與氫氧化鈉試液煮沸后，加稀鹽酸，既生成白色水楊酸沉淀；分離后，沉淀用水洗滌，并于1000C1050C干燥其熔點(diǎn)約為158 0C，該沉淀在醋酸銨試液中又可溶解。 3氯貝丁酯分子中具有酯結(jié)構(gòu)，堿水解后與鹽酸羥胺生成異羥酸鹽，在弱酸性條件下加三氯化鐵即呈紫色異羥酸鐵。 4羥苯乙酯的乙醇溶液，煮沸后，加硝酸汞試液，放置后逐漸生成沉淀，上清夜呈紅色。五、分解產(chǎn)物的反應(yīng) 1苯甲酸鹽可分解成苯甲酸升華物，分解產(chǎn)物可用于鑒別。 2含硫的藥物，可分解后鑒別。 3丙磺舒高溫加熱時(shí)，能產(chǎn)生二氧化硫

58、氣體，具SO2臭味。六、 紫外吸收光譜法(一) 利用紫外特征吸收法 1貝若酯 2氯貝丁酯 3羥苯乙酯 4丙磺舒 5布洛芬 6甲芬那酸(二) 利用雙波長(zhǎng)吸收度比法 1對(duì)氨基水楊酸鈉 2甲芬那酸七、紅外吸收光譜法 第三節(jié) 特殊雜質(zhì)檢查 一、阿司匹林中特殊雜質(zhì)的檢查 (一) 合成工藝 (二) 檢查 1溶液的澄清度 2水楊酸 3易炭化物 二、 對(duì)氨基水楊酸鈉中特殊雜質(zhì)的檢查 (一)合成工藝與間氨基酚雜質(zhì)的產(chǎn)生 (二)雙相滴定法與原理 (三) 高效液相色譜法三、羥苯乙酯中有關(guān)物質(zhì)的檢查四、甲芬那酸中特殊雜質(zhì)的檢查（一）合成工藝（二）檢查1“銅鹽”檢查法2有關(guān)物質(zhì)五、 氯貝丁酯中雜質(zhì)的檢查(一) 合成工藝

59、(二) 對(duì)氯酚的檢查方法1氣相色譜法2高效液相色譜法JP (13)的方法(三) 揮發(fā)性雜質(zhì)的檢查方法 第四節(jié) 含 量 測(cè) 定 一、 酸堿滴定法（一）直接滴定法（二）水解后剩余滴定法 1阿司匹林含量測(cè)定 2羥苯乙酯含量測(cè)定（三）兩步滴定法 1阿司匹林片的含量測(cè)定 2氯貝丁酯的含量測(cè)定二 、亞硝酸鈉滴定法三、雙相滴定法四、紫外分光光度法(一)直接紫外分光光度法(二) 離子交換-紫外分光光度法(三) 柱分配色譜-紫外分光光度法 1水楊酸的限量測(cè)定 2 阿司匹林的含量測(cè)定五、高效液相色譜法(一)阿司匹林栓劑的含量測(cè)定(二)丙磺舒原料的含量測(cè)定 第五節(jié) 體內(nèi)藥物分析一、血清中阿司匹林(ASA)和水楊酸(

60、SA)濃度的高效液相色譜 測(cè)定法二、尿中丙磺舒的固相萃取凈化-高效液相色譜分析法三、 HPLC法測(cè)定人血漿中布落芬含量第七章 芳香胺類(lèi)藥物的分析 第一節(jié) 芳胺類(lèi)藥物的分析 一、對(duì)氨基苯甲酸酯類(lèi)藥物的基本結(jié)構(gòu)與主要化學(xué)性質(zhì)（一）基本結(jié)構(gòu)與典型藥物（二）主要化學(xué)性質(zhì) 1芳伯氨基特性 2水解特性 3弱酸性 4其他特性 二、酰胺類(lèi)藥物的基本結(jié)構(gòu)與主要化學(xué)性質(zhì) (一) 基本結(jié)構(gòu)與典型藥物 (二)主要化學(xué)性質(zhì) 1水解后顯芳伯氨基特性 2水解產(chǎn)物易酯化 3酚羥基的特性 4弱堿性 5與重金屬離子發(fā)生沉淀反應(yīng) 三、鑒別試驗(yàn) （一） 重氮化-偶合反應(yīng) 1苯佐卡因和鹽酸普魯卡因的鑒別方法 2對(duì)乙酰氨基酚的鑒別方法（