流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)技巧以及數(shù)據(jù)分析

1、關(guān)于流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)技巧及數(shù)據(jù)分析第一張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月BD公司不同型號(hào)流式細(xì)胞儀FACSCaliburLSRIIFACSAriaFACSCountFACSVantage&DiVaFACSCanto第二張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月一 流式細(xì)胞儀的基本原理 *穩(wěn)定流動(dòng) *激發(fā)光斑 *熒光補(bǔ)償 *熒光素選擇二 數(shù)據(jù)分析及開(kāi)窗第三張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月FCM原理示意圖第四張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 層流是液體穩(wěn)定流動(dòng)的必要條件,管道中層流 的形成要滿足雷諾數(shù) dV Re = 2300， 式中、分別為液體的密度和粘滯系數(shù)，d和V分

2、別為管道的直徑和液體的平均流速。FCM利用層流技術(shù),使細(xì)胞流動(dòng)穩(wěn)定,并具有自聚焦作用,為細(xì)胞分析分選提供技術(shù)保證. 層流技術(shù)第五張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)（示意圖） 流速與壓力的關(guān)系服從Bernoulli方程，即 P=(1/2)V2 (忽略高度的變化)。改變氣壓,就可獲得不同的流速。 第六張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第七張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 低速 高速不同樣本速率形成的樣本流第八張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月激發(fā)光源與光束成形系統(tǒng)第九張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月.20um64um32um 0 32um聚焦

3、距離激光束聚焦透鏡強(qiáng)度光束成形與細(xì)胞受照方式這種橢圓形光斑的檢測(cè)區(qū)保證每個(gè)細(xì)胞分別受到光照且受檢時(shí)受到一致的光照 FCM的單細(xì)胞照明技術(shù)第十張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第十一張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月熒光光譜重疊 FITC和PE熒光光譜重疊第十二張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月Uncompensated vs CompensatedFL1FL2 利用電子技術(shù)或計(jì)算機(jī)軟件等方法將串入相鄰熒光通道的信號(hào)加以扣除的方法稱“熒光補(bǔ)償”熒光補(bǔ)償?shù)谑龔?，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月熒光補(bǔ)償?shù)谑膹?，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月Mean值判斷補(bǔ)償

4、第十五張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月雙或多參數(shù)熒光抗體的組合標(biāo)記FITC+PE 488 525 、575 綠色、橙色FITC+T red 488 525 綠色 568 615 紅色FITC+PeCy5 488 525、 675 綠色、 紅色FITC+ ECD 488 525、 625 綠色、橙紅色F+P +PeCy5 488 525、575、675 綠、橙、紅色F+ ECD +PeCy5 488 525、575、675 綠、橙紅色、紅色F+P +PeCy5 +APC 488 525 、 575 綠色、橙色 633 670 紅色 熒光染料 激發(fā)波長(zhǎng)（nm) 發(fā)射波長(zhǎng)（nm) 顏色第十

5、六張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 用化學(xué)法將兩種不同激發(fā)波長(zhǎng)的染料結(jié)合在一起，在488nm波長(zhǎng)激發(fā)光激發(fā)后產(chǎn)生的發(fā)射波長(zhǎng)激發(fā)另一熒光染料產(chǎn)生的熒光信號(hào)。LaserCY7755PEECD620CY5670488nm能量傳遞染料：第十七張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月流式細(xì)胞術(shù)操作流程：培養(yǎng)細(xì)胞新鮮組織石蠟包埋單細(xì)胞懸液制備熒光抗體標(biāo)記上機(jī)檢測(cè)表型測(cè)定細(xì)胞分選繼續(xù)培養(yǎng)FISHPCR統(tǒng)計(jì)學(xué)分析第十八張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月單分散細(xì)胞第十九張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月FSCFSC信號(hào)的強(qiáng)弱與細(xì)胞的大小和活力相關(guān)第二十張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于20

6、22年6月SSCSSC信號(hào)的強(qiáng)弱與細(xì)胞內(nèi)顆粒多少相關(guān)第二十一張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞散色光信號(hào)第二十二張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞熒光測(cè)量細(xì)胞的自發(fā)熒光 未經(jīng)染色的樣品細(xì)胞 在激發(fā)光的照射下可測(cè)到有微弱的熒 光信號(hào).細(xì)胞的特異性熒光 經(jīng)過(guò)各種特異染色的 細(xì)胞在激發(fā)光的照射下可測(cè)到較強(qiáng)的熒光 信號(hào).第二十三張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月自發(fā)熒光信號(hào)與特異染色的熒光信號(hào)分析圖自發(fā)熒光信號(hào)第二十四張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月特異染色的熒光信號(hào)第二十五張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月DNA分析比較第二十六張，PPT共五十二頁(yè)，

7、創(chuàng)作于2022年6月排除雙聯(lián)體細(xì)胞第二十七張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞阻滯在G2M期第二十八張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月雙克隆細(xì)胞周期分析第二十九張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 溴脫氧尿嘧啶核苷( Bromodeoxyuridine， BrdUrd )是胸苷的一種類似物。它可以替代胸腺嘧啶摻入到細(xì)胞新合成的DNA分子中，成為S期細(xì)胞的一種標(biāo)記物。流式細(xì)胞術(shù)采用抗BrdUrd單克隆抗體免疫熒光和PI雙參數(shù)檢測(cè)細(xì)胞，不僅可檢測(cè)一個(gè)細(xì)胞群體的動(dòng)力學(xué)參數(shù)和DNA含量，同時(shí)可以了解不同細(xì)胞的DNA合成能力高低。 BrdUrd和DNA雙標(biāo)記染色第三十張，PPT共

8、五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第三十一張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月BrdUrd與PI檢測(cè)第三十二張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月BrdUrd與PI檢測(cè)第三十三張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月BrdUrd與PI檢測(cè)第三十四張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞三色熒光檢測(cè)第三十五張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞因子測(cè)定*檢測(cè)T細(xì)胞(CD69)活化第三十六張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月G6=R1*R5第三十七張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月*CD4抗原分子結(jié)構(gòu)引起CD4熒光強(qiáng)度下調(diào)第三十八張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于20

9、22年6月細(xì)胞因子分析圖*過(guò)敏性鼻息肉與鼻息肉細(xì)胞因子比較第三十九張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月純化單核細(xì)胞第四十張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月調(diào)節(jié)性T細(xì)胞檢測(cè)第四十一張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第四十二張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月G3=R1*R3G4=R1*R4第四十三張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月凋亡細(xì)胞測(cè)定第四十四張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月凋亡細(xì)胞測(cè)定第四十五張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞凋亡檢測(cè)第四十六張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月陰性的設(shè)置第四十七張，PPT共五十二頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月血小板檢測(cè)第四十