植物組織培養(yǎng)第三章植物器官與組織培養(yǎng)

1、關(guān)于植物組織培養(yǎng)第三章植物器官和組織培養(yǎng)第一張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月組織培養(yǎng)步驟圖第二張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（1）準(zhǔn)備階段 查閱相關(guān)文獻(xiàn)，根據(jù)已成功培養(yǎng)的相近植物資料，結(jié)合實(shí)際制定出切實(shí)可行的培養(yǎng)方案。 根據(jù)實(shí)驗(yàn)方案配制適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)消毒劑以及不同培養(yǎng)階段所需的培養(yǎng)基，并經(jīng)高壓滅菌或過(guò)濾除菌后備用。（2）外植體的選擇與消毒 選擇合適的部位作為外植體，采回后經(jīng)過(guò)處理，然后進(jìn)行消毒處理。 將消毒后的外植體在無(wú)菌條件下切割成一定大小的小塊，或剝離出莖尖、挑出花藥，接種到啟動(dòng)培養(yǎng)基上。第三張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（3）啟動(dòng)培養(yǎng) 接種后的材料置于培養(yǎng)室

2、或光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，促使外植體中已分化的細(xì)胞脫分化形成愈傷組織，或頂芽、腋芽直接萌發(fā)形成芽。 將愈傷組織轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基分化成不同的器官原基或形成胚狀體，最后發(fā)育形成再生植株。（4）增殖培養(yǎng) 分化形成的芽、原球莖數(shù)量有限，采用適當(dāng)?shù)脑鲋撑囵B(yǎng)基經(jīng)反復(fù)多次切割轉(zhuǎn)接。 當(dāng)芽苗繁殖到一定數(shù)量后，再將一部分用于壯苗生根，另一部分保存或繼續(xù)擴(kuò)繁。進(jìn)行脫毒苗培養(yǎng)的還要進(jìn)行病毒檢測(cè)。 第四張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（5）生根培養(yǎng) 剛形成的芽苗往往比較弱小，多數(shù)無(wú)根，此時(shí)可降低或不加細(xì)胞分裂素濃度，提高生長(zhǎng)素濃度，促進(jìn)芽苗生根，提高其健壯度。（6）煉苗移栽 選擇生長(zhǎng)健壯，有35條根的生根苗進(jìn)行煉

3、苗，移栽到疏松透氣的基質(zhì)中，注意保溫、保濕、遮蔭。當(dāng)苗完全成活后，再移向大田。第五張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月擬定培養(yǎng)方案外植體預(yù)處理外植體無(wú)菌接種啟動(dòng)培養(yǎng)分化出芽、胚狀體或原球莖繼代增殖培養(yǎng)生根培養(yǎng)煉苗移栽成活供生產(chǎn)使用植物組織培養(yǎng)的一般程序 培養(yǎng)基配制滅菌第六張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第一節(jié) 植物器官和組織培養(yǎng)的基本程序無(wú)菌外植體的獲得初代培養(yǎng)物的建立 形態(tài)發(fā)生和植株再生培養(yǎng)產(chǎn)物的觀察記載第七張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月無(wú)菌外植體的獲得（一）莖尖、莖段、葉片的滅菌 清水沖洗，吸干0.1-0.2%氯化汞浸泡2-10min，（70%酒精浸泡數(shù)秒，10

4、%次氯酸鈣浸泡10-20min或2%次氯酸鈉浸泡15-30min）滅菌水沖洗3-5次無(wú)菌濾紙吸干分割接種。（二）根、塊莖、鱗莖的滅菌生長(zhǎng)在土中，滅菌困難，以受損傷。滅菌前仔細(xì)清洗，加大滅菌劑濃度或延長(zhǎng)滅菌時(shí)間。第八張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月無(wú)菌外植體的獲得（三）花蕾的滅菌 未開(kāi)放的花蕾中的花藥為花被包裹，處于無(wú)菌狀態(tài)，采摘后可直接滅菌。 70%酒精浸泡10-30s0.1-0.2%氯化汞浸泡3-10min，（或1%次氯酸鈉浸泡10-20min）滅菌水沖洗3-5次無(wú)菌濾紙吸干分割接種。（四）果實(shí)和種子的滅菌 表皮有茸毛或蠟質(zhì)，需在滅菌劑中加入幾滴土溫-80。 果實(shí)70%酒精浸泡數(shù)秒

5、0.1-0.2%氯化汞浸泡3-10min，（或1%次氯酸鈉浸泡10-20min）滅菌水沖洗3-5次無(wú)菌濾紙吸干分割接種。第九張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月初代培養(yǎng)物的建立（一）無(wú)菌環(huán)境 培養(yǎng)基、接種器械、超凈工作臺(tái)、接種室環(huán)境、抗生素物質(zhì)（去除侵入組織內(nèi)部的病菌。見(jiàn)表）（二）規(guī)范操作 操作技術(shù)熟練、工作經(jīng)驗(yàn)、操作者、進(jìn)入超凈工作臺(tái)的物品表面。（三）條件合適 培養(yǎng)基種類、激素種類和濃度、其他添加物、外植體來(lái)源、生長(zhǎng)發(fā)育狀態(tài)、培養(yǎng)條件。第十張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月形態(tài)發(fā)生和植株再生建立的無(wú)菌培養(yǎng)物在適宜的離體環(huán)境中，生長(zhǎng)發(fā)育（形態(tài)發(fā)生）形成完整的小植株。離體材料的形態(tài)

6、發(fā)生的途徑：器官發(fā)生體細(xì)胞胚胎發(fā)生第十一張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月形態(tài)發(fā)生和植株再生器官發(fā)生：芽或芽原基起源于培養(yǎng)組織中比較表層的細(xì)胞，即外起源。根原基發(fā)生在組織較深處，即內(nèi)起源。兩者之間一般沒(méi)有什么聯(lián)系，呈現(xiàn)單向極性。胚狀體發(fā)生：極大多數(shù)體細(xì)胞胚起源于單細(xì)胞，形成的胚狀體具有雙極性，在其發(fā)育的早期階段，在方向相反的兩端分化出莖端和根端，其維管組織與母體植物或外植體的維管組織通常沒(méi)有聯(lián)系。胚狀體維管組織呈獨(dú)立的Y形。第十二張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 外植體形態(tài)發(fā)生形成完整植株的途徑（一）外植體-愈傷組織-完整植株。 具體又可分為三種： 1、愈傷組織-同時(shí)長(zhǎng)芽和根

7、-植株。2、愈傷組織-莖-根-植株。3、愈傷組織-根-芽-植株。4、愈傷組織-體細(xì)胞胚-植株第十三張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（二）外植體-胚狀體-植株?？蓮囊韵聨追N培養(yǎng)物中產(chǎn)生：1、器官上發(fā)生。2、愈傷組織上發(fā)生。3、游離單細(xì)胞發(fā)生。4、小孢子發(fā)生。 誘導(dǎo)胚狀體比誘導(dǎo)芽數(shù)量多、速度快、結(jié)構(gòu)完整。 （三）外植體-直接形成根與芽-植株。如莖尖培養(yǎng) 第十四張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第十五張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月培養(yǎng)產(chǎn)物的觀察與記載（一）愈傷組織誘導(dǎo)率=產(chǎn)生愈傷組織的外植體數(shù)/外植體總數(shù)100%生長(zhǎng)量=培養(yǎng)一段時(shí)間后愈傷組織干重或鮮重-接種時(shí)愈傷組織的

8、干重或鮮重（二）胚狀體胚狀體誘導(dǎo)率=產(chǎn)生胚狀體的外植體數(shù)/外植體總數(shù)100%（三）芽芽分化數(shù)=產(chǎn)生芽的外植體數(shù)/外植體總數(shù)100%（四）根發(fā)根率=發(fā)根芽數(shù)/培養(yǎng)芽數(shù)每個(gè)材料平均發(fā)根數(shù)第十六張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第二節(jié) 植物營(yíng)養(yǎng)器官培養(yǎng)植物根段培養(yǎng)植物莖段培養(yǎng)植物葉培養(yǎng)第十七張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月一、離體根的培養(yǎng) 植物根段培養(yǎng)是指以植物的根切段為外植體進(jìn)行培養(yǎng)的技術(shù)。（一）根無(wú)性系的建立來(lái)自無(wú)菌種子發(fā)芽產(chǎn)生的幼根切段或植物根系經(jīng)滅菌處理后的切段，可以以兩種方式進(jìn)行培養(yǎng)，建立根的無(wú)性繁殖系。 第十八張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月1、根的直接增殖1

9、）根無(wú)性繁殖系的建立 將種子進(jìn)行表面消毒，在無(wú)菌條件下進(jìn)行無(wú)菌萌發(fā)，待根伸長(zhǎng)后從根尖一段切取長(zhǎng)1.0cm的根尖，接種培養(yǎng)基中。 這些根的培養(yǎng)生長(zhǎng)很快，番茄根每天約生長(zhǎng)10mm，幾天后發(fā)育出側(cè)根。待側(cè)根生長(zhǎng)約一周后，即可切取側(cè)根的根尖進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，它們又迅速生長(zhǎng)出側(cè)根，又可切下進(jìn)行培養(yǎng)，如此反復(fù)，就可得到從單個(gè)根尖衍生而來(lái)的離體根的無(wú)性系。 2）培養(yǎng)條件：黑暗培養(yǎng)，溫度為2527一、離體根的培養(yǎng) 第十九張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3）培養(yǎng)基 離體根培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基很多，多為無(wú)機(jī)離子濃度低的White培養(yǎng)基，其他培養(yǎng)基如MS、B5培養(yǎng)基等也可采用，但必須將其離子濃度稀釋到2/3或1/

10、2。一、離體根的培養(yǎng) 第二十張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月一、離體根的培養(yǎng) 4）培養(yǎng)方式 離體根的培養(yǎng)方式有三種類型。 第一種固體培養(yǎng)法，即將根尖接種在固體培養(yǎng)基上，根依靠培養(yǎng)基中的養(yǎng)分和生長(zhǎng)物質(zhì)而不斷生長(zhǎng)。 第二種是液體培養(yǎng)法，把根尖接種在無(wú)瓊脂的液體培養(yǎng)基中，經(jīng)常振蕩使根獲得充足的氧氣。 第三種是固體-液體培養(yǎng)法，就是把根基部插入固體瓊脂培養(yǎng)基中，根尖浸在液體培養(yǎng)基中，根尖生長(zhǎng)而根不斷的伸長(zhǎng)和分枝。 第二十一張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2、根的間接增殖第一步在脫分化培養(yǎng)基上誘導(dǎo)形成愈傷組織，如胡楊的根段培養(yǎng)，可誘導(dǎo)形成白色愈傷組織。第二步在再分化培養(yǎng)基上誘導(dǎo)形成芽

11、的分化，如胡楊從綠色愈傷組織分化出小植株。一、離體根的培養(yǎng) 第二十二張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月胡蘿卜根培養(yǎng)第二十三張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（二） 離體根生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)要求1、無(wú)機(jī)成分 要求培養(yǎng)基中有全部必要元素，因?yàn)樗请x體生長(zhǎng)所需要的，一般的為MS、B5培養(yǎng)基。2、氮源 氮源有銨態(tài)氮、硝態(tài)氮和可溶性有機(jī)氮如氨基酸或酰胺等，其中以硝態(tài)氮的效果最好。加入含各種氨基酸的水解酪蛋白，能促進(jìn)離體根的生長(zhǎng)。一、離體根的培養(yǎng) 第二十四張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3、碳源 以蔗糖的效果最佳，幾乎為葡萄糖的10倍。蔗糖的濃度為23%。4、維生素 維生素以B1和B6最

12、為重要，缺少它根的生長(zhǎng)受到阻礙，而加入它可使根的生長(zhǎng)成倍的加快。B1的使用濃度為0.1-1.0mg/L為宜。5、生長(zhǎng)物質(zhì) 對(duì)離體根的生長(zhǎng)而言，生長(zhǎng)素的效應(yīng)最為明顯，在一般情況，加入適量的生長(zhǎng)素能促進(jìn)根的生長(zhǎng)，其反應(yīng)和需要量因植物種而異：6、溫度和光照 黑暗有利于根的形成，溫度一般在16-257、PH 根發(fā)生和生長(zhǎng)所需的PH范圍一般為5.0-6.0一、離體根的培養(yǎng) 第二十五張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月二、莖段培養(yǎng)莖段培養(yǎng)是指對(duì)植物的帶有一個(gè)以上定芽或不定芽的外植體（包括塊莖、球莖、鱗莖等在內(nèi)的幼莖切段）的無(wú)菌培養(yǎng)。目的:1、快速繁殖，2、探討莖細(xì)胞的分裂潛力和全能性，以及誘發(fā)細(xì)胞變

13、異，篩選突變體。我們主要是介紹用于快速繁殖為目的的莖段培養(yǎng)。 第二十六張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月莖段 莖尖取材有限，可采用帶節(jié)或不定牙的莖段進(jìn)行培養(yǎng)。第二十七張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月莖段培養(yǎng)用于快速繁殖的優(yōu)點(diǎn)培養(yǎng)技術(shù)簡(jiǎn)單易行，繁殖速度較快，每年可增殖105-1012株苗；加速良種和珍貴植物的繁殖，芽生芽方式增殖的苗木質(zhì)量好，且無(wú)病，性狀均一；解決不能用種子繁殖的無(wú)性繁殖植物的快速繁殖的問(wèn)題，且可節(jié)省種株；試管苗便于運(yùn)輸和防止種苗帶菌傳播，有利于國(guó)際種質(zhì)交流；試管苗可用于保存某些難以用種子保存的種質(zhì)資源。第二十八張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月Mura

14、shige(1974)曾提出用組織培養(yǎng)法進(jìn)行植物快速繁殖三個(gè)階段的概念，第一階段外植體成苗；第二階段繁殖體增殖；第三階段移植于土壤中長(zhǎng)根。這三個(gè)階段對(duì)于不同植物來(lái)說(shuō)有不同的反應(yīng)，應(yīng)用于草本植物是成功的，但對(duì)木本植物來(lái)說(shuō)，最大的困難是第三個(gè)階段。第二十九張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月1、無(wú)菌苗的建立目的：從所取用的外植體誘發(fā)芽的形成，以獲得無(wú)菌苗?？赡苡兴姆N不同結(jié)果：一是得到單生芽，二是得到叢生芽：細(xì)胞分裂素水平高時(shí)三是得到長(zhǎng)根的完整植株。四是得到愈傷組織：生長(zhǎng)素水平較高時(shí)作為快速繁殖而言，我們希望屬于第一、第二結(jié)果，它有利于提高繁殖系數(shù)，加速繁殖速度。第三十張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)

15、作于2022年6月2、無(wú)菌苗的增殖增殖的途徑 一是誘導(dǎo)形成大量的胚狀體二是誘導(dǎo)形成大量的不定芽三是促進(jìn)腋芽的快速形成。第三十一張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2、無(wú)菌苗的增殖優(yōu)缺點(diǎn)：第一、二種途徑的好處是增殖速度快，但會(huì)產(chǎn)生變異，第三種途徑的好處是不會(huì)產(chǎn)生變異，能保持品種優(yōu)良特性，且方法簡(jiǎn)便，可在各種植物上使用，但增殖速度不如前二者。若用于育種，以第一、第二種途徑有利，而用于良種快速增殖，以第三種途徑有利，主要是要保證良種的優(yōu)良品性，不產(chǎn)生變異。目前已廣泛采用，每年每個(gè)芽可增殖10萬(wàn)株乃至上百萬(wàn)株。 第三十二張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月腋芽增殖的原理 高等植物的每個(gè)葉腋

16、中都有腋芽存在，通常由于頂芽的存在，頂端優(yōu)勢(shì)阻止腋芽的生長(zhǎng)，但在一定的條件下可以使它生長(zhǎng)，如除去頂芽或使用生長(zhǎng)激素，可以解除頂端優(yōu)勢(shì)，腋芽便不斷分化和生長(zhǎng)，逐漸形成芽叢。 若反復(fù)切割這些腋芽和移植到新的培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)，就可在短期內(nèi)得到大量的芽。第三十三張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月影響增殖成功的關(guān)鍵因素A、細(xì)胞分裂素 在腋芽增殖上的主要措施是用細(xì)胞分裂素抑制頂端優(yōu)勢(shì)，促進(jìn)腋芽生長(zhǎng)發(fā)育，所以在這一階段培養(yǎng)基中添加細(xì)胞分裂素是必須的。 實(shí)踐證實(shí)，除個(gè)別的例子外，加入細(xì)胞分裂素是行之有效的。6-BA對(duì)促進(jìn)腋芽增殖是最有效，依次為KIN和2ip。一般濃度在0.25mg/l以上，少數(shù)用1.

17、0mg/L，個(gè)別的用5mg/L。第三十四張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月B、生長(zhǎng)素 生長(zhǎng)素雖不能促進(jìn)腋芽增殖，但可改善苗的生長(zhǎng)，因此，許多種植物也都加入一定的生長(zhǎng)素類物質(zhì)。其中使用最多的是NAA，依次為IBA、IAA和2，4-D，它們的使用濃度多為0.5mg/L以下。影響成功的關(guān)鍵因素第三十五張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月C、GA GA對(duì)芽的伸長(zhǎng)有促進(jìn)作用，故常加入少量的GA，使用濃度為0.5mg/L。 D、光照 光照條件也十分重要，這一階段必須保持適當(dāng)?shù)墓庵芷?16小時(shí)光照)和光強(qiáng)(2000-3000Lux)，以利芽的再生和生長(zhǎng)。影響成功的關(guān)鍵因素第三十六張，PPT共九

18、十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3、無(wú)菌苗的生根這個(gè)階段的目的是使再生的大量試管苗形成根系，獲得完整的植株，在前兩階段以長(zhǎng)苗為目的，使用的生長(zhǎng)激素往往不利于生根的發(fā)生和生長(zhǎng)，因此在這個(gè)階段，必須創(chuàng)造一個(gè)適于根的發(fā)生和生長(zhǎng)的條件。主要是降低或除去細(xì)胞分裂素，而加入或增加生長(zhǎng)素。第三十七張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月影響生根成功的關(guān)鍵因素培養(yǎng)基的鹽濃度 試管苗的生根，對(duì)基本培養(yǎng)基的種類要求不嚴(yán)，一般的培養(yǎng)基都可用于誘導(dǎo)生根，但對(duì)其含鹽濃度要適量加以稀釋。前面的幾種培養(yǎng)基中，除White培養(yǎng)基外，都富含N、P、K鹽，它們都抑制根的發(fā)生。因此，應(yīng)將它們降低到1/2、1/3或1/4，甚至更低的水

19、平。就可得到理想的生根結(jié)果。第三十八張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月生長(zhǎng)素的濃度 細(xì)胞分裂素同生長(zhǎng)素的比值大于1時(shí)，有利于芽的產(chǎn)生和生長(zhǎng)；比值小于1時(shí)，則有利于根的產(chǎn)生和生長(zhǎng)。 由于在苗增殖時(shí)施用了較高濃度的細(xì)胞分裂素，其苗中尚保持著一定的量，因此在生根培養(yǎng)時(shí)一般不需要添加細(xì)胞分裂素，或者仍使用較低濃度的細(xì)胞分裂素，如降低到0.02mg/L以下。 生長(zhǎng)素是必須的，且需要較高的濃度。使用的生長(zhǎng)素類物質(zhì)最多的是NAA，依次為IBA、IAA、2，4-D。生長(zhǎng)素的濃度，NAA一般是0.1-1.0mg/l不等。IBA和IAA可稍高些 。第三十九張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月光照和溫

20、度條件 增強(qiáng)光照有利于發(fā)根，且對(duì)成功地移栽到盆缽中有良好作用，故在生根培養(yǎng)時(shí)應(yīng)增加光照時(shí)間和光照強(qiáng)度。但強(qiáng)光直接照射根部會(huì)抑制根的生長(zhǎng)，所以在生根培養(yǎng)基時(shí)最好在培養(yǎng)基中加入0.3%的活性碳，可促進(jìn)生長(zhǎng)。第四十張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月4、試管苗的移植 1）盆土的準(zhǔn)備 土最好是經(jīng)過(guò)干熱滅菌、高溫高壓滅菌，或者用福爾馬林（5%）或（0.3%）硫酸銅稀釋液噴灑在土壤中，然后用塑料布覆蓋一周，在翻動(dòng)土，讓其溶液氣味揮發(fā)掉。 為了有利于試管苗根系的發(fā)育，要求移栽土疏松，因此與1/21/3的草木灰混合起來(lái)作為移植的介質(zhì)。也可以用山土和腐熟過(guò)的木屑或其它通氣良好的介質(zhì)。第四十一張，PPT共九

21、十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2）遮蔭和加熱設(shè)備的準(zhǔn)備 試管苗在冬天或夏天移栽時(shí)，最初的幾天里要注意溫度與日照的變化不能有急劇的變化，溫度最好與培養(yǎng)室的溫度一致或接近。 光也不能直射，主要因?yàn)橹仓甑母颠€未得到重新發(fā)育。夏天溫度過(guò)高，造成植株萎蔫，冬天溫度太低導(dǎo)致植株死亡。第四十二張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3）煉苗 將試管苗容器口的塞子或紙去掉，并在培養(yǎng)室中放置1天。從培養(yǎng)室移至常溫條件下放置幾天，要注意不要染菌。 第四十三張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月4）移栽 將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，小心操作，勿把根系損壞。然后洗凈根部的培養(yǎng)基。在盆土中開(kāi)一穴，將植株栽下，最好將根

22、鋪展開(kāi)，種植不要過(guò)深，也不能過(guò)淺，不要用手用力壓土，以免造成根系的損傷。第四十四張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月5、移栽后管理 土壤要保持疏松，通氣要好，這樣有利于根系的發(fā)育。 水分的控制要得當(dāng)，移栽后第一次澆水要澆透，且勿出現(xiàn)上濕下干現(xiàn)象。第一次澆水最好采用滲水的方式，即將剛移栽的盆放在裝有水的盆中，讓水從盆底逐漸滲上來(lái)，水在盆面出現(xiàn)既可。平時(shí)要勤觀察，保持土壤濕潤(rùn)。 濕度控制要適當(dāng)大一些，對(duì)試管苗的恢復(fù)發(fā)育和根系的形成有好處。因而要在盆口用玻璃器皿或塑料布罩上。這樣有利于保證濕度，但是也要注意通風(fēng)，防止發(fā)霉而事得其反 第四十五張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 溫度 夏天

23、要讓試管苗在陰涼的地方進(jìn)行過(guò)渡，冬天要在溫室中過(guò)渡一段時(shí)間，以免溫度過(guò)高或過(guò)低導(dǎo)致試管苗的死亡。 光照 剛移栽的試管苗且勿在陽(yáng)光下。 注意天氣變化，試管苗應(yīng)移栽在無(wú)風(fēng)的地方，移栽初期應(yīng)避免大的風(fēng)雨的襲擊。第四十六張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月三、離體葉的培養(yǎng)離體葉培養(yǎng)是指包括葉原基、葉柄、葉鞘、葉片、子葉在內(nèi)的葉組織的無(wú)菌培養(yǎng) 。再生植株的方式有兩種：一種是直接誘導(dǎo)形成芽或胚狀體，另一種是先誘導(dǎo)形成愈傷組織，再經(jīng)愈傷組織分化成植株。葉培養(yǎng)的結(jié)果：芽或胚狀體；愈傷組織；成熟葉第四十七張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第四十八張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月葉的離體培

24、養(yǎng)技術(shù) 1、材料滅菌 取干凈幼嫩的葉，用70%酒精漂洗10秒鐘，再在飽和漂白粉中浸815分鐘，用無(wú)菌水沖洗數(shù)次，再把葉子夾放在無(wú)菌干濾紙上吸干水份，供接種用。 注意粗糙的或帶絨毛的葉較難除菌，應(yīng)在消毒液中加入一滴吐溫(一種表面活化劑)，時(shí)間應(yīng)適當(dāng)?shù)难娱L(zhǎng)。 第四十九張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2、接種 把消毒過(guò)的葉組織切成約0.2cm2小塊或薄片，接種在MS培養(yǎng)基或其它常用的培養(yǎng)基中，附加足夠量的生長(zhǎng)素(如2，4-D2mg/L)或細(xì)胞分裂素(如0.2mg/L6-BA)。第五十張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3、培養(yǎng) 葉接種物應(yīng)放在25，每天10小時(shí)的光照，光強(qiáng)約15002

25、000LUX的培養(yǎng)室中培養(yǎng)。培養(yǎng)約經(jīng)兩周至月余，葉切口乃至切塊開(kāi)始增厚腫大，進(jìn)而形成愈傷組織。 這時(shí)應(yīng)轉(zhuǎn)移到含細(xì)胞分裂素約2mg/L的再分化培養(yǎng)基上進(jìn)行分化培養(yǎng)，約經(jīng)10天愈傷組織開(kāi)始轉(zhuǎn)綠，因而出現(xiàn)綠色芽點(diǎn)，它們將發(fā)育成苗。 若在分化培養(yǎng)基上不長(zhǎng)根，還需將苗移至NAA0.5mg/L的生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根，從而發(fā)育成完整的植株。第五十一張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月葉片愈傷組織誘導(dǎo)形成第五十二張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月4、培養(yǎng)中應(yīng)注意的問(wèn)題 首先要選用易培養(yǎng)成功的葉組織，如幼嫩葉比成熟葉易培養(yǎng)，子葉比葉片易于培養(yǎng)。 其次要添加適當(dāng)種類和數(shù)量的生長(zhǎng)激素，葉的培養(yǎng)比胚、莖

26、尖、莖段培養(yǎng)難度大，因此生長(zhǎng)激素的選用是十分重要的，往往以多種生長(zhǎng)素或多種細(xì)胞分裂素的配合使用，較有利于葉組織的脫分化和再分化。如水稻葉片單用2，4-D效果差，而2，4-D、NAA、IAA等三種生長(zhǎng)素以4:2:1(mg/L)的比例配合使用，有利于愈傷組織形成。第五十三張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第三節(jié) 植物繁殖器官培養(yǎng)植物花器官培養(yǎng)植物幼果培養(yǎng)植物種子培養(yǎng)第五十四張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月植物花器官培養(yǎng)植物的花器官培養(yǎng)：對(duì)植物的整朵花或花的組成部分（花托、花柄、花瓣、花絲、子房、花藥、胚珠等）進(jìn)行離體培養(yǎng)的技術(shù)。將未開(kāi)放的花蕾、花柄、花瓣、花托等組織經(jīng)過(guò)滅菌處理或

27、適當(dāng)切割后，在適宜條件下進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)結(jié)果可能有：成熟果實(shí)、不定芽或叢生芽、愈傷組織 第五十五張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月植物幼果培養(yǎng)植物幼果培養(yǎng)：對(duì)植物不同發(fā)育時(shí)期的幼小果實(shí)進(jìn)行離體培養(yǎng)的技術(shù)。經(jīng)過(guò)滅菌處理后，在適宜條件下進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)結(jié)果可能有：成熟果實(shí)、愈傷組織 第五十六張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月植物種子培養(yǎng)植物種子培養(yǎng)：對(duì)受精后發(fā)育不全的未成熟種子和發(fā)育完全的成熟種子實(shí)進(jìn)行離體培養(yǎng)的技術(shù)。經(jīng)過(guò)滅菌處理后，在適宜條件下進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)結(jié)果可能有：小植株、愈傷組織、叢生芽或不定芽。對(duì)糖濃度要求一般較低，為1-3%。 第五十七張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年

28、6月第四節(jié) 植物組織培養(yǎng)植物分生組織培養(yǎng)植物愈傷組織培養(yǎng)植物薄層組織培養(yǎng)第五十八張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 植物分生組織培養(yǎng)是指對(duì)植物的分生組織進(jìn)行離體培養(yǎng)的技術(shù)，包括植物根尖、莖尖等頂端分生組織和形成層組織的培養(yǎng)。 莖尖培養(yǎng)：對(duì)植物頂端的原分生組織和它衍生的分生組織的培養(yǎng)。 莖尖組織經(jīng)過(guò)適當(dāng)培養(yǎng)后，可能發(fā)育的方向?yàn)椋貉棵劝l(fā)、產(chǎn)生胚狀體、產(chǎn)生不定器官、形成愈傷組織。 植物分生組織的培養(yǎng)第五十九張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月植物愈傷組織培養(yǎng)植物愈傷組織培養(yǎng)：誘導(dǎo)植物外植體產(chǎn)生無(wú)序生長(zhǎng)的薄壁細(xì)胞及對(duì)其培養(yǎng)的技術(shù)。植物的各種器官及組織，經(jīng)培養(yǎng)都可產(chǎn)生愈傷組織，并能不斷繼代

29、繁殖。一般薄壁細(xì)胞和形成層容易形成愈傷組織，愈傷組織的質(zhì)地差異很大，有的緊密堅(jiān)實(shí)，有的疏松柔軟。第六十張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月植物愈傷組織培養(yǎng)致密堅(jiān)實(shí)的愈傷組織內(nèi)無(wú)大的細(xì)胞間隙，由管狀分子組成維管組織；疏松柔軟的愈傷組織有大量的大細(xì)胞間隙，細(xì)胞排列無(wú)序。兩種質(zhì)地的愈傷組織可以利用生長(zhǎng)素進(jìn)行轉(zhuǎn)換，即高濃度生長(zhǎng)素變致密堅(jiān)實(shí)愈傷組織為疏松柔軟。愈傷組織通常在黑暗或弱光下進(jìn)行，溫度為25第六十一張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月莖尖分生組織培養(yǎng)莖尖分生組織培養(yǎng)僅指長(zhǎng)度不超過(guò)0.1mm莖尖的頂端圓錐區(qū)的培養(yǎng)，這么小的外植體是不易培養(yǎng)成功的，因此只有在用于某些植物獲得無(wú)病原體的植

30、物才采用，而一般都采用較大的帶一個(gè)和幾個(gè)葉原基的莖尖培養(yǎng)。第六十二張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月能得到無(wú)病毒的植株的主要原因是：病毒侵染植株后，通過(guò)胞間連絲轉(zhuǎn)移到其他細(xì)胞中，或依靠篩管進(jìn)行轉(zhuǎn)移。因此，病毒在患病植株上的分布是不均勻的，即老的成熟器官中病毒含量高，幼嫩未成熟的器官中病毒含量較低而莖尖分生組織，在細(xì)胞沒(méi)有充分分化以前不受侵染，故幾乎不帶病毒。 第六十三張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月1、培養(yǎng)技術(shù)莖尖組織的分離 從未發(fā)病植株上，取正在生長(zhǎng)的頂芽、萌發(fā)芽和球莖的中心芽。材料用70%的酒精浸沒(méi)幾秒到數(shù)十秒鐘，再在稀釋20倍的次氯酸鈉中浸510分鐘，用無(wú)菌水沖洗數(shù)次后

31、，供組織分離用。第六十四張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月在無(wú)菌條件下進(jìn)行無(wú)菌操作，把芽放在解剖鏡下，用鑷子、刀子、解剖針等工具，逐層把芽外面的幼葉和葉原基除去，使生長(zhǎng)點(diǎn)露出，這時(shí)要細(xì)心，不要弄傷頂端圓錐體，用利刃切下含有12個(gè)葉原基的0.1-0.2mm長(zhǎng)的生長(zhǎng)點(diǎn)，然后接種到瓊脂培養(yǎng)基上，切取生長(zhǎng)點(diǎn)的大小，是培養(yǎng)能否取得成功的關(guān)鍵，原則是在生長(zhǎng)點(diǎn)不帶病毒的情況下，盡量取稍大些的生長(zhǎng)點(diǎn)，這樣易于培養(yǎng)成功。 第六十五張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月培養(yǎng)：常用的培養(yǎng)基有White(1943)，Morel(1995)，MS培養(yǎng)基等等。2，4-D，IAA，NAA等生長(zhǎng)素是必須的，它們能

32、有效地促進(jìn)芽的生長(zhǎng)發(fā)育，但是濃度并能太高，一般用0.1mg/l左右即可，高于1.0mg/L，往往產(chǎn)生畸變芽或形成愈傷組織。接種后的生長(zhǎng)點(diǎn)，在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)很慢，再生植株往往需要幾個(gè)月甚至一年以上。因此，注意滿足其培養(yǎng)條件是十分重要的。生長(zhǎng)點(diǎn)培養(yǎng)要求2427的溫度，最好給以日夜溫差，適當(dāng)?shù)墓庵芷诤凸?。由于培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，應(yīng)注意培養(yǎng)基保濕，一般可用防濕的鋁箔或塑料薄膜包裹解決。 第六十六張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月莖尖經(jīng)過(guò)適當(dāng)培養(yǎng)后，可能發(fā)育的方向?yàn)椋?芽萌發(fā)； 產(chǎn)生胚狀體； 產(chǎn)生不定器官； 形成愈傷組織第六十七張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月脫毒試管苗植物的移植嫁接扦插法 把試

33、管苗剪下，先嫁接在砧(zhen)木上，然后再扦插成活，最后長(zhǎng)成植株。移植法 當(dāng)試管苗長(zhǎng)到數(shù)厘米和形成較多的根系時(shí)，打開(kāi)試管蓋，放在室內(nèi)窗口處煉苗23天。然后小心取出苗，洗去根上的瓊脂以免滋生細(xì)菌，再移栽至小花盆中。第六十八張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月病毒植物的鑒定第六十九張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（一）指示植物(indmatingplant)法 利用病毒在其他植物上產(chǎn)生的枯斑作為鑒別病毒種類的方法，就是枯斑和空斑的測(cè)定法。這種專門(mén)選用以產(chǎn)生局部病斑的寄主即為指示植物，又稱鑒別寄主。它只能鑒定靠汁液傳染的病毒。最早是美國(guó)的病毒學(xué)家Holmes 1929年發(fā)現(xiàn)的。他用

34、感染TMV的昔通煙葉的粗汁液和少許金剛砂相混合，然后在煙葉子上摩擦23d后葉片止出現(xiàn)了局部壞死斑。在一定范圍內(nèi)，枯斑與侵染性病毒的濃度成正比。這種方法條件簡(jiǎn)單，操作方便，故一直沿用至今，仍為一種經(jīng)濟(jì)而有效的鑒定方法?？莅叻ú荒軠y(cè)出病毒總的核蛋白濃度，而只能測(cè)出病毒的相對(duì)感染力。第七十張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（二）抗血清(antisemm)鑒定法 用已知抗血清可以鑒定未知病毒的種類。這種抗血清就是高度專一性的試劑，這種方法特異性高，測(cè)定速度快，一般幾小時(shí)甚至幾分鐘就可以完成。所以抗血清法成為植物病毒鑒定中最有用的方法之一。 第七十一張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月由于

35、人的眼睛難以觀察小于0.1mm的微粒，而借助于普通光學(xué)顯微鏡也只能看到小至200bm的微粒，所以只有通過(guò)電子顯微鏡才能分辨0.5m大小的病毒顆粒。這樣采用電子顯微鏡既可以直接觀察病毒，檢查出有無(wú)病毒存在，了解病毒顆粒的大小、形狀和結(jié)構(gòu)，又可以鑒定病毒的種類。這是一種較為先進(jìn)的方法，但需一定的設(shè)備和技術(shù)。 這一方法的優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高和能在植物粗提取液中定量測(cè)定病毒。（三）電子顯微鏡(elecmc microscope)檢查法第七十二張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月酶聯(lián)免疫法是指采用酶標(biāo)記抗原或抗體的定量測(cè)定法。將抗原固定在支持物上，加入待檢血清，然后加入酶(過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶)標(biāo)記的

36、抗體，使待檢血清中與對(duì)應(yīng)抗原的特異性抗體結(jié)合，最后用特殊分光光度計(jì)測(cè)定。此法是現(xiàn)在靈敏度較高和常使用的方法。 （四）酶聯(lián)免疫鑒定法第七十三張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第七十四張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月一、無(wú)病毒苗的保存繁殖 無(wú)病毒植株并不是有額外的抗病性，它們有可能很快又被重新感染。所以一旦培育得到無(wú)病毒苗，就應(yīng)很好地隔離與保存。 無(wú)病毒植物的利用第七十五張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月二、無(wú)病毒苗的利用 無(wú)病毒苗在生產(chǎn)中的利用也要防止病毒的再感染。生產(chǎn)場(chǎng)所應(yīng)隔離病毒感染途徑，做好土壤消毒或防蚜等工作。在此種植區(qū)及種植規(guī)模小的地方，要較長(zhǎng)時(shí)間才會(huì)感染。而

37、在種植時(shí)間長(zhǎng)、輪作及種植規(guī)模大的產(chǎn)地則在短期內(nèi)就可以感染。一旦感染，便會(huì)影響產(chǎn)量和質(zhì)量的保證。因此，應(yīng)重新采用無(wú)病毒苗，以保證生產(chǎn)的質(zhì)量。第七十六張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月三、無(wú)病毒苗的效果 無(wú)病毒苗可以表現(xiàn)出明顯的優(yōu)良效果。如草莓可增產(chǎn)20%50%，植株結(jié)果多，單果重增加，上等果比例提高。菊花切花品種的脫毒株，表現(xiàn)出株高增加，切花數(shù)增多，花朵大，切花較重等特點(diǎn)。 第七十七張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（一）污染的原因及其預(yù)防措施1、污染原因 污染是指在組織培養(yǎng)過(guò)程中培養(yǎng)基和培養(yǎng)材料滋生雜菌，導(dǎo)致培養(yǎng)失敗的現(xiàn)象。 病原菌：細(xì)菌及真菌兩大類。三、培養(yǎng)中常見(jiàn)問(wèn)題第七十八

38、張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)菌污染特點(diǎn)-菌斑呈黏液狀，接種后1-2天發(fā)現(xiàn)。污染途徑： 外植體帶菌 培養(yǎng)基及器皿滅菌不徹底 操作人員未遵守操作規(guī)程 真菌污染的特點(diǎn)-污染部分長(zhǎng)有不同顏色的霉菌，接種后3-10天發(fā)現(xiàn)。 污染途徑： 周?chē)h(huán)境不清潔 超凈工作臺(tái)過(guò)濾裝置失效 培養(yǎng)瓶的口徑過(guò)大第七十九張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2、污染的預(yù)防措施防止材料帶菌的措施-莖尖作外植體時(shí)，進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)（無(wú)糖）或暗培養(yǎng)。無(wú)糖營(yíng)養(yǎng)液或自來(lái)水使枝條抽枝，以新抽嫩枝作外植體。-晴天取材，下午取材，經(jīng)日曬過(guò)可殺死部分細(xì)菌或真菌。-接種時(shí)除去外部韌皮組織，只接內(nèi)部的分生組織。 第八十張，PPT共九

39、十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（2）外植體的滅菌 -多次滅菌法，次氯酸鈉-無(wú)菌水-次氯酸鈉-多種藥液交替浸泡法，肥皂水-酒精-次氯酸鈉-無(wú)菌水。第八十一張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月器皿與金屬器械的滅菌 玻璃器皿可采用濕熱滅菌或干熱滅菌 金屬器皿一般火焰滅菌，也可干熱滅菌布質(zhì)制品的滅菌 濕熱滅菌無(wú)菌操作室的滅菌 2%新捷爾滅或70%酒精擦拭（噴霧），紫外燈照射，定期甲醛和高錳酸鉀熏蒸。嚴(yán)格按照操作程序。第八十二張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（二）外植體的褐變及其防止措施。1、褐變的原因 褐變是指外植體在培養(yǎng)過(guò)程中體內(nèi)的多酚氧化酶被激活，使細(xì)胞內(nèi)的酚類物質(zhì)氧化成棕褐色的醌類

40、物質(zhì)，這種致死的褐變物向外擴(kuò)散致使培養(yǎng)基逐漸變成褐色，抑制其它酶的活性，影響外植體的分化，最后變褐死亡的現(xiàn)象。 第八十三張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月基因型 某些植物酚類物質(zhì)含量較多。外植體的生理狀態(tài) 幼年的材料培養(yǎng)含醌類物質(zhì)較少。培養(yǎng)基的成分-過(guò)高的無(wú)機(jī)鹽濃度-生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)使用不當(dāng)，BA過(guò)多-分生能力強(qiáng)的材料，氧化受抑制，褐變也被抑制-培養(yǎng)條件不適宜，溫度過(guò)高或光照過(guò)強(qiáng)，褐變加速。材料轉(zhuǎn)移時(shí)間 時(shí)間過(guò)長(zhǎng)引起材料褐變。第八十四張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2、褐變的防止措施選擇適宜的外植體及最佳培養(yǎng)基。連續(xù)轉(zhuǎn)移。加抗氧化物。加活性炭。0.1-0.5%活性炭 第八十五張，PPT共九十八頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（三）玻璃化現(xiàn)象及其預(yù)防措施1、玻璃化現(xiàn)象及其產(chǎn)生原因玻璃化是在細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中的環(huán)境產(chǎn)生變化，試管苗為了適應(yīng)變化了的環(huán)境而呈玻璃狀。主要原因是：激素濃度 BA濃度提高，導(dǎo)致玻璃化苗的產(chǎn)生。瓊脂濃度 瓊脂濃度低，玻璃化苗增加。第八十