藥物分析學(xué)課件：第八章 對(duì)氨基苯甲酸酯和酰苯胺類(lèi)局麻藥物的分析

1、對(duì)氨基苯甲酸酯和酰苯胺類(lèi)局麻藥物的分析第 八 章22022/8/4概述局麻藥-暫時(shí)阻斷身體某一區(qū)域的神經(jīng)傳導(dǎo)而產(chǎn)生的局部麻醉作用表面麻醉 浸潤(rùn)麻醉 傳導(dǎo)麻醉 蛛網(wǎng)膜下腔麻醉（腰麻） 硬膜外麻醉32022/8/4掌握 對(duì)氨基苯甲酸酯和酰苯胺類(lèi)局麻藥物的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)；代表性藥物 的鑒別、檢查和含量測(cè)定的方法、原理與特點(diǎn)。熟悉 主要對(duì)氨基苯甲酸酯和酰苯胺類(lèi)局麻藥物的雜質(zhì)結(jié)構(gòu)、危害、檢查 方法與含量限度。了解 影響對(duì)氨基苯甲酸酯和酰苯胺類(lèi)局麻藥物穩(wěn)定性的主要因素及體內(nèi) 樣品與臨床檢測(cè)方法。42022/8/4局麻藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)通常包括三個(gè)部分： 親脂性芳香環(huán)； 中間連接功能基； 親水性胺基。 對(duì)氨基苯甲酸

2、酯類(lèi)局麻藥物：連接芳環(huán)和胺基的中間功能基是酯鍵 代表藥物為普魯卡因 酰苯胺類(lèi)局麻藥物：代表藥物為利多卡因 中間功能基是酰胺鍵 52022/8/4一、對(duì)氨基苯甲酸酯類(lèi)藥物基本結(jié)構(gòu)與典型藥物本類(lèi)藥物分子中都具有對(duì)氨基苯甲酸酯的母體結(jié)構(gòu)通式如下：1、基本結(jié)構(gòu)第一節(jié) 對(duì)氨基苯甲酸酯和酰苯胺類(lèi)藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)62022/8/42、對(duì)氨基苯甲酸酯類(lèi)典型藥物苯佐卡因(Benzocaine) 鹽酸普魯卡因(Procaine Hydrochloride) 對(duì)氨基苯甲酸-2-（二乙胺基）乙酯 鹽酸鹽 72022/8/4鹽酸丁卡因(Tetracaine Hydrochloride) 鹽酸氯普魯卡因(Chloropr

3、ocaine Hydrochloride) 2、對(duì)氨基苯甲酸酯類(lèi)典型藥物丁氨基苯甲酸乙酯二甲氨基鹽酸鹽4-（丁氨基）-苯甲酸-2-（二甲氨基）乙酯鹽酸鹽82022/8/4抗心律失常藥鹽酸普魯卡因胺 說(shuō) 明： 其化學(xué)結(jié)構(gòu)與鹽酸普魯卡因僅存在羧酸酯與酰胺的差異，化學(xué)性質(zhì)與本類(lèi)藥物很相似，故也在此一并列入討論 。酰胺羧酸酯92022/8/4二、酰苯胺類(lèi)藥物基本結(jié)構(gòu)與典型藥物1、基本結(jié)構(gòu)本類(lèi)藥物均系苯胺的?；苌?，其結(jié)構(gòu)共性是具有芳酰氨基 結(jié)構(gòu)通式為：102022/8/42、酰苯胺類(lèi)典型藥物鹽酸利多卡因(Lidocaine Hydrochloride) 鹽酸布比卡因(Bupivacaine Hydr

4、ochloride) 哌啶環(huán)丁基1-丁基-2-N-2,6-二甲基苯胺甲?；哙}酸鹽112022/8/4鹽酸羅哌卡因(Ropivacaine Hydrochloride) 長(zhǎng)效局麻，鎮(zhèn)痛。毒性低S-(-)-N-(2,6-二甲基苯基)1-丙基-2-哌啶甲酰胺鹽酸鹽（或一水合物） 2、酰苯胺類(lèi)典型藥物122022/8/4三、主要理化性質(zhì)1 芳伯氨基特性2 水解特性3 弱堿特性4 與重金屬離子反應(yīng)特性5 吸收光譜特性6 其他特性132022/8/4三、主要理化性質(zhì)對(duì)氨基苯甲酸酯類(lèi)藥物鹽酸丁卡因鹽酸氯普魯卡因?qū)Χ“被郊姿釋?duì)氨基-2-氯苯甲酸142022/8/4酰苯胺類(lèi)藥物三、主要理化性質(zhì)152022

5、/8/4三、主要理化性質(zhì)1、芳伯氨基特性 對(duì)氨基苯甲酸酯類(lèi)藥物的結(jié)構(gòu)中具有芳伯氨基(除鹽酸丁卡因外)，故顯重氮化-偶合反應(yīng)；與芳醛縮合成Schiff堿反應(yīng)；易氧化變色等。 酰苯胺類(lèi)藥物結(jié)構(gòu)中具有芳酰氨基，在酸性溶液中也可水解為芳伯氨基化合物，而顯芳伯氨基特性反應(yīng)。 162022/8/42、水解特性 對(duì)氨基苯甲酸酯類(lèi)藥物因分子結(jié)構(gòu)中含有酯鍵，故易水解。 影響藥物水解反應(yīng)的快慢因素：光、熱或堿性條件 苯佐卡因、鹽酸普魯卡因 對(duì)氨基苯甲酸(PABA) 鹽酸氯普魯卡因 4-氨基-2-氯苯甲酸 鹽酸丁卡因 對(duì)丁氨基苯甲酸(BABA) 172022/8/43、弱堿性 脂烴胺側(cè)鏈為叔胺氮原子(除苯佐卡因外)

6、，具有一定堿性，可以成鹽； 能與生物堿沉淀劑發(fā)生沉淀反應(yīng)； 在水溶液中不能用標(biāo)準(zhǔn)酸直接滴定，只能在非水溶劑體系中滴定。182022/8/44、與重金屬離子反應(yīng)特性 因酰苯胺類(lèi)藥物分子結(jié)構(gòu)中酰氨基上的氮可在水溶液中與銅離子或鈷離子絡(luò)合，生成有色的配位化合物沉淀。此沉淀可溶于氯仿等有機(jī)溶劑而呈色。5、吸收光譜特性 因該類(lèi)藥物分子結(jié)構(gòu)中均含有苯環(huán)及相應(yīng)的取代基與脂烴胺側(cè)鏈，具有特征的紫外吸收光譜與紅外光譜行為。 192022/8/46、其他特性 其游離堿多為堿性油狀液體或低熔點(diǎn)固體，難溶于水，可溶于有機(jī)溶劑； 其鹽酸鹽均系白色結(jié)晶性粉末，具有一定的熔點(diǎn)，易溶于水和乙醇，難溶于有機(jī)溶劑。202022/

7、8/4第二節(jié) 鑒 別 試 驗(yàn)一、重氮化-偶合反應(yīng)芳香第一胺類(lèi)鑒別反應(yīng) 分子結(jié)構(gòu)中具有芳伯氨基或潛在芳伯氨基的藥物，均可發(fā)生重氮化反應(yīng)，生成的重氮鹽可與堿性-萘酚偶合生成有色的偶氮染料。 212022/8/4直接與亞硝酸鈉進(jìn)行重氮化反應(yīng)的藥物有: 苯佐卡因、鹽酸普魯卡因、鹽酸氯普魯卡因和鹽酸普魯卡因胺 【示例8-1】鹽酸普魯卡因 ChP（2010） 取供試品約50mg，加稀鹽酸1m1，必要時(shí)緩緩煮沸使溶解，放冷，加0.1mo1/L亞硝酸鈉溶液數(shù)滴，滴加堿性-萘酚試液數(shù)滴，視供試品不同，生成由橙黃到猩紅色沉淀。 222022/8/4重氮化-偶合反應(yīng)一、重氮化-偶合反應(yīng)232022/8/4說(shuō) 明：

8、鹽酸丁卡因分子結(jié)構(gòu)中不具有芳伯氨基，無(wú)此反應(yīng)，但其分子結(jié)構(gòu)中的芳香仲胺在酸性溶液中與亞硝酸鈉反應(yīng)，生成N-亞硝基化合物的乳白色沉淀，可與具有芳伯氨基的同類(lèi)藥物區(qū)別。 一、重氮化-偶合反應(yīng)242022/8/4二、與金屬離子反應(yīng)與銅離子或鈷離子反應(yīng) 具有芳酰胺+脂肪胺結(jié)構(gòu)（鹽酸利多卡因）羥肟酸鐵鹽反應(yīng) 具有芳酰胺結(jié)構(gòu)（鹽酸普魯卡因胺）芳酰胺脂肪胺酰胺252022/8/4二、與金屬離子反應(yīng)1、鹽酸利多卡因的鑒別方法 ChP2010 取本品0.2g，加水20ml溶解后，取溶液2ml，加硫酸銅試液0.2ml與碳酸鈉試液1ml，即顯藍(lán)紫色配位化合物；加三氯甲烷2ml，振搖后放置，三氯甲烷層顯黃色。 說(shuō)明：

9、苯佐卡因、鹽酸普魯卡因、鹽酸氯普魯卡因和鹽酸丁卡因等，在同樣條件下不發(fā)生此反應(yīng)。262022/8/4 其在酸性溶液中與氯化鈷試液反應(yīng)，生成亮綠色細(xì)小鈷鹽沉淀。 鹽酸利多卡因的水溶液加硝酸酸化后，加硝酸汞試液煮沸，顯黃色；對(duì)氨基苯甲酸酯類(lèi)藥物顯紅色或橙黃色，可與之區(qū)別。272022/8/42、鹽酸普魯卡因胺的鑒別方法 ChP2010 取本品0.1g，加水5ml，加三氯化鐵試液與濃過(guò)氧化氫溶液各1滴，緩緩加熱至沸，溶液顯紫紅色，隨即變?yōu)榘底厣磷睾谏Ａu肟酸鐵鹽反應(yīng)282022/8/4三、水解產(chǎn)物反應(yīng) 對(duì)氨基苯甲酸酯類(lèi)藥物分子中有些具有酯鍵結(jié)構(gòu)，在堿性條件下可水解，利用其水解產(chǎn)物的特性或與某些試劑

10、的反應(yīng)可進(jìn)行鑒別。鹽酸普魯卡因 二乙氨基乙醇 對(duì)氨基苯甲酸鈉 對(duì)氨基苯甲酸苯佐卡因 乙醇 292022/8/4三、水解產(chǎn)物反應(yīng)鹽酸普魯卡因302022/8/41、鹽酸普魯卡因 ChP（2010）312022/8/42、苯佐卡因 ChP（2010） 取本品約0.1g，加氫氧化鈉試液5ml，煮沸，即有乙醇生成，加碘試液，加熱，即生成黃色沉淀，并發(fā)生碘仿的臭氣。 322022/8/4四、制備衍生物測(cè)定熔點(diǎn)鹽酸丁卡因 （ChP2010、USP34-NF29、BP2010、JP15） 取本品約0.1g，加5%醋酸鈉溶液10ml溶解后，加25%硫氰酸銨溶液1ml，即析出白色結(jié)晶；濾過(guò)，結(jié)晶用水洗滌，在80

11、干燥后，熔點(diǎn)約為131。 332022/8/4五、吸收光譜特征1、紫外吸收光譜 取本品，精密稱(chēng)定，按干燥品計(jì)算，加0.01 mol/L鹽酸溶液溶解并定量稀釋成每1ml中約含0.40 mg的溶液，照紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定，在263 nm與271nm的波長(zhǎng)處有最大吸收；其吸光度分別為0.530.58與0.430.48?！臼纠?-2】鹽酸布比卡因（ChP2010）342022/8/4【示例8-2】鹽酸普魯卡因胺片 （ChP2010） 取本品的細(xì)粉適量，加水振搖使鹽酸普魯卡因胺溶解，濾過(guò)，取濾液加水制成每1mL中含鹽酸普魯卡因胺5g的溶液，照紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定，在280nm的波長(zhǎng)處有最大吸收。

12、 352022/8/42、紅外吸收光譜 結(jié)構(gòu)復(fù)雜，且結(jié)構(gòu)差別較小的化合物-IR法ChP：對(duì)照?qǐng)D譜法362022/8/42、紅外吸收光譜 圖8-1 鹽酸普魯卡因的紅外吸收?qǐng)D譜(氯化鉀壓片)峰位(cm-1)歸屬3315, 3200NH2(伯胺)2585N+-H(胺基)1692C=O (酯羰基)1645N-H (胺基)1604, 1520C=C (苯環(huán))1271, 1170, 1115C-O (酯基)372022/8/4圖8-2 鹽酸普魯卡因胺的紅外吸收?qǐng)D譜(氯化鉀壓片)峰位(cm-1)歸屬31003500NH2 (酰胺)2645N+-H (胺基)1640C=O (酰胺帶)1600, 1515C=C

13、 (苯環(huán))1550N-H (酰胺帶)1280C-N (酰胺帶)2、紅外吸收光譜 382022/8/4練習(xí)1 下列哪個(gè)藥物不能用亞硝鈉法進(jìn)行測(cè)定（ ）A鹽酸丁卡因 B鹽酸普魯卡因 C苯佐卡因 D對(duì)乙酰氨基酚A392022/8/4練習(xí)2 鹽酸丁卡因在酸性溶液中與亞硝酸鈉 作用生成（ ）A重氮鹽 BN-亞硝基化合物 C偶氮染料 D偶氮氨基化合物B402022/8/4練習(xí)3 鹽酸普魯卡因分子中有 結(jié)構(gòu)，易發(fā)生水解。酯鍵412022/8/4第三節(jié) 特殊雜質(zhì)與檢查一、鹽酸普魯卡因中對(duì)氨基苯甲酸的檢查雜質(zhì)來(lái)源：水解產(chǎn)生對(duì)氨基苯甲酸和二乙氨基乙醇 對(duì)氨基苯甲酸的化學(xué)變化： 結(jié)果導(dǎo)致注射液變黃、療效下降、毒性增

14、加 原料藥及注射用滅菌粉末中雜質(zhì)限量 ： 0.5% 注射液中雜質(zhì)限量 ： 1.2% 422022/8/4檢查方法：HPLC 雜質(zhì)對(duì)照品法流動(dòng)相 ：0.1%庚烷磺酸鈉的0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)-甲醇(6832) 檢測(cè)波長(zhǎng)：279 nm 固定相 ：十八烷基硅烷鍵合硅膠 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)： 理論板數(shù)按對(duì)氨基苯甲酸峰計(jì)算不低于2000 鹽酸普魯卡因峰和對(duì)氨基苯甲酸峰的分離度應(yīng)大于2.0 外標(biāo)法以峰面積計(jì)算第三節(jié) 特殊雜質(zhì)與檢查一、鹽酸普魯卡因中對(duì)氨基苯甲酸的檢查432022/8/4第三節(jié) 特殊雜質(zhì)與檢查一、鹽酸普魯卡因中對(duì)氨基苯甲酸的檢查442022/8/4二、鹽酸氯普

15、魯卡因注射液中有關(guān)物質(zhì)和光解產(chǎn)物的檢查 鹽酸氯普魯卡因在生產(chǎn)和貯藏過(guò)程中同樣存在穩(wěn)定性問(wèn)題，其注射液在一定的滅菌溫度、時(shí)間和溶液pH條件下，更易發(fā)生水解反應(yīng)，生成4-氨基-2-氯苯甲酸降解產(chǎn)物。 USP34-NF29： HPLC原料藥中雜質(zhì)限量 ： 0.625% 注射液中雜質(zhì)限量 ： 3.0% 452022/8/4【示例8-4 】鹽酸氯普魯卡因注射液中有關(guān)物質(zhì)及光降解產(chǎn)物的研究檢查方法：HPLC/MS色譜條件： 色譜柱：Zobax SB-C18柱 流動(dòng)相：0.5乙酸水溶液-0.5乙酸乙腈溶液(8713, v/v) 流速：1mL/min 檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm，參比波長(zhǎng)：360nm質(zhì)譜條件： 電噴

16、霧正離子化，干燥氣(N2)流速9.5L/min，干燥氣壓力350kPa，干燥氣溫度350。噴霧電壓4kV，傳輸/裂解電壓70V，質(zhì)量掃描范圍80600。462022/8/4圖8-3 鹽酸氯普魯卡因注射液中光照前存在的雜質(zhì)及其質(zhì)譜圖 圖8-4 鹽酸氯普魯卡因注射液經(jīng)光照后產(chǎn)生的雜質(zhì)及其質(zhì)譜圖 鹽酸羥基普魯卡因472022/8/4三、鹽酸利多卡因注射液中2,6-二甲基苯胺及其他雜質(zhì)的檢查雜質(zhì)來(lái)源：水解產(chǎn)生檢查方法：HPLC 雜質(zhì)對(duì)照品法鹽酸利多卡因(Lidocaine Hydrochloride) 2,6-二甲基苯胺482022/8/4三、鹽酸利多卡因注射液中2,6-二甲基苯胺及其他雜質(zhì)的檢查2,

17、6-二甲基苯胺492022/8/4四、鹽酸羅哌卡因的光學(xué)純度檢查 鹽酸羅哌卡因是一種新穎的長(zhǎng)效酰胺類(lèi)局麻藥，與鹽酸布比卡因相比，具有更好的安全性以及更廣的高、低濃度之間的臨床使用范圍，主要用于外科手術(shù)麻醉和術(shù)后鎮(zhèn)痛。 鹽酸羅哌卡因分子中有一個(gè)手性碳原子，存在二個(gè)對(duì)映體，由于R-鹽酸羅哌卡因心臟毒性較大，目前臨床上使用的為S-鹽酸羅哌卡因?qū)τ丑w。 鹽酸羅哌卡因(Ropivacaine Hydrochloride) 長(zhǎng)效局麻，鎮(zhèn)痛。毒性低502022/8/4毛細(xì)管電泳方法： USP34-NF29 規(guī)定：供試品中R-鹽酸羅哌卡因的限量不得超過(guò)0.5% 背景電解質(zhì)溶液： H3PO4 （pH2.93.1

18、 ） 運(yùn)行緩沖液 ：背景緩沖液 +2,6-二-O-甲基-環(huán)糊精系統(tǒng)適用性溶液：S-鹽酸羅哌卡因及R-鹽酸羅哌卡因標(biāo)準(zhǔn)品 1、 分析溶液配制供試品溶液：S-鹽酸羅哌卡因樣品 供試品稀釋溶液 512022/8/42、毛細(xì)管沖洗過(guò)程 毛細(xì)管沖洗過(guò)程：先用水沖洗1分鐘，然后用0.1mol/L的氫氧化鈉溶液沖洗10分鐘，最后再用水沖洗3分鐘。如果使用的是新的或者是干燥的毛細(xì)管，則需要延長(zhǎng)氫氧化鈉溶液的沖洗時(shí)間至30分鐘。 兩次進(jìn)樣分析之間的毛細(xì)管沖洗過(guò)程：先用水沖洗1分鐘，然后用0.1mol/L的氫氧化鈉溶液沖洗4分鐘，再用水沖洗1分鐘，最后用運(yùn)行緩沖液沖洗4分鐘。 522022/8/43、電泳條件與系

19、統(tǒng)適用性試驗(yàn) 石英毛細(xì)管柱 ：50m72cm)電泳條件系統(tǒng)溫度：30 施加電壓：500V/s的速度最后穩(wěn)定至375V/cm 電流：4045A 檢測(cè)波長(zhǎng)：206 nm 系統(tǒng)適用性溶液電泳分析 ：R-及S-鹽酸羅哌卡因的相對(duì)遷移時(shí)間分別約為0.96和1.0分離度(R)不少于3.7分析時(shí)間約為30分鐘 供試品稀釋溶液的電泳分析： 信噪比不小于10 532022/8/44、 實(shí)驗(yàn)步驟 為了確保電泳分離沒(méi)有干擾峰，分別將運(yùn)行緩沖液和水以相同體積進(jìn)樣(50mbar5.0s)，然后再將運(yùn)行緩沖液以50mbar1.0s進(jìn)樣。 式中：rR和rS分別代表供試品溶液中R-鹽酸羅哌卡因和S-鹽酸羅哌卡因的峰響應(yīng)值；M

20、R和MS分別代表R-鹽酸羅哌卡因和S-鹽酸羅哌卡因的遷移時(shí)間。 供試品S-鹽酸羅哌卡因中R-鹽酸羅哌卡因的比例不得超過(guò)0.5%。5、 電泳系統(tǒng)關(guān)閉 實(shí)驗(yàn)分析結(jié)束后，分別用0.1mol/L的氫氧化鈉溶液和水依次沖洗毛細(xì)管柱10分鐘。毛細(xì)管柱貯藏前必須干燥。542022/8/4練習(xí) 鹽酸普魯卡因注射液中應(yīng)檢查的雜質(zhì)為（ ）A對(duì)氨基酚 B對(duì)氨基苯甲酸 C對(duì)氯酚 D對(duì)氯乙酰苯胺B552022/8/4第四節(jié) 含 量 測(cè) 定一、亞硝酸鈉滴定法1、基本原理 具芳伯氨基或水解后具有芳伯氨基的藥物 芳伯氨基或水解后生成芳伯氨基的藥物在酸性溶液中與亞硝酸鈉定量發(fā)生重氮化反應(yīng)，生成重氮鹽，可用永停滴定法指示反應(yīng)終點(diǎn)

21、。 562022/8/4一、亞硝酸鈉滴定法572022/8/42、測(cè)定的主要條件 （1）加入適量KBr加速反應(yīng)KBr為催化劑在鹽酸存在下，重氮化反應(yīng)的機(jī)理為： NaNO2+HClHNO2+NaClHNO2+HClNOCl+H2O582022/8/4592022/8/4 K1 300 K2 加入KBr，可增大被測(cè)溶液中NO+的濃度，所以能加快重氮化反應(yīng)速度。602022/8/4（2）酸的種類(lèi)及其濃度在不同酸中重氮化反應(yīng)的速度為：HBrHCl H2SO4 HNO3鹽酸: 1:2.56 加入過(guò)量鹽酸： 重氮化反應(yīng)速度加快； 重氮鹽在酸性溶液中穩(wěn)定； 防止生成偶氮氨基化合物，而影響測(cè)定結(jié)果612022

22、/8/4 酸度加大，反應(yīng)向左進(jìn)行，故可防止偶氮氨基化合物的生成。若酸度過(guò)大，又可阻礙芳伯氨基的游離，反而影響重氮化反應(yīng)速度。在太濃的鹽酸中還可使亞硝酸分解。 芳胺類(lèi)藥物與酸的摩爾比為1（2.56）。 622022/8/4（3）反應(yīng)溫度： 重氮化反應(yīng)的速度與溫度成正比，但是生成的重氮鹽又隨溫度升高而加速分解。 一般地，溫度每升高10，重氮化反應(yīng)速度加快2.5倍，但同時(shí)重氮鹽分解的速度亦相應(yīng)地加速2倍；所以滴定一般在低溫下進(jìn)行。由于低溫時(shí)反應(yīng)太慢，經(jīng)試驗(yàn)，可在室溫（1030）下進(jìn)行，其中15以下結(jié)果較準(zhǔn)確。632022/8/4（4）滴定速度： 先快后慢 滴定管尖端插入液面下2/3處，滴定液一次大部

23、分放下，然后將滴定管尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，再緩緩滴定 。尤其是在近終點(diǎn)時(shí)，因尚未反應(yīng)的芳伯氨基藥物的濃度極稀，須在最后一滴加入后，攪拌15分鐘，再確定終點(diǎn)是否真正到達(dá)。 642022/8/43、指示終點(diǎn)的方法 （1）永停滴定法ChP（2010）E和E為兩個(gè)惰性鉑(Pt)電極，G為電流計(jì)，R與電流計(jì)臨界阻尼電阻值近似，R1為2k可調(diào)電阻，R2電阻值為6070，B為1.5V干電池 用作重氮化法的終點(diǎn)指示時(shí)，先將電極插入供試品的鹽酸溶液中，調(diào)節(jié)R1使加在電極上的電壓約為50mV。滴定過(guò)程中，觀察滴定過(guò)程中電流計(jì)指針的變化。終點(diǎn)前，溶液中無(wú)亞硝酸，線路無(wú)電流通過(guò)，電流計(jì)指針指零；終點(diǎn)時(shí)溶液中

24、有微量亞硝酸存在，電極即起氧化還原反應(yīng)，線路中遂有電流通過(guò)，此時(shí)電流計(jì)指針突然偏轉(zhuǎn)，并不再回復(fù)，即為滴定終點(diǎn)。652022/8/4（2）電位法USP（3）外指示劑法 KI淀粉糊劑或試紙2NaNO2+2KI+4HCl 2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O （4）內(nèi)指示劑法中性紅 不可逆指示劑662022/8/44、滴定法 鹽酸普魯卡因 ChP（2010） 取本品約0.6g，精密稱(chēng)定，照永停滴定法（附錄A），在1525，用亞硝酸鈉滴定液（0.1 mol/L）滴定。每1ml亞硝酸鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于27.28mg的C13H20N2O2HCl?！臼纠?-5 】672022/8/4

25、二、非水溶液滴定法 本類(lèi)藥物中的鹽酸布比卡因分子結(jié)構(gòu)含有弱堿性氮原子，具弱堿性 。溶 劑：冰醋酸與醋酐溶液 滴定劑：高氯酸（0.1mol/L ）指示滴定終點(diǎn)方法：電位法 加入適量醋酐的作用： 在冰醋酸與醋酐溶液中，醋酐解離生成的醋酐合乙酰氧離子比醋酐合質(zhì)子的酸性還強(qiáng)，有利于布比卡因堿性的增強(qiáng)，使滴定突躍敏銳。 682022/8/4【示例8-6 】鹽酸布比卡因的含量測(cè)定 取本品約0.2g，精密稱(chēng)定，加冰醋酸20ml與醋酐20ml溶解后，照電位滴定法，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于32.49mg的C18H28N2

26、OHCl。鹽酸布比卡因非水滴定法反應(yīng)過(guò)程如下：692022/8/4【示例8-7 】鹽酸丁卡因的含量測(cè)定 ChP2010采用乙醇作為溶劑的非水溶液酸堿滴定法 取本品約0.25g，精密稱(chēng)定，加乙醇50mL振搖使溶解，加0.01 mol/L鹽酸溶液5mL，搖勻，照電位滴定法，用氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)滴定，兩個(gè)突躍點(diǎn)體積的差作為滴定體積。每1mL氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于30.08mg的C15H24N2O2HCl。702022/8/4三、紫外分光光度法【示例8-8 】紫外分光光度法測(cè)定注射用鹽酸丁卡因的含量 （ChP2010） 取本品10瓶，分別加水溶解，并分別定量轉(zhuǎn)移至25

27、0ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取鹽酸丁卡因?qū)φ掌?，精密稱(chēng)定，加水溶解并定量稀釋制成每1ml中約含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。精密量取供試品溶液與對(duì)照品溶液各3ml，分別置于100ml量瓶中，加鹽酸溶液(1200)5ml與磷酸鹽緩沖液(pH 6.0)(取磷酸氫二鉀20g與磷酸二氫鉀80g，加水溶解并稀釋至1000ml，用6mol/L磷酸溶液或10mol/L的氫氧化鉀溶液調(diào)節(jié)pH至6.0)10ml，用水稀釋至刻度，搖勻，照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在310nm的波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度，計(jì)算每瓶的含量，求出平均含量，即得。712022/8/4四、高效液相色譜法【示例8-9 】

28、鹽酸利多卡因注射液的含量測(cè)定 （ChP2010）色譜條件：系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：固定相：C18流動(dòng)相：磷酸鹽緩沖液（pH8.0）-乙腈(5050) 檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm 理論板數(shù)按利多卡因峰計(jì)算不低于2000 722022/8/4測(cè)定法： 精密量取本品適量(約相當(dāng)于鹽酸利多卡因100mg)置50ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，精密量取20L注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取利多卡因?qū)φ掌芳s85mg，精密稱(chēng)定，置50mL量瓶中，加1mol/L鹽酸溶液0.5mL使溶解，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，并乘以1.156，即得。732022/8/4練習(xí)A742022/8/4練習(xí)

29、鹽酸丁卡因和鹽酸利多卡因側(cè)鏈烴胺的叔胺氮具有弱堿性，均可采用_滴定法測(cè)定含量。 非水溶液752022/8/4練習(xí)在亞硝酸鈉滴定法中，加入適量溴化鉀的作用是（ ）A增加亞硝酸鈉的穩(wěn)定性 B防止生成的重氮鹽分解 C防止亞硝酸的逸失 D加速重氮化反應(yīng)的速度D762022/8/4練習(xí)C772022/8/4練習(xí) 加入過(guò)量鹽酸： 重氮化反應(yīng)速度加快； 重氮鹽在酸性溶液中穩(wěn)定； 防止生成偶氮氨基化合物，而影響測(cè)定結(jié)果亞硝酸鈉滴定法中為什么要加入過(guò)量的鹽酸？ 782022/8/4第五節(jié) 體內(nèi)藥物分析 鹽酸普魯卡因、鹽酸利多卡因、鹽酸丁卡因和鹽酸布比卡因是目前臨床應(yīng)用最多的局麻藥物。由于這些藥物均具有一定的毒副

30、作用，加之其在臨床應(yīng)用甚為廣泛，因此對(duì)其進(jìn)行治療監(jiān)測(cè)一直為人們所重視。792022/8/4【示例8-10 】 HPCE測(cè)定人血漿中的普魯卡因、利多卡因、丁卡因和布比卡因 實(shí)驗(yàn)方法： 毛細(xì)管依次用1mol/L NaOH、0.1mol/L NaOH、蒸餾水各沖洗2分鐘，再用運(yùn)行緩沖溶液沖洗4分鐘。每次分析后需用運(yùn)行緩沖溶液沖洗2分鐘，再進(jìn)行下次分析。電泳分離條件： 40mmol/L的H3PO4-Tris緩沖體系(pH 5.0)，石英毛細(xì)管59.0cm(有效長(zhǎng)度50.8cm)70m(id)，柱溫18，壓力進(jìn)樣3kPa5秒，工作電壓20.0V，檢測(cè)波長(zhǎng)220nm。802022/8/4樣品處理與測(cè)定： 精密吸取含藥血漿0.2mL，置2mL具塞刻度離心管中，加入1mol/L NaOH 0