DB15∕T 2544-2022 大球蓋菇菌種制作技術(shù)規(guī)程

1、ICS65.020.01CCSB0515內(nèi)蒙古自治區(qū)地方標準DB15/T 25442022大球蓋菇菌種制作技術(shù)規(guī)程Regulation of strain manufacture for stropharia rugosoannulata2022-04-25 發(fā)布2022-05-25 實施內(nèi)蒙古自治區(qū)市場監(jiān)督管理局發(fā) 布IDB15/T 25442022前言本文件按照GB/T 1.12020標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定起草。本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)果蔬標準化技術(shù)委員會（SAM/TC 25）歸口。本文件起草單位：內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學院。本文件主要起草人：王海燕、孫國琴、李

2、亞嬌、龐杰、于傳宗、王永、韓鳳英、扈順、薛國萍、慕宗杰、付崇毅、康立茹。 PAGE 5 PAGE 4DB15/T 25442022大球蓋菇菌種制作技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了大球蓋菇菌種生產(chǎn)要求、母種生產(chǎn)、原種和栽培種生產(chǎn)、檢驗、入庫等技術(shù)流程要點。本文件適用于大球蓋菇母種、原種、栽培種菌種制作要求。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件， 僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB 4806.7食品安全國家標準食品接觸用塑料材料及制品NY/T 528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程NY/

3、T 1731食用菌菌種良好作業(yè)規(guī)范術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。菌種 spawn通過生產(chǎn)試驗驗證具有特異性、均一性和穩(wěn)定性，豐產(chǎn)性好、抗性強的大球蓋菇菌株或品種，培養(yǎng)生長在適宜基質(zhì)上具結(jié)實性的菌絲培養(yǎng)物，包括母種、原種和栽培種。母種 stock culture經(jīng)各種方法選育得到的具有結(jié)實性的菌絲體純培養(yǎng)物及其繼代培養(yǎng)物，以玻璃試管或培養(yǎng)皿為培養(yǎng)容器和使用單位，也稱為一級種、試管種。原種 pre-culture spawn由母種移植、擴大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物。常以菌種瓶（玻璃菌種瓶或塑料菌種瓶）或（1217）cm（2228）cm（0.040.05）mm聚丙烯塑料袋為容器。也稱為二級種

4、。栽培種 spawnDB15/T 25442022由原種移植、擴大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物。常以菌種瓶（玻璃瓶或塑料瓶）或（1517）cm（3335）cm（0.040.05） mm聚丙烯塑料袋為容器。栽培種只能用于擴大到栽培出菇袋或直接出菇，不可以再次擴大繁殖菌種。也稱為三級種。菌種生產(chǎn)要求人員生產(chǎn)所需要的技術(shù)人員和檢驗人員應(yīng)經(jīng)過專業(yè)培訓、掌握基礎(chǔ)知識及菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程要求的相應(yīng)專業(yè)技術(shù)人員。場地、廠房菌種生產(chǎn)應(yīng)選擇地勢高，通風良好，空氣清新，水源近，排水通暢，交通便利的場所。場地環(huán)境條件符合NY/T 528規(guī)定。菌種生產(chǎn)廠房要求有各自隔離的攤曬場、原材料庫、配料分裝庫。配套有配料室、攪拌室、

5、裝袋（瓶） 室、滅菌室、冷卻室、接種室、培養(yǎng)室（通風好，有紗窗）、菌種檢測室及菌種冷藏庫等各環(huán)節(jié)的設(shè)施。冷卻室、接種室，培養(yǎng)室都要有離子凈化設(shè)施。菌種生產(chǎn)廠房條件應(yīng)符合NY/T 1731規(guī)定。生產(chǎn)設(shè)備菌種生產(chǎn)需要粉碎機、電子秤、攪拌機、裝袋（瓶）機、高壓滅菌鍋或常壓滅菌鍋、離子凈化器、超凈工作臺或接種箱、恒溫培養(yǎng)箱、培養(yǎng)架、搖床、液體菌種灌（30 L250 L）、顯微鏡等設(shè)備。菌種生產(chǎn)設(shè)備應(yīng)符合NY/T 1731規(guī)定。母種生產(chǎn) 培養(yǎng)基馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、蛋白胨1.5 g、瓊脂18 g、加水至1000 mL。 容器試管規(guī)格18 mm180 mm或者20 mm200 mm；培養(yǎng)皿直徑

6、7 cm9 cm；三角瓶規(guī)格300 mL500 mL。 分裝和滅菌斜面培養(yǎng)基分裝和滅菌分裝培養(yǎng)基至試管1/4處，用棉塞或硅膠塞封閉試管口，每5支試管為1把，牛皮紙包棉塞，橡皮筋扎緊，棉塞向上放置。棉塞應(yīng)采用梳棉，不能使用脫脂棉。在121 122 （0.11 MPa0.12 MPa） 下滅菌25 min。滅菌后溫度降到（655）時，在空氣清潔的室內(nèi)擺斜面，要求斜面長度不超過試管長度的2/3。從擺好的試管中抽取3 %5 %的試管，在28 下培養(yǎng)48 h，無微生物長出為滅菌合格。平板培養(yǎng)基分裝和滅菌DB15/T 25442022培養(yǎng)基裝入300 mL500 mL三角瓶至刻度的2/3處，用帶濾膜的封口

7、膜封口后放入滅菌鍋；玻璃培養(yǎng)皿用報紙包好，放入滅菌鍋。在溫度升至102 105 排凈冷空氣后升壓，升至121 122 （0.11 MPa0.12 MPa）恒溫滅菌25 min。滅菌后溫度降到（655）時，在超凈工作臺內(nèi)將三角瓶中的培養(yǎng)基分裝至無菌培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)基占培養(yǎng)皿高度的1/31/2。 接種超凈工作臺或接種箱紫外燈照射30 min后吹風，之后用75 %酒精進行表面消毒。接菌過程嚴格執(zhí)行無菌操作，接種后及時貼好標簽并做好記錄。將3 mm5 mm菌塊接種在培養(yǎng)皿或試管培養(yǎng)基的中部，培養(yǎng)皿需用石臘封口膜密封。菌絲長滿培養(yǎng)基表面即可使用。培養(yǎng)在通風避光、18 28 下培養(yǎng)。接種后每隔2 d3 d檢

8、驗一次，挑出菌種未活、污染和生長不良的不合格培養(yǎng)物。原種、栽培種生產(chǎn) 培養(yǎng)基谷?；螓溋?0 %，檸條粉、麥麩、棉籽殼、玉米芯粉或豆秸粉9 %，石膏1 %。水分含量60 %65 %， pH值調(diào)至67。 容器原種采用850 ml以下、瓶口直徑小于等于4 cm、耐126 高溫的菌種瓶，也可以采用（1217）cm（2228）cm（0.040.05）mm的聚丙烯塑料袋。栽培種采用同原種要求相同的瓶子，也可采用（1517）cm（3335）cm（0.040.05）mm 的聚丙烯塑料袋。以上聚丙烯塑料袋均要求符合GB 4806.7規(guī)定。 裝袋（瓶）采用裝袋（瓶）機或人工進行裝袋（瓶），人工裝袋（瓶）需用打孔器

9、在袋口處打孔，孔直徑1 cm1.5 cm、深度為8 cm12 cm，每袋（瓶）裝培養(yǎng)基質(zhì)500 g600 g，塑料袋用無棉蓋體套環(huán)或窩口海綿塞封口，培養(yǎng)基質(zhì)裝袋（瓶）后4 h內(nèi)進行滅菌。 滅菌可采用高壓滅菌和常壓滅菌。高壓滅菌：組合培養(yǎng)料在121 122 （0.11MPa0.12 MPa）下滅菌2 h；糧食培養(yǎng)基在121 122 （0.11 MPa0.12 MPa）下滅菌2.5 h。常壓滅菌：在3 h之內(nèi)使溫度升至100 ，恒溫保持10 h12 h。 接種DB15/T 25442022原種、栽培種在超凈工作臺或接種箱內(nèi)接種，接種前打開紫外燈照射30 min后吹風，接種時用75 % 酒精對超凈工

10、作臺或接種箱進行表面擦拭消毒。每個原種接入2 cm3 cm大小母種12塊；每個栽培種接入原種量不應(yīng)少于15 g。菌種都應(yīng)從容器口處接種，不應(yīng)打孔多點接種。每批接種應(yīng)為單一品種，如中途換品種時采用75 %酒精對超凈工作臺或接種箱及接種工具進行表面擦拭消毒。 培養(yǎng)通風避光、21 28 下培養(yǎng)。 貯存原種和栽培種在0 4 下貯存，貯存期不超過50 d。檢驗、入庫檢驗?zāi)阜N感官要求母種感官要求見表1。表1大球蓋菇母種感官要求項目要求容器完整、無損、潔凈棉塞或無棉蓋體干燥、整潔、松緊適度、能滿足透氣和過濾要求培養(yǎng)基灌入量為試管總?cè)莘e的1/4，培養(yǎng)皿高的的1/31/2菌種外觀菌絲生長量長滿斜面或平板菌絲體特

11、征菌絲潔白、絨毛狀、生長致密、均勻、健壯菌絲體表面均勻、舒展、平整菌絲體分泌物無菌落邊緣整齊雜菌菌落無斜面背面外觀培養(yǎng)基不干縮，無積水、顏色均勻、無暗斑、無色素原種感官要求原種感官要求見表2。DB15/T 25442022表2大球蓋菇原種感官要求項目要求容器完整、無損、潔凈棉塞或無棉蓋體干燥、整潔、松緊適度、能滿足透氣和濾菌要求培養(yǎng)基上表面距瓶（袋）口的距離（505）mm菌種外觀菌絲生長量長滿容器菌絲體特征菌絲體白、生長旺健、整齊培養(yǎng)物表面菌絲體生長均勻、無高溫抑制線培養(yǎng)基及菌絲體緊貼瓶壁、無干縮菌絲分泌物無、允許少量無色至棕黃色水珠雜菌菌落無子實體原基無栽培種感官要求栽培種感官要求見表3。表3大球蓋菇栽培種感官要求項目要求容器完整、無破損棉塞或無棉蓋體干燥、整潔、松緊適度、