免疫印跡技術(shù)ANA譜測定

1、epi丈第華西醫(yī)院XFCHINAIIOSFITAI5ICHCANUNIVFRSITY免疫印跡技術(shù)ANA譜測定羅俐梅醫(yī)院Q卩|丈普華XFCHINAIIOSFITAI5ICHCANUNIVFRSITYWesternblot法SDS電泳轉(zhuǎn)移電泳3131條帶印跡法SmSS-BScl-7OPM-SclJo-1nRNP/SmCENPBdsDNSNukleos.Histonerito.P-Prot.AMA-M2KontrolleQP|丈第華西醫(yī)院純化抗原的免疫印跡法純化可提取性細(xì)胞核抗原(ENA)包被于硝酸纖維膜上，待測血清標(biāo)本與之反應(yīng)，如存在相應(yīng)抗體，則會(huì)結(jié)合上去，并進(jìn)一步結(jié)合酶標(biāo)記的二抗，經(jīng)酶底物顯色即

2、可觀察到相應(yīng)的抗體。2卩|丈穆華西醫(yī)院XFSTCHINAIIOSPTTAISICHUANUNIVFRSITY免疫印跡法檢測ENA譜的原理加底物顯色,觀察結(jié)果洗去多余酶標(biāo)二抗加入酶標(biāo)二抗反應(yīng)洗去未反應(yīng)蛋白加入標(biāo)本反應(yīng)純化抗原膜條（膜條試劑盒）nRNP/SmSmSS-ASS-BScl-70Jo-1CENPBdsDNAHistonesliMIIIControl2QP|丈第華西醫(yī)院QP|丈第華西醫(yī)院試劑樣本稀釋液:直接使用工作洗滌液：直接使用（已配好）酶標(biāo)記二抗:直接使用（已配好）底物:直接使用操作步驟潤膜：取出反應(yīng)槽，每槽加入1.5ml樣本稀釋液，緩慢于室溫孵育5分鐘，將膜條充分潤濕，倒掉樣本緩沖液

3、加樣：然后在每個(gè)槽中加入樣本緩沖液1.5mL,并加入待檢血清或質(zhì)控血清15uL,充分混勻，緩慢在室溫振搖孵育30分鐘。洗滌：棄去槽內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，用洗滌液洗滌3次，每次每槽加稀釋洗滌液l5inl,操作步驟加酶：每槽加入稀釋后酶標(biāo)抗體1.5mL,混勻，緩慢在室溫?fù)u床上孵育30分鐘。洗滌：同前洗滌。顯色：每槽加入顯色液1.5mL,室溫反應(yīng)10分鐘終止：每槽棄去反應(yīng)液，用蒸憾水洗滌三次，取岀膜條，有序貼于結(jié)果分析頁上，待膜條干后進(jìn)行結(jié)果判斷。XFCHINAIIOSFITAI5ICHCANUNIVFRSITYQP|丈第華西醫(yī)院影響因素未用完的洗滌液棄之，不可留作下次用。全部操作應(yīng)振搖進(jìn)行，否則

4、檢測敏感性會(huì)有所下降。不同血清標(biāo)本，顯色強(qiáng)度會(huì)有不同，弱陽性結(jié)果需仔細(xì)觀察。試劑需恢復(fù)至室溫方可使用，否則會(huì)影響檢測結(jié)果。QP|丈第華西醫(yī)院QP|丈第華西醫(yī)院試驗(yàn)準(zhǔn)備分為5組,每組取1個(gè)病人標(biāo)本，在一個(gè)反應(yīng)板上試驗(yàn)。其中一組增加陰性和陽性質(zhì)控O各組需領(lǐng)取以下物資:待測標(biāo)本1份陰性和陽性質(zhì)控1份（第1組）反應(yīng)板和吸水紙樣本緩沖液1瓶樣本洗滌液（已稀釋）1瓶酶標(biāo)記抗體（已稀釋）共用底物1瓶結(jié)果解釋首先觀察第一條質(zhì)控線應(yīng)顯色才可判讀結(jié)果，若不顯色則說明試劑失效或?qū)嶒?yàn)失敗,需復(fù)查。將膜條上顯色區(qū)帶與抗體位置對應(yīng)抗體帶對照,即可判斷出陽性抗體.抗可提取性核抗原(ENA)抗體抗iiRNP抗體：MCTD95-100%(高滴度)抗Sin抗體：SLE標(biāo)記性抗體(20%-30%)抗SSA抗體：PSS60-75%,其它CTD抗R052抗體：意義不明抗SSB抗體：PSS10-40%,其它CTD抗Sc