2016年臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量手冊(cè)

1、實(shí)驗(yàn)室公正性說(shuō)明 修訂頁(yè)章質(zhì)量方針?lè)肿由飳?shí)驗(yàn)室組織結(jié)構(gòu)圖 分子生物實(shí)驗(yàn)室設(shè)置平面圖JS-LJ-S MP0000-000章管理程序文件程序管理文件編碼目錄實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)管理程序JS-LJ-S MP0001-000JS-LJ-S MP0002-000JS-LJ-S MP0003-000儀器設(shè)備管理程序臨床標(biāo)本的管理程序?qū)嶒?yàn)室人員配置及培訓(xùn)程序 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制管理程序JS-LJ-S MP0004-000JS-LJ-S MP0005-000實(shí)驗(yàn)室生物防護(hù)與安全管理程序JS-LJ-S MP0006-000JS-LJ-S MP0007-000實(shí)驗(yàn)室文件、記錄的管理程序?qū)嶒?yàn)耗材購(gòu)買(mǎi)、驗(yàn)收、儲(chǔ)放程序JS-LJ-

2、S MP0008-000抱怨處理程序儀器設(shè)備校準(zhǔn)程序JS-LJ-S MP0009-000JS-LJ-SM P0010-000JS-LJ-S MP0011-000實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果報(bào)告程序檢驗(yàn)過(guò)程中發(fā)生故障時(shí)的應(yīng)急處理程序JS-LJ-S MP0012-000實(shí)驗(yàn)室清潔消毒程序文件修改程序JS-LJ-SM P0013-000JS-LJ-S MP0014-000腫瘤分子檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編碼目錄JS-LJ-S OP0000-000石蠟包埋組織DNA提取標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程JS-LJ-S OP0001-000石蠟包埋組織樣本RNA提取標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程JS-LJ-S OP0002-000JS-LJ-S OP00

3、03-000血液DNA提取標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程口腔拭子/唾液DNA提取標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程JS-LJ-S OP0004-000JS-LJ-S OP0005-000組織DNA提取標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程組織RNA提取標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程JS-LJ-S OP0006-000反轉(zhuǎn)錄標(biāo)準(zhǔn)操作流程JS-LJ-S OP0007-000基因mRN表達(dá)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程JS-LJ-S OP0008-000EGFRS因突變Q-PCR標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程JS-LJ-S OP0009-000KRAS基因突變Q-PCR標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程JS-LJ-SO P0010-000BRAF基因突變Q-PCR標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程JS-LJ-S OP0011-000PDGFR基因突變Q-P

4、CR標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程JS-LJ-S OP0012-000葉酸基因多態(tài)性Q-PCR標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程JS-LJ-S OP0013-000基因SNP Q-PCF標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程JS-LJ-S OP0014-0001p 19q LOH標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程JS-LJ-S OP0015-000MGM甲基化標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程JS-LJ-S OP0016-000樣本脫包、分類、編號(hào)、登錄、發(fā)放標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程JS-LJ-SO P0017-000臨床標(biāo)本采集、驗(yàn)收、拒收標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程JS-LJ-S OP0018-000臨床標(biāo)本保存標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程JS-LJ-SO P0019-000試劑質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程JS-LJ-S OP0020-000實(shí)驗(yàn)結(jié)果有

5、效性判斷標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程JS-LJ-S OP0021-000室內(nèi)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程JS-LJ-S OP0022-000室間質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程JS-LJ-S OP0023-000主要儀器使用、維護(hù)、校準(zhǔn)操作規(guī)程JS-LJ-S OP0024-000實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理程序JS-LJ-S OP0025-000申請(qǐng)單必須信息JS-LJ-S OP0026-000腫瘤個(gè)體化檢測(cè)樣本采集注意事項(xiàng)JS-LJ-S OP0027-000葉酸基因檢測(cè)樣本采集注意事項(xiàng)JS-LJ-S OP0028-000檢測(cè)報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程JS-LJ-S OP0029-000修訂頁(yè)修訂 序號(hào)修訂的 章節(jié)條款簡(jiǎn)要修訂內(nèi)容批準(zhǔn)人批準(zhǔn)日期、尸：

6、早質(zhì)量方針題目：質(zhì)量方針起草：日期：審核：日期：編號(hào)：JS-LJ-ZLC0001-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門(mén)：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門(mén)：技術(shù)部臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室是嚴(yán)格按照衛(wèi)生部、山東省臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化要求進(jìn)行管理與操作，我中心的質(zhì)量方針為：公正、科學(xué)、我們的檢驗(yàn)工作必須做到:行為公正一任何情況下，不被各種利益所驅(qū)動(dòng)，客觀公正、獨(dú)立誠(chéng)實(shí)地開(kāi)展檢驗(yàn)工作。方法科學(xué)一遵守國(guó)家有關(guān)法律、法規(guī)，依據(jù)有關(guān)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范。數(shù)據(jù)準(zhǔn)確一認(rèn)真執(zhí)行本中心工作程序，對(duì)檢驗(yàn)工作進(jìn)行全過(guò)程質(zhì)量控制，確保檢驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性。辦事高效一在規(guī)定的工作日內(nèi)接受客戶委托，出具檢驗(yàn)報(bào)告。分子實(shí)驗(yàn)室組織結(jié)構(gòu)圖題目

7、：分子生物實(shí)驗(yàn)室組織結(jié)構(gòu)圖起草：日期：審核：日期：編號(hào)：JS-LJ-ZLC0002-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門(mén)：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門(mén)：技術(shù)部JS-LJ-S MP0001-000實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)管理程序題目：實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)管理程序起草：日期：審核：日期：編號(hào)：JS-LJ-SMP0001-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門(mén)：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門(mén)：技術(shù)部1. 目的：防止實(shí)驗(yàn)室交叉污染，保證實(shí)驗(yàn)室的正常運(yùn)行，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和實(shí)驗(yàn)人員的安全性。2. 適用范圍：本制度適用于PCF實(shí)驗(yàn)室及相關(guān)人員，明確實(shí)驗(yàn)室各分區(qū)的內(nèi)務(wù)工 作。3.程序?qū)嶒?yàn)室的設(shè)置和人流、物流管理本中心在二樓大實(shí)驗(yàn)室內(nèi)設(shè)置臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室

8、，即PCR實(shí)驗(yàn)室。PCF實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置分四個(gè)獨(dú)立工作區(qū)：PCR式劑準(zhǔn)備區(qū)（一區(qū)）、PCR羊本處理區(qū)（二區(qū)）、PCF擴(kuò)增區(qū)（三區(qū)）、PCF產(chǎn)物分析區(qū)（四區(qū)），各區(qū)設(shè)有專門(mén)的責(zé)任 人。各區(qū)門(mén)前有醒目標(biāo)志，每個(gè)區(qū)都設(shè)置緩沖區(qū)，用于更換工作服、工作鞋及維持空 氣流向。進(jìn)入各個(gè)工作區(qū)域工作時(shí)，必須嚴(yán)格遵守單一方向順序：即從第一區(qū)的試劑準(zhǔn)備區(qū)一-第二區(qū)的樣本處理區(qū)一-第三區(qū)的擴(kuò)增區(qū)一-第四區(qū)的產(chǎn)物分析區(qū)。嚴(yán)禁誤入和逆向進(jìn)入各工作區(qū)。區(qū)通過(guò)排風(fēng)裝置保持正壓，三、四區(qū)通過(guò)抽風(fēng)裝置保持負(fù)壓。各區(qū)配備專用的儀器、設(shè)備、輔助設(shè)施、耗材、清潔用品、辦公和消毒用 品，并有明顯的區(qū)域標(biāo)示，須貼上不同顏色標(biāo)簽予以區(qū)別：第一區(qū)

9、為藍(lán)色標(biāo)簽，第二 區(qū)為綠色標(biāo)簽，第三區(qū)為白色標(biāo)簽，第四區(qū)為粉色標(biāo)簽不得混用。各區(qū)配有不同顏色工作服，第一區(qū)為藍(lán)色，第二區(qū)為綠色，第三區(qū)為白色, 第四區(qū)為粉色，進(jìn)入各區(qū)實(shí)驗(yàn)室，必須更換本室有顏色標(biāo)識(shí)的工作服，換上專用鞋, 帶上手套。實(shí)驗(yàn)室的物流同樣嚴(yán)格遵守上述唯一流向制度，并通過(guò)傳遞窗進(jìn)行傳遞。3.2實(shí)驗(yàn)室清潔消毒管理321 實(shí)驗(yàn)室工作服應(yīng)每周由專人定期清洗和消毒。標(biāo)本制備區(qū)工作服必須先進(jìn)行消3.22實(shí)驗(yàn)結(jié)束后實(shí)驗(yàn)人員必須立即對(duì)工作區(qū)進(jìn)行清潔消毒，操作完成后打開(kāi)排氣扇。桌面在工作結(jié)束后，必須立即用消毒液（2g/L有效氯含量或75%酉精等）擦拭，并 將可移動(dòng)紫外燈調(diào)至實(shí)驗(yàn)臺(tái)60-90cm內(nèi)照射消毒

10、30-60min，室內(nèi)空氣紫外燈消毒30-60min o各區(qū)配備專用清潔工具，并有明顯的區(qū)域標(biāo)示，不得混用。實(shí)驗(yàn)室人員配置及培訓(xùn)程序題目：實(shí)驗(yàn)室人員配置及培訓(xùn)程序起草：日期：審核：日期：編號(hào)：JS-LJ-SMP0002-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門(mén)：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門(mén)：技術(shù)部1. 目的：保證實(shí)驗(yàn)室有足夠數(shù)量合格的工作人員，確保能夠保質(zhì)保量完成相應(yīng)的工作任務(wù)。2. 適用范圍：本程序適用于實(shí)驗(yàn)室人員配置、管理、培訓(xùn)及考核，所有工作人員均 應(yīng)熟知并遵守該程序。3.程序 3.1. 人員要求實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)為醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)或相關(guān)專業(yè)畢業(yè)，具有中級(jí)技術(shù)職稱或大 中專以上學(xué)歷。實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)參加衛(wèi)生部或

11、市臨檢中心舉辦的PCR技術(shù)培訓(xùn)，并取得合格證。對(duì)于新進(jìn)入本室的人員，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)室有培訓(xùn)合格證的上級(jí)技術(shù)人員的指導(dǎo) 下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)工作，實(shí)驗(yàn)報(bào)告由有資格的本室工作人員出具，并應(yīng)在最短的時(shí)間內(nèi)取得 上崗培訓(xùn)合格證。3.2.人員配置實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)工作需要配備足夠的工作人員，目前實(shí)驗(yàn)室操作人員4人，其中2人已獲得培訓(xùn)合格證，視工作量的增加和業(yè)務(wù)發(fā)展需要，適當(dāng)增加工作人員。3.22各級(jí)技術(shù)人員履行相應(yīng)的工作職責(zé)。3.3.人員培訓(xùn)及考核3.3.1.3.3.2.實(shí)驗(yàn)室工作人員定期參加相關(guān)學(xué)術(shù)交流會(huì)議。實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人（或技術(shù)負(fù)責(zé)人）定期參加衛(wèi)生部 PCR室間質(zhì)評(píng)總結(jié)會(huì)。3.3.3.3.4.人員管理安排未取得上崗培訓(xùn)合格

12、證的工作人員在合適的時(shí)間內(nèi)參加技術(shù)培訓(xùn)。3.4.1實(shí)驗(yàn)室建立所有工作人員的技術(shù)檔案，包括：學(xué)歷、任職資格、發(fā)表論文、 研究成果、培訓(xùn)等相關(guān)材料復(fù)印件。3.4.2技術(shù)檔案包括文本檔案和電子檔案，文本檔案每年更新1次。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制管理程序題目：實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制管理程 序起草：日期：審核：日期：編號(hào)：JS-LJ-SMP0003-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門(mén)：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門(mén)：技術(shù)部1.目的：監(jiān)控本實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作的可靠性和有效性，確定檢測(cè)結(jié)果能否報(bào)告。2. 適用范圍：本程序適用于實(shí)驗(yàn)室臨床檢測(cè)實(shí)驗(yàn)全過(guò)程，實(shí)驗(yàn)室工作人員均須熟知 并遵守本程序，并逐步完善室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評(píng)工作。3.程序 3.1.

13、室內(nèi)質(zhì)控由于核酸擴(kuò)增的高敏感性，為避免假陽(yáng)性和假陰性，必須對(duì)DNA和RNA分析的各步進(jìn)行質(zhì)量控制，以保證測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。室內(nèi)質(zhì)控包括標(biāo)本制備、 逆轉(zhuǎn)錄、擴(kuò)增和產(chǎn)物分析中的每一步。逆轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增：包括陽(yáng)性質(zhì)控和陰性質(zhì)控。對(duì)逆轉(zhuǎn)錄和核酸擴(kuò)增的質(zhì)控可使 用內(nèi)標(biāo)質(zhì)控方法也可采用外標(biāo)質(zhì)控方法。在測(cè)定血清/血漿病原體如HBV-DNA HCV-RN等時(shí)，應(yīng)使用市臨檢中心統(tǒng)一發(fā)放的質(zhì)控品作為質(zhì)控樣本，與待測(cè)臨床標(biāo)本等同處理提取核酸及擴(kuò)增，以判斷逆轉(zhuǎn) 錄及擴(kuò)增檢測(cè)的效果。3.143.1.5.質(zhì)控樣本在擴(kuò)增時(shí)必須使用與患者的標(biāo)本相同的主反應(yīng)混合液。每一個(gè)PCF反應(yīng)都必須設(shè)外加陰性質(zhì)控（污染監(jiān)測(cè)質(zhì)控）。3.

14、1.6.測(cè)定結(jié)果的評(píng)價(jià):3.1.6.1.采用實(shí)時(shí)熒光定量PCF檢測(cè)方法，在判斷結(jié)果時(shí)，應(yīng)先對(duì)擴(kuò)增的熒光信號(hào)作出定性判斷，然后再進(jìn)行定量分析，避免一些非特異性熒光信號(hào)對(duì)結(jié)果分析的干擾。3.1.6.2.當(dāng)質(zhì)控標(biāo)本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)在控時(shí)，方可發(fā)出臨床標(biāo)本的檢測(cè)報(bào)告。3.1.6.3.每次實(shí)驗(yàn)的質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)均要作記錄，如有失控現(xiàn)象應(yīng)及時(shí)分析失控原因并米取措施,并做記錄。3.2.室間質(zhì)評(píng)3.2.1.參加山東省或衛(wèi)生部臨檢中心相關(guān)檢測(cè)的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)。3.2.2.室間質(zhì)控樣本的接收和驗(yàn)收參見(jiàn)室間質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。3.2.3.質(zhì)控標(biāo)本的檢測(cè)按常規(guī)臨床標(biāo)本對(duì)待，檢測(cè)結(jié)果須在截止日期前上報(bào)。3.2.4.對(duì)室間質(zhì)評(píng)的反饋結(jié)果進(jìn)行

15、分析，確定工作中須修正的環(huán)節(jié)。查閱同行對(duì)有關(guān)試劑盒的使用效果。1.儀器設(shè)備管理程序題目：儀器設(shè)備管理程序起草：日期：審核：日期：編號(hào)：JS-LJ-SMP0004-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門(mén)：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門(mén)：技術(shù)部目的：確保實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備得到妥善的管理。確保檢測(cè)質(zhì)量，保障儀器設(shè)備的使2.用壽命。適用范圍：本程序適用于基因擴(kuò)增檢驗(yàn)診斷室所有的儀器設(shè)備的購(gòu)置、驗(yàn)收、使用、校正和維護(hù)管理。3.程序儀器購(gòu)買(mǎi)原則：根據(jù)中心的有關(guān)規(guī)定本著“質(zhì)優(yōu)價(jià)廉”進(jìn)行，所購(gòu)儀器必須三證齊全（生產(chǎn)許可證、產(chǎn)品注冊(cè)證、經(jīng)營(yíng)執(zhí)照），并能與基因診斷實(shí)驗(yàn)室的工作條件相 符外包裝：廠名廠址、檢測(cè)、批準(zhǔn)文號(hào)、批號(hào)和有效期等。

16、3.2.儀器購(gòu)買(mǎi)程序儀器廠家的確定：先由實(shí)驗(yàn)操作人員提出初步意見(jiàn)，提供2家或2家以上（特殊情況1家亦可）試劑廠家的有關(guān)儀器信息，提交中心儀器審核組討論。儀器的購(gòu)買(mǎi)：由物流部負(fù)責(zé)與供貨商聯(lián)系供貨，交儀器審核組討論決定。儀器的驗(yàn)收：供貨商送來(lái)儀器后由物流部人員和實(shí)驗(yàn)操作人員共同驗(yàn)收，在廠家的供貨清單上簽字。儀器的放置：根據(jù)儀器本身的要求及基因診斷實(shí)驗(yàn)室各區(qū)的要求安放儀器?；蛟\斷實(shí)驗(yàn)室的主要儀器設(shè)備均需建立檔案，檔案內(nèi)容包括：設(shè)備的名稱及型號(hào)、制造商名稱、設(shè)備編號(hào)、啟用日期、目前放置地點(diǎn)、設(shè)備責(zé)任人，并應(yīng)有儀器 的標(biāo)準(zhǔn)操作SOP或其它技術(shù)資料復(fù)印件。常規(guī)儀器設(shè)備的操作使用程序3.6.1.儀器設(shè)備的

17、使用授權(quán)僅有本實(shí)驗(yàn)室工作人員有權(quán)使用實(shí)驗(yàn)室的儀器設(shè)備。儀器設(shè)備的使用者在使用前首先必須熟悉儀器設(shè)備的操作使用程序并經(jīng) 中心主任考核認(rèn)可。PCR實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有工作人員均經(jīng)工程師操作培訓(xùn)，共同完成實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)系統(tǒng)的建立，管理文件的撰寫(xiě)工作。3.6.2.儀器的使用儀器設(shè)備的使用嚴(yán)格遵守分區(qū)使用管理。儀器設(shè)備的使用必須嚴(yán)格遵循儀器設(shè)備的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。常規(guī)儀器設(shè)備的維護(hù)保養(yǎng)程序儀器設(shè)備應(yīng)定期校準(zhǔn)，具體參照“儀器設(shè)備校準(zhǔn)程序”。儀器出現(xiàn)故障應(yīng)作記錄和處理意見(jiàn)，如不能正常使用，應(yīng)填寫(xiě)維修申請(qǐng)單, 交儀器部設(shè)備維修人員或相關(guān)專門(mén)維修單位進(jìn)行處理。儀器應(yīng)有工作狀態(tài)標(biāo)識(shí)，正常運(yùn)行的各區(qū)儀器應(yīng)貼有相應(yīng)的標(biāo)簽（綠色）以表明

18、其狀態(tài)。待維護(hù)的儀器用黃色標(biāo)簽。有故障待修暫停儀器用紅色標(biāo)簽。需定期作校準(zhǔn) 或檢定的儀器應(yīng)有校準(zhǔn)或檢定日期及下次校準(zhǔn)或檢定日期的記錄。儀器設(shè)備的報(bào)廢經(jīng)提出申請(qǐng)后，由中心有關(guān)人員統(tǒng)一處理。本實(shí)驗(yàn)室所有儀器、設(shè)備均為專用不外借。1.臨床標(biāo)本的管理程序題目：臨床標(biāo)本的管理程序起草：日期：審核：日期：編號(hào)：JS-LJ-SMP0005-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門(mén)：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門(mén)：技術(shù)部目的：加強(qiáng)標(biāo)本采集、運(yùn)送、貯存、廢棄的管理，保證檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性與有效性。2.適用范圍：本程序適用于各類臨床標(biāo)本的管理。3.程序標(biāo)本的唯一性標(biāo)識(shí)：標(biāo)識(shí)構(gòu)成中心代碼、病人姓名、標(biāo)本采集日期、檢測(cè)、該檢測(cè)批次的標(biāo)本序號(hào)

19、，無(wú)間隔符號(hào)。標(biāo)本的唯一性標(biāo)識(shí)須字跡清晰明了，不得 隨意作任何涂改；必須時(shí)，在舊標(biāo)識(shí)上劃雙線更改，更改后應(yīng)保持舊標(biāo)識(shí)可辨識(shí)。具 體見(jiàn)“標(biāo)本唯一標(biāo)識(shí)編號(hào)操作規(guī)程”。外包裝：廠名廠址、檢測(cè)、批準(zhǔn)文號(hào)、批號(hào)和 有效期等。標(biāo)本的采集、驗(yàn)收、拒收：本實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)標(biāo)本為血清，要求用真空采血管采集 血液標(biāo)本；接收標(biāo)本時(shí)應(yīng)核對(duì)標(biāo)本與檢驗(yàn)申請(qǐng)單的一致性。標(biāo)本接受人須檢查標(biāo)本狀 態(tài)：標(biāo)本合乎要求，須在標(biāo)本記錄上注明合格，作進(jìn)一步處理；標(biāo)本不合格，工作人 員有權(quán)拒受標(biāo)本，其它后續(xù)處理過(guò)程中發(fā)現(xiàn)的不合格，應(yīng)記錄其狀態(tài)并通知相關(guān)醫(yī)院 重新送檢。具體見(jiàn)“臨床標(biāo)本采集、驗(yàn)收、拒收操作規(guī)程”。臨床標(biāo)本的保存：當(dāng)天不檢測(cè)的標(biāo)本可

20、經(jīng)離心后吸取血清及時(shí)放置于-20 C保存。具體見(jiàn)“臨床標(biāo)本保存操作規(guī)程”。3.4.標(biāo)本的安全處理：實(shí)驗(yàn)室所有的廢棄標(biāo)本、使用過(guò)的耗材等均應(yīng)放入含相應(yīng)濃 度的有效氯消毒液中，然后再作相應(yīng)的處理。所有標(biāo)本均可能具有傳染性，須嚴(yán)格遵 守檢驗(yàn)中心有關(guān)院內(nèi)感染及醫(yī)用垃圾的管理和處理規(guī)定，工作人員須注意保持并隨時(shí) 檢查容器的完整和無(wú)標(biāo)本外泄發(fā)生。具體見(jiàn)“實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理程序”和“實(shí)驗(yàn)室生 物防護(hù)和安全管理程序”。1.實(shí)驗(yàn)室生物防護(hù)與安全管理程序2.適用范圍：本程序適用于整個(gè)臨床基因診斷實(shí)驗(yàn)室。題目：實(shí)驗(yàn)室生物防護(hù)與安全管理程序起草：日期：審核：日期：編號(hào)：JS-LJ-SMP0006-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)

21、部門(mén)：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門(mén)：技術(shù)部目的：保證實(shí)驗(yàn)室、實(shí)驗(yàn)人員和外部環(huán)境的安全。3.程序：根據(jù)中華人民共和國(guó)傳染病防治法，參照微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生 物安全通用準(zhǔn)則以及山東省臨床檢驗(yàn)中心下發(fā)的山東省臨床檢驗(yàn)專業(yè)質(zhì)控督查基本 內(nèi)容和要求，對(duì)本實(shí)驗(yàn)室中各種危險(xiǎn)因素采取有效的控制措施，預(yù)防實(shí)驗(yàn)室中存在的污染源對(duì)實(shí)驗(yàn)室、實(shí)驗(yàn)人員和環(huán)境的污染，具體內(nèi)容詳見(jiàn)中心文件“生物安全手冊(cè)”。嚴(yán)格執(zhí)行生物防護(hù)和安全制度，監(jiān)控各種危險(xiǎn)因素，采取有效控制措施，注意個(gè)人生物安全防護(hù)，實(shí)驗(yàn)中嚴(yán)格按照各種標(biāo)準(zhǔn)操作程序操作外包裝：廠名廠址、檢測(cè)、 批準(zhǔn)文號(hào)、批號(hào)和有效期等。每天更換廢液缸的2g/L有效氯含量消毒液，并保證2

22、g/L有效氯含量消毒液用量為 廢液缸內(nèi)總液量的1/5左右。正確配置使用消毒液。如不當(dāng)使用消毒液也能散布污染通 過(guò)空白對(duì)照、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照和弱陽(yáng)性（低拷貝數(shù)）對(duì)照進(jìn)行質(zhì)控。實(shí)驗(yàn)臺(tái)面日常清潔時(shí)使用75%的酒精擦拭。每區(qū)每天實(shí)驗(yàn)前后紫外燈照射30- 60min，如有需要可延長(zhǎng)照射時(shí)間，對(duì)工作臺(tái)面實(shí)驗(yàn)前后也要用紫外燈照射30-60 min，并作好記錄。標(biāo)本采集、運(yùn)送過(guò)程中，應(yīng)保持容器完好，無(wú)泄漏。工作桌面或地面一旦有標(biāo)本 污染時(shí)，應(yīng)及時(shí)用含氯消毒液清潔，再用 75%勺酒精清潔桌面。實(shí)驗(yàn)廢棄物、患者樣本均可能具有傳染性，應(yīng)按照生物傳染性質(zhì)對(duì)待，應(yīng)嚴(yán)格按 照實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理制度處理。3.6.有下列情況

23、之一者，還需另外消毒：手接觸有傳染性的微生物；水龍頭、水池肥皂、工作服可能同時(shí)被大量細(xì)菌污染者。消毒劑可用2g/L有效氯含量消毒液。3.7.1.3.7.其它安全措施:在基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室門(mén)上需貼上生物危害標(biāo)志，非工作需要，其他人員不得入內(nèi)。與實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的任何私人物品嚴(yán)禁入內(nèi)。3.7.2.實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)接受生物安全相關(guān)培訓(xùn)，了解病原體感染的途徑和預(yù)防方法。3.7.3.接觸感染性物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室人員必須作好個(gè)人防護(hù)，戴好手套、口罩和帽子,禁止裸手接觸任何物質(zhì)，不要戴著手套觸摸皮膚。3.7.4.實(shí)驗(yàn)使用后的廢物按照不同的處理要求進(jìn)行處理。3.7.5.的工作服,并掛在指定的地方。工作結(jié)束后，立即洗手才可離

24、開(kāi)。實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入PCR實(shí)驗(yàn)工作區(qū)，應(yīng)換上各區(qū)的專用工作服，離開(kāi)時(shí)脫下該區(qū)3.7.6.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后必須立即對(duì)工作區(qū)進(jìn)行清潔消毒。桌面在工作結(jié)束后，必須立即 用消毒液（2g/L有效氯含量消毒液或75%酒精等）擦拭，并將可移動(dòng)紫外燈調(diào)至距實(shí)驗(yàn)臺(tái)60-90cm內(nèi)照射消毒30-60min。3.7.7.保證實(shí)驗(yàn)室所用的實(shí)驗(yàn)消耗品均經(jīng)過(guò)高壓滅菌處理。3.7.8.防盜措施:制定防火、防盜措施：及時(shí)檢查電線是否老化，發(fā)現(xiàn)隱患應(yīng)及時(shí)排除； 設(shè)內(nèi)保安全機(jī)制，由PCF室工作人員為安全員，負(fù)責(zé)工作完畢后檢查門(mén)窗。3.7.9.要嚴(yán)格執(zhí)行以上各項(xiàng)措施，并定期由室負(fù)責(zé)人對(duì)以上措施的落實(shí)情況予以調(diào) 查。如調(diào)查不合格，對(duì)相應(yīng)責(zé)任人

25、進(jìn)行處罰，并限期整改。4.應(yīng)急措施:工作人員在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中懷疑被感染、發(fā)生重大生物污染時(shí)，應(yīng)立即停止試驗(yàn)并報(bào) 告上級(jí)，并暫時(shí)關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室，進(jìn)行嚴(yán)格的消毒，并根據(jù)實(shí)際情況，采取相應(yīng)有效措施 避免感染的發(fā)生或曼延。如遇實(shí)驗(yàn)中手指被劃破，應(yīng)立即用水沖洗、消毒包扎傷口， 如此標(biāo)本為陽(yáng)性，應(yīng)立即接種疫苗，同時(shí)上報(bào)山東省臨檢中心，提請(qǐng)?jiān)俅螌徍藢?shí)驗(yàn)室 消毒隔離情況。在此期間，為了確保報(bào)告的及時(shí)，將病人標(biāo)本送往其他經(jīng)衛(wèi)生部審批的實(shí)驗(yàn)室檢 測(cè)。JS-LJ-S MP0007-0001.2.實(shí)驗(yàn)室文件、記錄的管理程序題目：實(shí)驗(yàn)室文件、記錄的管理程序起草：日期：審核：日期：編號(hào)：JS-LJ-SMP0007-000批準(zhǔn)：日

26、期：頒發(fā)部門(mén)：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門(mén)：技術(shù)部目的：確保資料的記錄、保存狀態(tài)在控。適用范圍：本程序適用于實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生的數(shù)據(jù)、文本資料的記錄和保存的整個(gè)過(guò)程，主要有：病人和標(biāo)本信息、實(shí)驗(yàn)操作記錄、實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果、原始檢測(cè)申請(qǐng) 單和出具的檢測(cè)報(bào)告單、儀器使用記錄等。3.程序病人和標(biāo)本信息：接收標(biāo)本后，在標(biāo)本登記表中登記病人和標(biāo)本信息，包 括：病人姓名、性別、年齡、檢測(cè)、標(biāo)本類型、標(biāo)本狀態(tài)、送檢日期、標(biāo)本接收人 等，對(duì)不符合檢測(cè)要求的標(biāo)本在“拒收標(biāo)本登記表”上記錄，并及時(shí)通知送檢單位。當(dāng)天工作結(jié)束后將以上表格分類保存于標(biāo)本接受間外包裝：廠名廠址、檢測(cè)、批準(zhǔn)文3.2.號(hào)、批號(hào)和有效期等。檢測(cè)過(guò)程中的實(shí)

27、驗(yàn)記錄：在專用實(shí)驗(yàn)記錄簿上記載，不同實(shí)驗(yàn)區(qū)的記錄簿不得混用。試劑準(zhǔn)備和貯存區(qū)應(yīng)記錄檢測(cè)所用的試劑盒情況（名稱、批號(hào)、數(shù)量）； 標(biāo)本制備區(qū)記錄檢測(cè)標(biāo)本數(shù)及在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行的操作過(guò)程；在擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)記錄質(zhì) 控結(jié)果和分析。PCR儀運(yùn)行結(jié)束，運(yùn)行和結(jié)果文件應(yīng)保存在專門(mén)的數(shù)據(jù)文件夾中。文件名應(yīng)保持唯一性，前面英文字母為實(shí)驗(yàn),后面六位數(shù)字為實(shí)驗(yàn)日期，如 HBV 02071Q34將病例資料、樣品資料、檢測(cè)結(jié)果錄入報(bào)告系統(tǒng)，產(chǎn)生結(jié)果報(bào)告單，經(jīng)實(shí) 驗(yàn)室主任審核簽名；檢驗(yàn)申請(qǐng)單、檢驗(yàn)結(jié)果記錄（包括病例資料）裝訂保存于擴(kuò)增區(qū)3.5.工作臺(tái)抽屜里，統(tǒng)一建檔封存，至少保存 2年以上。實(shí)驗(yàn)記錄要真實(shí)，不得隨意涂改，如確需

28、更改，應(yīng)在所需更改內(nèi)容上劃雙 紅線，填上新內(nèi)容，說(shuō)明更改原因并簽名。36實(shí)驗(yàn)記錄須妥善保存，涉及醫(yī)療糾紛及特殊情況外，本室無(wú)義務(wù)提供給他人借閱或復(fù)印通過(guò)空白對(duì)照、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照和弱陽(yáng)性（低拷貝數(shù)）對(duì)照進(jìn)行質(zhì)控。1.2.實(shí)驗(yàn)耗材購(gòu)買(mǎi)、驗(yàn)收、儲(chǔ)放程序題目：實(shí)驗(yàn)耗材購(gòu)買(mǎi)、驗(yàn)收、儲(chǔ)放程序起草：日期：審核：日期：編號(hào)：JS-LJ-SMP0008-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門(mén)：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門(mén)：技術(shù)部目的：規(guī)定試劑購(gòu)買(mǎi)原則、驗(yàn)收的程序和試劑的正確貯存。適用范圍：本程序適用于實(shí)驗(yàn)室所購(gòu)的診斷試劑盒、實(shí)驗(yàn)耗材。3.程序試劑的購(gòu)買(mǎi)和管理試劑購(gòu)買(mǎi)原則：PCR僉測(cè)試劑選用原則“質(zhì)優(yōu)價(jià)廉”并與 ABI 75

29、00儀器配套，所購(gòu)試劑必須三證齊全。（三證包括：）3.1.2. 試劑購(gòu)買(mǎi)程序3.1.2.1試劑廠家的確定：先由具體檢測(cè)人員提供2家或2家以上（特殊情況1家亦可）試劑生產(chǎn)廠家的相關(guān)試劑信息，提交試劑審核組討論并確定第一試劑商和第二試劑供貨商,將申請(qǐng)單交物流部與供貨商確定試劑價(jià)格。3.122試劑的購(gòu)買(mǎi)：操作人員提前1周以上填寫(xiě)請(qǐng)購(gòu)單，交由物流部與供貨商聯(lián)系供貨。試劑生產(chǎn)廠商的變更：為保證試劑使用的穩(wěn)定性，原則上一年內(nèi)不變更試劑生產(chǎn)廠商，如在使用過(guò)程中發(fā)現(xiàn)質(zhì)量問(wèn)題，操作人員及時(shí)向?qū)嶒?yàn)室負(fù)責(zé)人匯報(bào)，必要時(shí)提出更換試劑生產(chǎn)廠家的要求，交試劑審核組討論決定。3.1.3.試劑驗(yàn)收:3.1.3.1物流部專門(mén)人

30、員負(fù)責(zé)核對(duì)試劑品名、數(shù)量和價(jià)格，并在供貨清單上簽字。3.1.3.2操作人員負(fù)責(zé)試劑質(zhì)量驗(yàn)收（內(nèi)外包裝驗(yàn)收）：外包裝要求：包裝完整無(wú)損、標(biāo)識(shí)清楚齊全 （品名、廠家、批準(zhǔn)文號(hào)、生產(chǎn)日期、效期）、所購(gòu)試劑需保證至少仍有三個(gè)月以上效期;內(nèi)包裝要求：內(nèi)包裝完好無(wú)損、無(wú)泄漏，試劑各部分、說(shuō)明書(shū)齊全。供貨清單由試劑管理人員保管，試劑驗(yàn)收后登記存儲(chǔ)。試劑儲(chǔ)存：試劑盒保存按照說(shuō)明書(shū)規(guī)定進(jìn)行。PCR僉測(cè)試劑分區(qū)保存：擴(kuò)增反應(yīng)體系試劑保存于試劑儲(chǔ)存區(qū)；對(duì)照品、定量校準(zhǔn)品、核酸提取試劑儲(chǔ)存于樣品處 理區(qū)。試劑質(zhì)檢：按照試劑質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)操作程序操作。試劑出現(xiàn)質(zhì)量問(wèn)題，立即書(shū)面通知實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人員，在其知情同意下，書(shū)面 通知物

31、流部辦理退換貨手續(xù)。實(shí)驗(yàn)耗材的購(gòu)買(mǎi)和管理購(gòu)買(mǎi)：由實(shí)驗(yàn)室工作人員填寫(xiě)申請(qǐng)，按需提出所購(gòu)耗材的品名、規(guī)格、數(shù) 量，由實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人簽字同意后交物流部購(gòu)買(mǎi)。驗(yàn)收：消耗品購(gòu)進(jìn)后由物流部相關(guān)人員核對(duì)數(shù)量、規(guī)格，查驗(yàn)外包裝是否破 損，如發(fā)生破損或其它質(zhì)量問(wèn)題，給予退回。由實(shí)驗(yàn)室工作人員負(fù)責(zé)進(jìn)行質(zhì)量驗(yàn)收。實(shí)驗(yàn)操作人員對(duì)庫(kù)存試劑定期每月檢查，并填寫(xiě)試劑使用記錄表，不使用過(guò)期試劑，并杜絕浪費(fèi)現(xiàn)象。試劑外借必須征得實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人員同意，并履行中心有關(guān)借出手續(xù)。1.抱怨處理程序題目：抱怨處理程序起草：日期：審核：日期：編號(hào)：JS-LJ-SMP0009-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門(mén)：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門(mén)：技術(shù)部目的：“

32、抱怨”往往提示實(shí)驗(yàn)室存在著尚未得到認(rèn)識(shí)的漏洞或問(wèn)題。為正確處理好2.“抱怨”，鞏固和完善實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量體系，特制訂本程序。適用范圍：本程序適用于來(lái)自于患者，臨床醫(yī)護(hù)人員或?qū)嶒?yàn)室工作人員針對(duì)檢測(cè)結(jié)果質(zhì)量、服務(wù)質(zhì)量或?qū)嶒?yàn)室管理等問(wèn)題的投訴。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室工作人員均有責(zé)任接待申訴者，實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人對(duì)抱怨進(jìn)行處理，如超出室負(fù)責(zé)人職權(quán)范圍，應(yīng)經(jīng)中心負(fù)責(zé)人處理。3.程序3.1.接到抱怨3.2.記錄抱怨33提出針對(duì)具體抱怨的處理方法343.5.征求抱怨方對(duì)處理方法的意見(jiàn)3.6.執(zhí)行解決方案3.7.記錄最后的處理結(jié)果將不在常見(jiàn)抱怨處理方式范圍內(nèi)的處理方法交室負(fù)責(zé)人審核4.處理措施:4.1.針對(duì)客戶對(duì)服務(wù)態(tài)度抱怨的處理措

33、施4.1.1.接到抱怨后，由室負(fù)責(zé)人責(zé)成相關(guān)人員向客戶致歉。4.1.2.對(duì)患者提出的合理要求及時(shí)進(jìn)行處理。4.1.3.調(diào)查事情原委，根據(jù)調(diào)查結(jié)果對(duì)相關(guān)責(zé)任人進(jìn)行處罰。4.1.4.記錄抱怨及其處理結(jié)果。4.2.針對(duì)客戶對(duì)結(jié)果準(zhǔn)確性抱怨的處理措施4.2.1.為客戶展示原始實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。向客戶解釋相關(guān)實(shí)驗(yàn)程序和可能臨床情況，幫助客戶解除疑慮。如確有實(shí)驗(yàn)結(jié)果不符合有效性要求或出現(xiàn)錯(cuò)誤，則應(yīng)及時(shí)糾正錯(cuò)誤，重新實(shí) 驗(yàn)以得到準(zhǔn)確結(jié)果。同時(shí)由室負(fù)責(zé)人向客戶致歉以爭(zhēng)取得到其諒解，按有關(guān)條例對(duì)責(zé)任 人進(jìn)行相應(yīng)處罰，并記錄。針對(duì)客戶對(duì)檢測(cè)結(jié)果和臨床診斷的符合率抱怨的處理措施針對(duì)客戶抱怨的檢查進(jìn)行從實(shí)驗(yàn)前到實(shí)驗(yàn)后的全程調(diào)

34、查，查找是否存在影響結(jié)果的因素，并形成書(shū)面報(bào)告。4.32就調(diào)查發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題進(jìn)行針對(duì)性解決。4.3.3.4.4.針對(duì)客戶對(duì)結(jié)果發(fā)放時(shí)效性抱怨的處理措施4.4.1.嚴(yán)格按承諾時(shí)間發(fā)放臨床報(bào)告。與客戶建立定期交流機(jī)制，定期了解臨床使用情況和對(duì)臨床作出解釋。4.4.2.在與客戶交流會(huì)上就報(bào)告發(fā)放過(guò)程及時(shí)間作出解釋，獲取臨床對(duì)結(jié)果報(bào)告時(shí)效性的理解。5.抱怨解決的原則所有實(shí)驗(yàn)室工作人員要認(rèn)真對(duì)待客戶及其它部門(mén)人員就實(shí)驗(yàn)室工作所提出的抱怨，對(duì)提出抱怨的人員要做到語(yǔ)言文明，熱情接待。由實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)對(duì)抱怨申訴進(jìn)行處理，實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人不在時(shí)由其委托人處理，實(shí)驗(yàn)室所有工作人員均有責(zé)任接待申訴者。對(duì)抱怨和投訴均應(yīng)進(jìn)行

35、相應(yīng)記錄，包括日期、申訴人、申訴內(nèi)容、處理措施、處理者、聯(lián)系方式等。對(duì)于當(dāng)時(shí)能解決的申訴應(yīng)及時(shí)處理，當(dāng)時(shí)不能解決的，要限時(shí)處理，并明確告知申訴者。5.5. 如抱怨涉及到實(shí)驗(yàn)室操作程序是否符合臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法、臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范等，實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人應(yīng)召集實(shí)驗(yàn)室工作人員討論，如實(shí)驗(yàn)室的操作程序確實(shí)不符合有關(guān)規(guī)定，應(yīng)重新修訂操作規(guī)程后執(zhí)行。當(dāng)實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人無(wú)法滿意解決報(bào)怨時(shí)，應(yīng)將有關(guān)材料遞交中心，由中心處理。JS-LJ-S MP0010-0001.2.儀器設(shè)備校準(zhǔn)程序題目：儀器設(shè)備校準(zhǔn)程序起草：日期：審核：日期：編號(hào)：JS-LJ-SMP0010-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門(mén)：技術(shù)部生效

36、日期：分發(fā)部門(mén)：技術(shù)部目的：確保實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備得到妥善的管理，確保檢測(cè)質(zhì)量。適用范圍：本程序適用于適用于實(shí)驗(yàn)室所有的儀器設(shè)備。3.程序3.1.1.3.1.校準(zhǔn)方法:定量擴(kuò)增儀、生物安全柜、冷凍高速離心機(jī)功能性儀器由各生產(chǎn)廠家每年進(jìn)行一次維修檢測(cè)，并將此作為校準(zhǔn)依據(jù)。各儀器的校準(zhǔn)單位（即生產(chǎn)廠家）見(jiàn)主要儀器一覽表。3.1.2.移液器校準(zhǔn)外送專業(yè)機(jī)構(gòu)專業(yè)人員進(jìn)行校準(zhǔn)。3.1.3.干式恒溫器使用經(jīng)質(zhì)量檢定的溫度計(jì)進(jìn)行自行校準(zhǔn)。3.1.4.溫濕度計(jì)校準(zhǔn)以經(jīng)過(guò)質(zhì)量計(jì)量監(jiān)督局校準(zhǔn)過(guò)的其他溫度計(jì)和濕度計(jì)進(jìn)行校3.1.5.準(zhǔn)。移動(dòng)紫外線消毒車(chē)由檢驗(yàn)中心儀器部專門(mén)人員每六個(gè)月對(duì)紫外燈管的紫外線進(jìn)行測(cè)試。新燈管要

37、求紫外線強(qiáng)度大于或等于90UW/cm舊燈管紫外線強(qiáng)度大于或等于70 UW/cm。每年聯(lián)系生產(chǎn)廠家進(jìn)行一次維護(hù)和檢測(cè)，并將此作為校準(zhǔn)依據(jù)。3.2.校準(zhǔn)計(jì)劃3.2.1.啟用校準(zhǔn)：設(shè)備在投入使用時(shí)實(shí)施啟用校準(zhǔn)。3.2.2.周期校準(zhǔn)：設(shè)備在投入使用后，每年實(shí)施一次校準(zhǔn)。3.2.3.3.2.4.維修后校準(zhǔn)：設(shè)備在維修后須經(jīng)校準(zhǔn)方可重新投入使用。校準(zhǔn)計(jì)劃外的校準(zhǔn)：如在檢測(cè)及 EQA IQC活動(dòng)中發(fā)現(xiàn)存在結(jié)果漂移或偏差及其它可疑情況時(shí)，通過(guò)分析對(duì)可疑設(shè)備及時(shí)實(shí)施校準(zhǔn)。325.移液器的校準(zhǔn)順序：按照單一流向規(guī)定，對(duì)移液器的校準(zhǔn)首先校準(zhǔn)試劑準(zhǔn)備區(qū)，然后依次為樣本處理區(qū)和 PCF擴(kuò)增區(qū)。每校準(zhǔn)完一個(gè)區(qū)的移液器，將

38、其放回原處后，再取下一個(gè)區(qū)的移液器進(jìn)行校準(zhǔn)。3.2.6.校準(zhǔn)安排在不進(jìn)行樣本檢測(cè)的日期完成。3.2.7.校準(zhǔn)的有效標(biāo)識(shí)：經(jīng)校準(zhǔn)的設(shè)備加貼綠色標(biāo)簽，標(biāo)簽上應(yīng)標(biāo)明本次校準(zhǔn)的日期和結(jié)果及下次校準(zhǔn)的計(jì)劃預(yù)定日期。3.2.8.實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人員每年應(yīng)制定書(shū)面的各儀器設(shè)備的校準(zhǔn)計(jì)劃，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)后由各儀器設(shè)備責(zé)任人按計(jì)劃實(shí)施。校準(zhǔn)結(jié)果的審批及記錄保存：每次校準(zhǔn)的結(jié)果須及時(shí)送交中心質(zhì)量負(fù)責(zé)人審閱簽字。校準(zhǔn)記錄須妥善保存于 PCR實(shí)驗(yàn)室三區(qū)直至設(shè)備報(bào)廢。1.實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果報(bào)告程序題目：實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果報(bào)告程序起草：日期：審核：日期：編號(hào)：JS-LJ-SMP0011-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門(mén)：技術(shù)部生效日期：

39、分發(fā)部門(mén)：技術(shù)部目的：檢測(cè)報(bào)告是過(guò)程的最終輸出，為使報(bào)告的生成、發(fā)放、管理受控，特制訂本程2.序。適用范圍：本程序適用于本基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室所有臨床檢測(cè)的結(jié)果報(bào)告，只有經(jīng)PCR培訓(xùn)并獲得上崗證的工作人員才有權(quán)審核和簽發(fā)報(bào)告單。3. 程序檢測(cè)結(jié)果的報(bào)告應(yīng)準(zhǔn)確、清晰、明確、客觀和及時(shí)，杜絕虛假報(bào)告。實(shí)時(shí)熒光PCF測(cè)定時(shí)，其檢測(cè)數(shù)據(jù)要經(jīng)過(guò)分析，避免因非特異性熒光而造成假陽(yáng)性結(jié) 果。根據(jù)質(zhì)控品判斷PCF擴(kuò)增的有效性，只有當(dāng)質(zhì)控品的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)在控時(shí)，才可發(fā)出報(bào)告，否 則應(yīng)重新測(cè)定。定量結(jié)果報(bào)告以每毫升拷貝數(shù)（拷貝數(shù)/ml）報(bào)告，如結(jié)果高于測(cè)定方法線性范圍上限, 則對(duì)樣本稀釋后再測(cè)，結(jié)果乘上稀釋倍數(shù)；如結(jié)果

40、低于方法的線性范圍下限，則報(bào)告小于檢測(cè) 下限。病人檔案及測(cè)定結(jié)果及病人檔案一并登記到實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄表中，由室負(fù)責(zé)人管理所有 病人資料。每份報(bào)告均應(yīng)由我實(shí)驗(yàn)室出具；報(bào)告內(nèi)容至少應(yīng)包括：病人姓名、性別、年齡、樣 本號(hào)、標(biāo)本特性、標(biāo)本狀態(tài)、標(biāo)本接收日期及測(cè)定、測(cè)定方法、結(jié)果、參考范圍以及操作者和 審核者的簽名和檢測(cè)日期等內(nèi)容。否則視為無(wú)效或虛假報(bào)告單。以上記錄實(shí)行完整保存，至少 保存2年以上。3.5.報(bào)告單應(yīng)及時(shí)發(fā)出。由送化驗(yàn)單人員負(fù)責(zé)送往各送檢醫(yī)院。36打印當(dāng)日檢測(cè)報(bào)告匯總表，存檔，妥善保存2年以上3.7.當(dāng)臨床科室醫(yī)生要求電話報(bào)告結(jié)果時(shí)，應(yīng)先確認(rèn)對(duì)方身份，核對(duì)其所查詢的病人姓名、病區(qū)床號(hào)等情況，方

41、可報(bào)告，并明確告知對(duì)方，實(shí)驗(yàn)的最終結(jié)果以檢測(cè)報(bào)告單為準(zhǔn)。當(dāng)患者要求電話報(bào)告結(jié)果時(shí)，應(yīng)讓患者提供病人基本信息后由送檢醫(yī)院科室負(fù)責(zé)人出 面告知對(duì)方其檢測(cè)結(jié)果，并需明確告知對(duì)方，實(shí)驗(yàn)的最終結(jié)果以檢測(cè)報(bào)告單為準(zhǔn)。檢驗(yàn)過(guò)程中發(fā)生故障時(shí)的應(yīng)急處理程序題目：檢驗(yàn)過(guò)程中發(fā)生故障時(shí)的應(yīng)急處理程序起草：日期：審核：日期：編號(hào)：JS-LJ-SMP0012-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門(mén)：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門(mén)：技術(shù)部1. 目的：為避免因儀器設(shè)備發(fā)生故障和試劑盒發(fā)生質(zhì)量問(wèn)題而影響到臨床檢測(cè)報(bào)告的及時(shí)性和準(zhǔn)確性，特制定本程序。適用范圍：本程序適用于可能影響到檢測(cè)報(bào)告發(fā)出的儀器設(shè)備和試劑等，對(duì)于潛在 著一定的可能影響檢測(cè)質(zhì)

42、量的不確定因素，一旦發(fā)生，作為對(duì)應(yīng)措施，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有一套相 應(yīng)的應(yīng)急處理程序，室負(fù)責(zé)人有責(zé)任組織并直接監(jiān)督本程序的實(shí)施。3. 程序?qū)嶒?yàn)室負(fù)責(zé)人接到儀器設(shè)備故障的報(bào)警后，立即現(xiàn)場(chǎng)確認(rèn)異常情況的性質(zhì)和故障 程度。儀器設(shè)備故障本室不能解決的，應(yīng)及時(shí)通知有關(guān)設(shè)備維修人員或供應(yīng)商，具體程序見(jiàn)儀器設(shè)備管理程序。對(duì)于發(fā)生故障的儀器設(shè)備，及時(shí)維修的同時(shí)，采取以下處理辦法。321.有滿足使用要求的替用設(shè)備的，啟用替用設(shè)備。3.2.2.3.2.3.可借用其他部門(mén)儀器設(shè)備時(shí)，核實(shí)該設(shè)備的使用狀態(tài)良好后可借用。替用、借用或備用設(shè)備的使用在滿足質(zhì)量要求的同時(shí)，必須同時(shí)滿足實(shí)驗(yàn)室管理 措施（特別是防污染）的要求。試劑盒質(zhì)量

43、發(fā)生問(wèn)題，經(jīng)核實(shí)后，及時(shí)通知供貨商更換另一批次試劑，使用前需 先作質(zhì)量檢測(cè)，合格后方可使用。當(dāng)有樣本或反應(yīng)管破裂，并泄露于離心機(jī)內(nèi)或擴(kuò)增儀時(shí)，應(yīng)停止工作，立即用浸有75%勺乙醇消毒液的棉簽檫拭離心機(jī)或擴(kuò)增儀，然后紫外燈照射30 min ;將該破管的原 始標(biāo)本按要求保存好與下一批標(biāo)本一起檢測(cè)。當(dāng)有樣本破裂,并泄露于工作臺(tái)面時(shí),應(yīng)用棉簽吸干血清,并用浸有2g/L有效氯消毒液的毛巾覆蓋30 min后，清水擦干再用紫外線燈照射 30 min。若質(zhì)控品出現(xiàn)問(wèn)題，應(yīng)更換其他批次的質(zhì)控品。如果試劑配制與標(biāo)本處理過(guò)程中遇到停電狀況，把試劑、標(biāo)本先保存在冰箱里,等待電源來(lái)時(shí)再繼續(xù)操作。如果在擴(kuò)增過(guò)程中遇到停電，

44、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部UPS將利用電池組供電，使PCR實(shí)驗(yàn)操作完成。儀器設(shè)備故障或試劑質(zhì)量問(wèn)題不能得到解決，預(yù)期將會(huì)影響到檢測(cè)報(bào)告的及時(shí)發(fā)出，可將標(biāo)本送至其它實(shí)驗(yàn)室檢查（該實(shí)驗(yàn)室同樣應(yīng)為獲同類認(rèn)準(zhǔn)的PCF檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室）；如已影響到報(bào)告的及時(shí)發(fā)出，應(yīng)向相關(guān)醫(yī)院公告，取得病人和醫(yī)生的諒解。影響到檢測(cè)報(bào)告發(fā)出的情況，應(yīng)在“應(yīng)急處理登記表”作記錄。1.實(shí)驗(yàn)室清潔消毒程序題目：實(shí)驗(yàn)室清潔消毒程序起草：日期：審核：日期：編號(hào)：JS-LJ-SMP0013-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門(mén)：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門(mén)：技術(shù)部目的：保證實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的整潔，防止污染。2.作。適用范圍：適于實(shí)驗(yàn)室工作環(huán)境、實(shí)驗(yàn)臺(tái)面、工作服、移液器等的清潔

45、消毒工所有實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)熟知并遵守本程序，清潔工作可由實(shí)驗(yàn)室指定人員進(jìn)行。3.操作程序3.1.消毒液配制3.1.1. 配制2g/L有效氯消毒液：參照消毒劑說(shuō)明書(shū)配制終濃度為2g/L有效氯消毒液。3.1.2.各實(shí)驗(yàn)區(qū)的清潔消毒工具均專用，不可混用。所配制的消毒液只限在當(dāng)天內(nèi)使用，隔夜如使用時(shí)應(yīng)根據(jù)本 SOPt新配制。3.2.紫外消毒3.2.1.紫外消毒須根據(jù)需要設(shè)定時(shí)間，通常為 30 min，根據(jù)需要適當(dāng)延長(zhǎng)時(shí)間。3.2.2.消毒結(jié)束后，關(guān)閉電源開(kāi)關(guān)。3.3.實(shí)驗(yàn)室消毒清潔程序3.3.1.每次實(shí)驗(yàn)前一天和實(shí)驗(yàn)結(jié)束后對(duì)各區(qū)進(jìn)行全面消毒。包括實(shí)驗(yàn)臺(tái)面、傳遞窗、地板。3.3.2.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中如發(fā)生標(biāo)本

46、或試劑外濺，應(yīng)立即用含2g/L有效氯消毒液濕布覆蓋污染處30 min，再進(jìn)行擦拭，隨后用清水擦洗，并作記錄。3.3.3.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后用含2g/L有效氯消毒液對(duì)臺(tái)面進(jìn)行清潔，紫外燈照射30 min。3.3.4.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用移動(dòng)紫外消毒車(chē)對(duì)工作臺(tái)面進(jìn)行紫外照射30 min，并將傳遞窗紫外燈打開(kāi)照射30 min。3.3.5.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，開(kāi)啟室內(nèi)紫外燈對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行紫外照射消毒至少30 min。3.3.6. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用含2g/L有效氯消毒液對(duì)各區(qū)所有儀器設(shè)備進(jìn)行擦拭清潔。3.3.7.每次對(duì)使用過(guò)的移液器、鑷子用 75%酉精棉球進(jìn)行擦拭。每周將待清潔工作服高壓滅菌后洗滌消毒，不同實(shí)驗(yàn)區(qū)的工作服隔天洗滌

47、。文件修改程序題目：文件修改程序起草：日期：審核：日期：編號(hào)：JS-LJ-SM P0014-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門(mén)：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門(mén)：技術(shù)部目的：保證文件完整性和有效性。適用范圍：本實(shí)驗(yàn)室管理體系的所有文件。程序：使用文件的操作人員在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)某個(gè)文件不適合實(shí)際工作，應(yīng)書(shū)面向室負(fù)責(zé) 人提出申請(qǐng)。申請(qǐng)?jiān)谥行臅?huì)議上通過(guò)，文件即可修改。文件修改由原撰寫(xiě)人執(zhí)行。1、2、文件首次發(fā)行為第一版，當(dāng)文件有修改后，修改狀態(tài)用阿拉伯?dāng)?shù)字表示，按3、4順序遞增，標(biāo)示在版號(hào)后。修改的文件經(jīng)中心負(fù)責(zé)人審核批準(zhǔn)、所有要求的授權(quán)簽字均已履行后，文件即為正 式發(fā)布，并同時(shí)生效執(zhí)行，原文件同時(shí)作廢。文件修改內(nèi)

48、容的相關(guān)記錄由實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人保存。JS-LJ-S OP0001-000石蠟包埋組織DNA提取標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程2.適用范圍：本程序適用于所有石蠟包埋組織樣品的DNA提 取。3.方法原理：利用細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞核釋放基因組DNA由硅膠膜柱可逆吸附基因題目：石蠟包埋組織dnAS取標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程起草：日期：審核：日期：編號(hào)：JS-LJ-SO P0001-001批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門(mén)：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門(mén)：技術(shù)部DNA制備膜選擇性地吸附1.目的：采用細(xì)胞裂解和血紅素/蛋白沉淀技術(shù)，結(jié)合DNA,以從石蠟包埋組織中提取高質(zhì)量的基因組 DNA組DNA經(jīng)蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白質(zhì)、脂質(zhì)以及多糖等雜質(zhì)后，用純化液

49、洗 脫獲得基因組DNA實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備:儀器和試劑：水浴鍋，小型常溫高速離心機(jī)，細(xì)胞/組織基因組DNA（離心柱）提 取試劑盒（百泰克），1.5 ml離心管，20-2001移液器及槍頭，100-10001移液器及槍頭。預(yù)備：實(shí)驗(yàn)前10 min打開(kāi)水浴鍋，調(diào)至56C ;另一水浴鍋調(diào)制90C ;本實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程在抽提專用實(shí)驗(yàn)臺(tái)進(jìn)行，穿實(shí)驗(yàn)服，戴乳膠手套及口罩。漂洗液WB使用前確認(rèn)加入無(wú)水乙醇，用記號(hào)筆在瓶上標(biāo)記。其余溶液 TL或CB如果有結(jié)晶或者沉淀，請(qǐng)于37C水浴重新溶解，并混勻。樣本確認(rèn)：根據(jù)樣本登記表的信息對(duì)樣本進(jìn)行確認(rèn)，并確認(rèn)樣本抽提類型、樣本質(zhì)量及是否足量等。實(shí)驗(yàn)步驟:組織脫蠟：開(kāi)啟通風(fēng)櫥；在通風(fēng)處

50、內(nèi)開(kāi)啟1.5 ml離心管管蓋，用移液槍加入1 ml二甲苯，用刀片將5-8片10卩m厚的石蠟生物組織切片（蠟塊組織處理：在石蠟包埋 組織樣品表面輕輕刮去不含組織的石蠟表層，再刮取5-10um厚的薄片，并保證剩余樣本表面平整，嚴(yán)禁使用摳取，粉碎，切除等操作破壞組織樣本；若是蠟卷，則直接用干凈的槍頭挑取適量樣本）輕輕刮入 1.5 ml離心管，密蓋，振蕩器振蕩30s;于離心機(jī)內(nèi)12000 rpm離心2 min，棄上清至專用廢液缸。注意不要棄掉沉淀。再加入1 ml無(wú)水乙醇，密蓋，再用振蕩器充分振蕩混勻；于離心機(jī)內(nèi)12000 rpm離心2 min，棄上清專用廢液缸。打開(kāi)管蓋，于室溫或 37C干燥10-15

51、 min,至酒精完全揮發(fā)，備用。過(guò)程使用槍頭為一次性耗用物，不得反復(fù)使用。52 消化：加入200 d裂解液TL,重懸沉淀，加入30卩蛋白酶K,混勻。置于64C水浴鍋水浴1h （或直至樣品完全溶解），90C水浴鍋水浴30min,短暫離心，試管壁上 的溶液收集到管底。加入200 d結(jié)合液CB渦旋混勻，再加入100 d異丙醇，漩渦震蕩充分混勻。 短暫離心，試管壁上的溶液收集到管底。轉(zhuǎn)移溶液：將所有的溶液（不要沉淀）都轉(zhuǎn)移到一個(gè)吸附柱中，12000 rpm離心30s，倒去收集管中廢液。重新將吸附柱放回收集管中。5.5.洗滌：向吸附柱內(nèi)加入500 d l抑制物去除劑IR，棄槍頭，12000 rpm離心3

52、0s,倒掉收集管中廢液。5.6.向吸附柱內(nèi)加入700 d l漂洗液WB 12000 rpm，離心30s，倒掉收集管中廢液,加500d l漂洗液WB 12000 rpm，離心30s，倒掉收集管中廢液。晾干吸附柱：空轉(zhuǎn)12000 rpm 2 min，將吸附柱放入新的1.5 ml離心管中，打開(kāi)吸附柱蓋子，室溫放置2 min或以上以徹底晾干吸附材料中殘余的酒精。洗脫：向吸附膜中間加入65dl的洗脫緩沖液E（65C預(yù)熱），室溫放置2-3 min.12000 rpm離心1mi n,離心管中的液體即為抽提的基因組 DNA濃度測(cè)量：用分光光度計(jì)測(cè)量DNA濃度。質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：DNA濃度高于20ng/ d l ,OD

53、260/OD28約為1.6-2.0則認(rèn)為DNA可用，可直接用于PCR等后續(xù)實(shí)驗(yàn),否則需重新抽提。若抽提好的 DNA暫時(shí)不用，可置于-20 C保 存?zhèn)溆?。關(guān)機(jī)及實(shí)驗(yàn)臺(tái)整理：實(shí)驗(yàn)完成后，關(guān)閉水浴鍋，所有用過(guò)的移液器調(diào)至最大量程， 擺放整齊，所有用過(guò)的東西歸回原位。最后用 75%酉精噴灑實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，2 min后擦拭干凈。注意事項(xiàng)：試劑盒在第一次使用前請(qǐng)按試劑瓶標(biāo)簽說(shuō)明在漂洗液W沖加入無(wú)水乙醇，并做好標(biāo)記；溶液使用后，應(yīng)避免長(zhǎng)期暴露于空氣中，用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。 余石蠟標(biāo)本在下次接收樣本時(shí)返還客服部，并由客服簽字確認(rèn)。9.參考文獻(xiàn)： 細(xì)胞、組織基因組DNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)。（百泰克）石蠟包埋組織樣本RN

54、A提取標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程題目：石蠟包埋組織樣本RNA提取標(biāo)準(zhǔn)操作起草：日期：規(guī)程審核：日期：編號(hào)：JS-LJ-S OP0002-000批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門(mén)：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門(mén)：技術(shù)部1.目的：柱提法從石蠟包埋組織樣本中提取高質(zhì)量的RNA2.適用范圍：本程序適用于所有石蠟包埋組織樣品的 RNA提取。3.方法原理：改進(jìn)的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細(xì)胞和滅活 RNA然后總RNA在高離序 鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，再通過(guò)一系列快速的漂洗離心的步驟，漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除，最后低鹽的RNase free water將純凈RNA從硅基膜上洗脫。實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備:儀器和試劑：通風(fēng)櫥，小型高速冷

55、凍離心機(jī)；固定組織基因組RNA（離心柱）提取試劑盒（百泰克）溶液PTL，蛋白酶K,裂解液MRL去蛋白液RE漂洗液RWRNase-free H 20,70聽(tīng)醇，RNase-free吸附柱，氯仿，收集管，移液器及槍頭。注意：所有接觸樣品的試劑、耗材均需保證無(wú) RNA酶，無(wú)菌，若發(fā)現(xiàn)可能存在污染,要立即更換。實(shí)驗(yàn)前預(yù)備：實(shí)驗(yàn)前10 min打開(kāi)冷凍離心機(jī)制冷，開(kāi)啟水浴鍋；穿實(shí)驗(yàn)服，戴一次性乳膠手套及口罩。4.3.樣本確認(rèn)：根據(jù)樣本登記表的信息對(duì)樣本進(jìn)行確認(rèn)，并確認(rèn)樣本抽提類型、樣本質(zhì)量及是否足量等。實(shí)驗(yàn)步驟:組織脫蠟：打開(kāi)通風(fēng)廚，用鑷子取出離心管，用移液槍加入1 ml二甲苯，并用刀片將5-10片10卩

56、m厚的石蠟生物組織切片（蠟塊組織處理：在石蠟包埋組織樣品表面輕輕刮去不含組織的石蠟表層，再刮取 5-10um厚的薄片，并保證剩余樣本表面平整，嚴(yán)禁使用扣取，粉碎，切除等操作破壞組織樣本；若是蠟卷，則直接用干凈的槍頭挑取適量樣本）樣品輕輕刮入1.5 ml離心管，棄切片至一次性垃圾桶。用振蕩器振蕩30sec；離心12000 rpm, 2min，4C。棄上清至專用液體垃圾桶。加入 1 ml無(wú)水乙醇,棄槍頭；用振蕩器充分振蕩混勻，離心12000 rpm, 2min, 4C。棄上清至專用液體垃圾桶，室溫干燥10-15 min，至殘留的酒精完全揮發(fā)。組織破碎：加入240卩l(xiāng)溶液PTL和 10卩l(xiāng)蛋白酶K溶

57、液，漩渦混勻。55C孵育15min,再80C 15min。加入750卩l(xiāng)裂解液MRL漩渦混勻，室溫放置 2 min。分層：加入200卩l(xiāng)氯仿。蓋緊樣品管蓋，震蕩15 sec，室溫下孵育3 min。離心12000 rpm, 10min, 4C。取上清：更換手套，用鑷子夾取新1.5 ml離心管，用移液器小心吸取上清（大概600卩l(xiāng)）放入新離心管內(nèi)，加入等體積70%乙醇，顛倒混勻。將可能得到的溶液一起轉(zhuǎn)入吸附柱RA中（溶液過(guò)多可分次過(guò)柱）。離心 12000 rpm, 45sec, 4C,棄廢液。注意：吸取上清時(shí)一定要小心，不要吸到中間層的蛋白，一定要少吸，不要貪多，以免造成RNA樣品被蛋白或基因組D

58、NA污染。沉淀：加入500卩l(xiāng)去蛋白液RE,離心12000 rpm, 45sec，棄掉廢液。5.6 .洗滌：加入700卩l(xiāng)漂洗液RW,離心12000 rpm, 60sec,棄掉廢液，加入 500卩l(xiāng)5.7.漂洗液RW 12000 rpm離心60sec,棄掉廢液。空轉(zhuǎn)離心 12000 rpm, 2min, 4C。5.8.干燥：將吸附柱放入一個(gè)進(jìn)口離心管中，掀開(kāi)離心柱蓋，室溫干燥2min。溶解：加入30卩I RNase-free 水溶解，室溫放置 2min。離心12000rpm, 1min,5.9.濃度測(cè)量：用分光光度計(jì)測(cè)量RNA濃度。保存：保存于-20 C或者更低。質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：RNA濃度高于100

59、ng/卩l(xiāng) , OD260/OD28約為1.8-2.2則認(rèn)為RNA可用,可直接用于后續(xù)RT-PCF實(shí)驗(yàn),否則需重新抽提。若抽提好的 RNA暫時(shí)不用，可置于 -80 C保存?zhèn)溆谩ｊP(guān)機(jī)及實(shí)驗(yàn)臺(tái)清理：實(shí)驗(yàn)完成后，關(guān)閉離心機(jī)及水浴鍋；所有用過(guò)的移液器調(diào)至最 大量程并擺放整齊；將所有用過(guò)的物品歸回原位。最后用75%酒精噴灑實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，2 min后擦拭干凈。8.注意事項(xiàng):所有的耗材均無(wú)RNA酶污染，所需要的氯仿、酒精、異丙醇等均需保證沒(méi)有被RNA酶污染，如果發(fā)現(xiàn)試劑有可能被污染，要立即更換；RNA吸取上清時(shí)一定要小心，不要吸到中間層的蛋白，一定要少吸，不要貪多, 提取不要求量，更多的要求質(zhì)。參考文獻(xiàn)：百泰克

60、石蠟包埋組織RNA快速提取試劑盒（離心柱型）說(shuō)明書(shū)。血液dnA提取標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程題目：血液dnA提取標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程起草：日期：審核：日期：編號(hào)：JS-LJ-SO P0003-001批準(zhǔn)：日期：頒發(fā)部門(mén)：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門(mén)：技術(shù)部1.目的：采用細(xì)胞裂解和血紅素/蛋白沉淀技術(shù)，結(jié)合DNA制備膜選擇性地吸附DNA。以從血液樣本中提取高質(zhì)量的基因組 DNA2.適用范圍：適用于所有新鮮及冷凍保存血液樣品的基因組DNA提取3.方法原理：利用細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞核釋放基因組 DNA由硅膠膜柱可逆吸附基因組DNA經(jīng)蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白質(zhì)、脂質(zhì)以及多糖等雜質(zhì)后，用純化液洗脫獲得基因組DNA4.實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備