ABO血型鑒定標準操作程序SOP文件

1、火華縣中醫(yī)院文件編號：LCYYYJYK_SOP_01 頁碼：第- PAGE 7 -頁，共 7 頁版本：第 1 版，第 1 次修訂生效日期：20XX0101項目檢驗科檢驗科 SOP編寫者：王醫(yī)生審核者：李醫(yī)生批準者：主任時間：20XX0101時間：20XX0101時間：20XX0101ABO 血型鑒定標準操作程序文件一、目的：確保儀器正常運轉與結果的準確性，嚴格檢驗質(zhì)量標準，為臨床提供及時、可靠的結果報告。二、適用范圍：檢驗科日常操作規(guī)范 三、操作人員：檢驗科授權工作人員。測定原理根據(jù)紅細胞上有或無 A 抗原或和 B 抗原，將血型分為 A 型、B 型、AB 型及 O 型 4 種?？衫眉t細胞凝集

2、試驗，通過正、反定型準確鑒定 ABO 血型。所謂正定型，是用已知抗A 和抗B 分型血清來測定紅細胞上有無相應的 A 抗原或和 B 抗原；所謂反定型，是用已知 A 細胞和 B 細胞來測定血清中有無相應的抗A 或和抗B。試劑和儀器批批檢的抗A(B 型血)、抗B(A 型血)及抗A 十 B(O 型血)分型血清。批批檢的 5 A、B 及 O 型試劑紅細胞鹽水懸液，制備方法見本節(jié)附注；離心機，顯微鏡。標本收集與處理 1，受檢者血清；2，枸緣酸鈉抗凝血或未稍取血，受檢者血液制成 5 紅細胞鹽水懸液使用， 制備方法見本節(jié)附注。3，標本出現(xiàn)中度溶血者，為不合格標本，不能用于檢測。操作步驟試管法取潔凈小試管(內(nèi)徑

3、 10mm60mm)3 支，分別標明抗A、抗B 和抗A十 B，用滴管分別加抗A、抗B 和抗A 十 B 分型血清各 l 滴（約 50 ul）于試管底部，再以滴管分別加入受檢者 5紅細胞鹽水懸液 1 滴，混和。另取潔凈小試管(內(nèi)徑 10mm60mm)3 支，分別標明 A、B 和 O 細胞。用滴管分別加入受檢者血清 l 滴于試管底部，再分別以滴管加入 A、B 和 O 型 5試劑紅細胞懸液 l 滴，混和。立即以 1000rmin 離心 3 min。將試管輕輕搖動，使沉于管底的紅細胞浮起，先以內(nèi)眼觀察有無凝集(或溶血)現(xiàn)象。如內(nèi)眼不見凝集，應將反應物倒于玻片上，再以低倍鏡檢查。觀察結果時既要看有無凝集，

4、更要注意凝集強度，此有助于A、B 亞型、類 B 或 cisAB 的發(fā)現(xiàn)。凝集強度判斷標準4 十 紅細胞凝集成一大塊，血清清晰透明。3 十 紅細胞凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰。2 十 紅細胞凝塊分散成許多小塊，見到游離紅細胞。1 十 肉眼可見大顆粒，周圍有較多游離紅細胞。土鏡下可見數(shù)個紅細胞凝集在一起，周圍有很多游離紅細胞。MF混合凝集外觀(mixed field)是指鏡下可見少數(shù)紅細胞凝集，而極大多數(shù)紅細胞仍呈分散分布。一表示陰性，鏡下未見凝集，紅細胞均勻分布。玻片法取清潔玻片 1 張(或白瓷板 1 塊)，用蠟筆劃成方格，標明抗-A、抗-B 和抗-A 十 B，分別用滴管滴加抗-A、抗-B 和抗-A

5、 十 B 分型血清 l 滴于標明的方格內(nèi)，再各加受檢者 2紅細胞懸液 1 滴，混和。另取潔凈玻片一張(或白瓷板 1 塊)，用蠟筆劃成方格，標明A 細胞、B細胞和 O 細胞，用滴管各加受檢者血清 1 滴，再分別用滴管滴加 A、B和 O 型試劑紅細胞懸液 1 滴。將玻片(或白瓷板)不斷輕輕轉動，使血清與細胞充分混勻，連續(xù)約 15 min，先以肉眼觀察有無凝集(或溶血)反應；再在低倍鏡下觀察結果。結果判定ABO 血型正反定型結果分型血清+受檢者紅細胞受檢者血型受檢者血清+試劑紅細胞抗-A抗-B抗-A 十 BA 細胞B 細胞O 細胞十十A十十十B十一O十十十十十AB注：十為凝集；一為不凝集。質(zhì)量控制與

6、附注 1，分型血清必須為批批檢試劑，且在有效期內(nèi)使用；質(zhì)量性能符合要求。試劑開封后必須貼上開封日期、開封人標簽，用畢后應放置冰箱保存，以免細菌污染。試劑開封后有效期為一周。2，試劑紅細胞以 3 個健康者同型新鮮紅細胞混和，用生理鹽水洗滌 1 次，以除卻存在于血清中的抗體及可溶性抗原?；蚴褂煤细竦纳唐吩\斷紅細胞。試劑紅細胞有效期：自制的為15 天，商品的為試劑有效期。試劑開封后必須貼上開封日期、開封人標簽，用畢后應放置冰箱保存，以免細菌污染。試劑開封后有效期為一周。3，生理鹽水啟用后，有效期為二周。4，所有試劑在開封或使用時，必須檢查是否有變質(zhì)；凡可疑者，必須更換新的試劑進行檢測工作。5，試管、

7、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。6，操作方法應按規(guī)定，一般應先加血清，然后再加紅細胞懸液，以便容易核實是否漏加血清。7，按理 IgM 抗-A 和抗-B 與相應紅細胞的反應溫度以 4為最強，但為了防止冷凝集現(xiàn)象的干擾，一般仍在室溫 (2024)內(nèi)進行試驗， 37可使反應減弱。8，離心時間不宜過長或過短，速度不宜過快或過慢，以防假陽性或假陰性結果。9，觀察時應注意紅細胞呈特異性凝集、繼發(fā)性凝固以及緡錢狀排列的區(qū)別。10，判斷結果后應仔細核對、記錄，避免筆誤。11，對于可能存在不完全抗原的時候，應在各反應方加入凝聚胺試劑，以檢驗不完全抗原的存在。12，對于可疑結果，必須更換所用的試劑，重新檢測。1

8、3，5%紅細胞懸液的配制：用生理鹽水洗滌紅細胞 3 次。根據(jù)下表進行紅細胞懸液的配制。懸液濃度（%）壓積紅細胞（滴）鹽水（滴）212ml(40)510.8ml(16)1010.4ml(8)2010.2ml(4)正反定型結果不一致的原因（一）原因：有技術性問題或紅細胞和血清本身的問題，常見者有以下幾種：1， 分型血清效價太低、親和力不強。如抗A 血清效價不高，可將A 亞型誤定為 O 型，AB 型誤定為 B 型。2， 紅細胞懸液過濃或過淡，抗原抗體比例不適當，使反應不明顯，誤判為陰性反應。3， 受檢者紅細胞上抗原位點過少(如亞型)或抗原性減弱(見于白血病或惡性腫瘤：以及類 B 或 cisAB 等。

9、4，受檢者血清中蛋白紊亂(高球蛋白血癥)，或實驗時溫度過高，常引起紅細胞呈緡錢狀排列。5，受檢者血清中缺乏應有的抗-A 及或抗B 抗體，如丙種球蛋白缺乏癥。6，各種原因引起的紅細胞溶解，誤判為不凝集。部分溶血時，可溶性血型物質(zhì)中和了相應的抗體.7，由細菌污染或遺傳因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。8，血清中有意外抗體，如自身抗I，常引起干擾。9，老年人血清中抗體水平大幅度下降正反定型結果不一致的解決辦法如發(fā)現(xiàn)ABO 正反定型結果不一致，先要重復作試驗1 次。嚴格執(zhí)行操作規(guī)程，使用質(zhì)量合格的試劑以及細心觀察和解釋試驗結果，就可解決明顯的問題， 對一些疑難問題月必須進一步研究。（二）

10、檢查步驟：1， 另從受檢者采取 l 份新鮮血液標本這樣可以糾正因污染或搞錯樣本造成的不符合。2，將紅細胞洗滌數(shù)次，配成 5鹽水細胞懸液，用抗A、抗B、抗Al， 抗A 十 B 及抗 H 做試驗可以得到其它有用的信息。3，對受檢紅細胞作直接抗球蛋白試驗，如結果呈陽性，表示紅細胞已被抗體致敏。4，用 A1、A2、B、O 紅細胞及自身紅細胞檢查受檢血清。如果懷疑是抗I， 用 O 型(或 ABO 相合的)臍血紅細胞檢查。5，如果試驗結果未見凝集，應將細胞及血清試驗至少在室溫和4放置30min，用顯微鏡檢查核實。6，如疑為A 抗原或 B 抗原減弱，則可將受檢紅細胞與抗A 或抗B 血清作吸收及放散試驗以及受

11、檢者唾液作 A、B、H 血型物質(zhì)測定。后者只對 80HAB 分泌型的人有用。7，如試驗結果紅細胞呈絹錢狀排列，加等滲鹽水l 滴，混和，往往可使絹錢現(xiàn)象消失。應注意不應先加鹽水 l 滴于受檢者血清中而后和紅細胞作試驗，以免使血清中抗體被稀釋。8，如受檢者為 A 型血而疑為有類 B 抗原時，可用下列方法進行鑒別觀察細胞與抗A 及抗B 的凝集強度，與抗A 的反應要比與抗B 的反應強。這種區(qū)別用玻片法作試驗更為明顯。（2） 用受檢者紅細胞與自身血清作試驗，血清中的抗B 不凝集自身紅細胞上的類 B 抗原。檢查唾液中是否有 A、B 物質(zhì)，如果是分泌型，可檢出 A 物質(zhì)而無 B物質(zhì)。核對患者的診斷，類 B 抗原的形成與結腸癌、直腸