醫(yī)學(xué)專題藥代動(dòng)力學(xué)在新藥研究中的應(yīng)用

1、藥代動(dòng)力學(xué)在新藥研究中的應(yīng)用 ： 85327256 ： 12021/7/20 星期二1 生物利用度和生物等效性研究 人體生物利用度（bioavailability）是反映制劑中主藥吸收進(jìn)入人體體循環(huán)的相對(duì)量和速度的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。生物等效性（bioequivalancy）試驗(yàn)是指用生物利用度研究的方法，以藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)為指標(biāo)，比較同一種藥物的相同或者不同劑型的制劑，在相同的試驗(yàn)條件下，其活性成份吸收程度和速度有無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的人體試驗(yàn)。 22021/7/20 星期二一、生物樣品測定方法的要求1特異性首選色譜法如HPLC、GC、GC-MS或LC-MS等方法放免與ELISA方法有一定的特異性，靈敏度

2、高，但常有交叉反應(yīng)。2標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍必須用至少5個(gè)濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，應(yīng)使用與待測樣品相同生物介質(zhì)，線性范圍要能覆蓋全部待測濃度，不得用線性范圍外推的方法求算未知樣品的濃度。標(biāo)準(zhǔn)曲線不包括零點(diǎn)。32021/7/20 星期二3精密度與準(zhǔn)確度精密度用質(zhì)控樣品的日內(nèi)和日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）表示，一般RSD應(yīng)小于15，在LOQ附近RSD應(yīng)小于20。準(zhǔn)確度是指用特定方法測得的生物樣品濃度與真實(shí)濃度的接近程度，可用相對(duì)回收率表示，一般應(yīng)85115范圍內(nèi)，在LOQ附近應(yīng)在80120范圍內(nèi)。42021/7/20 星期二 加樣濃度 (mgL)0.269.8419.680.269.8419.680.299.1

3、020.490.299.7221.540.2210.2219.030.259.3819.56 檢出濃度0.2410.2721.080.309.2118.26 (mgL)0.308.6617.510.299.3719.090.308.4716.960.309.6217.65 X0.279.3419.010.299.4619.22 SD0.040.851.800.020.211.50 RSD（%）14.89.19.56.92.27.8 表1-3 精密度試驗(yàn)日 內(nèi) 變 異 日 間 變 異52021/7/20 星期二4最低定量限最低定量限是標(biāo)準(zhǔn)曲線上的最低濃度點(diǎn)，又稱靈敏度，表示測定樣品中符合準(zhǔn)確度和

4、精密度要求的最低藥物濃度。 5樣品穩(wěn)定性了解待測藥物和內(nèi)標(biāo)物在不同pH、光照、溶劑、溫度條件下穩(wěn)定性對(duì)于中藥或多組分制劑，應(yīng)注意他們的相互作用體液中藥物的穩(wěn)定性包括室溫、冷藏（2-8）、凍融、冷凍（-20-70）62021/7/20 星期二6提取回收率應(yīng)考察高、中、低三個(gè)濃度的提取回收率，其限度一般應(yīng)高于50。72021/7/20 星期二7質(zhì)控樣品質(zhì)控樣品系將已知量的待測藥物加入到生物介質(zhì)中配制的樣品，用于質(zhì)量控制。一般配制高、中、低三個(gè)濃度的質(zhì)控樣品。8質(zhì)量控制應(yīng)在生物樣品分析方法確證完成之后開始測試未知樣品。每個(gè)未知樣品一般測定一次，必要時(shí)可進(jìn)行復(fù)測。每批生物樣品測定時(shí)應(yīng)建立新的標(biāo)準(zhǔn)曲線，

5、并隨行測定高、中、低三個(gè)濃度的質(zhì)控樣品。質(zhì)控樣品測定結(jié)果的偏差一般應(yīng)小于20。82021/7/20 星期二二、受試者入選條件：一般情況應(yīng)選擇健康男性志愿者。特殊作用的藥品，則應(yīng)根據(jù)具體情況選擇適當(dāng)受試志愿者，如婦科用藥，選擇健康女性志愿者；試驗(yàn)藥品可能引起受試者精神或軀體依賴性反應(yīng)時(shí)，則應(yīng)選擇需要該類藥品治療的患者。92021/7/20 星期二一般情況下，受試者應(yīng)具備如下條件:男性1840周歲。同一批受試者年齡不宜相差10歲以上。體重：一般要求在標(biāo)準(zhǔn)體重10范圍內(nèi)；或體重指數(shù)BMI在2024范圍內(nèi)。身體狀況：無心、肝、腎、消化道、神經(jīng)系統(tǒng)、精神異常及代謝異常等病史；體格檢查示血壓、心率、心電圖

6、、呼吸狀況、肝、腎功能和血象無異常。102021/7/20 星期二試驗(yàn)前兩周內(nèi)未服用任何其它藥物。簽署知情同意書。 受試者例數(shù)為1824例 絕對(duì)生物利用度試驗(yàn)選用經(jīng)批準(zhǔn)上市的相同藥物靜脈注射劑作為參比制劑。相對(duì)生物利用度試驗(yàn)選用經(jīng)批準(zhǔn)上市的相同藥物相同劑型的主導(dǎo)產(chǎn)品作為參比制劑 112021/7/20 星期二對(duì)受試者的要求受試者于試驗(yàn)前1日和試驗(yàn)期內(nèi)均勿飲用酒類和咖啡類飲料；試驗(yàn)前禁食過夜10小時(shí)。于次日早晨空腹服用受試制劑或參比制劑，用150200ml溫開水送服；服藥2小時(shí)后方可再飲水，4小時(shí)后進(jìn)統(tǒng)一餐。受試者服藥后應(yīng)避免劇烈運(yùn)動(dòng)，亦不得長時(shí)間臥床122021/7/20 星期二對(duì)乙酰氨基酚咀

7、嚼片生物利用度研究自愿受試者知情同意書 我自愿參加對(duì)乙酰氨基酚咀嚼片人體生物利用度和生物等效性研究。經(jīng)過華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院臨床藥理研究所醫(yī)生對(duì)本項(xiàng)研究所作的充分說明，我已經(jīng)了解到，本項(xiàng)研究是經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)，為證實(shí)對(duì)乙酰氨基酚咀嚼片在人體吸收程度合格性而進(jìn)行的工作；我已經(jīng)認(rèn)識(shí)到該研究的意義、目的、藥物作用、可能出現(xiàn)的不良反應(yīng)以及有效的預(yù)防辦法。試驗(yàn)期間我將按醫(yī)生要求用藥，不用任何其它藥物；按要求進(jìn)餐，不吸煙、不飲酒，適度活動(dòng)；按規(guī)定時(shí)間接受血樣采集和必要的觀察。臨床藥理研究所將進(jìn)行必要的監(jiān)護(hù)并提供自愿受試者營養(yǎng)費(fèi)，以保證工作順利進(jìn)行。鑒于此，我自愿參加對(duì)乙酰氨基酚咀嚼片人體生物利用

8、度和生物等效性研究，并按照試驗(yàn)要求與醫(yī)務(wù)人員密切配合完成此項(xiàng)研究。 自愿受試者（簽名）年 月 日華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院臨床藥理研究所臨床藥理所醫(yī)生（簽名）_年 月 日132021/7/20 星期二三、設(shè)計(jì)方法一個(gè)受試制劑與一個(gè)參比制劑比較的情況下，采用兩制劑雙周期交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以減少不同試驗(yàn)周期和個(gè)體差異對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。受試者按隨機(jī)原則分成兩組。一組受試者先服用受試制劑，后服用參比制劑；另一組受試者先服用參比制劑，后服用受試制劑。通常應(yīng)間隔1周或2周。半衰期長的藥物，需有更長的間隔時(shí)間。142021/7/20 星期二四、生物樣品采集時(shí)間點(diǎn)的確定通常應(yīng)有預(yù)試驗(yàn)，為合理設(shè)計(jì)采樣點(diǎn)提供依據(jù)。應(yīng)用血

9、藥濃度測定法時(shí)，服藥前應(yīng)先取空白血樣。一般在藥時(shí)曲線峰前部分至少取4個(gè)點(diǎn)，峰后部分取6個(gè)或6個(gè)以上點(diǎn)?？偛蓸狱c(diǎn)不少于11個(gè)。采樣持續(xù)到受試藥原形或其活性物35個(gè)半衰期時(shí)，或持續(xù)采樣至血藥濃度為Cmax的110120以后。152021/7/20 星期二五、生物等效性評(píng)價(jià)對(duì)受試制劑與參比制劑的生物等效性評(píng)價(jià)，應(yīng)從藥物吸收程度和吸收速度兩方面進(jìn)行。藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)AUC和Cmax，經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行交叉試驗(yàn)的方差分析與雙單側(cè)t檢驗(yàn)處理。若受試制劑AUC的90可信限落在參比制劑80125范圍內(nèi)，Cmax的90可信限落在70143范圍內(nèi)，Tmax經(jīng)非參數(shù)法檢驗(yàn)無差異，可以認(rèn)定受試制劑與參比制劑生物等效。 1

10、62021/7/20 星期二2 臨床前藥代動(dòng)力學(xué)研究 1研究目的：了解新藥在體內(nèi)動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，闡明ADME過程。為藥理毒理研究中的安全性與有效性提供依據(jù)。2、檢測方法：建立檢測方法要求同上！放射性核素標(biāo)記藥物，用前要進(jìn)行純度檢查，放化純度95%標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍：要指明藥物的化學(xué)純度要制備藥物在不同生物介質(zhì)中的標(biāo)準(zhǔn)曲線。在所測濃度范圍內(nèi)，藥物自生物樣品的回收率不低于70。172021/7/20 星期二3.試驗(yàn)材料與方法1）實(shí)驗(yàn)藥品應(yīng)注明受試藥物的名稱、批號(hào)、來源、純度、保存條件及配制方法。使用的受試藥物應(yīng)與藥效學(xué)或毒理學(xué)研究使用的一致。對(duì)照品應(yīng)是標(biāo)明含量的純品 182021/7/20 星期二2

11、）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般采用成年和健康的動(dòng)物。常用動(dòng)物有小鼠、大鼠、兔、豚鼠和狗等。首選動(dòng)物：應(yīng)與藥效學(xué)或毒理學(xué)研究一致。盡量在清醒狀態(tài)下實(shí)驗(yàn)，動(dòng)力學(xué)研究最好從同一動(dòng)物多次采樣。 創(chuàng)新藥應(yīng)選用兩種或兩種以上的動(dòng)物，其中一種為嚙齒類動(dòng)物；另一種為非嚙齒類動(dòng)物。其他類型的藥物，可選用一種動(dòng)物（建議首選非嚙齒類動(dòng)物，如犬或兔等）?？诜盟幉灰诉x用兔子等食草類動(dòng)物。 192021/7/20 星期二3）給藥途徑 所用的給藥途徑和方式，應(yīng)盡可能與臨床用藥一致。4）試驗(yàn)劑量藥代動(dòng)力學(xué)研究至少應(yīng)設(shè)三個(gè)劑量組，其中一個(gè)劑量應(yīng)相當(dāng)于藥效學(xué)試驗(yàn)有效劑量，高劑量一般接近于最大耐受量(MTD)，以了解藥物在體內(nèi)的動(dòng)力學(xué)過程是線性

12、動(dòng)力學(xué)還是非線性動(dòng)力學(xué)。202021/7/20 星期二4 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1）血藥濃度時(shí)間曲線：取樣點(diǎn)的設(shè)計(jì)應(yīng)兼顧到吸收相、分布相和消除相.根據(jù)研究樣品的特性，取樣點(diǎn)通常可安排913個(gè)點(diǎn)不等，即吸收相應(yīng)取23個(gè)點(diǎn)，達(dá)峰濃度處取23點(diǎn)，分布相取23點(diǎn)，消除相取34個(gè)點(diǎn)整個(gè)采樣時(shí)間應(yīng)持續(xù)到35個(gè)半衰期或到Cmax的1/101/20。在非連續(xù)取樣的動(dòng)物試驗(yàn)中，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)至少應(yīng)有5只動(dòng)物的數(shù)據(jù);如經(jīng)同一動(dòng)物多次采樣，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)至少應(yīng)有3只動(dòng)物的數(shù)據(jù)?？诜o藥，一般在給藥前應(yīng)禁食12小時(shí)以上。212021/7/20 星期二特布他林濃度-時(shí)間曲線圖222021/7/20 星期二2）組織分布試驗(yàn)一般選用小鼠或大鼠，

13、選定一個(gè)有效劑量給藥后，分別在吸收相、分布相和消除相各選一個(gè)時(shí)間點(diǎn)取樣測定。測定心、肝、腎、脾、肺、腦、胃、腸、子宮或睪丸、脂肪和肌肉等重要組織中的濃度，以了解藥物在體內(nèi)的主要分布組織，特別是效應(yīng)靶器官和毒性靶器官的分布。若某組織的藥物濃度較高，應(yīng)進(jìn)一步研究消除的情況。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)至少應(yīng)有5個(gè)動(dòng)物的數(shù)椐。同位素標(biāo)記物的組織分布試驗(yàn)，盡可能提供給藥后不同時(shí)相的整體放射自顯影圖像。232021/7/20 星期二3）排泄試驗(yàn)一般選用小鼠或大鼠進(jìn)行排泄試驗(yàn)。選定一個(gè)有效劑量，給藥后按一定的時(shí)間間隔分段收集尿液、糞便和大鼠的膽汁，記錄每一時(shí)間間隔內(nèi)的尿液、糞便和膽汁的體積或重量，測定藥物在其中的排泄量。至

14、少5只動(dòng)物的試驗(yàn)數(shù)據(jù)，以確定藥物的排泄途徑、排泄速度和各途徑的排泄量。242021/7/20 星期二4）血漿藥物蛋白結(jié)合方法：平衡透析法、超過濾法、分配平衡法、凝膠過濾法、光譜法等。以平衡透析法最簡單、經(jīng)濟(jì)，但費(fèi)時(shí)，需24h達(dá)平衡。至少進(jìn)行3個(gè)濃度的血漿蛋白結(jié)合率試驗(yàn)，每個(gè)濃度至少重復(fù)試驗(yàn)3次，以了解是否有濃度依賴性。注意事項(xiàng)：考慮影響因素：pH、血漿濃度、藥物濃度等證明藥物與半透膜本身有無結(jié)合，應(yīng)做對(duì)照從半透膜上溶解下來的成分會(huì)影響藥物測定，應(yīng)特別注意。要分析空白讀數(shù)高的原因?？杀谎獫{轉(zhuǎn)化的藥物，要加少量酶抑制劑。252021/7/20 星期二5）結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化試驗(yàn)對(duì)于創(chuàng)新藥尚需了解在體內(nèi)的代謝轉(zhuǎn)

15、化情況。如藥物的排泄百分率很低（如= t(1-alpha): 1.7340 t2: 5.688 = t(1-alpha): 1.73490% confidential interval: 94.0%-106.1%- CONCLUSION: Test and Reference formulation bioequivalence402021/7/20 星期二PARAMETER:AUC(0-Tn) ANALYSIS OF VARIANCE After Logrithmic transformation-source Sum of Squares DF Mean Squares F value P

16、 value-Inter-subjects Carry-over 4.8996 1 4.8996 -29.1826 -8.61027 Residuals -3.0221 18 -0.1679 -9.1995 -0.00033Intra-subjects Formulation 0.0032 1 0.0032 0.1765 0.67940 Periods 0.0023 1 0.0023 0.1281 0.72453 Residuals 0.3285 18 0.0183total 2.2116 39- Two one-side test and (1-2*alpha) confidential interval-Mean of Reference: 3.5007 Mean of Tested: 3.4828t1: 4.804 = t(1-alpha): 1.7340 t2: 5.643 = t(1-alpha): 1.73490% confidential in