循環(huán)腫瘤細(xì)胞臨床應(yīng)用及技術(shù)講解

1、循環(huán)腫瘤細(xì)胞臨床應(yīng)用及技術(shù)講解治療手段手術(shù)觀察輔助治療全身治療問 題相同TNM分期不同預(yù)后潛在微轉(zhuǎn)移灶維持or調(diào)整腫瘤基因變化實(shí)時(shí)樣本障礙挑 戰(zhàn)精準(zhǔn)預(yù)后判斷復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移預(yù)警及早療效評(píng)價(jià)實(shí)時(shí)樣本獲得腫瘤治療的問題與挑戰(zhàn)原發(fā)腫瘤局部寡轉(zhuǎn)移廣泛轉(zhuǎn)移我們需要找到一種更能準(zhǔn)確代表腫瘤的標(biāo)志，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，全面有效的獲取腫瘤信息！常規(guī)診斷手段提示腫瘤信息技術(shù)應(yīng)用不足影像學(xué)解剖學(xué)信息代謝信息腫瘤大小與腫瘤的惡性程度與侵潤(rùn)轉(zhuǎn)移能力不完全一致，信息獲取存在滯后性，因輻射等原因不能作為實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)手段血清學(xué)腫瘤標(biāo)志物信息間接反應(yīng)腫瘤治療狀態(tài)，不能直接提供腫瘤進(jìn)展信息，與生理病理相關(guān)性差，特異性不足病理學(xué)生物學(xué)信息直接反應(yīng)腫瘤

2、細(xì)胞學(xué)和分子生物學(xué)特性，但因取材困難，不能作為實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)手段臨床需要更實(shí)時(shí)、更特異的腫瘤監(jiān)測(cè)手段ASCO Annual Report ：2015 臨床腫瘤學(xué)進(jìn)展 液體活檢引領(lǐng)未來十年腫瘤治療Nat Rev Clin Oncol. 2013;10(8):472-84. 實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)液體活檢樣本之ctDNA &CTCsCancer Res. 2003;63: 3805-11. Breast Cancer Res. 2009;11:R46. Am J Pathol. 2011;178:989-96.循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTCs）1869年 Aust Med J，Ashworth最早 在轉(zhuǎn)移性癌癥患者血液中觀察到

3、；存在于外周循環(huán)的各類腫瘤細(xì)胞統(tǒng)稱；來自原發(fā)灶、轉(zhuǎn)移灶或不明部位。大多數(shù)CTCs在外周血循環(huán)中會(huì)發(fā)生凋亡，只有少數(shù)CTCs才能夠形成轉(zhuǎn)移Cancer Letters. 2007, 253: 180204.CTCs 與腫瘤轉(zhuǎn)移CTCs的特點(diǎn)稀少 約1個(gè)CTC/109 （10億）個(gè)血細(xì)胞，1個(gè)CTC/106-7個(gè)白細(xì)胞。型別差異 CTCs可以是間質(zhì)型、上皮型、上皮間質(zhì)混合型、成團(tuán)的CTC(CTM)CTCs-新型“液體活檢”Breast Cancer：N Engl J Med 351:781-791,2004Prostate Cancer : Lancet Oncol 10:233-239, 200

4、9Colorectal Cancer: J Clin Oncol 26:3213-3221, 2008CTCs檢測(cè)的臨床應(yīng)用CTCs臨床應(yīng)用一：評(píng)估預(yù)后治療前一個(gè)周期后N Engl J Med 2004;351:781-91.10CTC結(jié)合影像學(xué)更準(zhǔn)確評(píng)估乳腺癌患者預(yù)后CTC結(jié)合影像學(xué)對(duì)乳腺癌患者的總生存期預(yù)測(cè)更準(zhǔn)確Group1：CTC5，影像學(xué)顯示SD/PRGroup2：CTC5，影像學(xué)顯示PDGroup3：CTC5，影像學(xué)顯示SD/PRGroup4：CTC5，影像學(xué)顯示PDClin Cancer Res 2006;12(21) 對(duì)于原發(fā)性肺癌患者，CTCs計(jì)數(shù)在有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的肺癌患者中有顯著

5、升高，相關(guān)性優(yōu)于CEA。CTCs臨床應(yīng)用二：評(píng)估復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移Clin Cancer Res 2009;15(22)Hepatology.2013, 57(4): 1458-1468.CTCs臨床應(yīng)用二：評(píng)估復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移 對(duì)于肝癌患者，CTCs數(shù)量與復(fù)發(fā)病灶以及復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)正相關(guān)，且相關(guān)性優(yōu)于AFP。45-male-ESCC（食管鱗狀細(xì)胞癌）12w，CT-骨和皮下轉(zhuǎn)移104w，PET-CT顯示復(fù)發(fā)CTC可動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)，及早發(fā)出腫瘤轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)預(yù)警，結(jié)合血清標(biāo)志物，能更準(zhǔn)確預(yù)測(cè)疾病進(jìn)展。World J Gastroenterol.2015,21(25):7921-8.CTCs臨床應(yīng)用二：動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)

6、移CTCs臨床應(yīng)用三：CTCs計(jì)數(shù)與療效監(jiān)測(cè)化療后CTC數(shù)量減少患者的臨床療效好于CTCs數(shù)量增加的患者化療前后CTC的數(shù)量變化反映臨床療效化療前化療后J Clin Oncol. 2011Apr 20;29(12):1556-63.J Clin Oncol 2008;26:3213-3221.前列腺癌中CTCs檢測(cè)的療效評(píng)估價(jià)值優(yōu)于PSACTCs檢測(cè)的臨床應(yīng)用循環(huán)腫瘤微栓子(CTM)Hui L et al., PLos one, 2013. 循環(huán)腫瘤微栓子又稱循環(huán)腫瘤細(xì)胞團(tuán)，一般由3個(gè)及以上腫瘤細(xì)胞組成。CTM成瘤能力強(qiáng)于單個(gè)CTCCell. 2014, 158: 11101122.CTM的成

7、瘤、轉(zhuǎn)移能力是單個(gè)CTC的23-50倍CTM與預(yù)后評(píng)估J Clin Oncol. 2012;30: 525-32.CTCs檢測(cè)的臨床應(yīng)用3.3%2.7% Yu M et al., Science , 2013, 339: 580-584.12.7%CTCs分型與預(yù)后評(píng)估CTCs分型更精確地評(píng)估療效 Yu M et al., Science , 2013, 339: 580-584.CTCs表型轉(zhuǎn)換與病情進(jìn)展相關(guān) Yu M et al., Science , 2013, 339: 580-584.CTCs檢測(cè)的臨床應(yīng)用CTC指導(dǎo)實(shí)時(shí)個(gè)體化治療CTCs用于檢測(cè)EGFR突變N Engl J Med

8、2008;359:366-77.sensitivity:96%, specificity:100%CTCs用于檢測(cè)肺癌ALK重排J Clin Oncol 2013;31:2273-81.CTCs用于檢測(cè)乳腺癌HER2擴(kuò)增吻合率: 97%特異性:100%PNAS. 2004;101:9393-8. 9位患者，原發(fā)灶為HER2擴(kuò)增陰性，疾病進(jìn)展之后檢測(cè)CTC發(fā)現(xiàn)HER2擴(kuò)增陽性，對(duì)其中4位采取含赫賽汀治療方案，3位患者疾病緩解。CTCs檢測(cè)追蹤乳腺癌患者HER2擴(kuò)增狀態(tài)PNAS. 2004;101:9393-8.小 結(jié)個(gè)體化治療時(shí)代腫瘤實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)的實(shí)現(xiàn) 需要突破性技術(shù)對(duì)CTCs進(jìn)行分離、分型和分析，

9、將腫瘤狀態(tài)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和腫瘤個(gè)體化治療有機(jī)結(jié)合。對(duì)腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、療效評(píng)估的預(yù)測(cè)影響 CTCs的作為腫瘤轉(zhuǎn)移的種子，有望綜合反映腫瘤的實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)，通過跟蹤血液中CTCs數(shù)量和型別的變化，監(jiān)測(cè)腫瘤動(dòng)態(tài)、評(píng)估治療效果。對(duì)實(shí)時(shí)個(gè)體化治療的影響 CTCs的分子分析，有望綜合反映腫瘤分子病理學(xué)背景，實(shí)時(shí)提供腫瘤分子信息，推進(jìn)腫瘤實(shí)時(shí)的個(gè)體化治療。怎樣的CTCs檢測(cè)技術(shù)能夠滿足需求？免疫捕獲法借助上皮細(xì)胞標(biāo)志物EPCAM的表達(dá)進(jìn)行CTC直接捕獲；EpCAM的表達(dá)存在差異，常導(dǎo)致檢測(cè)假陰性；會(huì)漏檢更容易在外周血中存活的EMT CTC和CTM；捕獲CTC時(shí)，已損壞細(xì)胞，不適于蛋白、基因等后續(xù)分析。經(jīng)典的一代 CTC 檢測(cè)技術(shù)原理先分離后鑒定，采用上皮+間質(zhì)標(biāo)志物進(jìn)行鑒定，不同表型的CTC均能檢出。 技術(shù)原理分離鑒定 二代檢測(cè)技術(shù)參數(shù)CTCs截留率 80%；特異性 90%；靈敏度 = 1個(gè)/5 ml ：高度自動(dòng)化的識(shí)別掃描系統(tǒng)6層掃描，15分鐘完成一次讀片以8片為一個(gè)單位，自動(dòng)進(jìn)片自動(dòng)識(shí)別，人工判讀，8個(gè)樣本自動(dòng)處理10個(gè)熒光通道，可同步滿足內(nèi)部質(zhì)控和科研目標(biāo)CanPatrolTMCTCs精準(zhǔn)分型 ：CTC 捕獲數(shù)據(jù)CanPatrolTMCTCs系統(tǒng)深入分析CanPatrolTM_