蔗糖酶KM值的測(cè)定_第1頁
蔗糖酶KM值的測(cè)定_第2頁
蔗糖酶KM值的測(cè)定_第3頁
蔗糖酶KM值的測(cè)定_第4頁
蔗糖酶KM值的測(cè)定_第5頁
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文檔簡介

1、蔗糖酶 Km值的測(cè)定1實(shí)驗(yàn)原理酶促反應(yīng)速度在實(shí)驗(yàn)中反映為：單位時(shí)間內(nèi)產(chǎn)物濃度的增加量或單位時(shí)間內(nèi)底物濃度的減少量酶促反應(yīng)的速度要在酶促反應(yīng)進(jìn)行的初期進(jìn)行測(cè)定，即測(cè)定酶促反應(yīng)的初速度酶促反應(yīng)初速度與底物濃度的關(guān)系用米氏方程來表示： V0 = Vmax SKm + SV0：酶促反應(yīng)初速度Vmax：最大反應(yīng)速度 S：底物濃度Km：米氏常數(shù)2 Km值等于酶促反應(yīng)初速度為最大反應(yīng)速度一半時(shí)所對(duì)應(yīng)的底物濃度，是酶的基本的特征常數(shù)之一，它包含著酶與底物結(jié)合和解離的性質(zhì)，特別是同一種酶能夠作用于幾種不同的底物時(shí)。 不同的酶Km值不同，同一種酶與不同底物反應(yīng)Km值也不同 Km值可近似地反映酶與底物的親和力大?。?/p>

2、Km值大，表明親和力??；Km值小，表明親合力大 大多數(shù)純酶的Km值在0.01100 mmol/L 3Lineweaver-Burk Kinetics （雙倒數(shù)作圖法） = * + 1 Km 1 1V0 Vmax S Vmax選擇不同的S，通過測(cè)定產(chǎn)物量來計(jì)算V0，直線做圖，即可得出Vmax和Km值 y = a x + b4酶活力預(yù)試以對(duì)照管調(diào)零點(diǎn)，于520nm處測(cè)OD值（1.0-1.8）酶沉淀溶于10ml蒸餾水，10,000rpm離心10min, 取上清（目的：找到酶最佳稀釋比例）注意該濃度用量即為酶促反應(yīng)測(cè)定的最大用量5底物濃度與酶促反應(yīng)速度混勻，沸水5min，流水冷卻3min， 以 “0”管調(diào)零，520nm測(cè)OD值標(biāo)準(zhǔn)曲線用上次課做過的數(shù)值，也可再做一次6結(jié)果處理v: 生成產(chǎn)物葡萄糖的速率（5min單位時(shí)間內(nèi), 1ml酶液反應(yīng)生成的葡萄糖的量）；S: 底物蔗糖的摩爾濃度； 300：本實(shí)驗(yàn)用蔗糖溶液的濃度 300mM； V： 各試管中加入的底物蔗糖的體積ml； 2： 反應(yīng)的總體積是2ml； 1000：將反應(yīng)的總體積換算為L300V27思 考 題Km值的含義及測(cè)定的方法

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