長(zhǎng)春中醫(yī)大《中藥化學(xué)》實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

1、實(shí)驗(yàn)報(bào)告通過(guò)實(shí)驗(yàn)將書本上的理論知識(shí)運(yùn)用到實(shí)際當(dāng)中，最終通過(guò)寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告，總結(jié)實(shí)驗(yàn)的過(guò)程、原理及意義，最終把理論知識(shí)用于實(shí)踐，并通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果補(bǔ)充理論知識(shí)真正做到理論和實(shí)踐相結(jié)合，而這一結(jié)合的體現(xiàn)是撰寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告。根據(jù)本課程的特點(diǎn)現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求總結(jié)如下：一、實(shí)驗(yàn)題目按實(shí)驗(yàn)講義寫。二、實(shí)驗(yàn)原理提取、分離、TLC檢識(shí)的原理分別寫。三、實(shí)驗(yàn)流程與解析按實(shí)際操作寫，解析主要要求說(shuō)明所操作步驟的原因及注意事項(xiàng)。四、實(shí)驗(yàn)步驟根據(jù)實(shí)驗(yàn)流程寫，并寫出注意事項(xiàng)，并表明哪步是自己做的。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)率（計(jì)算）、試管反應(yīng)現(xiàn)象(描述)、薄層圖（畫或照片，并標(biāo)示Rf值）六、小結(jié)及討論1、對(duì)產(chǎn)率分析：理論應(yīng)得多少，實(shí)際得了多少

2、，并對(duì)其進(jìn)行分析；2、對(duì)試管反應(yīng)現(xiàn)象：解釋，并說(shuō)明可以推測(cè)的結(jié)果；3、薄層圖:對(duì)色譜圖解釋，如色譜原理、展開(kāi)劑、顯色劑，Rf比較。連續(xù)回流提取法操作規(guī)程一、安裝前檢查（20分）1.裝置組成（各部件名稱準(zhǔn)確）（1）玻璃儀器部分：三部分組成，燒瓶、索氏提取器（虹吸管、蒸氣上升管）、冷凝管（2）固定裝置部分：鐵架臺(tái)、雙頂絲（自由夾）、萬(wàn)能夾（3）熱源：（種類及溫度）根據(jù)溶劑選熱源及控制溫度（水浴鍋、電熱套）（4）其他：濾紙、乳膠管、鑷子2.裝置是否干凈：干凈的判斷標(biāo)準(zhǔn)（干燥、無(wú)水痕）3.裝置有無(wú)破損（尤其注意磨口處、虹吸管、冷凝管）4.裝置是否匹配：索氏提取器部分的大小決定燒瓶大小5.裝置是否干燥，

3、若不干燥特別是磨口若不干燥，用乙醇或甲醇或丙酮潤(rùn)洗后吹干或晾干。二、安裝設(shè)備（20分） 1. 整體安裝位置確定：注意根據(jù)熱源、冷凝水位置確定具體安裝位置及鐵架臺(tái)位置2. 玻璃儀器部分從下至上安裝，冷凝管斜口對(duì)著蒸氣上升管 3. 目測(cè)雙頂絲和鐵架臺(tái)的位置后，將雙頂絲安裝在鐵架臺(tái)上，不合適可以微調(diào)4. 將圓底燒瓶（帶有水浴鍋保溫圈）與萬(wàn)能夾相連，萬(wàn)能夾要固定在圓底燒瓶和索氏提取器的磨口處5.將萬(wàn)能夾固定在鐵架臺(tái)上的雙頂絲部分，高度不合適可以微調(diào)6.水浴鍋水的加入量和加入時(shí)間：不要加滿，應(yīng)該在裝置安裝完畢后補(bǔ)加水，以免燒瓶漂起，加水量為燒瓶三分之二處。7.系統(tǒng)穩(wěn)定性相關(guān)-萬(wàn)能夾的方向一致；重心與鐵架

4、臺(tái)平行8.打開(kāi)冷凝水之前，要先檢查水籠頭是否有水，有氣，流速大小，以決定提取時(shí)冷凝管水流大小。三、濾紙筒填裝（20分）1.濾紙包的疊法：原則保證不漏2.濾紙包的高度：應(yīng)低于蒸汽上升管3.裝藥量：藥材粉碎成粗粉；高度低于虹吸管4.裝藥后濾紙包封口四、如何加入提取溶劑（20分）1.加入時(shí)間：加入濾紙包及冷凝管安裝完畢后加入，從冷凝管上方放置漏斗加入。2.加入量： 加入溶劑量不少于1個(gè)半虹吸量，不超過(guò)2個(gè)虹吸量（結(jié)合燒瓶體積），溶劑量過(guò)少難以完成提取，過(guò)多增加回收時(shí)間，同時(shí)受圓底燒瓶體積的限制，注意不同規(guī)格裝置加入量是不同的。需要根據(jù)提供的裝置預(yù)判加入量，因此需要理解加入量是如何確定的。3.加入位置

5、：從冷凝管加入，用三角漏斗，或從裝藥筒加入，用三角漏斗：冷凝水打開(kāi)循環(huán)，防止溶劑揮散。4.提取終點(diǎn)的確定方法五、器材整理（20分）1.提取完畢后先關(guān)閉水浴鍋，再拔下水浴鍋電源；待溶劑從冷凝管不滴后再關(guān)冷凝水2. 拆儀器與安裝順序相反3. 濾紙包用鑷子夾出后置密閉容器中暫放，待處理。4取出盛有提取液的燒瓶，用磨口塞或膠皮塞塞上后待回收，防止溶劑揮散到空氣中（比賽時(shí)如果有時(shí)間，可直接利用該裝置回收溶劑）5刷洗玻璃儀器（尤其是虹吸管部分如何涮洗，用少量乙醇洗滌，用蒸餾水沖洗）、晾干、整潔歸位。操作考試實(shí)例：請(qǐng)完成下列采用連續(xù)回流提取部分實(shí)驗(yàn)操作穿山龍粗粉（50g） 置圓底燒瓶中，加水250ml、濃硫

6、酸20ml，室溫浸泡24小時(shí)，文火加熱回流46小時(shí)，放冷，傾出酸水液。酸性藥渣用清水漂洗3次，然后將藥渣倒入乳缽中，加Na2CO3粉末，反復(fù)研磨，調(diào)pH至中性，水洗，抽干。中性藥渣 低溫（80）干燥12小時(shí)。干燥藥渣置乳缽中研成細(xì)粉，置索氏提取器中，以石油醚（6090沸程）為溶劑，連續(xù)回流提取45小時(shí)。石油醚提取液回收石油醚至剩1015ml時(shí)，迅速傾入小三角燒瓶中，放置使充分冷卻，過(guò)濾。 濾 液 沉 淀 用少量冷石油醚洗二次抽干。薯蕷皂苷元粗品硅膠或聚酰胺薄層檢識(shí)SOP一、準(zhǔn)備工作（20分）1.供試品溶液及對(duì)照品溶液制備（1）供試品溶液制備：經(jīng)提取分離后得到待檢識(shí)成分，如果是已知化合物，溶解的

7、溶劑選擇可根據(jù)該化合物的溶解性選擇溶劑溶解樣品。如果是親脂性成分（如揮發(fā)油、游離的生物堿、香豆素苷元、蒽醌苷元、黃酮苷元），除選擇甲醇或乙醇溶解樣品，可選擇甲醇、乙醇、三氯甲烷、乙酸乙酯溶解樣品制成溶液，但不宜選擇沸點(diǎn)較低的乙醚溶解樣品；如果是親水性的成分（苷類化合物），常選擇甲醇、乙醇或丙酮溶解樣品，但不宜選擇沸點(diǎn)較高的正丁醇溶解樣品。注意通常不易選擇水溶解樣品。如果是未知化合物，可參考提取分離過(guò)程中選擇的溶劑判斷。（2）對(duì)照品溶液制備：同上。 注意事項(xiàng)：樣品與對(duì)照品要配制成溶液，吸取溶液點(diǎn)樣，不要將混濁液或固體物點(diǎn)到薄層板上。溶液制備是影響薄層效果的重要因素。2.儀器與材料的準(zhǔn)備（1）薄層

8、板：市售薄層板分普通板和高效薄層板，常用硅膠薄層板、硅膠GF254薄層板、聚酰胺薄膜等。在保證色譜質(zhì)量的前提下，如需對(duì)薄層板進(jìn)行特別處理或化學(xué)改性，以適應(yīng)分離要求，可以選擇自制薄層板。市售薄層板使用前處理：如需要，硅膠板臨用前一般應(yīng)在110活化30分鐘。聚酰胺薄膜不需活化。鋁基片薄層板可根據(jù)需要剪裁，但需注意剪裁后的薄層板底部的硅膠層不得有破損。如存放期間被空氣中雜質(zhì)污染，使用前可用三氯甲烷、甲醇或二者的混合溶劑在展開(kāi)缸中上行展開(kāi)預(yù)洗，110活化，置干燥器中保存?zhèn)溆谩Ｗ灾票影澹翰０逡螅簯?yīng)光滑、平整。用溫?zé)嵯匆路鬯滔春?、用自?lái)水沖洗干凈，再用蒸餾水沖洗至不附水珠，置干燥潔靜處晾干，備用。必

9、要時(shí)鋪板前用乙醇擦試后鋪板。 稱取吸附劑（硅膠或硅膠GF254，200300目）置乳缽中，按1:3比例加0.3%0.5%羧甲基纖維素鈉水溶液（或水），在研缽中按同一方向研磨混勻（目的避免產(chǎn)生大量氣泡），研磨時(shí)間一般不超過(guò)4分鐘（以研杵沾取有粘稠感），倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度0.3mm和0.5mm），取下涂好薄層的薄板，置水平臺(tái)上于室溫下晾干后，在110活化30分鐘，即置有干燥劑（如變色硅膠）的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度，在反射光及透視光下檢查，表面應(yīng)均勻、平整、光滑、無(wú)麻點(diǎn)、無(wú)氣泡、無(wú)破損及污染。（2）點(diǎn)樣器：定性和定量微升毛細(xì)管；手動(dòng)、半自動(dòng)、全自動(dòng)點(diǎn)樣器材

10、。（3）展開(kāi)容器：稱為展開(kāi)缸（層析缸）。上行展開(kāi)一般可用適合薄層板大小的專用平底或雙槽展開(kāi)缸，展開(kāi)時(shí)須能密閉。水平展開(kāi)時(shí)用專用的水平展開(kāi)缸。（4）顯色裝置：噴霧顯色用玻璃噴霧瓶；專用噴霧器。采用腳踏式或電動(dòng)裝置壓縮氣體使顯色劑呈均勻細(xì)霧狀噴出。浸漬顯色可用專用玻璃器械或用適宜的展開(kāi)缸代用；蒸氣熏蒸顯色可用雙槽展開(kāi)缸或適宜大小的干燥器代替。（5）檢視裝置：裝有可見(jiàn)光、254nm及365nm紫外光光源及相應(yīng)濾光片的暗箱，可附加攝像設(shè)備供拍攝圖像用，暗箱內(nèi)光源應(yīng)有足夠的亮度。（6）其他：配制展開(kāi)劑溶劑、電吹風(fēng)、鉛筆、格尺、移液管、分液漏斗、垃圾缸。二、點(diǎn)樣（20分）1.實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備：將供試品溶液、對(duì)

11、照品溶液、薄層板、點(diǎn)樣器（毛細(xì)管等）、電吹風(fēng)、格尺、鉛筆擺放在潔凈干燥的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，并注意光線、高度及周圍環(huán)境等是否適合點(diǎn)樣，實(shí)驗(yàn)者端坐在試驗(yàn)臺(tái)旁。2. 定位：定位用鉛筆，不要用其它筆標(biāo)記位置。預(yù)制板或自制板點(diǎn)樣基線距底邊10mm15mm(1cm1.5cm)，高效板一般基線距底邊8mm10mm(0.8cm1cm)，具體用鉛筆在兩側(cè)先確定，然后連接兩點(diǎn)成直線，保證點(diǎn)樣樣品在一條直線上；點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以相鄰斑點(diǎn)互相不干擾為宜，一般不少于8 mm（0.8cm），高效板不少于5 mm（0.5cm）；點(diǎn)樣圓點(diǎn)狀直徑一般不大于3 mm；高效板不大于2 mm；條帶狀寬度一般為5mm10mm(0.5c

12、m1cm)；高效板條帶狀寬度一般為4mm8mm(0.4cm0.8cm)，可用專用半自動(dòng)或自動(dòng)點(diǎn)樣器械噴霧法點(diǎn)樣。3. 點(diǎn)樣注意：接觸點(diǎn)樣時(shí)注意力度，勿損傷薄層表面；根據(jù)點(diǎn)樣量要求，選擇合適的毛細(xì)管（或其他點(diǎn)樣器）一次性將溶液取足量，尤其定量時(shí)最好要一次性取量；根據(jù)點(diǎn)樣量及圓點(diǎn)大小決定點(diǎn)樣次數(shù)，如果需要多次點(diǎn)樣，應(yīng)將前次點(diǎn)樣溶液用吹風(fēng)吹干后再次上樣，以避免斑點(diǎn)擴(kuò)散出現(xiàn)復(fù)斑或拖尾現(xiàn)象，用電吹風(fēng)時(shí)，先預(yù)測(cè)一下風(fēng)力和溫度，必要時(shí)用涼風(fēng)，注意將實(shí)驗(yàn)臺(tái)上實(shí)驗(yàn)材料吹落或溫度過(guò)熱。 4.點(diǎn)樣后整理：點(diǎn)樣后將毛細(xì)管置垃圾缸中，供試品溶液和對(duì)照品溶液等實(shí)驗(yàn)材料歸位放好，再進(jìn)行展開(kāi)。三、展開(kāi)劑配制（20分）1. 實(shí)

13、驗(yàn)材料準(zhǔn)備：干凈和干燥的展開(kāi)缸，檢查是否密閉，如果密閉性差，在邊緣涂少許凡士林，注意不要污染層析缸；不同規(guī)格干凈及干燥專用移液管；分析純?nèi)軇蝗绻谜归_(kāi)劑需要分層，則需要干凈及干燥的分液漏斗；展開(kāi)缸的干燥不要用烘箱加熱烘干或用熱風(fēng)長(zhǎng)時(shí)間吹干。2. 展開(kāi)劑取量確定：根據(jù)層析缸規(guī)格，按比例配制的總量應(yīng)以將點(diǎn)好的薄層板放入層析缸中，浸入展開(kāi)劑的深度為距原點(diǎn)5mm（0.5cm）為宜，切記不要浸泡或超過(guò)原點(diǎn)。3.展開(kāi)劑配制：按上述確定取量，用移液管吸取溶劑。如果展開(kāi)劑不分層 如氯仿-甲醇（8:2），吸取后直接放入層析缸中（如果是雙槽，放入一側(cè)），迅速密閉，展開(kāi)劑如果需要飽和，則可以在點(diǎn)樣前將展開(kāi)劑配好靜

14、置；如果展開(kāi)劑分層如氯仿-甲醇-水（65:35:10）下層，則應(yīng)在分液漏斗中配制，分層后取上層或下層。4.預(yù)平衡與蒸氣飽和：展開(kāi)前如需要溶劑蒸氣預(yù)平衡，可在展開(kāi)缸中加入適量展開(kāi)劑，密閉，一般保持1530分鐘，溶劑蒸氣預(yù)平衡后，應(yīng)迅速放入載有供試品的薄層板，立即密閉，展開(kāi)。如需展開(kāi)缸達(dá)到溶劑蒸氣飽和的狀態(tài)，則需要展開(kāi)缸的內(nèi)側(cè)放置與展開(kāi)缸內(nèi)側(cè)放置與展開(kāi)缸的內(nèi)徑同樣大小的濾紙，密閉一定時(shí)間，使達(dá)到飽和再如法展開(kāi)。5.展開(kāi)：將點(diǎn)好供試品與對(duì)照品的薄層板放入展開(kāi)缸，密閉，上行展開(kāi)，一般展距815cm，高效薄層板上行展開(kāi)58cm。溶劑前沿達(dá)到規(guī)定的展距，取出薄層板，晾干，待檢測(cè)。四、顯色（20分）1. 日

15、光下檢視：有顏色或顯色成分后檢視：供試品含有可見(jiàn)光下有顏色的成分可直接在日光下檢視，也可用噴霧法或浸漬法以適宜的顯色劑顯色，或加熱顯色，在日光下檢視。2. 紫外光下檢視：有熒光的物質(zhì)或遇某些試劑可激發(fā)熒光的物質(zhì)可在365nm紫外光燈下觀察熒光色譜；對(duì)于可見(jiàn)光下無(wú)色，但在紫外光下有吸收的成分可用帶有熒光劑的硅膠板（如硅膠GF254板），在254nm紫外光燈下觀察熒光板面上的熒光猝滅物質(zhì)形成的色譜。五、結(jié)果檢識(shí)1.記錄：薄層色譜圖像一般可采用攝像設(shè)備拍攝，以光學(xué)照片或電子圖像的形式保存。2.計(jì)算Rf值：Rf =斑點(diǎn)中心與原點(diǎn)距離（cm）/原點(diǎn)與前沿的距離（cm，展距），目的判斷斑點(diǎn)位置，表示各組成

16、成分的位置。3.斑點(diǎn)顏色描述：（1）置可見(jiàn)光下觀察，可見(jiàn)不同顏色斑點(diǎn)；（2）置紫外光燈（365nm）下觀察，可見(jiàn)不同顏色的熒光斑點(diǎn)；（3）置紫外光燈（254nm）下觀察，可見(jiàn)熒光淬滅斑點(diǎn)（以硅膠GF254為吸附劑）4.結(jié)果專業(yè)術(shù)語(yǔ)描述：供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色（或熒光）斑點(diǎn)。六、器材整理（20分）1. 展開(kāi)劑傾入廢液缸內(nèi)，不要倒入下水道或其它地方，通風(fēng)櫥中晾干（必要時(shí)刷洗干凈）。 2. 薄層板記錄結(jié)果后，將硅膠板用水浸濕，刷洗干凈，晾干，備用。3. 將其他實(shí)驗(yàn)器材歸位，將垃圾缸中垃圾倒掉。實(shí)例1：層析板：自制硅膠-CMC硬板樣 品：精品總堿氯仿液對(duì)照品；氧化苦參堿的氯

17、仿溶液展開(kāi)劑：氯仿：甲醇：氨水（15：4：0.5）顯色劑：改良碘化鉍鉀試劑實(shí)例2：吸附劑：硅膠-CMC薄層板（預(yù)制板）樣 品：5%自制薯蕷皂苷元的乙醇液（點(diǎn)樣量3對(duì)照品：5%薯蕷皂苷元對(duì)照品的乙醇液展開(kāi)劑：苯：乙酸乙酯（8：2）顯色劑：25%磷鉬酸的乙醇溶液（噴灑后110加熱5分鐘）實(shí)例3：大黃中蒽醌類成分薄層色譜鑒別實(shí)例4 蘆丁和槲皮素薄層色譜鑒別 硅膠柱層析分離SOP材料與儀器玻璃儀器：色譜柱、三角燒瓶、量筒、玻璃棒、燒杯、膠頭滴管固定部分：萬(wàn)能夾、雙頂絲收集樣品：自動(dòng)收集器或試管（帶試管架） 第一部分 準(zhǔn)備階段第1步 認(rèn)真讀題簽3遍，注意指令中數(shù)量要求，避免發(fā)生稱量錯(cuò)誤。第2步 觀察實(shí)驗(yàn)

18、環(huán)境，注意給出的材料與儀器。第3步 在大腦中將裝置圖重現(xiàn)出來(lái)，并注意第一步操作。第二部分 實(shí)驗(yàn)部分第1步 涮洗玻璃儀器。對(duì)所有用到的玻璃儀器都應(yīng)是干燥的。將實(shí)驗(yàn)中需要的玻璃儀器取出用自來(lái)水及洗滌劑清洗（如果競(jìng)賽時(shí)間不夠，這步可能會(huì)省略，注意現(xiàn)場(chǎng)提示）再用蒸餾水沖洗3次（用洗瓶中蒸餾水）用洗瓶中乙醇沖洗2次（清洗液倒入廢液缸，不要倒入水池中）用吹風(fēng)吹干（電吹風(fēng)或氣流干燥器），干凈干燥后，備用。第2步 吸附劑硅膠處理稱取硅膠：（1）如果指令中有稱取量，則直接稱?。唬?）如果指令中沒(méi)給出用量，而給出樣品量，則樣品與硅膠通常用量比為1:3060g（如果指令中提示樣品分離難易程度，可依此選擇，難分離者則

19、硅膠用量增多）色譜分離硅膠通常為100200目。（3）具體步驟：將天平調(diào)平將合適的干燥燒杯置天平上扣重輕輕加入硅膠（避免粉塵灑落到天平或?qū)嶒?yàn)臺(tái)上，接近稱樣量時(shí)再輕輕抖腕），記錄取量取下燒杯關(guān)閉天平（如果后續(xù)還需要稱量，此時(shí)先不拔電源）2.按給出洗脫劑的條件配制洗脫劑 按比例先計(jì)算用量，用合適的量筒取溶劑，置合適的錐形瓶中配制（注意錐形瓶不能過(guò)小，避免振搖混合不均勻）（注意試劑瓶蓋放的位置；試劑瓶標(biāo)簽方向；灑在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上；放平觀察是否到刻度；如果不到刻度，用干凈干燥補(bǔ)色譜柱安裝（20分）1. 選擇合適色譜柱：色譜柱為內(nèi)徑均勻、下端（帶或不帶活塞）縮口的硬質(zhì)玻璃管。 2. 將色譜柱固定在鐵架上（或鐵

20、架臺(tái)）上，垂直、穩(wěn)定。 3. 端口或活塞上部鋪墊適量脫脂棉或玻璃纖維。 4. 色譜柱規(guī)格：高度與直徑比（15:1（20:1）二、硅膠填裝（20分）1.柱色譜硅膠：顆粒大小均勻，通常直徑為0.070.15mm的顆粒。2.干法裝柱：將硅膠通過(guò)漏斗裝入柱內(nèi)，中間不應(yīng)間斷，形成一細(xì)流慢慢加入管內(nèi)。也可用橡皮槌輕輕敲打柱硅膠柱使硅膠裝填連續(xù)均勻、緊密。柱裝好后，打開(kāi)下端活塞，然后倒入洗脫劑洗脫以排盡柱內(nèi)空氣，并保持一定液面。 3. 濕法裝柱：將最初準(zhǔn)備使用的洗脫劑裝入柱內(nèi)，打開(kāi)下端活塞，使洗脫劑緩慢流出。然后把硅膠慢慢連續(xù)不斷地倒入柱內(nèi)（或?qū)⒐枘z與適量洗脫劑調(diào)成混懸液慢慢加入柱內(nèi)，），硅膠依靠重力和洗脫

21、劑的帶動(dòng)，在柱內(nèi)自由沉降，此間要不斷把流出的洗脫劑加回柱內(nèi)保持一定的液面，直至把硅膠加完并在柱內(nèi)沉降不再變動(dòng)為止。然后在硅膠上面加一小片濾紙或少許脫脂棉。根據(jù)加樣量控制洗脫劑液面至一定高度。三、上樣（液體）（20分）1.濕法上樣：用少量溶劑（最好就是展開(kāi)劑，如果展開(kāi)劑的溶解度不好，則可以用一極性較大的溶劑，但必須少量）將樣品溶解后，再用膠頭滴管轉(zhuǎn)移得到的溶液，沿著層析柱內(nèi)壁均勻加入，用少量溶劑洗滌后，再加入。2. 干法上樣：如樣品不溶于裝柱時(shí)用的洗脫劑，將樣品溶于易揮發(fā)的溶劑中，并加入適量硅膠（不超過(guò)柱中硅膠全量的1/10）與其拌勻，除盡溶劑，將拌有樣品的硅膠均勻加到柱頂（始終保持洗脫劑有一定

22、的液面），再覆蓋一層硅膠即可,上樣時(shí)注意沿著柱內(nèi)壁慢慢加入，始終保持硅膠上端表面平整；上樣量為硅膠的1/601/30。四、洗脫劑配制及加入、洗脫（20分）（1）洗脫劑的確定：可通過(guò)薄層色譜篩選，一般TLC展開(kāi)時(shí)Rf值為0.20.3的溶劑系統(tǒng)是最佳的洗脫系統(tǒng)，采用梯度洗脫法洗脫。（2）洗脫劑組成：可用單一溶劑、混合溶液，通常一般不超過(guò)三種溶劑。（3）流速控制：先打開(kāi)柱下端活塞，保持洗脫劑流速12滴/秒，上端不斷添加洗脫劑（可用分液漏斗控制添加速度與下端流出速度相近） （4）洗脫：采用梯度洗脫，洗脫劑的洗脫能力由弱到強(qiáng)逐步遞增。五、器材整理1.完成分離后，將吸附劑從柱子用取出，涮洗色譜柱，歸位。2

23、.將接收餾分的小三角燒瓶或試管編號(hào)，進(jìn)行TLC色譜，合并相同餾分。3.將所用玻璃儀器涮洗歸位。滲濾法SOP操作滲濾法是將天然藥物粗粉裝入滲濾筒內(nèi)，加適量提取溶劑，使藥材完全浸透后，將浸出液從下口緩緩放出，并不斷添加新溶劑，直到提盡所含有效成分為止的一種提取方法。 基本步驟：粉碎浸潤(rùn)裝筒排氣浸漬滲漉收集滲漉液一、主要裝置滲漉筒：滲漉筒有圓柱形和圓錐形二種，筒的長(zhǎng)度為筒直徑的2-4倍； 圓錐形滲漉筒適合提取膨脹性大的藥材；圓柱形滲漉筒適合提取膨脹性小的藥材。其他：萬(wàn)能夾、自由夾、鐵架臺(tái)、脫脂棉、玻璃棒二、藥材處理第1步：藥材粉碎成粗粉（24目）或酌予破碎，置燒杯中用薄膜密封（或置有蓋的容器中）；第

24、2步：加提取溶劑，攪拌浸潤(rùn)（注意：控制溶劑量，不是浸泡），密閉，使藥材充分膨脹后備用（由于浸潤(rùn)需要時(shí)間，故比賽時(shí)可能會(huì)提供處理好的藥材）。三、裝滲漉筒第1步：將鐵架臺(tái)置實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，擺放整齊，一次定位，不要再移動(dòng)第2步：先在鐵架臺(tái)上固定合適鐵圈，上面固定對(duì)頂絲，將萬(wàn)能夾與滲漉筒連接，垂直固定；第3步：將脫脂棉用提取溶劑潤(rùn)濕（脫脂棉的厚度為一層），置滲漉筒底部，打開(kāi)螺旋夾，再加入提取溶劑，排除脫脂棉中氣泡及下面乳膠管中的氣泡，在乳膠管充滿溶劑時(shí)夾緊，滲漉筒內(nèi)剩余溶劑用量以沒(méi)過(guò)脫脂棉為準(zhǔn)，不要明顯看到有液體；第4步：將已膨脹的藥材粗粉分次加入，加入高度1cm，每次加入應(yīng)均勻壓平，同時(shí)排除氣泡；下部藥粉

25、宜粗些，裝得稍松些，上部藥粉宜細(xì)些，裝得稍緊一些，不超過(guò)滲漉筒的2/3；第5步：上面蓋上濾紙或紗布，并壓上重物，以防止加溶劑時(shí)藥粉被沖浮起來(lái)；四、排氣第1步：裝筒完畢后，打開(kāi)滲漉筒下口的螺旋夾，向筒內(nèi)緩緩加入溶劑，并排除筒內(nèi)剩余空氣；第2步：在乳膠管充滿溶劑時(shí)關(guān)閉螺旋夾，將流出的溶劑再倒入筒內(nèi)，繼續(xù)添加溶劑至高出藥粉5厘米，加蓋浸泡24小時(shí)48小時(shí)，使溶劑充分滲透擴(kuò)散（由于時(shí)間原因，實(shí)際比賽時(shí)筒內(nèi)浸泡無(wú)法完成）五、收集滲漉液第1步：打開(kāi)螺旋夾使?jié)B漉液緩緩滴下，此處需控制滲漉速度23ml/分鐘（或一般流速以1000g藥粉計(jì)算，每分鐘流出35mL為宜）；第2步：（1）滲漉液的顏色極淺；（2）滲漉液

26、的體積相當(dāng)于原藥材的10倍時(shí)，便可以認(rèn)為已基本提取完全；（3）用TLC或化學(xué)檢識(shí)跟蹤 根據(jù)比賽時(shí)間，比賽時(shí)可能會(huì)給出接收體積第3步：將滲漉液用錐形瓶收集，密封保存?zhèn)溆茫ㄗ⒁夥胖玫胶侠砦恢茫?。六、整理?步：拆卸滲漉筒，將藥材殘?jiān)怪脽?，滲漉筒內(nèi)如果有殘?jiān)?，用少量水沖洗倒入燒杯中，并密閉待處理（應(yīng)把溶劑揮散掉再倒入垃圾桶內(nèi)）；第2步：（1）將滲漉筒及玻璃儀器涮洗干凈，用洗瓶中乙醇沖洗，再用蒸餾水沖洗干凈，擺放整齊；（沖洗乙醇要倒入廢液缸，不要倒入水池內(nèi)） （2）將萬(wàn)能夾、自由夾及鐵架臺(tái)等歸位并擺放整齊。提示：（1）認(rèn)真讀題簽，注意要求的稱樣量、體積等數(shù)值； （2）觀察給出的儀器裝置，在大腦中形成裝置的圖形，迅速想出步驟后再安裝，尤其注意第一步；（3）滲漉筒下面一直要放錐形瓶； （4）操作過(guò)程要保持臺(tái)面清潔，不要將藥渣或溶劑灑在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上。實(shí)驗(yàn)操作復(fù)習(xí)提綱 實(shí)驗(yàn)操作環(huán)節(jié)：乙醇的稀釋（包括計(jì)算、操作） 硫酸的稀釋（包括計(jì)算、操作）濾過(guò)（自