流行病血液葡萄糖測(cè)定

1、血液葡萄糖測(cè)定 流行病學(xué)教研室一、目的通過(guò)學(xué)習(xí)血糖檢測(cè)方法，熟悉和掌握一 些生化指標(biāo)的檢測(cè)方法并練習(xí)靜脈采血 技能，有助于慢性病的流行病學(xué)調(diào)查與 研究。二、實(shí)驗(yàn)原理糖尿病的診斷一般根據(jù)家族史、患病史、臨床體檢和實(shí)驗(yàn)室的化驗(yàn)結(jié)果綜合而定，其中血糖濃度的測(cè)定最為重要。一些輕癥或無(wú)癥狀的糖尿病，主要依據(jù)血糖測(cè)定而診斷。本次課主要介紹: 葡萄糖氧化酶(GOD)法 測(cè)定血糖 衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心血糖測(cè)定專(zhuān) 題協(xié)作組 推薦方法。反應(yīng)原理葡萄糖酸+H2O2葡萄糖 + O2 + H2O葡萄糖氧化酶(GOP)2H2O2+苯酚+4-氨基安替吡啉過(guò)氧化物酶（POD）醌亞胺 +4H2O醌亞胺在A480nm-A550nm

2、波長(zhǎng)有最大吸收，所產(chǎn)生顏色的強(qiáng)度與血清中葡萄糖的含量成正比。我們?cè)偻ㄟ^(guò)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液和樣品的光密度值相比較，根據(jù)公式就可計(jì)算出血清中葡萄糖的含量。三、方法(一) 試劑與器材1、試劑盒：中生北控生物科技股份有限公司提供； 葡萄糖氧化酶 (GOD) 1200 U/L 過(guò)氧化物酶 (POD) 1200 U/L 磷酸緩沖液（pH7.0） 100mmol/L 苯酚 0.1% 4-氨基安替吡啉 0.77mmol/L 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn): 5.55mmol/L(100mg/dl) 將上述和按1：1的比例混合即為工作液。（4）注意事項(xiàng) 1）緩沖液中含有疊氮鈉作為穩(wěn)定劑，不 要吞咽，避免與皮膚及粘膜接觸。 2）酚試劑

3、是有毒的，切勿吞咽，避免與 皮膚接觸，如果與皮膚接觸，立 即用大量水沖洗。 3）穩(wěn)定性和貯存：復(fù)溶前試劑在28 保存，可穩(wěn)定至標(biāo)簽上所寫(xiě)的期限。 復(fù)溶后，48可穩(wěn)定7天，室溫可 穩(wěn)定2天。 注射器（2.0ml）一支; 離心管(1.5ml) 1個(gè); 測(cè)定管3支/樣品等； 加樣器（1000.0ul、20.0ul）各1 支; 吸頭50.0ul、1000.0ul數(shù)個(gè)。2、材料（1）分光光度計(jì)； （2）微型離心機(jī)(1.5ml微量離心管用)；（3）恒溫水浴箱（37）。3、儀器設(shè)備4、標(biāo)本的采集與處理標(biāo)本的采集樣品為血清?？崭共杉o脈血1.0ml，注入于1.5ml試管中，以3000r/分的速度離心10分鐘，

4、分離血清備用。（二）操作步驟 空白管（ul） 標(biāo)準(zhǔn)管 （ul） 測(cè)定管 （ul） 蒸 餾 水10.0 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn) 10.0 樣 品 10.0 工 作 液 1000.0 1000.0 1000.0將上述液體混合均勻，置37水浴保溫1015分鐘（避免太陽(yáng)光直射）。取出后倒入比色杯，用直徑1.0cm的比色杯，在波長(zhǎng)505nm下，以試劑空白管調(diào)零，分別讀取A標(biāo)準(zhǔn)和A樣品。 四、計(jì)算公式濃度以C 表示： A樣品 C = 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)C（mmol/L） A標(biāo)準(zhǔn)五 、參考值（空腹）1、血清或血漿的血糖為 3.89 6.11mmol/L (70110mg/dl)；2、全血為3.336.1mmol/L (6011

5、0mg/dl)。 六、注意事項(xiàng)1、如果樣品葡萄糖濃度超過(guò) 22.2mmol/L(400mg/dl)時(shí)，樣品量可 減半，改為5ul,標(biāo)準(zhǔn)量不變，重新測(cè) 定，結(jié)果乘以 2 。2、試劑應(yīng)在28條件下儲(chǔ)存，對(duì)于酶 試劑要注意防凍。注意事項(xiàng)3、測(cè)定血糖的血清要用新鮮的，采集后 不應(yīng)超過(guò)2小時(shí)測(cè)定完,否則血清葡萄 糖被血細(xì)胞糖降解(每小時(shí)可降低7% 即 0.280.56mmol/L)4、如果必要時(shí)可做葡萄糖耐量試驗(yàn)，口服 葡萄糖75g溶于300ml水中，2小時(shí)后采 血，其血糖值應(yīng)恢復(fù)到空腹前（空腹血 糖增高明顯者一般不作此實(shí)驗(yàn)）。注意事項(xiàng)5、本法不宜直接用于尿糖測(cè)定，因尿中有高濃度的干擾過(guò)氧化物酶反應(yīng)的物質(zhì)（如尿 酸），產(chǎn)生負(fù)干擾。有報(bào)告預(yù)先用離子交換樹(shù)脂處理尿，除去干擾后再測(cè)定。七、臨床意義 1、血糖增高：（1）常見(jiàn)于生理因素及注射腎上腺素后；（2）病理性增高：多見(jiàn)于各種糖尿病；（3）某些內(nèi)分泌疾病也可增高，如甲狀 腺機(jī)能亢進(jìn)、腎上腺機(jī)能亢進(jìn)，垂 體前葉嗜酸性細(xì)胞腺瘤、垂體前葉 嗜堿性細(xì)胞機(jī)能亢進(jìn)癥等。臨床意義