新冠核酸檢測實(shí)驗(yàn)室PCR管八聯(lián)管濾芯吸頭等耗材質(zhì)檢和儲存程序

1、新冠核酸檢測實(shí)驗(yàn)室 PCR 管（八聯(lián)管） 濾芯吸頭等耗材質(zhì)檢和儲存程序1 目的保證耗材的使用質(zhì)量，合理的配用及存放。2 適用范圍核酸擴(kuò)增熒光檢測實(shí)驗(yàn)室常用耗材：離心管；PCR 管（八聯(lián)管）；濾芯吸頭；PCR 用采血管、采樣管、采樣拭子和一次性吸管等；無核酸水、PBS 等緩沖液。負(fù)責(zé)人購買和儲存程序購買前訂出計劃并定出品名、質(zhì)量規(guī)格報相關(guān)部門訂貨及購買。購買后，驗(yàn)收合格即領(lǐng)取。常用的消耗品定點(diǎn)、定量地擺在實(shí)驗(yàn)臺抽屜里，并標(biāo)明品名及數(shù)量。特殊的消耗品放在指定的地方。每周用量要有記錄，并及時補(bǔ)充及領(lǐng)取所用去的數(shù)量。訂購消耗品前，應(yīng)準(zhǔn)確查詢數(shù)量。玻璃用品應(yīng)放在指定位置，存放要小心，以免損壞。 5 質(zhì)檢

2、程序5.1輔料質(zhì)檢的基本原則5.11 外包裝檢查:外包裝應(yīng)完整無損無污，標(biāo)識清楚，檢査品名、品牌，貨號，規(guī)格、生產(chǎn)日期，有效期、保存條件等信息。內(nèi)包裝檢查:內(nèi)包裝物品應(yīng)與外包裝標(biāo)識一致，檢查是否有破損，泄漏，內(nèi)容物是否齊全，是否有相應(yīng)的使用說明書等。性能質(zhì)檢:檢測試劑耗材是否與其性能一致，比如吸頭的準(zhǔn)確性和氣密性等污染物質(zhì)檢:檢試劑耗材是否被常規(guī)檢測項目的待檢物污染，這種污染可能是物品生產(chǎn)環(huán)節(jié)，也可能是運(yùn)輸或?qū)嶒?yàn)室的保存過程中被污染。抑制物質(zhì)檢:檢試劑耗材中是否存在PCR 反應(yīng)的抑制物，比如核酸酶。5.2 輔料質(zhì)檢的前提條件5.21 弱陽性質(zhì)控:需要準(zhǔn)備弱陽性質(zhì)控，包括標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、第三方質(zhì)控或弱

3、陽性樣品用于進(jìn)行性能質(zhì)控和抑制物質(zhì)控。5.22.陰性質(zhì)控:需要準(zhǔn)各確定陰性的樣品或空白對照，用于進(jìn)行污染物的質(zhì)控。5.23 重復(fù)次數(shù):符合統(tǒng)計學(xué)計算的最常用的兩個數(shù)字是5 和 20，5 通常是能進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析的最少重復(fù)次數(shù)，20 通常用于計算 95的置信區(qū)間。我科選擇重復(fù)次數(shù)5。5.3 常見輔料的質(zhì)檢輔料的質(zhì)檢應(yīng)結(jié)合實(shí)際工作中可能用到的場景，并非越苛刻越好，需要每個實(shí)驗(yàn)室結(jié)合自身情況來設(shè)計和調(diào)整參數(shù)。我科按以下方式質(zhì)檢。離心管：滲漏密閉性:將 5 個離心管加入半量墨汁，蓋好蓋子后放入水中，浸泡30min，沒有墨汁滲出為合格。離心密閉性:將 5 個離心管加入半量純水，放入離心機(jī)，10000rpm

4、，30min，管蓋未崩開未漏液為合格。熱密閉性:將 5 個離心管加入半量純水，蓋好蓋子稱重后放入金屬浴中，56，30min， 再進(jìn)行稱重，離心管未變形，管蓋未崩開未漏液，前后重量未變化為合格。冷密閉性:將 5 個離心管加入半量純水，放入-20冰箱，24h，離心管未變形，管蓋未崩開未漏液為合格。污染物質(zhì)檢:將 5 個離心管分別加入半量陰性純水，蓋好蓋子渦旋1min 后靜置 5min，吸取純水作為模板進(jìn)行擴(kuò)增，qPCR 無擴(kuò)增為合格。抑制物質(zhì)檢:將 5 個離心管分別加入弱陽性質(zhì)控物，室溫靜置 5min，然后進(jìn)行提取 RNA 核酸，DNA 核酸，室溫靜置 5min，作為模板進(jìn)行擴(kuò)增，qPCR 擴(kuò)增未

5、被抑制為合格。PCR 管（八聯(lián)管）:滲漏密閉性:將 5 個 PCR 管（八聯(lián)管）加入半量墨汁，蓋好蓋子后放入水中，浸泡 30min， 沒有墨汁滲出為合格。離心密閉性:將 5 個 PCR 管（八聯(lián)管）加入半量純水，放入離心機(jī)，1000rpm，30min，管蓋未崩開未漏液為合格熱密閉性:將 5 個 PCR 管（八聯(lián)管）加入半量純水，蓋好蓋子稱重后放入PCR 儀，設(shè)置一個常用的 PCR 程序，程序運(yùn)行完畢后，再進(jìn)行稱重，PCR 管（八聯(lián)管）未變形，管蓋未崩開未漏液，前后重量未變化為合格。冷密閉性:將 5 個 PCR 管（八聯(lián)管）加入半量純水，放入 20冰箱，24h，離心管未變形， 管蓋未崩開未漏液為

6、合格。污染物質(zhì)檢:將 5 個PCR 管（八聯(lián)管）加入半量陰性純水，蓋好蓋子渦旋 1min 后靜置 5min， 作為模板進(jìn)行擴(kuò)增，qPCR 無擴(kuò)增為合格。抑制物質(zhì)檢:將 5 個 PCR 管（八聯(lián)管）分別加入弱陽性質(zhì)控物，室溫靜置 5min，然后進(jìn)行提取RNA 核酸，DNA 核酸，室溫靜置5min，作為模板進(jìn)行擴(kuò)増，qPCR 增未被抑制為合格?？瞻谉晒馔ㄍ感?對于 qPCR，需要考察 PCR 管（八聯(lián)管）是否有非特異性光信號，將 5 個空 PCR 管（八聯(lián)管），蓋好蓋子后放入PCR 儀，設(shè)置一個常用的PCR 程序，程序運(yùn)行完畢后，qPCR 無擴(kuò)增為合格。陽性熒光通透性:對于 qPCR，還需要考察

7、PCR 管（八聯(lián)管）是否會抑制熒光的通透性， 將 5 個。含弱陽性樣品和擴(kuò)增試劑的PCR 管（八聯(lián)管），與確認(rèn)無熒光干擾的 PCR 管（八聯(lián)管），蓋好蓋子后放入 PCR 儀一同擴(kuò)増，設(shè)置一個常用的PCR 程序，程序運(yùn)行完畢后， qPCR 擴(kuò)增未被抑制為合格。濾芯吸頭:測試吸頭需使用經(jīng)校準(zhǔn)的移液器。準(zhǔn)確性:將 5 個吸頭分別吸取定量的純水稱重，重量與體積的關(guān)系按照1g/mL 換算氣密性:取 5 個吸頭，吸取最大量程的含有1甘油的墨水，觀察有色液體不出現(xiàn)在濾塞之上，液面相同為合格。防氣溶膠性能:取 5 個吸頭，吸取陽性核酸，反復(fù)吹吸 10 次，換另一個新吸頭在陰性純水中反復(fù)吹吸 10 次，取陰性純

8、水作為模板進(jìn)行擴(kuò)増，qPCR 無擴(kuò)增為合格。污染物質(zhì)檢:取 5 個吸頭，吸取陰性純水反復(fù)吹吸 10 次，取陰性純水作為模板進(jìn)行擴(kuò)增， qPCR 無擴(kuò)增為合格。抑制物質(zhì)檢:取 5 個吸頭，吸取弱陽性質(zhì)控物反復(fù)吹吸 10 次，然后進(jìn)行提取;吸取 RNA 核酸和DNA 核酸反復(fù)吹吸 10 次，作為模板進(jìn)行擴(kuò)增，qPCR 擴(kuò)増未被抑制為合格。PCR 用采血管、采樣管、采樣拭子和一次性吸管等: 主要考察污染物和抑制物污染物質(zhì)檢:將 5 個耗材加入一定量陰性純水，蓋好蓋子渦旋 1min 后靜置 30min，吸取純水作為模板進(jìn)行擴(kuò)增，qPCR 無擴(kuò)增為合格。抑制物質(zhì)檢:將 5 個耗材分別加入弱陽性質(zhì)控物，室溫靜置30min，然后吸取質(zhì)控物進(jìn)行提取;作為模板進(jìn)行擴(kuò)增，qPCR 擴(kuò)增未被抑制為合格。無核酸水、PBS 等緩沖液:PH 值:測量各緩沖液的PH 值。污染物質(zhì)檢:吸取緩沖液作為模板進(jìn)行擴(kuò)增，qPCR 無擴(kuò)增為合格。抑制物