實(shí)驗(yàn)直接滴定法測(cè)還原糖

1、關(guān)于實(shí)驗(yàn)直接滴定法測(cè)還原糖第一張，PPT共二十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月1. 實(shí)驗(yàn)原理 將一定量的堿性酒石酸銅甲、乙液等量混合，立即生成天藍(lán)色的氫氧化銅沉淀，這種沉淀很快與酒石酸鉀鈉反應(yīng)，生成深藍(lán)色的可溶性酒石酸鉀鈉銅絡(luò)合物。在加熱條件下，以次甲基藍(lán)作為指示劑，用樣液滴定，實(shí)驗(yàn)三：還原糖的測(cè)定（直接滴定法）第二張，PPT共二十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月樣液中的還原糖與酒石酸鉀鈉銅反應(yīng)，生成紅色的氧化亞銅沉淀，待二價(jià)銅全部被還原后，稍過量的還原糖把次甲基藍(lán)還原，溶液由藍(lán)色變?yōu)闊o(wú)色，即為滴定終點(diǎn)。根據(jù)樣液消耗量可計(jì)算還原糖含量。當(dāng)稱樣量為5g時(shí)，該法的檢出限為0.25g/100g第三張，PPT共二

2、十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 （1）CuSO4 + 2NaOH = 2Cu(OH)2 + Na2SO4Cu(OH)2 +COOKCHOHCOONaCHOH（2）=COOKCHOCOONaCHOCu+ 2H2O第四張，PPT共二十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（3）=COOKCHOCOONaCHOCu+ 3Cu2OCHO(CHOH)4CH2OH+COOH(CHOH)3CH2OH6+ 6H2OCOOKCHOHCOONaCHOH+ 6+ H2CO3第五張，PPT共二十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（4）第六張，PPT共二十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2. 適用范圍與特點(diǎn) 本法又稱快速法，它是在藍(lán)-愛農(nóng)容量法基

3、礎(chǔ)上發(fā)展起來的，其特點(diǎn)是試劑用量少，操作和計(jì)算都比較簡(jiǎn)便、快速，滴定終點(diǎn)明顯。適用于各類食品中還原糖的測(cè)定。但測(cè)定醬油、深色果汁等樣品時(shí)，因色素干擾，滴定終點(diǎn)常常模糊不清，影響準(zhǔn)確性。本法是國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)分析方法。第七張，PPT共二十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3. 實(shí)驗(yàn)材料、儀器與試劑實(shí)驗(yàn)材料：蘋果儀 器：分析天平、研缽、電爐、鐵架 臺(tái)、錐形瓶、燒杯、玻棒、容 量瓶、移液管、酸式滴定管。試 劑：第八張，PPT共二十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（1）堿性酒石酸銅甲液：稱取15g硫酸銅(CuSO4 5H2O)及0.05g次甲基藍(lán)，溶于水中并稀釋至l000 mL。（2）堿性酒石酸銅乙液：稱取50g酒石酸鉀鈉

4、及75g氫氧化鈉，溶于水中，再加入4g亞鐵氰化鉀，完全溶解后，用水稀釋至1000mL貯存于橡膠塞玻璃瓶?jī)?nèi)。第九張，PPT共二十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（3）乙酸鋅溶液：稱取21.9g乙酸鋅，加3mL乙酸，加水溶解并稀釋至l00mL。（4）10.6%亞鐵氰化鉀溶液：稱取l0.6g亞鐵氰化鉀，加水溶解并稀釋至l00mL。（5）葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取l.0000g經(jīng)過962干燥2h的純葡萄糖，加水溶解后加入5mL鹽酸，并以水稀釋至l000mL。此溶液每毫升相當(dāng)于1.0mg葡萄糖。第十張，PPT共二十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月4. 實(shí)驗(yàn)步驟（1）樣品處理：稱取約5.00g試樣，置于250mL容量瓶

5、中，加50mL水，混勻，慢慢加入5 mL乙酸鋅溶液及5mL亞鐵氰化鉀溶液，加水至刻度，混勻，沉淀，靜置30min，用干燥濾紙過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液備用。第十一張，PPT共二十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（2）標(biāo)定堿性酒石酸銅溶液：吸取堿性灑石酸銅甲乙液各5.0mL，置于150mL錐形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠3粒。從滴定管滴加約9mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，控制在2min內(nèi)加熱至沸，趁熱以每2秒l滴的速度繼續(xù)滴加葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，直至溶液藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)。記錄消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液的總體積，平行操作三份，取其平均，按下式計(jì)算。第十二張，PPT共二十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月F= cVF：10mL堿性酒

6、石酸銅溶液相當(dāng)于葡萄糖的質(zhì)量，mgc：葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mg/mLV：標(biāo)定時(shí)消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的總體積，mL第十三張，PPT共二十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（3）試樣溶液預(yù)測(cè)：吸取5.0mL堿性灑石酸銅甲液及5.0mL乙液，置于150mL錐形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠3粒，控制在2min內(nèi)加熱至沸，趁沸以先快后慢的速度，從滴定管中滴加試樣溶液，并保持溶液沸騰狀態(tài)，待溶液顏色變淺時(shí)，以每2秒1滴的速度滴定，直至溶液藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)，記錄樣液消耗體積。 第十四張，PPT共二十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 當(dāng)樣液中還原糖濃度過高時(shí)應(yīng)適當(dāng)稀釋，再進(jìn)行正式測(cè)定，使每次滴定消耗樣液的體積控制在與標(biāo)

7、定堿性酒石酸銅溶液時(shí)所消耗的還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積相近，約在10mL左右。 當(dāng)濃度過低時(shí)則采取直接加入10mL樣品液，免去加水10mL，再用還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至終點(diǎn)，記錄消耗的體積與標(biāo)定時(shí)消耗的還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液體積之差相當(dāng)于10mL樣液中所含還原糖的量。第十五張，PPT共二十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（4）試樣溶液測(cè)定：吸取5.0mL堿性灑石酸銅甲液及5.0mL乙液，置于150mL錐形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠3粒，從滴定管中加比預(yù)測(cè)體積少lmL的試樣溶液至錐形瓶中，使在2min內(nèi)加熱至沸，趁沸繼續(xù)以每2秒l滴的速度滴定，直至藍(lán)色剛好褪去為終點(diǎn)，記錄樣液消耗體積。同法平行操作三份，得出平均消耗

8、體積。第十六張，PPT共二十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月5. 結(jié)果計(jì)算還原糖（以葡萄糖計(jì)%）=FmV2501000 100式中：m樣品質(zhì)量，gF10mL堿性酒石酸銅溶液相當(dāng)于 葡萄糖的質(zhì)量，mgV測(cè)定時(shí)平均消耗樣品的體積，mL250樣品溶液的總體積，mL第十七張，PPT共二十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月6. 注意事項(xiàng)（1）本方法測(cè)定的是一類具有還原性的糖，包括葡萄糖、果糖、乳糖、麥芽糖等，只是結(jié)果用葡萄糖或其他轉(zhuǎn)化糖的方式表示，所以不能誤解為還原糖=葡萄糖或其他糖，也并不完全等于各還原糖含量之和。但如果已知樣品中只含有某一種糖，如乳制品中的乳糖，則可以認(rèn)為還原糖=某糖。第十八張，PPT共二十三頁(yè)，

9、創(chuàng)作于2022年6月（2）堿性酒石酸銅甲乙液應(yīng)分別存放，臨用時(shí)甲、乙液等量混合，避免析出氧化亞銅沉淀，使Cu2+有效濃度降低。（3）本法是與定量的酒石酸銅試劑作用，Cu2+是定量的基礎(chǔ)，故樣品處理時(shí)，不能用銅鹽作蛋白質(zhì)沉淀劑，以免引入Cu2+，得到錯(cuò)誤的結(jié)果。第十九張，PPT共二十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（4）反應(yīng)終點(diǎn)本來應(yīng)為氧化亞銅的紅色，為更易觀察，在堿性酒石酸銅乙液中加入了少量亞鐵氰化鉀，使紅色氧化亞銅與亞鐵氰化鉀生成可溶性的復(fù)鹽，反應(yīng)終點(diǎn)由藍(lán)色變?yōu)闇\黃色，即為改良的藍(lán)-愛農(nóng)法。（5）滴定時(shí)不能隨意搖動(dòng)錐形瓶，更不能把錐形瓶從熱源上取下來滴定，以防止空氣進(jìn)入反應(yīng)溶液中。第二十張，PPT共二十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（6）滴定必須在沸騰條件下進(jìn)行，其原因一是可以加快還原糖與Cu2+的反應(yīng)速度，二是次甲基藍(lán)變色反應(yīng)是可逆的。還原型次甲基藍(lán)遇到空氣中氧時(shí)，又會(huì)被氧化為氧化型。此外，氧化亞銅也極不穩(wěn)定，易被空氣中的氧所氧化。保持反應(yīng)沸騰可防止空氣進(jìn)入，避免次甲基藍(lán)和氧化亞銅被氧化而增加耗糖量。第二十一張，PPT共二十三頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（7）樣品溶液預(yù)測(cè)的目的：一是本法對(duì)樣品溶液中還原糖濃度有一定要求，測(cè)定時(shí)樣品溶液的消耗體積應(yīng)與標(biāo)定葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液時(shí)消耗的體積相近（10mL左右），通過預(yù)測(cè)可以了解樣品溶液濃度是