體外診斷試劑臨床試驗★仁濟-糖化白蛋白檢測試劑盒（酶法）-臨床試驗方案（第二版）

1、糖化白蛋白檢測試劑盒（酶法）臨床試驗方案 2015年12月4日第二版糖化白蛋白檢測試劑盒（酶法） 2015年12月4日第二版申辦方：XX醫(yī)療科技（中國）有限公司體外診斷試劑臨床試驗方案產(chǎn)品名稱：糖化白蛋白檢測試劑盒（酶法）型號規(guī)格：GA酶液 40mL2 GA酶液 13.4mL2 ALB緩沖液 40mL2 ALB顯色劑 20mL2 校準品 1mL用3 校準品 1mL用3 申請人（蓋章）：XX醫(yī)療科技（中國）有限公司承擔臨床試驗醫(yī)療機構（蓋章）：上海交通大學醫(yī)學院附屬仁濟醫(yī)院臨床試驗類別：臨床驗證臨床試驗開展時間：2016年2月2016 年5月臨床試驗負責人（簽字）：統(tǒng)計學負責人（簽字）：2015

2、年12月4日說 明1. 醫(yī)療器械產(chǎn)品在臨床試驗前，必須制定臨床試驗方案。2. 臨床試驗方案由醫(yī)療機構和實施者共同設計、制定。實施者與醫(yī)療機構簽署雙方同意的臨床試驗方案，并簽訂臨床試驗合同。3. 市場上尚未出現(xiàn)的第三類植入體內(nèi)或借用中醫(yī)理論制成的醫(yī)療器械，臨床試驗方案應當向醫(yī)療器械技術審評機構備案。4. 醫(yī)療機構和實施者應當共同制定每病種的臨床試驗例數(shù)及持續(xù)時間，以確保達到試驗預期目的。5. 臨床試驗類別分臨床試用和臨床驗證。目 錄1. 臨床試驗的背景 12. 試驗目的 23. 試驗設計 34. 試驗過程 54.1 樣本篩選 124.2 樣本搜集和保存 144.3 樣本檢測 145 檢測系統(tǒng) 1

3、25.1 檢測試劑 125.2 檢測儀器 135.3 檢測人員 146 統(tǒng)計學分析 137 結果的使用和公正性 128 醫(yī)學倫理說明 129 參考文獻 1310 附錄A 121. 臨床試驗的背景糖化白蛋白(GA)是血液中葡萄糖與白蛋白發(fā)生非酶醣化反應的早期糖基化產(chǎn)物（1）。因白蛋白在體內(nèi)的半衰期較短（約17天），且白蛋白與血糖的結合速度比血紅蛋白快，所以GA對短期內(nèi)血糖變化比糖化血紅蛋白（HbA1c）敏感，通常認為GA測定可反映患者近期（約2周）的血糖控制情況，目前GA已成為臨床上應用較廣泛的血糖檢測指標（2）。多項研究表明，30天內(nèi)的血糖水平影響HbA1c水平達50%，而90天120天只影響

4、10%。所以，在血糖檢測體系中GA是對HbA1c的有效補充。近年來，GA與HbA1c的關系受到廣泛重視，通過研究GA與HbA1c的關系可進一步認識GA的臨床意義。動脈粥樣硬化是長期慢性炎癥性過程，它并非在糖尿病確診后才啟動，在血糖升高但仍未達到糖尿病診斷標準時就已啟動，隨著血糖的增高而進展加速。既往研究表明，作為糖尿病患者體內(nèi)主要的早期糖基化產(chǎn)物，GA可通過破壞內(nèi)皮細胞功能，導致血管壁的氧化應激和炎癥反應、刺激平滑肌細胞增殖和遷移等病理過程，加快動脈粥樣硬化和糖尿病血管并發(fā)癥的發(fā)生與發(fā)展（3）。因此GA在糖尿病動脈粥樣硬化病理生理機制中起到重要作用。GA是反映過去2-3周平均血糖水平的一項指標

5、。比血糖檢測“金標準”HbA1c的反映周期要短一些。因此，GA在治療效果的確認以及臨床用藥量的調(diào)整方面比A1c具有優(yōu)勢。另外，在許多血紅蛋白代謝異常的情況下，A1c的結果受到影響不能真實反映患者的血糖水平，而GA的結果則不受影響，如糖尿病腎病透析患者、貧血患者、妊娠期婦女的血糖檢測等，因此GA為血糖監(jiān)測的首選指標。2. 產(chǎn)品的檢測原理和方法2.1 介紹 XX醫(yī)療株式會社生產(chǎn)的糖化白蛋白檢測試劑盒（酶法）有GA酶液、,ALB緩沖液、ALB顯色劑和校準品、組成，其中校準品、為均勻的凍干粉狀，溶解后使用，其他試劑均為液體試劑，可直接上機使用。此試劑盒采用酶法定量檢測血清或血漿中的糖化白蛋白濃度。2.

6、2 主要成分GA酶液： 蛋白酶， 4-氨基安替匹林 GA酶液： 果糖氨基酸氧化酶， N,N-雙（4-璜丁基）-m-苯胺鈉鹽 ALB緩沖液：琥珀酸 ALB顯色劑：溴甲酚藍 校準品：人糖化白蛋白 校準品：人糖化白蛋白2.3 檢測原理2.3.1 糖化白蛋白的測定蛋白酶第一反應：糖化白蛋白 糖化氨基酸FAOD第二反應：糖化氨基酸 + O2 + H2O 葡萄糖醛酮 + 氨基酸 + H2O2PODH2O2 + 4-氨基安替比林 + DSBmT 紅紫色色素2.3.2 白蛋白的測定第一反應：還原型白蛋白 氧化型白蛋白BCP第二反應：氧化型白蛋白 白蛋白-BCP結合體 2.3.3 糖化白蛋白值（%）的計算糖化白

7、蛋白值（%）=糖化白蛋白濃度/白蛋白濃度為使測定值與常規(guī)檢測方法（Lucica GA-L，旭化成制藥株式會社）測定結果相一致，需用以下公式進行補正。補正公式：（糖化白蛋白濃度/白蛋白濃度） 48.9 + 1.92.4 特點 本試劑采用酶法，可以再全自動生化分析裝置上直接使用；試劑穩(wěn)定性良好，有效期為生產(chǎn)后14個月。2.5 參考范圍 1116%2.6 適用機型 本產(chǎn)品應用于定量檢測血清或血漿中糖化白蛋白的濃度，適用于各種全自動生化分析裝置：包括日立高新科學系統(tǒng) 7600、7180、LABOSPECT008、東芝醫(yī)療系統(tǒng) TBA-120FR型，貝克曼庫爾特AU-680型， BM9130型全自動生化

8、分析儀。2. 臨床試驗目的和內(nèi)容2.1 臨床試驗目的 按照國家食品藥品監(jiān)督管理總局相關規(guī)定的要求，為產(chǎn)品注冊申請的需要，進行體外診斷試劑的臨床研究，驗證預申報產(chǎn)品糖化白蛋白檢測試劑盒（酶法）臨床應用的可行性及檢測結果的可靠性，并具備一定的臨床價值。2.2 臨床試驗內(nèi)容 本試驗為已有同品種批準上市產(chǎn)品的臨床研究。以參比試劑旭化成制藥株式會社生產(chǎn)的糖化白蛋白測定試劑盒（Lucica GA-L，酶法）為相對標準，驗證考核試劑糖化白蛋白檢測試劑盒（Norudia GA，酶法）與參比試劑針對同一臨床標本的試驗結果是否具有較高的符合率（一致率）。3. 試驗總體設計3.1 臨床試驗流程圖臨床試驗報告樣本選擇

9、樣本收集記錄樣本信息考核試劑檢測結果參比試劑檢測結果考核試劑與參比試劑符合樣本考核試劑與參比試劑不符樣本兩試劑最終結果不符的進行第三方驗證數(shù)據(jù)統(tǒng)計圖1 臨床試驗流程圖根據(jù)入選標準和排除標準進行臨床樣本選擇使用少量參比試劑和考核試劑進行預實驗，熟悉試劑操作過程和參數(shù)用考核試劑和參比試劑對樣本進行檢測計算結果差異，相差較大的樣本進行第三方驗證。以第三方驗證試劑檢測結果作為真實值看看參比試劑和考核試劑的結果哪個與真實值更接近所有檢測結果記錄在案臨床單位完成分報告，申請單位完成最終的臨床實驗總結報告3.2 血清與血漿樣本比對同一患者血清樣本血漿樣本考核試劑檢測結果考核試劑檢測結果考察血清樣本與血漿樣本

10、的相關性比較4. 臨床試驗過程4.1 樣本量按照體外診斷試劑臨床研究技術指導原則的要求，對所選數(shù)量的樣本進行分析，具備一定的統(tǒng)計學意義，使臨床試驗結果合理可靠，同時也可對考核試劑做出科學的評價，節(jié)約社會成本。本產(chǎn)品在該院的臨床試驗樣本總數(shù)不低于100例，其中異常樣本數(shù)不少于總數(shù)的30%。產(chǎn)品是檢測血清或血漿中糖化白蛋白的診斷試劑，為驗證血清與血漿檢測的等效性，因此安排醫(yī)院留存50例以上的同一病人的血清、血漿的樣本進行檢測。4.2 樣本要求本試驗樣本要求使用血清或者血漿（肝素血漿、EDTA血漿、NaF血漿）。血清（血漿）分離后，盡可能于當日進行測定。若當日不能完成測定，按以下方法保存：1周內(nèi)檢測

11、保存于28冰箱，需長期保存則存放于-30以下冰箱，避免反復凍融。測定凍存樣本時，將樣本先恢復至室溫（1530）后，再進行檢測。以保證可以分批測定或同批檢測。本試驗使用醫(yī)院已經(jīng)檢測結束的正常及異常水平的該項目樣本或相關項目樣本，并具有確切臨床診斷信息，同時樣本的類別性別不限、年齡不限。本試驗需要剔除嚴重溶血、脂血、黃疸及患者信息不全等樣本。試驗后如有樣本因不符合要求被剔除，應予以說明；如剔除樣本后樣本數(shù)量不能滿足試驗要求，應予以補充樣本，以達到數(shù)量要求。4.3 4.4 臨床樣本分組臨床試驗的操作者應僅僅能夠看到樣本編號，無法得知樣本的原有信息。在全自動生化分析儀上同時使用考核試劑和參比試劑檢測血

12、清樣本。分別搜集結果，最后匯總統(tǒng)計，并結合臨床信息。全部樣本信息以及試驗編號、試驗結果、原始試驗數(shù)據(jù)應一一對應，并在臨床試驗單位存留備查。4.5 樣本檢測本試驗樣本檢測前要求質(zhì)控結果符合要求。檢測時將收集到的同一樣本分別在考核系統(tǒng)及參比系統(tǒng)上進行測定，記錄檢測結果，填寫臨床信息或其他相關原本信息，并打印原始數(shù)據(jù)。5. 檢測系統(tǒng)5.1 檢測試劑 考核系統(tǒng)為日本XX醫(yī)療株式會社生產(chǎn)的糖化白蛋白檢測試劑盒（酶法），使用配套的校準品和質(zhì)控品。參比系統(tǒng)采用日本旭化成制藥株式會社生產(chǎn)的糖化白蛋白測定試劑盒（酶法），使用配套的校準品和質(zhì)控品。在對比試驗研究中，考核系統(tǒng)與參比系統(tǒng)中重復測定結果仍不符的樣本，應

13、采用第三方試劑進行進一步驗證試驗。第三方試劑采用由四川邁克生物科技股份有限公司生產(chǎn)的糖化白蛋白檢測試劑盒（酶法），使用配套的校準品和質(zhì)控品。按照廠家提供的試劑盒的說明書及相應的上機參數(shù)進行操作，分別繪制校準曲線后，將各自質(zhì)控品作為標本在兩個系統(tǒng)上進行測定。待質(zhì)控結果符合預期值后，再進行試驗標本的上機測定。5.2 檢測儀器本試驗使用日立7600全自動生化分析裝置，試驗前進行充分清洗及滿足生化分析裝置正常運行的各種條件，以確保分析裝置運轉正常。6. 數(shù)據(jù)處理與記錄保存6.1 統(tǒng)計學分析統(tǒng)計學的分析方法是以參比試劑的檢測結果為相對標準，對同一樣本的兩種檢測結果進行回歸方程分析，并計算相關系數(shù)。6.2

14、 成功和失敗的可能性分析6.2.1 成功可能性分析本試驗使用患者的血清樣本進行測定，試驗的樣本量充足，由經(jīng)驗豐富的技師進行操作。公司有技術支持人員，保證應用的儀器設備在醫(yī)院正常運行使用。6.5.2 失敗可能性分析1）試驗中出現(xiàn)斷電、斷水等，導致儀器不能正常運行，出現(xiàn)試驗失敗。但醫(yī)院備有電源、輔助供水設施，不致出現(xiàn)上述情況。2）人員操作不當，導致試驗失敗。但本試驗選擇操作人員為具有多年臨床操作經(jīng)驗的人員，將出現(xiàn)操作不當?shù)默F(xiàn)象的可能性極小。3）如果試驗中樣本沒有達到要求，則會導致試驗結果的不可信，導致試驗的失敗。6.3 樣本相關信息記錄按照試驗記錄表格的要求記錄樣本相關信息，包括：樣本編號、患者姓

15、名縮寫（用拼音簡寫代替）、年齡、性別、檢驗單號（或者住院號等樣本在院內(nèi)的識別代碼）、臨床診斷結果、樣本類型、樣本備注。以上信息盡量完整。6.4 研究中發(fā)生的問題及其處理措施如試驗中出現(xiàn)差異較大的樣本測定結果,應做如下分析:1）操作是否有誤2）儀器狀態(tài)是否正常3）樣品狀態(tài)是否符合檢測標準4）試劑狀態(tài)是否符合檢測標準5）實驗室環(huán)境是否符合要求經(jīng)過上述分析,若是以上錯誤原因,應修正后重新進行試驗。7. 統(tǒng)計方法和評價方法 用兩種試劑盒（考核試劑和參比試劑）分別檢測同一個樣本，再分別對檢測結果做如下統(tǒng)計：7.1 定量結果分析7.1.1 雙變量相關性；以兩種試劑檢測結果作為變量，雙變量分析目標是確定兩個

16、變量之間的相關性，測定它們之間的預測或解釋的能力。雙變量統(tǒng)計分析技術包括：相關分析和回歸分析。在p0.01水平上的相關性。7.1.2 以參比試劑檢測結果為自變量Xi，以考核試劑結果為因變量Yi，以Yi對Xi作散點圖，并檢測兩種方法的線性相關性。7.1.3 做偏倚圖（bland-altman），檢驗兩種試驗結果的偏差。7.2 臨床評價標準7.2.1 雙變量相關系數(shù)大于0.957.2.2 兩種試劑檢測的結果做散點圖，分析器線性相關系數(shù)，|r|20.95試驗結果的偏差95%在偏差均值2 SD范圍內(nèi)。7.2.3 Bland-Altman偏倚圖用來比較兩組結果的差值是否在1.96個SD范圍內(nèi)，若95%以

17、上的差值在1.96SD范圍內(nèi)，可視為結果具有一致性。7.3 統(tǒng)計處理的一般公式本次臨床試驗結果使用SPSS20.0中文版軟件進行統(tǒng)計學處理。7.3.1 相關性計算：將考核試劑與參比試劑的測定數(shù)值進行相關分析，計算相關系數(shù)r，應得r0.95，P0.001，兩組測試數(shù)值具有顯著性正線性相關關系。r值計算公式如下：通過兩種試劑的檢測結果做散點圖，并計算其線性相關系數(shù)，從而判斷兩種產(chǎn)品的檢測一致性。7.3.2Bland-Altman偏倚圖繪制：以參比試劑結果為Xi，考核試劑結果為Yi，計算均值(Yi+Xi)/2和差值Yi-Xi，以均值(Yi+Xi)/2為橫軸，Yi-Xi為縱軸，做散點圖。計算差值的均數(shù)

18、d和標準差Sd，確定一致性界限為d1.96 Sd。若有95%的差值位于該一致性界限以內(nèi)，則視結果具有一致性。8. 臨床試驗涉及的倫理問題和病人知情同意書的說明本臨床試驗必須遵循赫爾辛基宣言和中國有關臨床試驗研究規(guī)范、法規(guī)進行。根據(jù)體外診斷試劑注冊臨床試驗技術指導原則（國食藥監(jiān)械2007240號）中臨床研究的基本原則中“該臨床研究對受試者幾乎沒有風險，可不提交倫理委員會的審評意見及受試者的知情同意書，但臨床研究者應提供有關倫理事宜的說明?！?由于本次臨床研究的糖化白蛋白檢測試劑盒（酶法）產(chǎn)品為體外診斷試劑，在臨床試驗中不需要與患者直接接觸，不向病人提供檢測報告，且試驗結果只用于對比研究，不涉及個

19、人隱私，不作為輔助診斷依據(jù)，不會給受試者帶來任何風險，因此可不提交受試者的知情同意書。9. 參考文獻1.Rondeau P, Bourdon E.Theglycation of albumin: structural and functional impacts. Biochimie,2011,93:645-658.2.中華醫(yī)學會糖尿病學分會.中國血糖監(jiān)測臨床應用指南（2011年版）.中華糖尿病雜志，2011,3:13-21.3.Rodino-Janeiro BK, Gonzalez-Peteiro M, Ucieda-Somoza R, et al.Glycated albumin, a p

20、recursor of advanced glycation end-products, up-regulated NADPH oxidase and enhances oxidative stress in human endothelial cells: molecular correlate of diabetic vasculopathy. Diabetes Metab Res Rev,2010,26:550-558.10. 其他需要說明的內(nèi)容。10.1 有關安全性方面的說明按全國臨床檢驗操作規(guī)程。10.2 風險的預測及事先應采取的措施10.2.1 臨床試驗開始時，臨床試驗單位應做好充分的準備，掌握本試劑及參比試劑的使用方法和相關技術，確保有充分