醫(yī)學(xué)羅氏電化學(xué)發(fā)光原理專題課件

1、羅氏電化學(xué)發(fā)光原理免疫檢測技術(shù)的發(fā)展電化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)及其原理電化學(xué)發(fā)光技術(shù)的優(yōu)勢免疫檢測技術(shù)的發(fā)展電化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)及其原理電化學(xué)發(fā)光技術(shù)的優(yōu)勢技術(shù)創(chuàng)新領(lǐng)先的免疫檢測新技術(shù)ECL放免酶免熒光免疫化學(xué)發(fā)光電化學(xué)發(fā)光1960S197080S2000S1，抗體技術(shù)的革命，從使用多克隆抗體向使用單克隆抗體轉(zhuǎn)變2，從手工操作向全自動(dòng)分析儀的轉(zhuǎn)變3，從液相放射免疫技術(shù)向均相和固相免疫分析技術(shù)的轉(zhuǎn)變1959年Berson和Yalow建立了放射免疫分析方法（RIA），大大提高了免疫測定的敏感度，這種標(biāo)記免疫測定開拓了醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的新領(lǐng)域 。 缺點(diǎn) 半衰期短，試劑貨架期不長。標(biāo)記物不斷變化，試劑批間、批內(nèi)變化大，標(biāo)準(zhǔn)曲線

2、不能保存。反應(yīng)時(shí)間長，操作步驟很難自動(dòng)化。使用放射性核素，對(duì)人體有一定的危害性。分析的限度為 10 mol/ml 或 10 g/ml。在一定時(shí)期內(nèi)曾被采用，正在被逐步取代。放射免疫測定法1971年Engvall和Perlman建立了固相酶免疫測定方法（ELISA），這種非放射標(biāo)記免疫測定在臨床檢驗(yàn)，特別是感染性疾病的診斷中取得了廣泛應(yīng)用。酶免疫測定法缺點(diǎn) 試劑制備困難。操作步驟復(fù)雜，耗時(shí)長。影響因素多，質(zhì)量控制難以保證。最后測定的是顏色的光密度，其精密度和敏感性不如發(fā)光免疫技術(shù)。 各實(shí)驗(yàn)室操作不規(guī)范，質(zhì)量難以保證。有學(xué)者認(rèn)為ELISA技術(shù)已逐步走向退化，可能會(huì)逐步退出臨床實(shí)驗(yàn)室?；瘜W(xué)發(fā)光免疫測

3、定法出現(xiàn)于20世紀(jì)90年代初。由于最后測定的是光子的量，不但對(duì)檢測者無害，其敏感度和精密度均優(yōu)于RIA，而且試劑較穩(wěn)定，并可進(jìn)行全自動(dòng)分析。 化學(xué)發(fā)光免疫測定法采用標(biāo)記催化酶（如辣根過氧化物酶）或化學(xué)發(fā)光分子（如魯米諾）的方法，其化學(xué)反應(yīng)一般不穩(wěn)定，為間斷的、閃爍性發(fā)光，而且在反應(yīng)過程中易發(fā)生裂變，導(dǎo)致反應(yīng)結(jié)果不穩(wěn)定。檢測時(shí)需對(duì)結(jié)合相與游離相進(jìn)行分離，操作步驟多。反應(yīng)原理相對(duì)落后。缺點(diǎn)電化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)電化學(xué)發(fā)光免疫測定法（ECLIA）發(fā)展于 1996年，它在發(fā)光反應(yīng)中加入了電化學(xué)反應(yīng)，是繼放射免疫、酶免疫、化學(xué)發(fā)光免疫測定之后的新一代標(biāo)記免疫測定技術(shù)，是電化學(xué)和免疫測定相結(jié)合的產(chǎn)物。世界公認(rèn)

4、的 最先進(jìn) 的臨床免疫檢測技術(shù)免疫檢測技術(shù)的發(fā)展電化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)及其原理電化學(xué)發(fā)光技術(shù)的優(yōu)勢Elecsys系列全自動(dòng)免疫分析儀1996年德國寶靈曼公司推出Elecsys 2010系統(tǒng)世界上第一臺(tái) 應(yīng)用電化學(xué)發(fā)光技術(shù)的全自動(dòng)免疫分析儀1998年羅氏公司收購寶靈曼公司2001年羅氏推出電化學(xué)發(fā)光免疫模塊E 170 羅氏是全球唯一 應(yīng)用電化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)制造儀器的廠商2006年羅氏推出電化學(xué)發(fā)光免疫模塊e6012007年羅氏推出電化學(xué)發(fā)光免疫模塊e411ECL 2010 diskE170ECL 2010 racke601Elecsys系列全自動(dòng)免疫分析儀e411 diske411 rack電化學(xué)發(fā)光反

5、應(yīng)的原理三聯(lián)吡啶釕和三丙胺在電極表面發(fā)生的電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)電化學(xué)發(fā)光原理底物：三聯(lián)吡啶釕Ru(bpy)2+3 N羥基琥珀酰胺酯(NHS) 三丙胺(TPA) 在電極陽極表面，以上兩種電化學(xué)活性物質(zhì)同時(shí)失去電子發(fā)生氧化反應(yīng)，2價(jià)的Ru(bpy)2+3 標(biāo)記物被氧化成3價(jià)的Ru(bpy)3+3 的標(biāo)記物，TPA被氧化成陽離子自由基TPA+* ， TPA+* 很不穩(wěn)定，自發(fā)地失去一個(gè)質(zhì)子而形成自由基TPA* ，其為強(qiáng)還原劑，將一個(gè)電子給3價(jià)的Ru(bpy)3+3 ，使其成為激發(fā)態(tài)的Ru(bpy)2+3 ，而TPA自身被氧化成氧化產(chǎn)物。激發(fā)態(tài)的Ru(bpy)2+3衰減時(shí)發(fā)射一個(gè)波長620nm的光子，重新形

6、成基態(tài)的Ru(bpy)2+3 。這一過程在電極表面周而復(fù)始進(jìn)行，產(chǎn)生許多光子。使得光信號(hào)增強(qiáng)。Sandwich Principle雙抗夾心法 large molecular weight antigens are measured directly proportional measurement, means: low signal = low concentration high signal = high concentration e.g. TSH, CA 15-3 II assays雙抗夾心法 & 橋聯(lián)免疫法Competitive Principle競爭法 small molecul

7、ar weight antigens are measured indirectly proportional measurement, means: high signal = low concentration low signal = high concentration e.g. T4, Folate II assays競爭法電化學(xué)發(fā)光免疫系統(tǒng)核心原理電化學(xué)發(fā)光磁性微粒子固相親和素- 生物素間接包被流動(dòng)池檢測系統(tǒng)簡單試劑管理，先進(jìn)的定標(biāo)概念直徑最小 2.8um表面積大而均一磁性微粒子呈懸浮狀態(tài)使異相反應(yīng)變成類均相反應(yīng)加快反應(yīng)速度提高反應(yīng)靈敏度磁性微粒子固相載體的優(yōu)點(diǎn)專利的鏈霉親和素-生

8、物素包被技術(shù)適用于包被各種化合物，如多肽、脂多糖等。親和素包被微粒子高效、均一、穩(wěn)定、通用。鏈霉親和素- 生物素間接包被的優(yōu)勢生物素結(jié)合物與標(biāo)本液相反應(yīng)。生物素- 親和素反應(yīng)親和力強(qiáng)。由磁鐵將結(jié)合標(biāo)記Ag-Ab復(fù)合物的磁性微粒（結(jié)合相）吸附于電極上，游離相被緩沖液沖走；電極表面的電化學(xué)發(fā)光的信號(hào)檢測完成后，磁鐵移走并使用系統(tǒng)清潔液沖走電極表面的結(jié)合標(biāo)記Ag-Ab復(fù)合物的磁性微粒子；實(shí)現(xiàn)了結(jié)合相與游離相的全自動(dòng)分離流動(dòng)池檢測系統(tǒng)簡單的試劑管理適用于電化學(xué)發(fā)光全自動(dòng)免疫分析儀各種型號(hào) Elecsys 2010 and the Modular E 1702維條形碼自動(dòng)輸入全部信息試劑聯(lián)體包 成分獨(dú)立

9、 穩(wěn)定好無需配制，打開即用自動(dòng)開閉試劑瓶蓋，有效地防止揮發(fā)等電化學(xué)發(fā)光試劑極為穩(wěn)定兩點(diǎn)定標(biāo)，節(jié)約成本二維條碼系統(tǒng)，信息量大先進(jìn)的兩點(diǎn)定標(biāo)方式羅氏研發(fā)部：建筑在參考標(biāo)準(zhǔn)上的 Master calibrator curve：10-12point每批試劑：Lot-specific master calibration curve (n = 5 or 6)客戶端：換批號(hào)兩點(diǎn)定標(biāo)免疫檢測技術(shù)的發(fā)展電化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)及其原理電化學(xué)發(fā)光技術(shù)的優(yōu)勢同行業(yè)中最先進(jìn)的分析原理專利的電化學(xué)發(fā)光分析技術(shù)（ECL） 最好的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物-三聯(lián)吡啶釕分子量小，結(jié)構(gòu)簡單?？梢詷?biāo)記于抗原，抗體，核酸等各種分子量，分子結(jié)構(gòu)的物質(zhì)。從而具有最齊全的檢測菜單。三聯(lián)吡啶釕為水溶性，且高度穩(wěn)定的小分子物質(zhì)。保證電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的高效和穩(wěn)定，而且避免了本底噪聲干擾。 最先進(jìn)的包被技術(shù)采用羅氏公司專利的鏈霉親和素-生物素包被技術(shù)。鏈霉親和素-生物素是最牢固和特異的結(jié)合。保證了牢固的包被效果和特異的檢測結(jié)果。電化學(xué)發(fā)光技術(shù)的優(yōu)勢電化學(xué)發(fā)光技術(shù)的優(yōu)勢特殊的磁性微粒子載體以及分離技術(shù)由聚苯乙烯包被的磁性微粒子為載體，直徑僅為2.8um。同類型產(chǎn)品最小提供類均相的反應(yīng)環(huán)境，增加反應(yīng)面積，提高反應(yīng)速度；保證最終檢測結(jié)果的高靈敏度；利用磁性分離技術(shù)，實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)化分析。與其它幾種標(biāo)記免疫測定技