藥典微生物相關(guān)培訓(xùn) 藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)劃建設(shè)質(zhì)量管理及面臨的挑戰(zhàn)

1、藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)劃建設(shè)質(zhì)量管理及面臨的挑戰(zhàn)馬仕洪中國食品藥品檢定研究院2015年8月15日，西安藥品微生物實(shí)驗(yàn)室Pharmaceutical microbiology laboratories may be involved in: sterility testing; detection, isolation, enumeration and identifi cation ofmicroorganisms(bacteria, yeast and moulds) and testing for bacterial endotoxins indifferent materials (e.g.

2、 starting materials, water), products, surfaces,garments and the environment; and assay using microorganisms as part of the test system.WHO good practices for pharmaceutical microbiology laboratories（WHO Technical Report Series, No. 961, 2011，Annex 2）藥品微生物實(shí)驗(yàn)室一、面臨的挑戰(zhàn)二、規(guī)劃建設(shè)三、質(zhì)量管理一、面臨的挑戰(zhàn)1、基本“矛盾”一百多年來人們

3、努力提高在“有菌的環(huán)境”生產(chǎn)“無菌的產(chǎn)品”的能力，事實(shí)證明這一努力至今充滿挑戰(zhàn)。典型的無菌生產(chǎn)工藝（來源于上海東富龍科技股份有限公司發(fā)布時間：2011-09-28）一、面臨的挑戰(zhàn)2、特殊的醫(yī)藥環(huán)境輸液品濫用！中西藥并存！一、面臨的挑戰(zhàn)3、不斷有人死亡2006年78月發(fā)生了震驚全國的“欣弗事件”直接死亡11人；企業(yè)倒閉；至今余震不斷圖、“ 奪命的欣弗”隨后的“刺五加事件”。近年，無菌檢查陽性結(jié)果仍然在國評中頻頻出現(xiàn)，表明我國藥品微生物污染高風(fēng)險(xiǎn)形勢仍然嚴(yán)峻。一、面臨的挑戰(zhàn)3、不斷有人死亡2012年10月，美國新英格蘭合成制藥中心生產(chǎn)的注射用類固醇霉菌污染，造成數(shù)百人感染真菌腦炎，至年底統(tǒng)計(jì)死亡3

4、9人。一、面臨的挑戰(zhàn)4、監(jiān)管形勢的變化從某種意義上看，正是這些悲劇促使藥典標(biāo)準(zhǔn)和GMP規(guī)定的進(jìn)步。當(dāng)前，這些標(biāo)準(zhǔn)的進(jìn)步直接推動了我國藥品微生物監(jiān)管的轉(zhuǎn)型，也將促使微生物檢驗(yàn)工作發(fā)生更本性的轉(zhuǎn)變，從而迎來發(fā)展機(jī)遇。監(jiān)管前移：終產(chǎn)品檢查過程控制Http:/.cn2015-8-17細(xì)菌內(nèi)毒素與熱原 細(xì)菌內(nèi)毒素（Endotoxin），是G-菌細(xì)胞壁層上的結(jié)構(gòu)，主要成分為脂多糖（lipopolysaccharide, LPS） 由多糖O抗原、核心多糖和類脂A(lipid A)三部分組成。當(dāng)細(xì)菌死亡或自溶后便會釋放出內(nèi)毒素。 熱原（pyrogen），系指能引起恒溫動物體溫異常升高的致熱物質(zhì)。它包括細(xì)菌性熱

5、原、內(nèi)源性高分子熱原、內(nèi)源性低分子熱原及化學(xué)熱原等。主要是指細(xì)菌性熱原，是某些細(xì)菌的代謝產(chǎn)物、細(xì)菌尸體及內(nèi)毒素。致熱能力最強(qiáng)的是G-桿菌的產(chǎn)物，其次是G+桿菌類，革蘭陽性球菌則較弱，霉菌、酵母、甚至病毒也能產(chǎn)生熱原。過程控制與熱原！9一、面臨的挑戰(zhàn)中國GMP2010年版中國藥典2015版微生物檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)體系全面與國際標(biāo)準(zhǔn)接軌；為藥品微生物從終產(chǎn)品檢驗(yàn)向過程控制轉(zhuǎn)變服務(wù)。Http:/.cn2015-8-17中國藥典2015版微生物檢驗(yàn)1101 無菌檢查法1105 非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查法：微生物計(jì)數(shù)法1106 非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查法：控制菌檢查法1107 非無菌產(chǎn)品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)1121 抑

6、菌效力檢查法1421 滅菌法9201 藥品微生物檢驗(yàn)替代方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則9202 非無菌藥品微生物限度檢查指導(dǎo)原則9203 藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則9204 微生物鑒定指導(dǎo)原則9205 藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物監(jiān)測和控制指導(dǎo)原則9206 無菌檢查用隔離系統(tǒng)驗(yàn)證指導(dǎo)原則Http:/www.nifdc.or2015-8-17一、面臨的挑戰(zhàn)5、對藥品微生物問題的再認(rèn)識USP/EP/JP/ChP2015 中國藥典2010及之前版本藥典分類依據(jù) 按營養(yǎng)條件分質(zhì)控分類 需氣、厭氣菌按微生物類別分細(xì)菌、真菌檢驗(yàn)體系 直接與培養(yǎng)條件對應(yīng) 選擇培養(yǎng)，或者人為區(qū)分評價(jià) 簡便、嚴(yán)謹(jǐn) 容易造成漏檢中外藥典微生物檢

7、查的系統(tǒng)性差異Http:/.cn2015-8-17中外藥典微生物檢查的系統(tǒng)性差異基于培養(yǎng)觀察的藥典微生物檢查技術(shù)只能區(qū)分到營養(yǎng)條件的生長水平，難以通過培養(yǎng)觀察區(qū)分細(xì)胞結(jié)構(gòu)。13 微生物（Microorganism）微生物高等低等酵母菌絲狀真菌 植物朊病毒類病毒 病毒 支原體 細(xì)菌 古細(xì)菌 原生動物 動物無細(xì)胞結(jié)構(gòu)原核細(xì)胞真核細(xì)胞14 微生物（Microorganism）（1）、微生物的大小關(guān)于人眼觀察極限關(guān)于顯微鏡關(guān)于濾膜孔徑關(guān)于0.45m和0.22 m對藥品微生物問題的再認(rèn)識 微生物（Microorganism）（2）、微生物的生命周期（菌種的保藏與傳代）（3）、微生物的生長條件（培養(yǎng)、消毒

8、、滅菌）（4）、微生物的特征（鑒定分析）（5）、微生物的分布（無菌操作、溯源調(diào)查）對藥品微生物問題的再認(rèn)識 藥品微生物（Pharmaceutical Microbiology）（1）、藥品環(huán)境對微生物的影響（2）、消毒與滅菌（3）、無菌保障技術(shù)（4）、微生物監(jiān)控（5）、微生物檢驗(yàn) 藥品微生物（Pharmaceutical Microbiology）藥品微生物檢驗(yàn)的特殊性休眠體亞致死受傷死亡活躍1818對藥品微生物問題的再認(rèn)識藥品微生物檢查特點(diǎn) 藥品因素 抽樣檢查 環(huán)境控制 操作影響 破壞試驗(yàn) 培養(yǎng)觀察 OOS調(diào)查方法驗(yàn)證過程控制一次性結(jié)論結(jié)果判斷藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)ChPUSPEPJP【性狀】【鑒別】

9、【檢查】【含量測定】微生物實(shí)驗(yàn)室技術(shù)能力藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)什么時候我們可以正常運(yùn)用“另有規(guī)定”？我們怎樣去落實(shí)原則性規(guī)定？原輔料及中間體的限度標(biāo)準(zhǔn)放行標(biāo)準(zhǔn)和警戒標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)環(huán)境ABCD我們怎樣認(rèn)識無菌檢查的意義？無菌檢查的意義 無菌是根據(jù)概率的原則判斷的。從給定批號的所有產(chǎn)品中存在被污染產(chǎn)品的概率得出判斷 無菌測試本身并不是設(shè)計(jì)用于保證產(chǎn)品無菌或產(chǎn)品已滅菌。產(chǎn)品的無菌保證是通過滅菌工藝或無菌工藝的驗(yàn)證來得到的。 無菌測試適用于藥典要求無菌的藥物或制劑。然而，合格結(jié)果僅說明在測試條件下受檢的樣品中未發(fā)現(xiàn)微生物污染。無菌檢查有什么意義？Http:/.cn2015-8-17無菌檢查的意義 Sterility

10、can be defined as the freedom from the presence of viable microorganisms. However, theconditions that guarantee absolute sterility are usually too harsh for active ingredients, and the definitionof sterility for a medicinal product must be defined in functional terms. In pharmaceutical practice, a c

11、ontainer is defined as sterile when the probability is less than one out ofone million that it is contaminated with replicating microorganisms. Because it is not possible to openand test each container of a biological medicinal product, a number of samples, representative of the lotbeing tested and

12、taken at different times during the filling operation, must be used to monitor sterility.This implies that when only a few non-sterile containers exist in a very large set of homogeneouscontainers the probability of detecting a non-sterile container is relatively low. For this reason sterilitytestin

13、g uses methods with broad sensitivity, normally incubation of samples in growth media promotinggrowth across a wide range of microorganisms where replication can be detected visually. Sterility also relies on procedural measures that effectively prevent contamination of biological materials,such as

14、clean room technology and other Good Manufacturing Practices. Tests for viral contaminants,which are normally specified in individual product requirements, are more complex and costly. TheWHO sterility testing guidelines are applicable across a wide range of biological medicinal productsincluding va

15、ccines, blood products, biotechnology products, and cell and tissueproducts.ttp:/biologicals/vaccines/sterility_testing/en/23無菌檢查的意義盡管基于抽樣概率的限制，通過無菌檢查發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品微生物污染的可能性極低，遠(yuǎn)期必然是通過加強(qiáng)中間參數(shù)的過程控制最大程度地降低終產(chǎn)品染菌風(fēng)險(xiǎn)，但無菌檢查有如下幾點(diǎn)現(xiàn)實(shí)意義： 產(chǎn)品上市前發(fā)現(xiàn)重大污染事件的最后一道關(guān)口； 通過無菌檢查的執(zhí)行情況可以管窺其無菌控制存在的問題；一、面臨的挑戰(zhàn)6、藥品微生物實(shí)驗(yàn)室能力建設(shè)標(biāo)準(zhǔn)的方法+限度標(biāo)準(zhǔn)（合理的結(jié)果

16、解釋）+實(shí)驗(yàn)室能力對標(biāo)準(zhǔn)的正確理解應(yīng)用實(shí)驗(yàn)室技術(shù)保障25如何選擇微生物分析鑒定技術(shù)方法？表觀水平 生化水平 分子水平 菌株采集 菌株純化微生物鑒定應(yīng)遵循逐步縮小范圍的原則依據(jù)分類學(xué)知識，將微生物逐步落實(shí)到科、屬、種 菌落形態(tài)觀察 細(xì)胞形態(tài)觀察 革蘭染色 是否鞭毛動力如何選擇微生物分析鑒定技術(shù)方法？(proteins)amid IC-O- Stretch(carbohydrates)amid IICH-Stretch(lipids)wavenumbers cm-1傅里葉變換紅外相似性分析實(shí)現(xiàn)手段化學(xué)計(jì)量學(xué)方法 光譜差異1 光譜數(shù)據(jù)的預(yù)處理(光譜差異放大)光譜的濾過&矢量歸一化2 譜段的選擇微生物

17、學(xué)差異3 模式識別（深入的評價(jià)和比較光譜的相似性和差異 ）聚類分析：無監(jiān)督型。尋找數(shù)據(jù)內(nèi)部相關(guān)性。鑒別分析：有監(jiān)督型。光譜距離表征相似性。Http:/www.nifdc.or2015-8-17傅里葉變換紅外相似性分析2）陽性結(jié)果調(diào)查FTIR圖譜測定外環(huán)境菌譜庫不相似監(jiān)控菌株進(jìn)一步比較相似不相似藥品污染內(nèi)環(huán)境菌譜庫操作失誤FTIR圖譜測定污染菌株實(shí)驗(yàn)環(huán)境污染相似重試Http:/www.nifdc.or2015-8-17一、面臨的挑戰(zhàn)7、基于過程控制的標(biāo)準(zhǔn)研究和建設(shè)2015版滅菌法未作修訂（2010年版附錄二部XVII）無菌保障、滅菌法、生物指示劑？熱不穩(wěn)定性物品的 值一般不低于8？不受輻射破壞的

18、原料藥及成品等均可采用輻射滅菌？過度殺滅產(chǎn)品滅菌驗(yàn)證一般不考慮微生物污染水平？Http:/www.nifdc.or2015-8-17一、面臨的挑戰(zhàn)7、基于過程控制的標(biāo)準(zhǔn)研究和建設(shè)生物指示劑(USP)在滅菌工藝中，以物理參數(shù)表征的物理殺滅力（ Physical）必須以生物指示劑測定的生物殺滅力（ Biological）加以驗(yàn)證，證明Physical和 Biological大體一致，才能最終確立日常應(yīng)用的滅菌參數(shù)。Http:/www.nifdc.or2015-8-17生物指示劑孢子計(jì)數(shù)、D值測定、指導(dǎo)原則草案32一、面臨的挑戰(zhàn)7、基于過程控制的標(biāo)準(zhǔn)研究和建設(shè)源頭控制+GMP 參數(shù)釋放（USP）對中

19、藥飲片的微生物研究水活度用于原輔料的參數(shù)釋放2015-8-17一、面臨的挑戰(zhàn)2015年版中國藥典微生物檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)體系將推動藥品微生物實(shí)驗(yàn)室從一個簡單的終產(chǎn)品檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室向微生物調(diào)查分析型實(shí)驗(yàn)室方向發(fā)展。Http:/.cn2015-8-17二、規(guī)劃建設(shè) 基本任務(wù)及特點(diǎn)？ 需要什么實(shí)驗(yàn)室？ 如何建設(shè)實(shí)驗(yàn)室？35基本任務(wù)及特點(diǎn)藥品微生物實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常遇到的問題： 是不是微生物？ 是什么微生物？ 微生物來自哪里？ 對產(chǎn)品有何影響？BackgroundThe WHO Expert Committee on Specifi cations for Pharmaceutical Preparationsadopte

20、d in 2009 a revised version of the Good practices for pharmaceuticalquality control laboratories (1).During the inspections carried out when prequalifying laboratories, the inspectors hadnoticed that some of the texts of these guidelines might benefit from additionalguidance, with a special focus on

21、 microbiology.36基本任務(wù)及特點(diǎn)藥品微生物檢驗(yàn)特點(diǎn)： 藥品因素方法驗(yàn)證 抽樣檢查 環(huán)境控制 操作影響 破壞試驗(yàn) 培養(yǎng)觀察 OOS調(diào)查過程控制結(jié)果判斷一次性結(jié)論P(yáng)harmaceuticalmicrobiology laboratoriesmay be involved in: sterility testing;需要什么實(shí)驗(yàn)室 detection, isolation,enumeration and identification of microorganisms(bacteria, yeast and moulds)and testing for bacterialendotox

22、ins indifferent materials (e.g.starting materials, water),products, surfaces,garments and theenvironment; and assay usingmicroorganisms as part ofthe test system.A+B隔離器應(yīng)該無菌（以嚴(yán)格保護(hù)樣品為中心）無菌檢查微生物限度檢查（水、環(huán)境、中間體 ）DAIIBSLII可能有菌（保護(hù)人和樣品）以微生物為實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的一部分生化分子理化（陽性對照、方法驗(yàn)證、結(jié)果判斷、溯源調(diào)查、抑菌效力、抗生素效價(jià)、藥敏藥效、工藝驗(yàn)證 ）肯定有菌（保護(hù)人和樣品

23、）儲藏配制洗消培養(yǎng)準(zhǔn)備緩沖功能輔助實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備人員辦公辦公需要什么實(shí)驗(yàn)室WHO good practices for pharmaceutical microbiology laboratories（WHO Technical Report Series, No. 961, 2011，Annex 2）39需要什么實(shí)驗(yàn)室 中國藥典2010年版整體萬級（C）下局部百級（A） 中國藥典2015年版方案：無菌檢查B級背景下的A級或采用隔離器微生物限度不低于受控環(huán)境下的B級關(guān)于“潔凈”和“生物安全”關(guān)于“GMP”與“GLP”關(guān)于“潔凈”和“生物安全”工業(yè)化生產(chǎn)（潔凈）生物因（生物全）藥品微生物實(shí)驗(yàn)室保證產(chǎn)品

24、安全保證人和環(huán)境安全工業(yè)化產(chǎn)品評微生物性樣本關(guān)于無菌檢查用隔離器系統(tǒng)關(guān)于無菌檢查用隔離器系統(tǒng)關(guān)于無菌檢查用隔離器系統(tǒng)Comparison between Clean Room and Isolator: An Isolator would require a slightly lower investment, but it has a more complexmaintenance and servicing. An Isolator would hardly require any changes in the current facilities; An Isolators guaran

25、tees a higher sterility assurance level, reducing the risk of false positives An Isolator requires a less demanding gowning procedure A Clean room would require a higher initial investment, but it could be servicedby a company supplying HAVC systems A Clean Room would require a more time and cost in

26、tensive training of staff A Clean Room would be more flexible A Cleanroom has higher running and operating costsDuring this session, the requirements for Clean Room Design and the procedures that need to be followed,were debated, including the need for a layouts for a Class B clean room, comprising

27、a Class A LAF,the Airlocks for Staff, samples, reagents. The General Requirements for Sterilization, Cleaning andDisinfection and Gowningwere also discussed with the staff, including hands-on training需要什么實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室布局應(yīng)該有利于實(shí)驗(yàn)室運(yùn)作防止交叉污染合理分區(qū)布局樣品、人員、環(huán)境安全滿足各項(xiàng)任務(wù)需求并留有發(fā)展空間高效、經(jīng)濟(jì)、環(huán)保藥品微生物實(shí)驗(yàn)室系統(tǒng)！如何建設(shè)實(shí)驗(yàn)室Premises2.1.1 M

28、icrobiology laboratories and certain support equipment (e.g.autoclaves and glassware) should be dedicated and separated fromother areas, especially from production areas.2.4.10 The fittings and finishes of the premises should comply withsection 11 of WHO GMP for sterile pharmaceutical products (8).W

29、HO good practices for pharmaceutical microbiology laboratories（WHO Technical Report Series, No. 961, 2011，Annex 2）如何建設(shè)實(shí)驗(yàn)室遵從工作任務(wù)及工作流程的工藝設(shè)計(jì)如何參與？切實(shí)可行的工程設(shè)計(jì)真實(shí)可靠的施工建造正確合理的設(shè)備選擇、安裝、驗(yàn)證細(xì)致入微的軟件管理及操作培訓(xùn)正確的運(yùn)行維護(hù)、監(jiān)控及技術(shù)支持必要常備的消耗品二、規(guī)劃建設(shè)藥品微生物實(shí)驗(yàn)室的生物安全是近年接受認(rèn)證檢查頻繁提到的一個問題。根本原因是近年強(qiáng)調(diào)方法驗(yàn)證、溯源調(diào)查、微生物分析等，藥品微生物實(shí)驗(yàn)室開始涉及大量的菌株、陽性培養(yǎng)物等

30、，應(yīng)該適當(dāng)引入生物安全概況，以便于實(shí)驗(yàn)室管理。根據(jù)藥品微生物實(shí)驗(yàn)室實(shí)際工作內(nèi)容，定位為二級生物水平比較恰當(dāng)。生物安全 生物安全（Biological Safety）微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則（WS233-2002）生物安全實(shí)驗(yàn)室通用要求（GB19489-2008）檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物檢測領(lǐng)域的應(yīng)用說明(CNAS-CL09:2013)表、2014年藥檢系統(tǒng)BSL-2級生物安全實(shí)驗(yàn)室調(diào)查總數(shù) 正壓 負(fù)壓 進(jìn)口 國產(chǎn) 未報(bào)品牌調(diào)查實(shí)驗(yàn)室設(shè)置通風(fēng)凈化系統(tǒng) 291 220 71高壓滅菌器 370二級生物安全柜 346339113 207 26生物安全50生物安全生物安全 藥品

31、微生物實(shí)驗(yàn)室常見微生物的生物安全等級及活動要求病原菌名稱實(shí)驗(yàn)活動所需生物安全實(shí)驗(yàn)室級別運(yùn)輸包裝分類e危害程度分類大 量 活 菌 動 物 感 染 樣 本 檢 非 感 染 性 材 料學(xué)名中文名A/BUN編號操作aBSL-2實(shí)驗(yàn)bABSL-2測c的實(shí)驗(yàn)dBSL-1Pathogenic Escherichia coli,Enterobacter aerogenes / cloacaeClostridium tetani致病性大腸埃希菌產(chǎn)氣腸桿菌 / 陰溝腸桿菌破傷風(fēng)梭菌第三類第三類第三類第三類第三類第三類第三類第三類第三類第三類第三類第三類第三類第三類第三類第四類第四類第四類第四類BSL-2BSL-2

32、BSL-2BSL-2BSL-2BSL-2BSL-2BSL-2BSL-2BSL-2BSL-2BSL-2BSL-2BSL-2BSL-2BSL-2BSL-2BSL-2BSL-2BBBBBBBBBBBBBBBBBBBUN 2814UN 3373UN 3373UN 3373UN 3373UN 3373UN 3373UN 3373UN 3373UN 3373UN 3373UN 3373UN 3373UN 3373UN 3373UN 3373UN 3373UN 3373UN 3373BSL-2BSL-2BSL-2BSL-2BSL-2BSL-2BSL-2BSL-2BSL-2BSL-2BSL-2BSL-2BSL

33、-2BSL-2BSL-2BSL-2BSL-2BSL-2ABSL-2ABSL-2ABSL-2ABSL-2ABSL-2ABSL-2ABSL-2ABSL-2ABSL-2ABSL-2ABSL-2ABSL-2ABSL-2ABSL-2ABSL-2ABSL-2ABSL-2ABSL-2BSL-1BSL-1BSL-1BSL-1BSL-1BSL-1BSL-1BSL-1BSL-1BSL-1BSL-1BSL-1BSL-1BSL-1BSL-1BSL-1BSL-1BSL-1Bacillus cereus蠟樣芽胞桿菌Pseudomonas aeruginosaSalmonella paratyphi A,B,CSalmon

34、ella typhi銅綠假單胞菌甲、乙、丙型副傷寒沙門菌傷寒沙門菌Serratia marcescensShigella spp粘質(zhì)沙雷菌志賀菌屬Staphylococcus aureusStaphylococcus epidermidisKlebsiella pnenmoniaeLegionella pneumophilaListeria ivanovii金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌肺炎克雷伯菌嗜肺軍團(tuán)菌伊氏李斯特菌Listeria monocytogenesBacillus subtilis單增李斯特菌枯草芽孢CMCC（B）63501生孢梭CMCC（B）64941白色念珠CMCC（F）980

35、01黑曲霉CMCC（F）98003Clostridium sporogenesCandida albicansAspergillus niger生物安全（1）中檢院工菌生物全（2）（3）符合的二、規(guī)劃建設(shè)（中檢院藥品微生物實(shí)驗(yàn)室系統(tǒng)現(xiàn)狀）二、規(guī)劃建設(shè)（中檢院藥品微生物實(shí)驗(yàn)室系統(tǒng)現(xiàn)狀）中檢院過度時期為滿足2015年版要求規(guī)劃的隔離器實(shí)驗(yàn)室。 2015-8-17NIFDC新址微生物實(shí)驗(yàn)室方案，依據(jù)中國藥典2010年版，不能滿足WHOGPCL中無菌檢查A+B的要求，所以決定微生物實(shí)驗(yàn)室暫不搬遷，留待2期工程重新規(guī)劃。實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)示例（優(yōu)化前）2015-8-17實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)示例（優(yōu)化后）三、質(zhì)量管理中國藥

36、典2010年版：藥品微生物實(shí)驗(yàn)室指導(dǎo)原則（8要素）USP1117:good practices for pharmaceutical microbiology laboratoriesWHO good practices for pharmaceutical microbiology laboratories（WHO Technical Report Series, No. 961, 2011，Annex 2）（12要素）中國藥典2015年版：藥品微生物實(shí)驗(yàn)室指導(dǎo)原則（13要素）CNAS-CL09：2013實(shí)驗(yàn)認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說明（16要素/6個關(guān)鍵點(diǎn)）9203、藥品微生物實(shí)驗(yàn)室

37、質(zhì)量管理指導(dǎo)原則9203（13條）WHO（12條）1 人員Personnel2 培養(yǎng)基3 試劑Reagents and culture mediaReagents and culture mediaReference materials and reference culturesEnvironment4 菌種5 環(huán)境6 設(shè)備Equipment7 樣品Sampling，Sample handling and identificationValidation of test methods，Disposal of contaminated waste8 檢驗(yàn)方法9 污染廢棄物處理10 質(zhì)量（結(jié)果

38、和檢驗(yàn)） Quality assurance of results and performance，Testing procedures11 實(shí)驗(yàn)記錄12 結(jié)果判斷和報(bào)告Test reports/13 文件2015-8-17619203、藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則 1、人員：專業(yè)、培訓(xùn) 2、培養(yǎng)基：制備、貯藏、質(zhì)量控制 3、試劑：接收、檢查、標(biāo)示 4、菌種管理（進(jìn)出、收集、貯藏、確認(rèn)、銷毀） 5、環(huán)境監(jiān)測（9205）和清潔消毒（指導(dǎo)原則？） 無菌-B級背景下A級單向流潔凈區(qū)域/無菌-隔離器 限度-不低于D級背景下的B級單向空氣流 6、設(shè)備：維護(hù)、校驗(yàn) 培養(yǎng)箱、天平和砝碼（校準(zhǔn)）、槍/吸管

39、（檢定） 生物安全柜、超凈臺、HEPA、622015-8-179203、藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則 7、樣品：采樣、運(yùn)輸、確認(rèn)及樣品識別 8、檢驗(yàn)方法：方法驗(yàn)證、方法適用性 9、污染廢棄物處理：生物安全管理對接GMP質(zhì)量管理過程控制OOS調(diào)查 10、質(zhì)量-結(jié)果準(zhǔn)確性 檢測結(jié)果-質(zhì)量保證 檢測過程-質(zhì)量控制 能力驗(yàn)證 11、實(shí)驗(yàn)記錄：who when what how 12、結(jié)果判斷及檢測報(bào)告：偏差調(diào)查（無菌陽性、限度超標(biāo)） 13、文件（Document）依法檢驗(yàn)（藥典） 法的范疇：上述12個要素的文件規(guī)程及相關(guān)記錄。632015-8-17二、質(zhì)量管理1. Validation of te

40、st methods方法驗(yàn)證與方法適用性； 新建方法方法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)方案；方法轉(zhuǎn)移與方法確認(rèn)； 藥典方法（其他成熟方法）的首次使用類似方法+陽性對照（ 部分菌株的驗(yàn)證）有案可查、溯源性！建立實(shí)驗(yàn)室自身的方法依據(jù)體系！Http:/www.nifdc.or2015-8-17方法驗(yàn)證需前處理驗(yàn)證前處理方法對污染菌生長、檢出的影響。樣品有抑菌作用 去除抑菌作用驗(yàn)證抑菌活性去除的有效性，以及去除方法對污染菌生長、檢出的影響?？梢酝ㄟ^驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)判斷不需前處理無抑菌作用檢查圖1 藥品微生物檢查方法驗(yàn)證的一般程序與環(huán)節(jié)652015-8-1765方法驗(yàn)證案例1圖中分別為陽性對照、347號加替沙星樣品經(jīng)300ml和50

41、0ml沖洗接種枯草桿菌35培養(yǎng)2天方法驗(yàn)證案例2根標(biāo)準(zhǔn)為菌不得過1藥檢菌結(jié)12中檢院。方法適用性平皿法（1：10供試液） 1ml/皿0.5ml/皿9100.2ml/皿1380計(jì)數(shù)結(jié)果（cfu/g）650合格不合格Http:/www.nifdc.or2015-8-17方法驗(yàn)證案例3驗(yàn)證的方法應(yīng)格標(biāo)準(zhǔn)判斷的：環(huán)吡酮胺陰道軟膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)微生物限度 照“2.6.12非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法” （歐洲藥典7.0版），取本品10g，加D/E中和肉湯稀釋至100ml，混勻，作為1:10供試液。需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)檢查，分別取1:10供試液1ml，等量分注2個平皿（12cm）中，每皿0.5

42、ml，需氧菌總數(shù)不得過102 CFU/g，霉菌和酵母菌總數(shù)不得過101 CFU/g。 分為行的11；252生物測定一2以25三、質(zhì)量管理2. Equipment維護(hù)、計(jì)量、校準(zhǔn)、性能確認(rèn)和使用監(jiān)控（溫度測量裝置、培養(yǎng)箱、水浴箱、烘箱、壓力滅菌器、天平、量器等等）Appendix2：Examples of maintenance of equipmentAppendix3：Examples of calibration checks and intervalsfor different laboratory equipmentAppendix4：Examples of equipment qua

43、lification and monitoringHttp:/www.nifdc.or2015-8-17Appendix2：Examples ofmaintenance of equipmentAppendix3：Examples ofcalibration checks andintervals for differentlaboratory equipmentAppendix4：Examples ofequipmentqualification andmonitoring三、質(zhì)量管理3. Reagents and culture media供應(yīng)商評估與現(xiàn)場審計(jì)水（純化水問題）配制（天平）滅

44、菌（壓力鍋，驗(yàn)證）標(biāo)記傳遞、保存與使用適用性試驗(yàn)（How?What?When?）原始記錄信息Http:/www.nifdc.or2015-8-173. Reagents and culture mediaPaper labels are preferredover marker pens.tp:/wcn3. Reagents and culture media用正確的、有格質(zhì)量保障的產(chǎn)品無菌級雙消毒劑無菌級手套生物指示劑Http:/www.nifdc.or3. Reagents and culture media 培養(yǎng)基（ Culture Media）上世紀(jì)8090年代中檢所配合藥典的收載逐漸

45、完成了干粉培養(yǎng)基的研制及配方確定，奠定了我國藥品微生物檢驗(yàn)用干粉培養(yǎng)基基礎(chǔ)。藥典微生物檢查方法：經(jīng)典方法、培養(yǎng)觀察！基實(shí)驗(yàn)室制用、制基 培養(yǎng)基（ Culture Media）如何控制檢驗(yàn)系統(tǒng)質(zhì)量？中國藥21215基用性檢查77對照培養(yǎng)基與對照菌株不同培養(yǎng)基質(zhì)控思路 對照培養(yǎng)基培養(yǎng)基適用性實(shí)驗(yàn)中國藥典，ICH（USP/EP/JP） 對照菌株GB/T4789.282014食品微生物學(xué)檢驗(yàn)培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求（2014年6月1日強(qiáng)制執(zhí)行？）78基用性檢查USP38：Microbiological Examination of Nonsterile Products: MicrobialEnumeration Tests：Growth Pormotion of the Media Microbiologi