p16基因在K562A02細胞株表達情況的研究

1、16基因在K562/A02細胞株表達環(huán)境的研究壽倍明，陳寶安，周冬蕊，劉德龍，丁家華，高沖，孫耘玉王駿，程堅，趙剛，宋慧慧，鮑文，陸祖宏【摘要】目的：研究p16基因在K562/A02細胞株的表達環(huán)境及其與耐藥的干系。要領：用PR法對慢性髓系白血病細胞株K562及其耐藥細胞株K562/A02舉行p16基因缺失檢測。結果：K562及K562/A02細胞株經(jīng)PR擴增后，均未擴出相應條帶。結論：K562/A02細胞株與K562細胞株一樣，均表示為p16基因缺失?！娟P鍵詞】p16基因；K562細胞株；K562/A02細胞株；表達；缺失腫瘤的產(chǎn)生、生長是一個多步調的歷程，此中抑癌基因的失活飾演了緊張腳色。

2、抑癌基因的失活可以通過多種途徑，如缺失、突變、啟動子地區(qū)的非常甲基化等。p16基因是1994年由Kab等1創(chuàng)造的多種腫瘤按捺基因ultipletursuppressrgene，TS1，在細胞增殖周期調控中發(fā)揮緊張的作用。p16的失活與多種血液體系惡性疾病有著嚴密的干系，失活的重要方法包羅基因缺失、點突變、甲基化、基因重排等。Quesnel等2報道了p16基因在K562細胞株中是缺失的，而p16基因在K562的耐藥細胞株K562/A02中的表達環(huán)境如今尚未見報道。本試驗擬研究p16基因在K562/A02細胞株的表達環(huán)境及其與耐藥的干系。1質料與要領1.1細胞造就K562細胞株購自上海細胞生物研究

3、所，用RPI1640造就基Gib公司產(chǎn)物加10胎牛血清(杭州四序青公司產(chǎn)物)，置于37、52、飽和濕度的造就箱中造就，48h傳代1次，造就中的細胞均保持在(0.10.5)106l-1的密度。K562A02細胞株系K562細胞株經(jīng)阿霉素(AD)漸漸誘導形成，由中國醫(yī)學科學院血液學研究所提供，造就及傳代歷程同K562細胞株。1.2要領2結果如圖1，從左往右14依次為比較組正凡人外周血DNA、arker、K562細胞株DNA、K562/A02細胞株DNA。表現(xiàn)比較組可擴出內參條帶664bp及p16基因條帶320bp，K562細胞株和K562/A02細胞株均擴出內參條帶而無p16基因條帶，證明K562

4、與K562/A02細胞株均為p16基因表達缺失。3討論p16基因位于人染色體9P21區(qū)，全長8.5kb，編碼1個含156個氨基酸殘基、相對分子質量為15800的卵白產(chǎn)物，即P16卵白，它是細胞周期依靠性激酶(DK)的按捺卵白。正常環(huán)境下P16卵白與細胞周期卵白DylinD競爭結合DK4、DK6，按捺兩者的活化，未活化的DK4、DK6不克不及排除視網(wǎng)膜母細胞瘤卵白(pRB)對轉錄因子的按捺，從而制止細胞從G1期進入S期，按捺DNA的合成和細胞增殖。當P16卵白喪失時，ylinD和DK4、DK6結合就會增多，使腫瘤細胞躲避負性調控，成為惡性生長的緊張環(huán)節(jié)3。p16抑癌基因是細胞周期調治RB途徑中緊

5、張的身分，也是該途徑受到損害時最易產(chǎn)生遺傳學改變的基因之一。在血液體系腫瘤中，p16基因重要在淋巴體系腫瘤中產(chǎn)生改變，在急性淋巴細胞白血病(ALL)特殊是兒童ALL中p16基因的缺失可達2675，在急性髓系白血病AL中缺失率很低，在慢性髓細胞白血病原始細胞危象期特殊是原始淋巴細胞危象期時缺失率可達354。如今血液體系惡性疾病的治療以化療為主，但是原發(fā)性或得到性耐藥仍舊是影響化療結果的緊張因素。比年來越來越多的證據(jù)證明,腫瘤的耐藥不但與腫瘤基因的擴增、易位、缺失、突變有關，并且與表不雅遺傳學改變也有著嚴密的干系。表不雅遺傳學最常見的改變就是啟動子地區(qū)的pG島甲基化狀態(tài)的改變，許多抑癌基因啟動子的

6、非常甲基化所致的基因沉默沉靜亦可以導致耐藥的產(chǎn)生。別的一些促進藥物外排基因的甲基化非常也可以誘導產(chǎn)生耐藥。多藥耐藥ultidrugresistane,DR是化療失敗的重要緣故原由之一，7號染色體上DR1編碼的P-糖卵白表達加強是DR的重要機制之一。DR1基因啟動子地區(qū)因富含胞嘧啶和鳥嘌呤G，故按照Gardiner-Garden的界說屬于pG島。1997年Kusaba等5領先提出甲基化大概是調控DR1基因表達的開關，他們將攜帶有人DR1基因的酵母人工染色體轉染至小鼠細胞中，用長春新堿誘導成耐藥株，與敏感株比力，耐藥株的DR1基因選擇性表達增高，同時該基因的5端出現(xiàn)低甲基化狀態(tài)，推測用化療藥物后D

7、R1基因編碼的P-糖卵白表達增高大概與該基因的5啟動子區(qū)或別的地區(qū)的去甲基化狀態(tài)有關。一些藥物轉運相干基因啟動子的甲基化可以攔阻化療藥物在腫瘤細胞中聚攏，從而低落腫瘤細胞中的藥物濃度。如編碼復原型葉酸轉運體基因啟動子的甲基化可以攔阻乳腺癌細胞對氨甲喋呤(TX)的聚攏6。Nakayaa等7對AL的DR1基因甲基化舉行研究，創(chuàng)造DR1基因表達和啟動子5末了甲基化狀態(tài)間存在負相干。朱燕等8創(chuàng)造ALL及多發(fā)性骨髓瘤患者骨髓DR1基因表達程度與基因轉錄起始點上游-110和150處兩個GG位點的甲基化程度呈負相干。Lu等9在對206名卵巢癌患者DR1表達的研究中創(chuàng)造，DR1的表達與p16有著嚴密的干系。有

8、文獻表白，p53基因突變后腫瘤細胞凋亡受阻，導致對化療藥物敏感性減低10。本試驗接納PR法檢測到K562阿霉素耐藥株K562/A02的p16基因表達缺失，同時檢測了K562細胞株p16基因表達環(huán)境，證明了其p16基因也表達缺失，與文獻報道11同等。K562和K562/A02細胞株p16基因缺失是否與其過分甲基化有關，與耐藥又是否存在關聯(lián)，值得進一步試驗和探究?！緟⒖嘉墨I】1KABA,GRUISNA，EAVER-FELDHAUSJ，etal.AellyleregulatrptentiallyinvlvedingenesisfanyturtypesJ.Siene，1994,264(5157):43

9、6-440.2QUESNELB，PREUDHE，HETUIND，etal.TransferfP16inka/DKN2geneinleukeielllinesinhibitsellprliferatinJ.BrJHaeatl，1996,95(2)：291-298.3BULTDJ,AINSATJS.GenesileningbyDNAethylatininhaeatlgialalignaniesJ.BrJHaeatl，2022,138(1):3-11.4芮紅兵，蘇津自，卓光生，等.抑癌基因p16INK4a與p53按捺白血病細胞株生長作用的比力J.白血菠淋巴瘤，2022,2(16):15-18.5KU

10、SABAH，NAKAYA，HARADAT，etal.aintenanefhypethylatinstatusandpreferentialexpressinfexgenushuanDRIPGY1geneinuseLellsbyYAediatedtransferJ.SatelllGenett，1997，23(4)：259-263.6RJ,KIRKINAF,DZHANDZHUGAZYANKN,etal.ethylatin-dependentsileningfthereduedflatearriergeneininherentlyethtrexate-resistanthuanbreastanere

11、llsJ.JBilhe，2001,276(43):39990-40000.7NAKAYAA,ADA,HARADAT,etal.HypethylatinstatusfpGsitesattheprterreginandverexpressinfthehuanDR1geneinauteyelidleukeiasJ.Bld，1998,92(11):4296-4307.8朱燕，武淑蘭，卜定方，等.惡性血液病患者drl啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)及其與表達的干系J.中國實行血液學雜志，2022,12(1)：6-10.9LUL,KATSARSD,ILEYA，etal.ExpressinfDR1inepithelialvariananeranditsassiatinithdiseaseprgressinJ.nlRes，2022,16(8):395-403.10RUSHV，KLISTRAD，VEKATRAANE，etal.Aberrantp53expressinpreditsl