運脾中藥復(fù)方制劑降低厭食大鼠下丘腦腹內(nèi)側(cè)區(qū)神經(jīng)元的興奮性

1、運脾中藥復(fù)方制劑降低厭食大鼠下丘腦腹內(nèi)側(cè)區(qū)神經(jīng)元的興奮性運脾中藥復(fù)方制劑降低厭食大鼠下丘腦腹內(nèi)側(cè)區(qū)神經(jīng)元的興奮性【關(guān)鍵詞】運脾復(fù)方y(tǒng)unpipresriptinreduesexitabilityfvnneurnsinanrexirats【abstrat】ai:texplretherlefyunpi,atraditinalhinesepresriptin,inreduingthesensitivityfthevnneurnsttheperipheralafferentsignalinanrexiaratsethds:theanrexiratdelasestablishedbyfeedingrat

2、sithspeiallypreparedfragefr1eekflledbydailyintragastriadinistratinfliquidextratfyunpipresriptinfr3eeks.theextraellularrerdingfrratvnasthenndutedtharaterizetherespnsesfstiulatinggastrivagalnerveandintravenusinjetinfsulfatedhlystkinintapeptide(k8)inthentrl,delandyunpitreatedgrups.results:theduratinfth

3、evnneurnalexitatintthegastrivagalnervestiulatinindelgrupassignifiantlylngerthanthatinntrlgrup(p0.05)andthenuberfksensitiveneurnssignifiantlyinreasediththedereasefstiulatinintensityindelgrupparediththatinntrlgrup(p0.05).hever,thereasnsignifiantdiffereneintherespnsesfvnneurnstthestiulatinfgastrivagaln

4、erveandthekadinistratinbeteentheyunpitreatedgrupandthentrlgrup.nlusin:yunpipresriptinanreduethesensitivityfvnneurnstthenegativefeedbaksignalfrtheperipheryandiprvetheappetiteftheanrexiarats.【keyrds】yunpiplexpresriptin;anrexia;ventredialhypthalainuleus;stah;vagusnerve;hleystkinin【摘要】目的：證實運脾中藥復(fù)方兒寶顆粒降低厭

5、食大鼠下丘腦腹內(nèi)側(cè)核vn神經(jīng)元對外周傳入信號的敏感性.方法：用特制飼料喂養(yǎng)大鼠1k制備厭食模型，再用運脾復(fù)方灌胃治療3k，然后用細(xì)胞外記錄法，記錄大鼠vn神經(jīng)元的自發(fā)放電，觀察其對電刺激胃迷走神經(jīng)、靜脈注射八肽膽囊收縮素k8的反響，比擬對照組、模型組和治療組3組間的差異.結(jié)果：模型組大鼠vn神經(jīng)元對胃迷走神經(jīng)刺激的興奮性反響時程延長p0.05，刺激強度降低p0.05，這些迷走興奮的vn神經(jīng)元對靜脈注射k的敏感率也增加p0.05；而治療組大鼠vn對胃迷走神經(jīng)刺激和靜脈注射k的反響與正常組無顯著差異.結(jié)論：運脾復(fù)方兒寶顆?？梢越档蛌n神經(jīng)元對外周傳入的攝食負(fù)反響信號的敏感性，從而到達促進食欲的目的

6、.【關(guān)鍵詞】運脾復(fù)方；厭食；下丘腦腹內(nèi)側(cè)核；胃；迷走神經(jīng)；膽囊收縮素0引言近20年的臨床理論證實運脾復(fù)方兒寶顆粒治療嬰幼兒厭食有可靠療效1.其機制研究說明，該復(fù)方能在外周程度上調(diào)節(jié)與攝食控制相關(guān)的多種因素2，如促進胃腸道蠕動、增強消化酶的活性、促進小腸吸收功能、調(diào)節(jié)胃腸道激素程度等，而我們近年來的研究結(jié)果說明，兒寶顆粒還能在中樞程度上影響攝食行為的控制3-4.我們通過觀察厭食大鼠下丘腦腹內(nèi)側(cè)核神經(jīng)元ventredialhypthalainulear,vn對胃迷走神經(jīng)刺激和靜脈注射k的反響，進一步分析了運脾復(fù)方對vn神經(jīng)元興奮性的影響.1材料和方法1.1材料日齡3540d的sd大鼠45只，體質(zhì)量

7、6010g第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心提供，隨機分為對照組、模型組和治療組，每組15只.所有動物均單籠飼養(yǎng)，自由進食水.1.2方法說明模型制備成功.從實驗第8日開場，治療組大鼠用運脾復(fù)方兒寶顆粒浸膏第四軍醫(yī)大學(xué)科研藥廠提供，藥物組成蒼術(shù)、陳皮、山楂、白芍，每毫升含生藥1.5g灌胃，1次/d，劑量為37.6g/kg(為臨床2倍等效量)，同時給予對照組和模型組大鼠等容積生理鹽水灌胃，連續(xù)3k.1.3胃迷走神經(jīng)刺激和vn神經(jīng)元自發(fā)放電的記錄實驗第28日晚禁食，次日用細(xì)胞外記錄法觀察大鼠vn神經(jīng)元對刺激胃迷走神經(jīng)和靜脈注射k8的反響.手術(shù)步驟：經(jīng)大鼠腹腔注射烏拉坦0.8g/kg和氯醛糖65g/kg混合麻醉

8、劑，麻醉后施行頸外靜脈插管術(shù)，以備追加麻醉劑、注射k810g/kg，美國siga公司產(chǎn)品和生理鹽水.沿左肋弓切開腹腔，別離胃迷走神經(jīng)前干與后干，掛于鉤狀雙極刺激電極以備刺激.縫合腹腔，用電熱板維持動物體溫于(37.00.5).然后，將動物固定于腦立體定位儀上，施第4腦室腦脊液引流.根據(jù)paxins和astn鼠腦立體定位圖譜6，于vna-2.3-2.8,l0.51,h89上方開顱直徑約1.5.以負(fù)相矩形雙脈沖100500a,0.5s,100hz刺激胃迷走神經(jīng)干，用充以含10g/l滂胺天藍(lán)的0.5l/l醋酸鈉溶液的玻璃微電極直流阻抗510細(xì)胞外記錄vn神經(jīng)元單位放電.神經(jīng)元的放電信號經(jīng)放大器放大后

9、輸入窗口甄別器，觸發(fā)窗口甄別器輸出的標(biāo)準(zhǔn)矩形脈沖5v,1.0s，通過模/數(shù)轉(zhuǎn)換器輸入計算機進展實時數(shù)據(jù)分析.由計算機采集的神經(jīng)元放電信號自動生成刺激前后時間直方圖，分析細(xì)胞對刺激胃迷走神經(jīng)采樣間隔2s，每次采樣800點，重復(fù)采樣100次和靜脈注射k采樣間隔1s，每次采樣900點，采樣1次的反響.比擬刺激后反響時間段內(nèi)刺激后窗口神經(jīng)元的放電頻率與刺激前一樣時間段內(nèi)刺激前窗口神經(jīng)元的根底放電頻率，假如刺激后窗口內(nèi)的放電頻率降低到刺激前窗口內(nèi)根底放電頻率的30%以下，或增加到200%以上，那么認(rèn)為該細(xì)胞對刺激產(chǎn)生了抑制或興奮反響.1.4組織學(xué)定位每次實驗完畢時，用陰極電流20a,10in將玻璃微電極

10、內(nèi)的滂胺天藍(lán)染料微量滲析到電極尖端的記錄點，然后取腦固定.1k后用冰凍切片機制備80厚的腦切片，檢查記錄點位置圖1，凡實際記錄點偏離vn者，所獲數(shù)據(jù)棄之不用.sd大鼠前囟后2.56橫切面，上方箭頭指示電極尾部痕跡，下方箭頭指示電極記錄位置處于vn區(qū)域.比擬用2檢驗，p0.05認(rèn)為組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義.2結(jié)果2.13組大鼠日攝食量在實驗過程中28d，3組大鼠日平均攝食量變化趨勢不同p0.05；實驗第17日內(nèi)，模型組與治療組大鼠日平均攝食量較對照組下降快，說明造模成功.經(jīng)兒寶顆粒治療后，治療組日平均攝食量上升較快，模型組日平均攝食量上升較慢圖2.說明運脾復(fù)方兒寶顆粒有促進食欲的作用.2.23組大鼠

11、vn神經(jīng)元對刺激胃迷走神經(jīng)的反響3組大鼠共記錄328個vn神經(jīng)元，其中對照組106個，模型組110個，治療組112個.胃迷走神經(jīng)刺激引起的vn神經(jīng)元反響類型有興奮性和抑制性反響兩種，即抑制性反響圖3a和興奮性反響圖3b，但以興奮性反響為主.對照組、模型組和治療組的vn神經(jīng)元對刺激胃迷走神經(jīng)的反響性無顯著性差異p0.05，表1.3組大鼠抑制性反響的vn神經(jīng)元反響埋伏期、反響時程和刺激強度亦無顯著性差異表2.但是，模型組vn神經(jīng)元的興奮性反響時程明顯高于對照組p0.05和治療組(p0.05)，其所需的刺激強度卻顯著低于對照組(p0.05)和治療組(p0.05).這就使模型組大鼠vn神經(jīng)元興奮性反響

12、的反響時程顯著大于其抑制性反響的反響時程p0.05，前者所需刺激強度卻顯著小于后者p0.05.而在對照組和治療組，vn神經(jīng)元的反響埋伏期、反響時程和刺激強度在興奮性反響和抑制性反響之間無顯著性差異.表1vn神經(jīng)元對刺激胃迷走神經(jīng)的反響性略表2胃迷走神經(jīng)刺激引起的大鼠vn神經(jīng)元的反響特征略2.23組大鼠vn神經(jīng)元對靜脈注射k的反響我們對自發(fā)放電比擬穩(wěn)定的vn神經(jīng)元包括對胃迷走神經(jīng)刺激有反響和沒有反響的細(xì)胞做了k敏感性測試，假如被檢測細(xì)胞對靜脈注射k呈現(xiàn)出特異且顯著的興奮性反響，而對生理鹽水不出現(xiàn)反響，那么認(rèn)為該細(xì)胞為k敏感神經(jīng)元.在對胃迷走神經(jīng)刺激無反響的vn細(xì)胞中,各組間k敏感神經(jīng)元比例無顯著

13、性差異表3.而在對胃迷走神經(jīng)刺激有反響的vn神經(jīng)元中，模型組k敏感神經(jīng)元明顯高于對照組(p0.05)和治療組(p0.05).表33組大鼠vn神經(jīng)元的k敏感性測試個數(shù)(略)我們在7只大鼠上正常組2個，模型組2個，治療組3個發(fā)現(xiàn)切斷胃迷走神經(jīng)顯著衰減靜脈注射k引起的vn神經(jīng)元興奮性反響圖2d.2.4組織學(xué)經(jīng)組織學(xué)檢查，對胃迷走神經(jīng)刺激有反響的神經(jīng)元以及對靜脈注射k敏感的神經(jīng)元記錄位點散在分布于vn中.3討論運脾復(fù)方兒寶顆粒選用輕清之劑調(diào)和脾胃，既不用克削通導(dǎo)之藥，也不用呆補滋膩之品，關(guān)鍵在“調(diào)和，其促進食欲的作用機制應(yīng)是協(xié)調(diào)機體各系統(tǒng)間的功能平衡，而不僅僅是對外周或中樞個別因素的孤立影響.本研究著

14、眼于攝食中樞神經(jīng)元活動與外周攝食因素間的信息聯(lián)絡(luò)，觀察了厭食大鼠vn神經(jīng)元對胃迷走神經(jīng)刺激和血中k濃度這兩個重要的外周抑食因素的反響，從而討論運脾法促進食欲的整體作用機制.vn是攝食控制環(huán)路中的一個重要核團，因其顯著的抑食作用被稱為飽中樞7.胃腸道迷走神經(jīng)是外周攝食信息傳遞入腦的主要通路.胃迷走神經(jīng)傳入纖維可將攝食負(fù)反響信號傳入vn，vn再通過胃迷走神經(jīng)傳出纖維抑制胃腸運動，終止攝食行為8-9.本研究發(fā)現(xiàn)模型組大鼠vn神經(jīng)元興奮性反響的反響時程顯著大于對照組和治療組，而所需刺激強度卻顯著低于后兩者.這一結(jié)果說明模型組大鼠vn神經(jīng)元更容易被胃迷走神經(jīng)傳入信號所激活，提示其承受到的攝食負(fù)反響信號比

15、另外兩組強烈.這可能是模型組大鼠攝食量下降的主要原因，同時也提示運脾治療有效地減弱了模型大鼠vn神經(jīng)元對胃迷走神經(jīng)刺激的興奮性反響，使神經(jīng)元產(chǎn)生興奮性反響的閾值增高，反響時程縮短.k是一種生理性飽因子，在進食過程中由小腸內(nèi)分泌細(xì)胞釋放入血，其血濃度在開場進食后20in內(nèi)達頂峰，產(chǎn)生顯著的抑食作用8.本研究顯示靜脈注射k能激活部分vn神經(jīng)元，大部分k敏感神經(jīng)元也對胃迷走神經(jīng)刺激敏感，而切斷胃迷走神經(jīng)能顯著減弱k引起的vn神經(jīng)元反響.這一結(jié)果提示k血濃度升高產(chǎn)生的飽效應(yīng)大部分是由胃迷走神經(jīng)介導(dǎo)的.實驗結(jié)果顯示模型組大鼠對胃迷走神經(jīng)刺激敏感的vn神經(jīng)元中的k敏感細(xì)胞數(shù)明顯增多，提示厭食大鼠胃迷走神經(jīng)

16、介導(dǎo)的k飽信號較對照組和治療組強烈.雖然vn神經(jīng)元承受胃迷走神經(jīng)傳入信息后主要通過其興奮性反響發(fā)出飽信號，但本研究顯示仍有約20%vn神經(jīng)元對胃迷走神經(jīng)傳入信號表現(xiàn)出抑制性反響，這些抑制性反響的神經(jīng)元與興奮性反響神經(jīng)元的反響埋伏期、反響時程和刺激強度均無顯著性差異.我們推測，這一小部分抑制性反響的神經(jīng)元，可能對興奮性神經(jīng)元的活動起拮抗作用，以便vn能發(fā)出適度的飽信號，不致于過快和過分強烈地抑制進食.但在模型組，這種平衡嚴(yán)重失調(diào)：模型大鼠vn神經(jīng)元興奮性反響的時程顯著高于抑制性反響的時程，而刺激強度顯著低于后者.這一現(xiàn)象同樣提示厭食大鼠vn發(fā)出的飽信號比正常大鼠強烈，而運脾治療可能通過降低厭食大

17、鼠vn神經(jīng)元對胃迷走神經(jīng)刺激的興奮性反響，從而協(xié)調(diào)vn的整體活動，發(fā)出適度的飽信號.我們研究結(jié)果說明，運脾復(fù)方兒寶顆粒通過降低厭食大鼠vn神經(jīng)元對胃迷走神經(jīng)傳入信息的敏感性，抑制厭食大鼠胃迷走神經(jīng)傳入信息對外周k飽信號的介導(dǎo)，同時也協(xié)調(diào)了vn興奮性神經(jīng)元和抑制性神經(jīng)元的活動，這種直接針對機體自身調(diào)節(jié)規(guī)律的研究，可能更有利于提醒中醫(yī)藥療效的整體機制.【參考文獻】1汪受傳，尤汝娣，郁曉維，等.運脾方藥治療小兒厭食癥的臨床及實驗研究j.中西醫(yī)結(jié)合雜志,1991,11(2):75-78.2萬力生,汪受傳.小兒厭食的中醫(yī)藥治療現(xiàn)狀與展望j.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2000,16(1):63-64.3杜永平，

18、張月萍，胡三覺.運脾復(fù)方對幼齡厭食大鼠lh,vh神經(jīng)元自發(fā)放電的影響j.神經(jīng)解剖學(xué)雜志，2001,17(2):183.4duyp,zhangyp,angs,etal.alteratininhypthalausandperipheryfbraingutpeptidesinanrexiinfantileratdelandtheregulatinbyerbagranulej.rldjgastrenterl,2001,7(2):275-280.5汪受傳,張月萍,陶勇,等.特制飼料喂養(yǎng)幼齡大鼠建立小兒厭食癥模型j.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，1999,15(3):148-150.6paxinsg,astn.theratbraininsteretaxirdinates.sandieg:aadeipress,1988:29-31.7張月萍，王建軍.攝食控制的神經(jīng)體