冰片聯(lián)合順鉑對大鼠C6膠質(zhì)細(xì)胞瘤的治療作用

1、冰片結(jié)合順鉑對大鼠C6膠質(zhì)細(xì)胞瘤的治療作用【摘要】討論冰片結(jié)合順鉑對大鼠6膠質(zhì)細(xì)胞瘤的治療作用。方法建立大鼠6膠質(zhì)瘤細(xì)胞模型，于治療組給予灌服冰片及靜脈注射順鉑，21天后分析治療組與對照組膠質(zhì)瘤橫截面積。結(jié)果治療組腦膠質(zhì)瘤的橫截面面積明顯小于對照各組P0.05。結(jié)論冰片能增加血腦屏障對順鉑的通透性，從而進(jìn)步順鉑對膠質(zhì)細(xì)胞瘤的治療作用。【關(guān)鍵詞】冰片；順鉑；大鼠6膠質(zhì)瘤細(xì)胞模型；血腦屏障Abstrat:bjetiveTexplrethetreatentfratellline6braingliadelithbrnelandisplatin.ethdsPreparetheratellline6bra

2、ingliadel，thetreatedgrupreEivedralbrne1andintravenusinfusinfisplatin，theareaftreatedgrupandntrlgrupsereanalyzedafter21days.ResultsTheeanareareduedsignifiantlyP0.05parediththsefthentrlgrups.nlusinBrnelanenhanethepereabilityfbldbrainbarriertisplatin，andinreasethetreatentfbraingliaithisplatin.Keyrds:br

3、nel;isplatin;ratellline6braingliadel;bldbrainbarrier1材料1.1細(xì)胞系和試劑6細(xì)胞株購于中科院上海細(xì)胞生物學(xué)研究所細(xì)胞庫；醫(yī)用順鉑，20g/瓶，齊魯制藥；石蠟油，500l/瓶，南昌白云制藥；冰片，購于杭州胡慶余堂；250l生理鹽水5瓶，杭州民生藥業(yè)；小牛血清購于杭州四季青胰蛋白酶及培養(yǎng)基購于GIB公司10水合氯醛(自配)：以3l/kg劑量腹腔注射麻醉大鼠；1.2儀器設(shè)備和器械細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)：TherSientifiRS自動化細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)；超凈工作臺：江蘇蘇凈集團(tuán)蘇州安泰空氣技術(shù)產(chǎn)；江灣I型大鼠腦立體定向儀：第二軍醫(yī)大學(xué)消費(fèi)。1.3實(shí)驗(yàn)動物40只

4、雄性istar大鼠購于上海實(shí)驗(yàn)動物中心，體重300320g。2方法2.1細(xì)胞培養(yǎng)將6細(xì)胞分裝于數(shù)只752(底面積)的培養(yǎng)瓶中。參加適量含有體積分?jǐn)?shù)為10小牛血清的RPI1640培養(yǎng)液,置入溫度37、25的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在細(xì)胞處于指數(shù)生長期時，以胰蛋白酶適量消化35in后，棄去消化液。用Hanks液吹打沖洗12次形成細(xì)胞懸液，調(diào)細(xì)胞濃度為每10l含1.5106個6細(xì)胞的懸液用于接種。2.2顱內(nèi)接種將麻醉后的大鼠頭部固定在腦立體定向儀上，剪去頭頂部毛發(fā)，碘伏消毒后鋪洞巾。取內(nèi)眥連線與頭部正中矢狀面交點(diǎn)向后縱向切開頭皮約1，別離暴露顱骨。根據(jù)Batker法確定右尾狀核靶點(diǎn)，于冠狀縫前1，中線右旁開3

5、，以牙科鉆在顱骨上鉆孔，孔徑約1.2，深達(dá)硬腦膜外表而不傷及腦組織。25l微量注射器抽取6細(xì)胞懸液10l，沿骨孔緩慢勻速注射10in，注射完畢后留針5in，緩慢退針，骨孔用醫(yī)用明膠海綿填充，骨蠟封閉。生理鹽水沖洗手術(shù)區(qū)，無菌絲線縫合切口后消毒皮膚，術(shù)后加用青霉素抗感染，整個過程在層流超凈臺中進(jìn)展，麻醉復(fù)蘇后單籠常規(guī)飼養(yǎng)14天。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.3實(shí)驗(yàn)分組將40只大鼠隨機(jī)分為冰片順鉑治療組；單用順鉑組；冰片組；空白對照組，共4組，每組10只。2.4大鼠體內(nèi)治療實(shí)驗(yàn)于術(shù)后14天，實(shí)驗(yàn)組：灌服10的冰片石蠟油溶液/v3l/kg/次，1h后大鼠尾靜脈注射順鉑1g/g,以后每48h給同等劑量冰片

6、+順鉑1次,共計3次。冰片組單用冰片石蠟油溶液?？瞻讓φ战M那么采用同體積石蠟油溶液，無冰片組那么未加冰片，其余方法一樣。2.5試驗(yàn)紀(jì)錄觀察大鼠活動狀態(tài)。腫瘤最大橫徑測量。于腫瘤接種21天取大鼠全腦,10%甲醛溶液固定后沿腫瘤中心作冠狀切面,程度方向測量每個腫瘤最大橫截面面積(包括壞死等病變組織)。組織病理學(xué)檢查：所有腦標(biāo)本固定，脫水，常規(guī)石蠟切片，片厚4，HE染色，光鏡下觀察。2.6數(shù)據(jù)統(tǒng)計統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)展LSD檢驗(yàn)分析。3結(jié)果3.1各組大鼠于腫瘤接種成功后均于恒溫臺上復(fù)蘇，復(fù)蘇時間24h不等。復(fù)蘇之后的大鼠逐漸恢復(fù)正常的飲食活動等。各組大鼠于腫瘤接種后10天起出現(xiàn)皮

7、毛不潔、飲食變差等異常現(xiàn)象，實(shí)驗(yàn)組于給予順鉑治療后病癥改善情況明顯好于對照的三組大鼠。3.2各組腦膠質(zhì)瘤的平均橫截面面積比擬見表1。表1腦膠質(zhì)瘤的平均橫截面面積治療組與對照組略與對照組相比，*P0.056膠質(zhì)細(xì)胞瘤病理切片，見圖1。4討論研究顯示，冰片能可逆性開啟BBB，作為“佐使藥協(xié)助其他藥物透過BBB。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，大白鼠灌服10%冰片石蠟油溶液及尾靜脈注射順鉑后,實(shí)驗(yàn)組腦膠質(zhì)瘤的橫截面面積明顯小于對照各組P0.05，具有統(tǒng)計學(xué)差異。這些均提示，冰片具有促進(jìn)順鉑進(jìn)入腦組織的作用，其結(jié)果與賈鈺銘等4相關(guān)研究根本一致。本研究結(jié)果，可以說明冰片促BBB開放與腦炎、腦外傷的病理性開放有質(zhì)的區(qū)別，其開放為生理性開放，冰片對腦及BBB有一定的保護(hù)作用，其