艾滋病檢測技術及診斷

1、艾滋病檢測技術及診斷艾滋病檢測技術及診斷第1頁檢測依據(jù)和行業(yè)標準艾滋病檢測技術及診斷第2頁樣品采集和處理樣品種類及用途血液標本采集抗凝劑選擇樣品保留樣品運輸艾滋病檢測技術及診斷第3頁樣品種類及用途 全血、血清、血漿、口腔黏膜滲出液、尿液及干血斑（ DBS ）樣品可用于HIV抗體檢測。全血、血清、血漿、病毒培養(yǎng)上清液可用于HIV抗原檢測。抗凝全血可用于CD4+和CD8+T淋巴細胞測定。血漿、DBS可用于HIV-1病毒載量、基因型和耐藥檢測。淋巴細胞富集液、外周血單核淋巴細胞（PBMC）及全血可用于HIV核酸定性與定量、基因型檢測和HIV-1分離培養(yǎng)。艾滋病檢測技術及診斷第4頁血液標本采集抗凝全血

2、：消毒局部皮膚，用有抗凝劑真空采血管抽取適量靜脈血，或用一次性注射器抽取靜脈血，轉移至加有抗凝劑試管中，輕輕顛倒混勻68次，備用。血漿：將采集抗凝全血15003000r/min離心15分鐘，上層即為血漿，吸出置于適當容器中，備用。血清：依據(jù)需要，用不含抗凝劑真空采血管抽取510ml靜脈血，或一次性注射器抽取靜脈血，轉移至無抗凝劑試管中，室溫下自然放置12小時，待血液凝固、血塊收縮后再用15003000r/min離心15分鐘，吸出血清，置于適當容器中，備用。艾滋病檢測技術及診斷第5頁抗凝劑選擇 CD4+和CD8+T淋巴細胞檢測：EDTA、肝素、枸櫞酸鈉病毒分離、核酸檢測： EDTA、枸櫞酸鈉艾滋

3、病檢測技術及診斷第6頁樣品保留 抗體檢測：血清或血漿樣品，短期（1周）內進行檢測可存放于28，一周以上應存放于-20 以下。核酸檢測：48h內分離血漿，4天內檢測可存放于4 ,3個月內存放于-20 以下，3個月以上-70 以下保留。CD4+T淋巴細胞檢測：室溫保留，時間不超出24h。假如用CD45設門，樣品保留不超出72h。艾滋病檢測技術及診斷第7頁樣品保留篩查陽性樣品應及時進行補充試驗，篩查陰性樣品，可依據(jù)詳細需要決定保留時間，提議最少保留1個月。特殊用途或專題項目標樣品依據(jù)詳細要求確定保留時間。補充試驗陽性樣品按照國家生物樣品管理相關要求執(zhí)行。艾滋病檢測技術及診斷第8頁樣品運輸標本篩查陽性

4、（復檢需用三代試劑），送檢單位必須聯(lián)絡受檢者，在仔細核實受檢者身份等信息后重新采集1份全血。將篩查陽性血清與重新采集全血共2份樣品一同送至本中心。要求送檢血清量不得少于0.5ml，送檢單位對重新采集全血不得做任何處理。標本標識須用正楷字標明受檢者姓名、性別和采集時間（年/月/日）。篩查陽性血清應裝于1.5ml凍存管內，假如沒有也可裝于真空采血管內，禁止使用除此之外其它容器。艾滋病檢測技術及診斷第9頁樣品運輸包裝要求：應采取WHO提出三級包裝系統(tǒng) 第一層容器：裝樣品，要求防滲漏。樣品應置于帶蓋試管內，試管上應有顯著標識，標明樣品編號或受檢者姓名、種類和采集時間。在試管周圍應墊有緩沖吸水材料，以免

5、碰碎。隨樣品應附有送檢單，送檢單應與樣品分開放置。 第二層容器：要求耐受性好、防滲漏、容納并保護第一層容器，能夠裝若干個第一層容器。將試管裝入專用帶蓋容器內，容器材料要易于消毒處理。 第三層容器：放在一個運輸用外層包裝內，應易于消毒。在第三層容器外面要貼標簽（數(shù)量，收、發(fā)件人）。艾滋病檢測技術及診斷第10頁樣品運輸用于抗體檢測血清和血漿樣品應在凍存條件下運輸，用于CD4+和CD8+T淋巴細胞測定樣品應在室溫下（1825 ）運輸。用于病毒載量檢測樣品應在-20 以下運輸。DBS和尿液樣品應在室溫下運輸。艾滋病檢測技術及診斷第11頁樣品運輸艾滋病檢測技術及診斷第12頁樣品運輸帶螺帽、墊圈血清凍存管

6、。艾滋病檢測技術及診斷第13頁樣品運輸禁止使用EP管艾滋病檢測技術及診斷第14頁樣品運輸禁止使用內旋蓋凍存管艾滋病檢測技術及診斷第15頁樣品運輸在凍存管外套帶蓋第二層容器艾滋病檢測技術及診斷第16頁樣品運輸置于帶冰袋第三層容器中艾滋病檢測技術及診斷第17頁樣品運輸 HIV抗體篩查檢測匯報填寫篩查陽性標本應填寫HIV抗體篩查檢測匯報，加蓋公章后送檢。匯報單不得有空項 ，必須按規(guī)范要求認真完成篩查、復檢（第一次）、復檢（第二次）三次試驗。在檢測結果空白處填寫送檢樣品S/CO值或發(fā)光值。HIV篩查試驗室篩查不能使用快速檢測方法。兩次復檢需使用三代試劑，三代試劑檢測結果陽性方可送檢。艾滋病檢測技術及診

7、斷第18頁艾滋病檢測技術及診斷第19頁HIV抗體檢測HIV抗體檢測試驗室要求HIV抗體檢測目標和關鍵點常規(guī)HIV抗體檢測方法結果匯報質量控制艾滋病檢測技術及診斷第20頁HIV抗體檢測 HIV抗體檢測試驗室要求應符合國家對試驗室生物安全相關要求試驗室質量控制按全國艾滋病檢測技術規(guī)范（）相關章節(jié)要求執(zhí)行艾滋病檢測技術及診斷第21頁HIV抗體檢測 HIV抗體檢測目標和關鍵點目標：1、HIV抗體檢測可用于診療、血液篩查、監(jiān)測等。 2、以診療為目標檢測是為了確定個體HIV感染狀 況，包含臨床檢測、自愿咨詢檢測、依據(jù)特殊需 要進行體檢等。 3、以血液篩查為目標檢測是為了預防輸血傳輸 HIV，包含獻血員篩查

8、和原料血漿篩查。 4、以監(jiān)測為目標檢測是為了了解不一樣人群HIV感 染率及其改變趨勢，包含高危人群、重點人群和 普通人群。 艾滋病檢測技術及診斷第22頁HIV抗體檢測關鍵點：1、依據(jù)目標選擇檢測方法及檢測策略。 2、嚴格恪守試驗室SOP。 3、結果判定以試劑盒說明書為標準。 4、篩查試驗有反應，須做補充試驗。補充試驗包 括抗體確證試驗（WB、RIBA/LIA）和核酸 試驗（定性和定量）。 艾滋病檢測技術及診斷第23頁HIV抗體檢測常規(guī)HIV抗體檢測方法 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA） 化學發(fā)光或免疫熒光試驗（CIA/IFA） 快速檢測法（RT）：金標法、硒標法、明膠顆粒凝集 試驗（PA） 蛋白

9、免疫印跡試驗（WB）、條帶/線性免疫試驗（RIBA /LIA）篩查方法抗體確證試驗艾滋病檢測技術及診斷第24頁HIV抗體檢測 結果匯報篩查匯報：篩查試驗無反應匯報為“HIV抗體陰性”；有反應必須進行復檢，復檢兩次檢測均無反應匯報為“HIV抗體陰性”，復檢檢測都有反應或一個有反應一個無反應需進行“補充試驗”（本中心只提供WB試驗），匯報為“HIV感染待確定”，不能出具陽性匯報。確證匯報：符合HIV-1陽性判斷標準，匯報“HIV-1抗體陽性”，符合HIV-2抗體陽性判斷標準，匯報“HIV-2抗體陽性”；符合陰性判斷標準，匯報“HIV抗體陰性”；符合不確定判定標準，匯報“HIV抗體不確定”，備注中注

10、明“24周后復檢”。艾滋病檢測技術及診斷第25頁質量控制酶免或發(fā)光法抗體檢測室內質量控制快速法抗體檢測質控艾滋病檢測技術及診斷第26頁質量控制 酶免或發(fā)光法抗體檢測室內質量控制試劑盒內部對照：試劑盒內提供陰陽性對照血清，用于判斷每次試驗有效性，但不能作為室內質控品用。室內質控品（外部對照）： 1、為試劑盒組分外部質控品，是為監(jiān)控檢測重復性而設置，質控品定值必須為弱陽性。 2、可判斷該批樣品檢測有效性，所以，每次試驗必須含室內質控品，其結果無效，必須重新試驗。艾滋病檢測技術及診斷第27頁質量控制Levey-Jennings質控圖質控圖參數(shù)：算術平均值（X）、標準差（S）、變異系數(shù)（CV）及控制限

11、?？刂埔?guī)則：告警（12S）、失控（13S）艾滋病檢測技術及診斷第28頁質量控制1、告警（12S）：當外部對照S/CO值超出2S范圍時，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應予注意，是否能夠繼續(xù)檢測需要深入觀察。警告:12S規(guī)則違反艾滋病檢測技術及診斷第29頁質量控制2、失控（13S）：當外部對照S/CO值超出3S范圍時，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，此次結果不能被接收。失控:13S規(guī)則違反艾滋病檢測技術及診斷第30頁質量控制質控圖分析及失控處理 試驗室應建立質控圖分析及失控情況處理程序。當出現(xiàn)失控時，必須找出發(fā)生問題原因，找出處理問題方法，并消除原因。艾滋病檢測技術及診斷第31頁質量控制 快速檢測質控試劑內對照 在質控窗口

12、內出現(xiàn)質控帶，該質控帶是試劑自帶內部過程質控，說明試驗操作全部完成而且試驗所用材料處于工作狀態(tài)。清潔檢測區(qū)背景是內部陰性過程質控。如試驗完成后未展現(xiàn)紅色質控帶，說明試劑盒內質控無效，該試驗結果無效，樣品必須重檢。艾滋病檢測技術及診斷第32頁試驗室質量控制室內質控品對照1、可采取商用質控品或自制質控品。質控品應包含抗體陽性 樣品和陰性樣品。不能使用酶聯(lián)試驗外部質控品。 更換試劑批號 更換檢測人員2、以下情況需做質量控制 更換包裝 更換廠家 3、提議：每個檢測日檢測一次陽性和陰性質控品；假如日檢測量大于50份樣品，最少應做2次質控。艾滋病檢測技術及診斷第33頁試驗室檢測策略窗口期：從HIV感染人體

13、到感染者血清中抗體、抗原或核酸等感染標志物能被檢測出之前時期。（在窗口期內血液已經(jīng)有感染性?，F(xiàn)有診療技術檢測HIV抗體、抗原和核酸窗口期分別為感染后3周、2周和1周左右。）HIV抗體篩查試驗：初步了解機體血液或體液中有沒有HIV 抗體檢測方法，也包含同時檢測抗體和抗原方法。HIV補充試驗：在取得篩查試驗結果后，為了準確判斷，繼續(xù)檢測機體血液或體液中有沒有HIV抗體或核酸方法，包含抗體確證試驗和核酸試驗。艾滋病檢測技術及診斷第34頁試驗室檢測策略艾滋病檢測技術及診斷第35頁試驗室檢測策略使用抗體檢測試劑篩查檢測流程（三代試劑）試劑1有反應無反應兩種試劑都有反應一有，一無均無反應補充試驗匯報HIV

14、抗體陰性艾滋病檢測技術及診斷第36頁試驗室檢測策略使用抗原抗體檢測試劑篩查流程（四代試劑）抗原抗體檢測試劑有反應抗體檢測都有反應一有，一無補充試驗均無反應HIV-1核酸試驗或P24抗原試驗或24周后隨訪無反應匯報HIV抗體陰性，P24抗原陰性艾滋病檢測技術及診斷第37頁HIV感染/AIDS診療診療標準 以試驗室檢測為依據(jù)，結合臨床表現(xiàn)和參考流行病學資料綜合進行。HIV抗體和病原學檢測是確診HIV感染依據(jù)；流行病學史是診療急性期和嬰幼兒HIV感染主要參考；CD4+T淋巴細胞檢測和臨床表現(xiàn)是HIV感染分期診療主要依據(jù)；AIDS指征性疾病是AIDS診療主要依據(jù)。艾滋病檢測技術及診斷第38頁HIV感染

15、/AIDS診療HIV感染診療成人、青少年及18個月以上兒童符合以下一項即可診療：HIV抗體篩查試驗有反應和HIV抗體確證試驗陽性；HIV抗體篩查試驗有反應和核酸定性試驗陽性；HIV抗體篩查試驗有反應和核酸定量試驗5000cps/ml；有流行病學史或艾滋病相關臨床表現(xiàn)，兩次HIV核酸檢測均為陽性；HIV分離試驗陽性。艾滋病檢測技術及診斷第39頁HIV感染/AIDS診療18個月齡及以下兒童符合以下一項即可診療：為HIV感染母親所生和兩次HIV核酸檢測均為陽性（第二次檢測需在出生4周后采樣進行）；有醫(yī)源性暴露史，HIV分離試驗結果陽性或兩次HIV核酸檢測均為陽性；為HIV感染母親所生和HIV分離試驗陽性。艾滋病檢測技術及診斷第40頁HIV感染/AIDS診療AIDS診療成人及1