可見分光光度計(jì)3課件

1、實(shí)驗(yàn)一 紫外可見分光光度計(jì)的性能檢驗(yàn) 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1、掌握紫外可見分光光度計(jì)性能的檢驗(yàn)方法 2、學(xué)會(huì)UV1100型紫外可見分光光度計(jì)的使用方法 二、實(shí)驗(yàn)原理 對(duì)分光光度計(jì)進(jìn)行性能檢查，以保證測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確。三、儀器與試劑 UV1100型紫外可見分光光度儀 石英比色皿（一對(duì)） 擦鏡紙 蒸餾水 6mg/100ml K2Cr2O7溶液 0.002mol/mol KMnO4溶液 2、波長精度的檢查以蒸餾水為空白 測(cè)定KMnO4溶液的吸收曲線若測(cè)得的最大吸收波長在5251nm以內(nèi)說明儀器波長精度符合使用要求5008000.40.2(nm)A0 3、重復(fù)性的檢查以0.02mol/L的H2SO4為空白在2

2、57nm處同一K2Cr2O7溶液的T，連續(xù)測(cè)定7次測(cè)定求出極差 若極差0.5%儀器的重復(fù)性符合使用要求 4.吸收值準(zhǔn)確度的檢查235nm、257nm分別測(cè)定 K2Cr2O7溶液吸光度并計(jì)算吸收系數(shù)以0.02mol/L的H2SO4為空白(T100%）313nm、350nm與下表規(guī)定的吸收系數(shù)比較 若相對(duì)偏差在1%以內(nèi)說明儀器符合使用要求波長/nm 吸收系數(shù) 235123.0126.0257142.8146.231347.050.3350105.5108.5實(shí)驗(yàn)二 吸收曲線的測(cè)繪及吸收系數(shù)的測(cè)定 三、儀器與試劑 UV1100型紫外可見分光光度計(jì) 石英比色皿（一對(duì)） 95%乙醇（A.R） 0.005

3、%丹皮酚對(duì)照品溶液1、吸收曲線的測(cè)繪精密吸取母液1ml置10ml量瓶95乙醇定容以95乙醇為空白，進(jìn)行光譜掃描，得到吸收曲線圖。2、吸收曲線的測(cè)繪 利用上述溶液，在274nm波長處測(cè)定其吸光度并計(jì)算百分吸收系數(shù)。實(shí)驗(yàn)三 分光光度法測(cè)定槐花中總黃酮的含量一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1、掌握用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定槐花中總黃酮含量的方法 2、鞏固紫外可見分光光度計(jì)的操作方法二、實(shí)驗(yàn)原理 黃酮類化合物分子中的羰基、羥基等結(jié)構(gòu)可與金屬鹽類試劑如鋁鹽、鉛鹽等生成有色配合物，可用于定量分析。三、儀器與試劑 UV1100型紫外可見分光光度儀 石英比色皿（一對(duì)） 5% NaNO2溶液 10% Al(NO3)3溶液 NaOH試液 蘆

4、丁對(duì)照品 槐花藥材 其余試劑均為分析純； 四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟1、對(duì)照品溶液的制備加甲醇，水浴使溶解蘆丁對(duì)照品50mg置25ml量瓶中放冷，加甲醇至刻度，搖勻精密吸取10ml置100ml量瓶中加水至刻度，搖勻即得（每1ml中含無水蘆丁0.2mg）=500nm以相應(yīng)試劑為空白測(cè)定吸光度（A）以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線吸光度濃度（mg/ml）3、供試品溶液的制備槐花粗粉1g精密稱定置索氏提取器中加乙醚加熱回流至提取液無色放冷棄乙醚液加甲醇90ml加熱回流至提取液無色移至100ml量瓶中甲醇少量多次洗滌容器洗液并入量瓶中加甲醇至刻度搖勻精密吸取10ml置100ml量瓶中加水至刻度

5、，搖勻即得五、注意事項(xiàng) 1、對(duì)照品和樣品應(yīng)同時(shí)顯色 2、顯色劑加入的順序、加入量和顯色時(shí)間要正確六、思考題 1.分光光度法有哪些影響因素？ 2.試述標(biāo)準(zhǔn)曲線法的優(yōu)點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)四、薄層板的制備二、儀器與試劑天平（0.1g） 研缽玻璃板 10 cm20cm CMC-Na水溶液 （3） 蒸餾水 薄層層析用硅膠GF254（青島海洋化工廠）三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟 1. 洗板 選取板面平整的玻璃板，洗凈后放置在干凈、平整的臺(tái)面上，陰干備用。2勻漿 將吸附劑1份（3.0g）和水3份在研缽中向同一方向研磨混合均勻。 3鋪制 將已調(diào)制好的吸附劑勻漿倒至玻璃板的一端，用研棒將勻漿引到玻板的各個(gè)邊緣，輕輕震動(dòng)，使吸附劑

6、均勻鋪開成一薄層。置水平臺(tái)上陰干。4活化 將陰干的薄層板至于110烘箱中活化30分鐘，置于有干燥器中備用。實(shí)驗(yàn)五 薄層色譜定性分析 （五味子的定性鑒別） 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1. 掌握薄層色譜的定性分析方法。 2. 熟悉薄層板的點(diǎn)樣方法。二、實(shí)驗(yàn)原理 中藥五味子中，五味子甲素為其主要有效成分之一，為了更好的進(jìn)行定性鑒別，選用五味子甲素對(duì)照品和五味子對(duì)照藥材進(jìn)行對(duì)照，根據(jù)相同的組分在相同的條件下，應(yīng)該有相同的顏色和比移值來作為定性鑒別的依據(jù)。五味子植株五味子藥材三、儀器與試劑定量毛細(xì)管已制備好的薄層板（硅膠GF254 ）展開缸 所用試劑均為分析純五味子粉末定量毛細(xì)管雙槽展開缸對(duì) 照 品四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操

7、作步驟1.供試品液的制備：取五味子粉末1g，加三氯甲烷20ml，加熱回流30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品液。2.對(duì)照藥材溶液的制備：取五味子對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。3.對(duì)照品溶液的制備：取五味子甲素對(duì)照品，加三氯甲烷制成每ml含1mg的對(duì)照品溶液。 4. 吸取上述三種溶液各2l，點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚（3060）甲酸乙酯甲酸（1551）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。五、思考題 1如何克服薄層展開過程中的邊緣效應(yīng)？引起邊緣效應(yīng)

8、的因素有哪些？ 實(shí)驗(yàn)六、高效液相色譜儀的使用一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆崭咝б合嗌V儀的使用方法了解高效液相色譜儀的結(jié)構(gòu)高效液相流程圖1 溶劑貯器,2 泵,3 流量與速度檢測(cè)裝置,4 進(jìn)樣閥,5 預(yù)柱(保護(hù)柱),6 分離柱(色譜柱),7 檢測(cè)器,8 數(shù)據(jù)記錄及處理系統(tǒng),9 廢液瓶二、儀器與試劑L-2000液相色譜儀（L-2400紫外檢測(cè)器）C18反相鍵合色譜柱（250 mm4.6 mm）微量進(jìn)樣器（25l）過濾器（0.45m）及脫氣裝置苯、甲苯、萘甲醇（色譜純）重蒸餾水三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與步驟（一）流動(dòng)相的預(yù)處理 1過濾流動(dòng)相，根據(jù)需要選擇不同的濾膜。 2對(duì)抽濾后的流動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。（二）安裝色

9、譜柱 按色譜柱標(biāo)示意流液方向安裝好色譜柱。（三）液相色譜儀的使用方法 1.啟動(dòng)液相色譜儀2.排除管道內(nèi)空氣3.泵流速的設(shè)定4.檢測(cè)器波長的設(shè)定5.打開T2000P色譜工作站6.色譜柱預(yù)平衡7進(jìn)樣8.數(shù)據(jù)采集完畢后，點(diǎn)擊停止進(jìn)樣9.點(diǎn)擊“再處理”和“報(bào)告”圖標(biāo)對(duì)圖譜進(jìn)行再處理，出報(bào)告圖10.實(shí)驗(yàn)完畢后沖洗色譜柱11.關(guān)閉工作站，關(guān)閉輸液泵電源，關(guān)閉檢測(cè)器電源、關(guān)閉儀器電源練習(xí)液相色譜儀使用的色譜條件、樣品溶液和進(jìn)樣量色譜條件 流動(dòng)相為甲醇水（8020）； 固定相:C18反相鍵合色譜柱；檢測(cè)波長為254nm；流速：1ml/min。 樣品溶液 含苯、甲苯、萘濃度分別為1g/ml的甲醇溶液。 進(jìn)樣量

10、：10l。四、思考題流動(dòng)相在洗脫前為何要進(jìn)行脫氣？一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1.掌握利用高效液相色譜法進(jìn)行定性 及定量分析。 2.鞏固高效液相色譜儀的使用方法。實(shí)驗(yàn)七、高效液相色譜定性及定量分析中藥赤芍中芍藥苷的定性鑒別和含量測(cè)定二、實(shí)驗(yàn)原理 1.采用與已知化合物對(duì)照,對(duì)組分進(jìn)行定 性分析。 2.采用外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行含量測(cè)定。三、儀器與試劑 L-2000液相色譜儀（L-2400紫外檢測(cè)器） C18反相鍵合色譜柱（250 mm4.6 mm） 微量進(jìn)樣器（25l） 芍藥苷對(duì)照品；赤芍藥材 其余試劑均為分析純 四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟 色譜條件 C18反相鍵合色譜柱； 流動(dòng)相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氫鉀緩沖

11、溶液（4065）；檢測(cè)波長為230nm。 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取五氧化二磷干燥36小時(shí)的芍藥苷對(duì)照品適量，加甲醇配制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。 供試品溶液的制備 取本品粗粉約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，浸泡4小時(shí)，超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。 測(cè)定 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10l，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。 本品含芍藥苷（C23H28O11）不得少于1.8%。五、思考題1外標(biāo)一點(diǎn)法的主要誤差來源是什么？2紫外檢測(cè)器的優(yōu)缺點(diǎn)是什么？實(shí)驗(yàn)八、氣相色譜儀的使用一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.

12、 掌握氣相色譜儀的使用方法2. 了解氣相色譜儀的結(jié)構(gòu)二、實(shí)驗(yàn)原理 氣相色譜法是采用氣體作流動(dòng)相（載氣）流經(jīng)色譜柱進(jìn)行分離分析的方法。主要由氣源部分、進(jìn)樣部分、色譜柱、柱溫箱、檢測(cè)器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。三、儀器與試劑島津GC-2014氣相色譜儀（FID檢測(cè)器）樟腦對(duì)照品溶液試劑均為A.R純四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟 （一）啟動(dòng)GC-2014氣相色譜儀（二）參數(shù)的設(shè)定（三）打開N2000色譜工作站（四）運(yùn)行GC-2014氣相色譜儀（五）進(jìn)樣（六）待數(shù)據(jù)采集完畢后，點(diǎn)擊停止采集；（七）待樣品分析結(jié)束后，在離線處理數(shù)據(jù)，察看數(shù)據(jù)報(bào)告，打印報(bào)告。（八）關(guān)機(jī)附: 練習(xí)氣相色譜儀使用的色譜條件、樣品溶液和進(jìn)樣量

13、色譜條件：聚乙二醇（PEG）-20M毛細(xì)管柱（柱長30m，內(nèi)徑0.25mm，膜厚度0.25m）；柱溫為160。 樣品溶液 樟腦對(duì)照品溶液。 進(jìn)樣量 ：1l。五、思考題使用氣相色譜儀時(shí)，應(yīng)該注意那些問題？實(shí)驗(yàn)九、氣相色譜法定性及定量分析樟腦、冰片和薄荷腦混合樣品中樟腦的定性鑒別和含量測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆詹捎脙?nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量分析的方法 熟悉利用氣相色譜儀進(jìn)行定性分析二、實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)際工作中，在已知待測(cè)組分的情況下，得到的氣相色譜圖可以借助對(duì)照品加以對(duì)照，利用保留值進(jìn)行定性。 利用氣相色譜進(jìn)行定量分析時(shí)，主要采用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量，以消除由于進(jìn)樣和儀器穩(wěn)定等原因造成的誤差。三、儀器與試劑 島津GC-2014氣相色譜儀（FID）；10l 微量進(jìn)樣器；內(nèi)標(biāo)物：萘；樟腦對(duì)照品；混合樣品溶液（由樟腦、冰片和薄荷腦組成）；其余試劑均為A.R純；四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟儀器條件 聚乙二醇（PEG）-20M毛細(xì)管柱（柱長30m、內(nèi)徑0.25mm、膜厚度0.25 m），柱溫160。校