臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)：第11章 固相膜免疫分析技術(shù)

1、第十一章 固相膜免疫分析技術(shù)(Chapter 11 Solid Phase Membrane-based Immunoassay)臨床免疫學(xué)檢驗(yàn) 固相膜免疫分析技術(shù)：是以微孔膜作為固相載體，利用液體可以流過(guò)微孔膜也可以通過(guò)毛細(xì)管作用在膜上向前移行的特性，以酶標(biāo)記或各種有色微粒子標(biāo)記抗體或抗原作為標(biāo)記物，通過(guò)抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行抗原或抗體檢測(cè)的快速檢驗(yàn)方法。第十一章 固相膜免疫分析技術(shù)不需大型設(shè)備；易掌握操作要求和判定標(biāo)準(zhǔn)；家庭式保健檢測(cè)和床旁檢測(cè)。 固相膜免疫分析技術(shù)：是以微孔膜作為固相載體，利用液體可以流過(guò)微孔膜也可以通過(guò)毛細(xì)管作用在膜上向前移行的特性，以酶標(biāo)記或各種有色微粒子標(biāo)記抗體或抗原作為

2、標(biāo)記物，通過(guò)抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行抗原或抗體檢測(cè)的快速檢驗(yàn)方法。第十一章 固相膜免疫分析技術(shù)膠體金免疫技術(shù)；斑點(diǎn)酶免疫吸附試驗(yàn)；免疫印跡試驗(yàn)。第一節(jié) 膠體金免疫技術(shù)(Section 1 Colloidal Gold Immunoassay) 膠體金免疫技術(shù)：是以膠體金作為示蹤標(biāo)記物或顯色劑，應(yīng)用于抗原抗體反應(yīng)的一種標(biāo)記免疫檢測(cè)技術(shù)。 膠體金：由金鹽還原而得，膠體金顆粒由一個(gè)基礎(chǔ)金核（原子金Au）及包圍在外的雙離子層（內(nèi)層為負(fù)離子層AuCl2-，外層是帶正電荷的H+）構(gòu)成。由于靜電作用，金顆粒之間互相排斥而懸浮成為一種帶負(fù)點(diǎn)的穩(wěn)定疏水膠體。第一節(jié) 膠體金免疫技術(shù)膠體金的性質(zhì)顆粒大小多在1100nm，穩(wěn)

3、定，均勻，單一分散狀懸浮；對(duì)電解質(zhì)敏感；大小不同，呈色不同。 膠體金粒徑 1枸櫞酸三鈉 膠體金特性 （nm） 加入量（ml）* 呈色 max 16 2.00 酒紅色 518nm 24.5 1.50 橙紅色 522nm 41 1.00 紅色 525nm 71.5 0.70 紫紅 535nm*還原100ml 0.01HAuCl4所需量 第一節(jié) 膠體金免疫技術(shù)膠體金的性質(zhì)免疫金 免疫金：是指膠體金與抗原或抗體等大分子物質(zhì)的結(jié)合物。一般認(rèn)為是膠體金顆粒表面的負(fù)電荷與蛋白質(zhì)表面帶正電荷的基團(tuán)借靜電吸附而形成牢固的結(jié)合。第一節(jié) 膠體金免疫技術(shù) 以硝酸纖維素膜為載體，并包被了抗原或抗體的滲濾裝置中，依次滴加

4、標(biāo)本、免疫金及洗滌液。因微孔濾膜貼置于吸水材料上，故溶液流經(jīng)滲濾裝置時(shí)與膜上的抗原或抗體快速結(jié)合并起到濃縮作用，達(dá)到快速檢測(cè)的目的（5min）。一、斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)（一）原理第一節(jié) 膠體金免疫技術(shù)一、斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)（二）方法類型雙抗體夾心法；間接法（少用）。第一節(jié) 膠體金免疫技術(shù)（三）操作要點(diǎn)操作示意圖裝置分解圖蓋微孔膜吸水墊料底加標(biāo)本、免疫金、洗滌液一、斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)第一節(jié) 膠體金免疫技術(shù) 是將膠體金標(biāo)記技術(shù)和蛋白質(zhì)層析技術(shù)相結(jié)合的以硝酸纖維素膜為載體的快速的固相膜免疫分析技術(shù)。滴加在膜一端的標(biāo)本溶液受到載體膜的毛細(xì)管作用向另一端移動(dòng)，被分析物與固定于載體膜上某一區(qū)域的抗體或抗原結(jié)

5、合而被固相化，無(wú)關(guān)物則越過(guò)該區(qū)域而被分離，然后通過(guò)膠體金的呈色條帶來(lái)判讀實(shí)驗(yàn)結(jié)果。二、斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)（一）原理GTC第一節(jié) 膠體金免疫技術(shù)（二）方法雙抗體夾心法競(jìng)爭(zhēng)法間接法 （少用）二、斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)第一節(jié) 膠體金免疫技術(shù)G區(qū)：金標(biāo)抗體C區(qū)：抗金標(biāo)抗體T區(qū)：包被抗體 吸水紙標(biāo)本AB二、斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)第一節(jié) 膠體金免疫技術(shù)標(biāo)本G區(qū)：金標(biāo)抗體C區(qū)：抗金標(biāo)抗體T區(qū)：包被標(biāo)準(zhǔn)抗原 吸水紙陽(yáng)性結(jié)果AB二、斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)第一節(jié) 膠體金免疫技術(shù)標(biāo)本G區(qū)：金標(biāo)抗體C區(qū)：包被抗抗體T區(qū)：標(biāo)準(zhǔn)抗原 吸水紙陰性結(jié)果AB二、斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)第一節(jié) 膠體金免疫技術(shù)（三）操作要點(diǎn)試劑條標(biāo)記線一端加入標(biāo)本

6、；一條棕紅線、兩條棕紅線、無(wú)棕紅色線。二、斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)第一節(jié) 膠體金免疫技術(shù)三、臨床應(yīng)用及評(píng)價(jià)方法簡(jiǎn)便、快速、無(wú)需特殊儀器設(shè)備，試劑穩(wěn)定；該技術(shù)不能準(zhǔn)確定量，只能作為定性試驗(yàn)；本法靈敏度不及酶免疫測(cè)定。第一節(jié) 膠體金免疫技術(shù)第二節(jié) 其他膜載體免疫分析技術(shù)(Section 2 Other Solid Phase Membrane-based Immunoassay)一、斑點(diǎn)酶免疫吸附試驗(yàn)（Dot-ELISA）（一）原理（二）技術(shù)要點(diǎn)抗原包被NC膜后，需封閉；抗原抗體反應(yīng)，先加待測(cè)抗體，洗滌后再加酶標(biāo)二抗；顯色：染色斑點(diǎn)。第二節(jié) 其他膜載體免疫分析技術(shù)一、斑點(diǎn)酶免疫吸附試驗(yàn)（Dot-ELISA）（三）方法學(xué)評(píng)價(jià)NC膜吸附力強(qiáng)，微量抗原吸附完全，靈敏度高；試劑用量節(jié)約；操作簡(jiǎn)單，不需特殊設(shè)備；-20可長(zhǎng)期保存。第二節(jié) 其他膜載體免疫分析技術(shù)一、斑點(diǎn)酶免疫吸附試驗(yàn)（Dot-ELISA）二、免疫印跡試驗(yàn)（IBT） 是一種將高分辨率凝膠電泳和免疫化學(xué)分析技術(shù)相結(jié)合的技術(shù)，具有分析容量大、敏感性高、特異性強(qiáng)等優(yōu)