臨床免疫學檢驗：第11章 固相膜免疫分析技術(shù)

1、第十一章 固相膜免疫分析技術(shù)(Chapter 11 Solid Phase Membrane-based Immunoassay)臨床免疫學檢驗 固相膜免疫分析技術(shù)：是以微孔膜作為固相載體，利用液體可以流過微孔膜也可以通過毛細管作用在膜上向前移行的特性，以酶標記或各種有色微粒子標記抗體或抗原作為標記物，通過抗原抗體反應(yīng)進行抗原或抗體檢測的快速檢驗方法。第十一章 固相膜免疫分析技術(shù)不需大型設(shè)備；易掌握操作要求和判定標準；家庭式保健檢測和床旁檢測。 固相膜免疫分析技術(shù)：是以微孔膜作為固相載體，利用液體可以流過微孔膜也可以通過毛細管作用在膜上向前移行的特性，以酶標記或各種有色微粒子標記抗體或抗原作為

2、標記物，通過抗原抗體反應(yīng)進行抗原或抗體檢測的快速檢驗方法。第十一章 固相膜免疫分析技術(shù)膠體金免疫技術(shù)；斑點酶免疫吸附試驗；免疫印跡試驗。第一節(jié) 膠體金免疫技術(shù)(Section 1 Colloidal Gold Immunoassay) 膠體金免疫技術(shù)：是以膠體金作為示蹤標記物或顯色劑，應(yīng)用于抗原抗體反應(yīng)的一種標記免疫檢測技術(shù)。 膠體金：由金鹽還原而得，膠體金顆粒由一個基礎(chǔ)金核（原子金Au）及包圍在外的雙離子層（內(nèi)層為負離子層AuCl2-，外層是帶正電荷的H+）構(gòu)成。由于靜電作用，金顆粒之間互相排斥而懸浮成為一種帶負點的穩(wěn)定疏水膠體。第一節(jié) 膠體金免疫技術(shù)膠體金的性質(zhì)顆粒大小多在1100nm，穩(wěn)

3、定，均勻，單一分散狀懸??；對電解質(zhì)敏感；大小不同，呈色不同。 膠體金粒徑 1枸櫞酸三鈉 膠體金特性 （nm） 加入量（ml）* 呈色 max 16 2.00 酒紅色 518nm 24.5 1.50 橙紅色 522nm 41 1.00 紅色 525nm 71.5 0.70 紫紅 535nm*還原100ml 0.01HAuCl4所需量 第一節(jié) 膠體金免疫技術(shù)膠體金的性質(zhì)免疫金 免疫金：是指膠體金與抗原或抗體等大分子物質(zhì)的結(jié)合物。一般認為是膠體金顆粒表面的負電荷與蛋白質(zhì)表面帶正電荷的基團借靜電吸附而形成牢固的結(jié)合。第一節(jié) 膠體金免疫技術(shù) 以硝酸纖維素膜為載體，并包被了抗原或抗體的滲濾裝置中，依次滴加

4、標本、免疫金及洗滌液。因微孔濾膜貼置于吸水材料上，故溶液流經(jīng)滲濾裝置時與膜上的抗原或抗體快速結(jié)合并起到濃縮作用，達到快速檢測的目的（5min）。一、斑點金免疫滲濾試驗（一）原理第一節(jié) 膠體金免疫技術(shù)一、斑點金免疫滲濾試驗（二）方法類型雙抗體夾心法；間接法（少用）。第一節(jié) 膠體金免疫技術(shù)（三）操作要點操作示意圖裝置分解圖蓋微孔膜吸水墊料底加標本、免疫金、洗滌液一、斑點金免疫滲濾試驗第一節(jié) 膠體金免疫技術(shù) 是將膠體金標記技術(shù)和蛋白質(zhì)層析技術(shù)相結(jié)合的以硝酸纖維素膜為載體的快速的固相膜免疫分析技術(shù)。滴加在膜一端的標本溶液受到載體膜的毛細管作用向另一端移動，被分析物與固定于載體膜上某一區(qū)域的抗體或抗原結(jié)

5、合而被固相化，無關(guān)物則越過該區(qū)域而被分離，然后通過膠體金的呈色條帶來判讀實驗結(jié)果。二、斑點金免疫層析試驗（一）原理GTC第一節(jié) 膠體金免疫技術(shù)（二）方法雙抗體夾心法競爭法間接法 （少用）二、斑點金免疫層析試驗第一節(jié) 膠體金免疫技術(shù)G區(qū)：金標抗體C區(qū)：抗金標抗體T區(qū)：包被抗體 吸水紙標本AB二、斑點金免疫層析試驗第一節(jié) 膠體金免疫技術(shù)標本G區(qū)：金標抗體C區(qū)：抗金標抗體T區(qū)：包被標準抗原 吸水紙陽性結(jié)果AB二、斑點金免疫層析試驗第一節(jié) 膠體金免疫技術(shù)標本G區(qū)：金標抗體C區(qū)：包被抗抗體T區(qū)：標準抗原 吸水紙陰性結(jié)果AB二、斑點金免疫層析試驗第一節(jié) 膠體金免疫技術(shù)（三）操作要點試劑條標記線一端加入標本

6、；一條棕紅線、兩條棕紅線、無棕紅色線。二、斑點金免疫層析試驗第一節(jié) 膠體金免疫技術(shù)三、臨床應(yīng)用及評價方法簡便、快速、無需特殊儀器設(shè)備，試劑穩(wěn)定；該技術(shù)不能準確定量，只能作為定性試驗；本法靈敏度不及酶免疫測定。第一節(jié) 膠體金免疫技術(shù)第二節(jié) 其他膜載體免疫分析技術(shù)(Section 2 Other Solid Phase Membrane-based Immunoassay)一、斑點酶免疫吸附試驗（Dot-ELISA）（一）原理（二）技術(shù)要點抗原包被NC膜后，需封閉；抗原抗體反應(yīng)，先加待測抗體，洗滌后再加酶標二抗；顯色：染色斑點。第二節(jié) 其他膜載體免疫分析技術(shù)一、斑點酶免疫吸附試驗（Dot-ELISA）（三）方法學評價NC膜吸附力強，微量抗原吸附完全，靈敏度高；試劑用量節(jié)約；操作簡單，不需特殊設(shè)備；-20可長期保存。第二節(jié) 其他膜載體免疫分析技術(shù)一、斑點酶免疫吸附試驗（Dot-ELISA）二、免疫印跡試驗（IBT） 是一種將高分辨率凝膠電泳和免疫化學分析技術(shù)相結(jié)合的技術(shù)，具有分析容量大、敏感性高、特異性強等優(yōu)