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1、實(shí)驗(yàn)十保健食品中超氧化物歧化酶(SOD)活性的測(cè)定(精)實(shí)驗(yàn)十保健食品中超氧化物歧化酶(SOD)活性的測(cè)定(精)3/3實(shí)驗(yàn)十保健食品中超氧化物歧化酶(SOD)活性的測(cè)定(精)實(shí)驗(yàn)十保健食品中超氧化物歧化酶(SOD)活性的測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)原理依據(jù)GB/T5009.171-2003,將25時(shí)控制鄰苯三酚自氧化速率50%所需的SOD定義為一個(gè)活力單位。在堿性條件下,鄰苯三酚會(huì)發(fā)生自氧化,可依據(jù)SOD控制鄰苯三酚自氧化能力測(cè)定SOD活力。二、實(shí)驗(yàn)試劑A液:pH8.20的0.1mol/L三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液(內(nèi)含1mmol/LEDTA2Na)。稱(chēng)取1.2114g三羥甲基氨基甲烷和37.2mgEDTA
2、2Na溶于鹽酸溶液中,用蒸餾水定溶至100ml。B液:4.5mmol/L鄰苯三酚鹽酸溶液。稱(chēng)取鄰苯三酚56.7mg溶于少許10mmol/L鹽酸溶液,并定容至100ml。鹽酸溶液:10mmol/L蒸餾水:二重石英蒸餾水三、實(shí)驗(yàn)儀器紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)精巧酸度計(jì)(0.01pH)離心計(jì)10ml比色管10ml離心管玻璃乳缽。四、測(cè)定步驟取茶葉樣品1.00g置于研缽中,加入9.0ml蒸餾水研磨5分鐘,移入10ml離心管。用少許蒸餾水沖刷研缽,洗液并入離心管中,加蒸餾水至刻度,經(jīng)4000r/min離心15分鐘,取上清液測(cè)定。在25左右,于10ml比色管中挨次加入A液2.35ml,蒸餾水2.00ml,B液0
3、.15ml。加入B液立刻混淆并傾入比色皿,分別測(cè)定在325nm波長(zhǎng)條件下初始時(shí)和1Min后吸光度值,兩者之差為鄰苯三酚自氧化速率A325(min-1)為0.060。在25左右,于10ml比色管中挨次加入20.0ul樣液或酶液,A液2.35ml,蒸餾水2.00ml,B液0.15ml。加入B液立刻混淆并傾入比色皿,分別測(cè)定在325nm波長(zhǎng)條件下初始時(shí)和1分鐘后吸光度值,兩者之差為樣液或酶液控制鄰苯三酚自氧化速率A325(min-1)。加入樣液或酶液的量使控制鄰苯三酚自氧化速率為1/2A325(min-1),即0.030。五、計(jì)算SOD活力gA325A1325A325100%4.5DV150%Vm式中:V加入樣液或酶液的體積,mlA325鄰苯三酚自氧化速率A325樣液或酶液控制鄰苯
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