特異性人免疫球蛋白穩(wěn)定性研究初探

1、特異性人免疫球蛋白穩(wěn)定性研究初探【摘要】目的檢測特異性人免疫球蛋白的制品相應(yīng)抗體含量變化情況。方法采用留樣觀察法和加速試驗(yàn)法對不同溫度條件下的特異性人免疫球蛋白有效期進(jìn)展預(yù)測。結(jié)果乙型肝炎人免疫球蛋白HBTG和破傷風(fēng)人免疫球蛋白TIG于28存放時(shí)較為穩(wěn)定，分別是放置3年、1年所檢測的各項(xiàng)指標(biāo)均無明顯變化。結(jié)論特異性人免疫球蛋白的有效期確定應(yīng)以常規(guī)觀察測得的結(jié)果為最可靠的根據(jù)?！娟P(guān)鍵詞】特異性人免疫球蛋白HBIGTIG穩(wěn)定性試驗(yàn)【Abstrat】bjetiveTdetettherelativeantibdieslevelsfspeifihuaniunglbulinprduts.ethdsThep

2、eridfvalidityfspeifihuaniunglbulinunderdifferentteperaturenditinasbservedrespetivelybyreservingsapleethdandaeleratedtest.ResultsTheresultsindiatedthathepatitisBiunglbulin(HBIg)andhuantetanusiunglbulin(TIG)ererelativelystableattheteperaturebeteen2t8.nlusinTheperidfvalidityfspeifihuaniunglbulinshuldbe

3、deterinedbasednthedatasfrutinetest.【Keyrds】speifihuaniunglbulin;HBIg;TIG;stabilitytest特異性人免疫球蛋白是用疫苗或毒素免疫人體使其血漿產(chǎn)生高效價(jià)抗體，經(jīng)低溫乙醇蛋白別離法制備并經(jīng)低pH放孵病毒滅活處理的特異性免疫球蛋白制劑，與抗毒素及抗血清相比，特異性人免疫球蛋白在使用過程中不會(huì)發(fā)生因注射異種蛋白而產(chǎn)生嚴(yán)重的過敏反響，其抗體在患者體內(nèi)維持時(shí)間較長。隨著我國醫(yī)療及安康程度的不斷進(jìn)步，特異性人免疫球蛋白在臨床上的使用越來越受到關(guān)注1,2。特異性人免疫球蛋白主要使用成分是IgG，含有針對各種不同抗原的抗體，本文對其

4、穩(wěn)定性的觀察是以抗體活性變化作為主要考察指標(biāo)，并以HBIG、TIG兩種制品為代表，通過制品在不同溫度下放置一定時(shí)間后，檢測其抗體效價(jià)等項(xiàng)指標(biāo)的變化來理解制品的穩(wěn)定性，以確定其有效期，現(xiàn)將有關(guān)試驗(yàn)方法及結(jié)果報(bào)告如下。1材料與方法11材料111特異性人免疫球蛋白HBIG、TIG均由蘭州生物制品研究所采用低溫乙醇工藝結(jié)合低pH放孵滅活病毒步驟制備而成批號分別為HBIG：20220701、20220702、20220703，200IU/支；TIG：20220401、20220402、20220403，250IU/支，均為液體劑型。112乙型肝炎外表抗體抗-HBs放射免疫分析試劑盒：3V診斷技術(shù)公司提供

5、。113抗-HBs、TIG標(biāo)準(zhǔn)品均由中國藥品生物制品檢定所提供。114儀器設(shè)備-計(jì)數(shù)器，2022G型，國營二六二廠消費(fèi)；HPL色譜柱：日本產(chǎn)G3000S，規(guī)格7.5300；紫外可見分光光度計(jì)：U-2001，日本日立公司。12方法121抗-HBs效價(jià)按2000年版?中國生物制品規(guī)程?制定，各樣品測定均重復(fù)1次，按均值計(jì)算。122抗-TT效價(jià)按?中華人民共和國藥典?2022年版三部附錄F破傷風(fēng)抗毒素效價(jià)測定法進(jìn)展，并將其檢測結(jié)果與ELISA法測定結(jié)果進(jìn)展比擬。123HBIG、TIG的單體加二聚體的檢查均按?中華人民共和國藥典?2022年版三部的要求進(jìn)展。124留樣觀察法將蘭州生物制品研究所制備的H

6、BIG制品置于28、241、371，分別于0、3、6、12、18、24及36個(gè)月取出，檢測其有關(guān)質(zhì)量指標(biāo)，同樣將上述來源的破傷風(fēng)人免疫球蛋白的TIG置于62，于0、3、6、9、12個(gè)月取樣，置于252，于0、1、2、3、6個(gè)月取樣，檢測其有關(guān)質(zhì)量指標(biāo)。2結(jié)果21抗體效價(jià)211抗-HBs效價(jià)乙型肝炎人免疫球蛋白的抗-HBs效價(jià)在不同放置條件下的變化結(jié)果見表1。結(jié)果顯示，制品在28存放3年時(shí)，抗-HBs效價(jià)無明顯改變，在241存放1年半時(shí)，抗-HBs效價(jià)平均下降32.8%，在371存放3個(gè)月后，抗-HBs效價(jià)開場明顯降低。表1HBIG在不同放置條件下的抗-HBs效價(jià)212抗-TT效價(jià)破傷風(fēng)人免疫球

7、蛋白的抗-TT效價(jià)在不同放置條件下的變化結(jié)果見表2，結(jié)果顯示，該制品在62存放1年時(shí)，破傷風(fēng)抗體效價(jià)無明顯改變；在252存放半年時(shí)，破傷風(fēng)抗體效價(jià)平均下降10.41%。22IgG單體加雙體特異性人免疫球蛋白中的IgG易于聚合，其中HBIG在28存放3年后，IgG單體加雙體平均下降了1.26%；TIG在62存放1年后，IgG單體加雙體平均下降了1.14%。但上述兩種制品在241存放6個(gè)月后單體加雙體的總和開場明顯下降，其變化情況分別見表3、表4。表2TIG在不同放置條件下的抗-TT效價(jià)表3HBIGIgG單體加雙體在不同條件下放置后的變化表4TIGIgG單體加雙體在不同條件下放置后的變化23蛋白質(zhì)

8、含量及純度HBIG、TIG蛋白質(zhì)含量及純度的穩(wěn)定性分別見表5、表6、表7、表8。從表中的情況反映出，HBIG樣品在不同溫度下28、241、371分別放置1年、2年及3年時(shí)，TIG樣品在62和252下分別放置半年和1年時(shí)，蛋白質(zhì)含量和純度根本上沒有發(fā)生改變，均說明這兩項(xiàng)指標(biāo)較為穩(wěn)定。表5HBIG不同放置條件蛋白質(zhì)含量變化情況表6HBIG不同放置條件下蛋白質(zhì)純度變化表7TIG不同放置條件蛋白質(zhì)含量變化情況表8TIG不同放置條件下蛋白質(zhì)純度變化3討論生物制品穩(wěn)定性試驗(yàn)，長期以來大多采用留樣觀察法，此法是在不同溫度下放置考察藥物制劑的穩(wěn)定性，是考察藥物穩(wěn)定性的最可靠方法，能準(zhǔn)確真實(shí)地反映制品穩(wěn)定性的實(shí)

9、際情況。本文進(jìn)展的穩(wěn)定性試驗(yàn)的方法根據(jù)?中華人民共和國藥典?2022年版附錄“原料藥與藥物制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原那么3，在人免疫球蛋白、靜注人免疫球蛋白pH4穩(wěn)定性試驗(yàn)的根底上4，5，試驗(yàn)樣品在252條件下放置6個(gè)月進(jìn)展加速穩(wěn)定性試驗(yàn)，在62條件下放置12個(gè)月、18個(gè)月、36個(gè)月進(jìn)展長期試驗(yàn)，分別檢測特異性人免疫球蛋白樣品外觀、pH值、抗體效價(jià)、純度、蛋白質(zhì)含量、IgG單體加雙體、無菌檢查、熱原質(zhì)檢查等多項(xiàng)指標(biāo)，以觀察其理化及生物學(xué)活性的變化情況，為確定此產(chǎn)品的有效期。特異性人免疫球蛋白有別于其他藥物制劑，其分子量為15萬左右，因其作用成分為蛋白質(zhì)，易受各種物理或化學(xué)因素的影響而出現(xiàn)裂解、聚合、變性等變化，造成其生物學(xué)功能下降或損失，從而使療效降低甚至失效，因此應(yīng)用上述方法進(jìn)展特異性人免疫球蛋白穩(wěn)定性觀察，對制品有效期確實(shí)定也僅是提供參考數(shù)據(jù)。其有效期確定還應(yīng)以常規(guī)留樣觀察法測定的穩(wěn)定性結(jié)果作為主要根據(jù)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1周海云，江麗君.人破傷風(fēng)免疫球蛋白及其應(yīng)用.微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展，2022，342：84-86.2周海云，曾鳴.乙型肝炎人免疫球蛋白的應(yīng)用研究.中國生物制品學(xué)雜志，2022，195：544-547.3國家藥典委員會(huì)編