方法學(xué)驗證中各項指標(biāo)的深度剖析課件

1、方法學(xué)驗證中各項指標(biāo)一、線性試驗 主成分含量測定 以測定濃度為100% ，50%120%之間選取5個點即可。 溶出（釋放）度測定 以釋放量的10%120%間選取5個點即可。 雜質(zhì)含量用雜質(zhì)對照品準(zhǔn)確測定 以雜質(zhì)限度為100% ，50%120%之間選取5個點即可。測定結(jié)果：1）闡述如何看待截距和斜率、如何應(yīng)用。2）誤差在哪里，應(yīng)用時的注意事項。3）為什么沒有不成線性的？通常C、H、O、N結(jié)構(gòu)，紫外監(jiān)測器決定。 個別化學(xué)鍵所致。梯度洗脫時，有時會出現(xiàn)不成線性。4）都成線性、為何還要做？最小二乘法的原理知曉。唑 來 磷 酸 結(jié) 構(gòu) 式引申使用：1）有關(guān)物質(zhì)測定 歸一化法和自身對照法的相互妙用。2）緩

2、釋制劑溶出度測定，對照品濃度設(shè)定為中間濃度。舉例說明。3）回收率試驗為何做80%120%即可？亦及樣品濃度與對照品濃度接近到何等程度的理解。4）國內(nèi)只注重相關(guān)系數(shù)，不注重截距。二、精密度試驗 重復(fù)性試驗：連續(xù)進樣6次。 中間精密度試驗和重現(xiàn)性試驗通過“耐用性試驗中的溶液穩(wěn)定性試驗”來體現(xiàn)。 濃度極低時才會不理想，加大進樣量。 色譜峰形極為重要，對稱性、柱效等參數(shù)。加大柱溫、增加流動相中有機相比例，使被測物質(zhì)峰盡快出峰。三、準(zhǔn)確度試驗 用回收率來衡量 作法：在80%120%間選擇3點或5點，原因是由外標(biāo)一點法決定的。 已知雜質(zhì)、且有雜質(zhì)對照品的，可采用加入法，即加樣回收率來評價。 一般情況下，只

3、要空白輔料無干擾，回收率均是良好的！專屬性試驗驗證圖譜 存在問題 配制相同濃度，測定樣品時，主成分峰驟然加大，將雜質(zhì)峰覆蓋。 強破壞試驗的目的： 驗證藥品在遭遇了極端的氣候環(huán)境條件下產(chǎn)生的雜質(zhì)，在所建立的色譜條件下是否能夠分離、測定。 檢測波長的確定 涉及到各被檢測物質(zhì)在該波長下的響應(yīng)因子是否相同，即所謂重量校正因子的問題。（f=A雜質(zhì)/A被測成分） 選取主成分與各雜質(zhì)具有相同紫外吸收的波長（f=1.0）。 選取各雜質(zhì)紫外吸收大于主成分紫外吸收的波長（f1.0），這樣可更加嚴格控制雜質(zhì)的限度。 如選取各雜質(zhì)紫外吸收小于主成分紫外吸收的波長，應(yīng)必須加入重量校正因子（f1.0），否則將得到錯誤的判

4、斷。四、檢測限 信噪比的三倍 純屬“紙上談兵”，實際測定中根本用不上。 是相對值，不是絕對值。是相對于供試品溶液濃度的多少分之一而言，一般至少要在5000倍以上。有關(guān)物質(zhì)、含量與自身對照三者濃度的關(guān)系積分參數(shù)的設(shè)定 積分參數(shù)的設(shè)定是非常重要的。由斜率(Slope)、峰寬(Width)、最小峰面積(Min Area)組成。 采用自身對照法時，對照溶液與供試品溶液必須在同一斜率、峰寬下進行積分計算。 供試品溶液最小峰面積的設(shè)定將直接導(dǎo)致測定結(jié)果。設(shè)定得太小，會導(dǎo)致很多小峰甚至是基線漂移的小峰均被積分出作為雜質(zhì)峰，從而導(dǎo)致雜質(zhì)峰面積增加，易判斷為不合格；如設(shè)定得過大，又將反映不出雜質(zhì)情況。方法學(xué)認證

5、中的耐受性試驗 是指更換試驗因素，如不同人員、不同儀器，不同色譜柱型號、廠家，不同試劑等因素。這一點才是真正至關(guān)重要的！認證時不可能做到這一點，出現(xiàn)問題時往往要考慮到。流速、柱溫與溶劑的選擇 在測定時通常調(diào)節(jié)流速使主成分保留時間稍長些，且使主成分峰不拖尾即可。 柱溫對分離效果的影響雖有一定的影響，但不甚顯著，如有柱溫箱，通常設(shè)定不超過35。 溶劑的選擇應(yīng)測定樣品溶液在該溶劑中的穩(wěn)定性來衡量，盡量勿選擇揮發(fā)性強的溶劑；同時應(yīng)保證對照溶液的主成分峰面積精密度良好。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中制訂有關(guān)物質(zhì)的原則 采用雜質(zhì)對照品法、用于降解產(chǎn)物的準(zhǔn)確測定，如氫氯噻嗪、對乙酰氨基酚等。 采用強破壞試驗破壞出雜質(zhì)。如中國藥典中的氧氟沙星所有品種，均在HPLC法的