社區(qū)常用檢驗(yàn)項(xiàng)目及其合理應(yīng)用原則課件

1、社區(qū)常用檢驗(yàn)項(xiàng)目和其合理應(yīng)用原則及各項(xiàng)檢驗(yàn)的臨床意義 孟昭彥檢驗(yàn)的特點(diǎn)和趨勢(shì) 中國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的未來(lái)發(fā)展將呈現(xiàn)五種趨勢(shì)：管理方面將向標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化方向發(fā)展，技術(shù)將向自動(dòng)化和信息化發(fā)展，檢驗(yàn)將向量知數(shù)源方向發(fā)展，人員分工向細(xì)分化方向發(fā)展，獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室也將成為重要的發(fā)展方向。檢驗(yàn)的特點(diǎn)和趨勢(shì) 第一從管理方面來(lái)說(shuō)，標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化是其未來(lái)發(fā)展的趨勢(shì)。目前，發(fā)達(dá)國(guó)家像美國(guó)、德國(guó)、法國(guó)等，已經(jīng)制定了一些關(guān)于臨床檢驗(yàn)的法律，其實(shí)這就是標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化的最高源頭。目前我國(guó)也出臺(tái)了實(shí)驗(yàn)室安全管理?xiàng)l理。另外，國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織也有大量的相關(guān)推薦性的指導(dǎo)原則出臺(tái)，強(qiáng)調(diào)的也是標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化的問(wèn)題。檢驗(yàn)的特點(diǎn)和趨勢(shì)第二就是技術(shù)。從

2、技術(shù)方面來(lái)講，自動(dòng)化、信息化應(yīng)該是其發(fā)展的一個(gè)重要趨勢(shì)。另外分子生物學(xué)也應(yīng)該是其未來(lái)發(fā)展的一個(gè)亮點(diǎn)。分子生物學(xué)的發(fā)展，人類基因突破性的解密，針對(duì)個(gè)體化的治療以后會(huì)逐步成為趨勢(shì)。個(gè)體化治療的基礎(chǔ)是什么？是要有個(gè)體化獨(dú)特的診斷。比如說(shuō)基因，每一個(gè)人都出現(xiàn)偏差不一樣，不像我們現(xiàn)在治療，例如只要得肺炎基本上都是一個(gè)處方，同一個(gè)類型的病全用一個(gè)方案治療。檢驗(yàn)的特點(diǎn)和趨勢(shì)第三，從檢驗(yàn)角度講，臨床檢驗(yàn)數(shù)源的準(zhǔn)確性問(wèn)題一直存在，甚至不同的廠家對(duì)同一檢驗(yàn)做出的結(jié)果也不一樣，同樣的機(jī)器不同廠家生產(chǎn)的也不一樣。而臨床檢驗(yàn)是給臨床診斷治療提供服務(wù)的，因此上述情況的出現(xiàn)就會(huì)給臨床診斷帶來(lái)很大困難。現(xiàn)在國(guó)際上比較強(qiáng)調(diào)量知

3、數(shù)源的問(wèn)題，這應(yīng)該是未來(lái)的一個(gè)發(fā)展趨勢(shì)。從實(shí)驗(yàn)室的告知與咨詢 常規(guī)化將來(lái)是一個(gè)趨勢(shì)。檢驗(yàn)的特點(diǎn)和趨勢(shì)第四人員分工問(wèn)題。這個(gè)方面發(fā)達(dá)國(guó)家已經(jīng)做得相當(dāng)不錯(cuò)，但在我們國(guó)家卻還只是一個(gè)發(fā)展趨勢(shì)。實(shí)際上現(xiàn)在在實(shí)驗(yàn)室、檢驗(yàn)科，工作職能沒(méi)有明確劃分，與上述所說(shuō)治療方案一樣，不論什么層次的人員，基本上都在做同一件事情，沒(méi)有真正體現(xiàn)出檢驗(yàn)的內(nèi)涵和價(jià)值。關(guān)鍵要人盡其才，使其在不同的崗位上盡可能地發(fā)揮自己的作用。因此檢驗(yàn)崗位的人員分工必須要細(xì)分，也就是說(shuō)需要有人專門做實(shí)驗(yàn)，有人專門做質(zhì)量控制，有人專門對(duì)報(bào)告進(jìn)行審核，有人專門和臨床進(jìn)行聯(lián)系等等，這樣檢驗(yàn)醫(yī)師將應(yīng)用而生。檢驗(yàn)的特點(diǎn)和趨勢(shì)近10年來(lái)，隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的快速發(fā)

4、展，檢驗(yàn)新知識(shí)新技術(shù)的不斷推出，不僅臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目增加了100%-200%,而且臨床醫(yī)師在疾病診斷、療效判斷、臨床決策方面對(duì)檢驗(yàn)的依賴度大幅度的提高，迫切需要即懂檢驗(yàn)又懂臨床的復(fù)合型人才。ISO15189醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力專用要求明確提出，醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室除了對(duì)患者的標(biāo)本進(jìn)行各種檢測(cè)外，還要求提供對(duì)結(jié)果的解釋以及實(shí)驗(yàn)室所涵蓋的范圍之內(nèi)提供正確的咨詢性服務(wù)。檢驗(yàn)醫(yī)師就是這種運(yùn)育而生人才。改變面對(duì)靜態(tài)的數(shù)據(jù)，而面對(duì)活生生的人,動(dòng)態(tài)的分析數(shù)據(jù),這是對(duì)檢驗(yàn)科的一種挑戰(zhàn)。 檢驗(yàn)的特點(diǎn)和趨勢(shì)與國(guó)外實(shí)驗(yàn)室最大差距是兩個(gè)方面（1）管理 （2）與臨床結(jié)合 檢驗(yàn)醫(yī)師 檢驗(yàn) 臨床 溝通橋梁 橋梁需要復(fù)合型人才，而我們現(xiàn)在

5、的檢驗(yàn)科隊(duì)伍缺少臨床知識(shí)，妨礙了與臨床的溝通。Schwarz提出“一個(gè)實(shí)驗(yàn)室醫(yī)學(xué)工作者沒(méi)有同臨床溝通和對(duì)話的能力是不能生存的”檢驗(yàn)的特點(diǎn)和趨勢(shì)我國(guó)現(xiàn)有的培養(yǎng)模式醫(yī)學(xué)本科畢業(yè)，經(jīng)臨床實(shí)踐取得執(zhí)業(yè)醫(yī)師執(zhí)照；再進(jìn)行檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)教育，合格后獲得檢驗(yàn)醫(yī)師的資格前3年：14個(gè)月臨床主要是內(nèi)科兒科個(gè)專業(yè)；22個(gè)月檢驗(yàn)科7個(gè)專業(yè)輪轉(zhuǎn)完成必修各專業(yè)學(xué)習(xí)后2年：檢驗(yàn)科專業(yè)組培訓(xùn)第一年在內(nèi)科選2個(gè)今后工作相關(guān)的專業(yè)各輪轉(zhuǎn)6個(gè)月第二年在檢驗(yàn)科選2專業(yè)各輪轉(zhuǎn)6個(gè)月檢驗(yàn)的特點(diǎn)和趨勢(shì)第五，獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室也是一個(gè)重要的發(fā)展趨勢(shì)。獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室的主要好處在于節(jié)省資金、保證質(zhì)量，有利于國(guó)家現(xiàn)有醫(yī)療資源的補(bǔ)充，而不是對(duì)現(xiàn)有國(guó)家醫(yī)療資源的沖擊，

6、于國(guó)于民任何一方面都是非常有利的事情。室驗(yàn)室的合并成為必然趨勢(shì)。自動(dòng)化、高容量、開放型實(shí)驗(yàn)室，該實(shí)驗(yàn)室的典型布局分為三個(gè)重要區(qū)域：中心處理區(qū)：樣品接收、處理、離心等；自動(dòng)化分析區(qū)：生化、血液、免疫化學(xué)、凝血等；手工操作區(qū)：電泳、DNA等。 LambertBeer 定律 的意義是：當(dāng)液層厚度為1cm ，物質(zhì)濃度為1molL 時(shí)在特定波 長(zhǎng)下的吸光度值。是物質(zhì)的特征性常數(shù)。在固定條件 （入射光波長(zhǎng)、溫度等）下，特定物質(zhì)的不變，這是分光光度法對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性的基礎(chǔ)。通過(guò)對(duì)已知濃度的溶液測(cè)定 其吸光度，可求得某物質(zhì)的。分光光度法 根據(jù)吸光度A測(cè)定的模式不同，又可分為幾種具體方法，常用的有：固定時(shí)間法（f

7、ixed time assay)和連續(xù)監(jiān)測(cè)法（kinetics assay）。 通常的代謝物多由固定時(shí)間法測(cè)定：監(jiān)測(cè)反應(yīng)起點(diǎn)和終點(diǎn)的吸光度A,由其差值算出待測(cè)物濃度，如GLU、UREA等； 分光光度法 酶學(xué)測(cè)定多用連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定其活性：連續(xù)監(jiān)測(cè)反應(yīng)過(guò)程中線性期的一系列吸光度A，從而得出待測(cè)物活性濃度，如ALT、AST等。 由于這些方法中多有工具酶的應(yīng)用，考慮到酶的不穩(wěn)定性，所以要特別注意待測(cè)體液中干擾物的影響，如藥物、脂血等。分光光度技術(shù)的定量方法 1標(biāo)準(zhǔn)曲線法 根據(jù)LambertBeer 定律，液體的濃度在一定范圍內(nèi)與吸光度成正比關(guān)系。配制一系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 （濃度應(yīng)包含高、中、低濃度范

8、圍），按標(biāo)本處理方法作相同處理，在特定波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)液濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，按最小二乘法的原理，將對(duì)應(yīng)各點(diǎn)連成一條通過(guò)原點(diǎn)的直線，這條直線稱為標(biāo)準(zhǔn)曲線。待測(cè)溶液測(cè)定吸光度后，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上可查出其相應(yīng)的濃度。制作和應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)應(yīng)注意下面幾點(diǎn)： 常用生化檢測(cè)項(xiàng)目分析方法舉例 1終點(diǎn)法 終點(diǎn)法檢測(cè)被測(cè)物質(zhì)在反應(yīng)過(guò)程中完全被轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物，即達(dá)到反應(yīng)終點(diǎn)，根據(jù)終點(diǎn)吸光度的大小求出被測(cè)物濃度，稱為終點(diǎn)法（end essay）。實(shí)際上被測(cè)物并沒(méi)有完全被轉(zhuǎn)變，而只是與產(chǎn)物達(dá)到一個(gè)動(dòng)態(tài)的化學(xué)平衡，因此該法稱為平衡法更為恰當(dāng)。從時(shí)間-吸光度曲線來(lái)看，到達(dá)反應(yīng)終點(diǎn)或平衡點(diǎn)時(shí)，吸光度將不再變化。

9、1終點(diǎn)法分析儀通常在反應(yīng)終點(diǎn)附近連續(xù)選擇兩個(gè)吸光度值，求出其平均值計(jì)算結(jié)果，并可根據(jù)兩點(diǎn)的吸光度差來(lái)判斷反應(yīng)是否到達(dá)反應(yīng)終點(diǎn)。終點(diǎn)法參數(shù)設(shè)置簡(jiǎn)單，反應(yīng)時(shí)間一般較長(zhǎng)，精密度較好。終點(diǎn)時(shí)間的確定： 1終點(diǎn)法根據(jù)時(shí)間-吸光度曲線來(lái)確定，如Trinder反應(yīng)測(cè)定尿酸，反應(yīng)曲線上35min時(shí)其吸光度已趨向穩(wěn)定，因而可將5min作為反應(yīng)終點(diǎn)。根據(jù)被測(cè)物反應(yīng)終點(diǎn)，結(jié)合干擾物的反應(yīng)情況來(lái)確定，如在血清白蛋白的溴甲酚綠法測(cè)定中，白蛋白與溴甲酚綠在10s內(nèi)很快完成反應(yīng)，之后球蛋白和球蛋白與溴甲酚綠發(fā)生 “慢反應(yīng)”，使反應(yīng)曲線上吸光度在10s后仍繼續(xù)緩慢上升，持續(xù)約達(dá)10min，因此終點(diǎn)時(shí)間應(yīng)采用1030s，而不應(yīng)

10、選擇10min。1終點(diǎn)法a一點(diǎn)終點(diǎn)法 在反應(yīng)到達(dá)終點(diǎn)，即在時(shí)間-吸光度曲線上吸光度不再改變時(shí)選擇一個(gè)終點(diǎn)吸光度值，這種方法稱為一點(diǎn)終點(diǎn)法（one point end essay），其反應(yīng)曲線見圖7-3。其檢測(cè)結(jié)果的計(jì)算公式是：待測(cè)物濃度CU=（待測(cè)吸光度AU試劑空白吸光度AB）K。 K為校準(zhǔn)系數(shù)。1終點(diǎn)法b兩點(diǎn)終點(diǎn)法 在被測(cè)物反應(yīng)或指示反應(yīng)尚未開始時(shí)，選擇第一個(gè)吸光度，在反應(yīng)到達(dá)終點(diǎn)或平衡時(shí)選擇第二個(gè)吸光度，此兩點(diǎn)吸光度之差用于計(jì)算結(jié)果，稱為兩點(diǎn)終點(diǎn)法（two point end essay）。計(jì)算公式為CU=（待測(cè)吸光度A2待測(cè)吸光度A1）K。1終點(diǎn)法該法能有效地消除溶血（hemolysis

11、）、黃疸（icterus）和脂濁（lipo-turbid）等樣品本身光吸收造成的干擾。在單試劑分析加入試劑的初期、或雙試劑分析中第二試劑加入之初，若指示反應(yīng)吸光度尚未明顯變化，則可在此時(shí)選擇第一個(gè)吸光度，在指示反應(yīng)終點(diǎn)時(shí)選擇第二個(gè)吸光度，從而設(shè)置成兩點(diǎn)終點(diǎn)法。1終點(diǎn)法但指示反應(yīng)初期吸光度無(wú)明顯變化的化學(xué)反應(yīng)較少，如單試劑方式測(cè)定總蛋白、白蛋白、鈣、磷、鎂等的終點(diǎn)法分析項(xiàng)目，及雙試劑方式測(cè)定葡萄糖、總膽固醇、甘油三酯等的終點(diǎn)法分析項(xiàng)目，因反應(yīng)初期吸光度已有明顯變化，因而均難以用上述方式設(shè)置兩點(diǎn)終點(diǎn)法。但在雙試劑分析中，如果將第一吸光度選擇在第二試劑加入前，此時(shí)指示反應(yīng)一般尚未開始，則能容易設(shè)置兩

12、點(diǎn)終點(diǎn)法。在此要注意必須將兩次讀吸光度時(shí)不同比色液體積進(jìn)行校正。1終點(diǎn)法目前全自動(dòng)分析儀均具有此自動(dòng)校正功能，不必手工進(jìn)行校正。常用的有總膽紅素（氧化法或重氮法）、結(jié)合膽紅素（氧化法或重氮法）、血清總蛋白（雙縮脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸（尿酸酶法）、總膽固醇（膽固醇氧化酶法）、甘油三酯（磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白膽固醇（直接測(cè)定法）、鈣（偶氮砷法）、磷（紫外法）、鎂（二甲苯胺藍(lán)法）等。1終點(diǎn)法以上項(xiàng)目中，除鈣、磷和鎂基本上還使用單試劑方式分析因而采用一點(diǎn)終點(diǎn)法外，其它測(cè)定項(xiàng)目都可使用雙試劑故能選用兩點(diǎn)終點(diǎn)法，包括總蛋白、白蛋白測(cè)定均已有雙試劑可用。

13、2固定時(shí)間法 在80120s及其以后，堿性苦味可與蛋白質(zhì)以及其它慢反應(yīng)干擾物反應(yīng)。這樣選用反應(yīng)的第二個(gè)30s為測(cè)定時(shí)間，既避免了快反應(yīng)物質(zhì)的干擾，也避免了慢反應(yīng)物質(zhì)的影響，使肌酐濃度與吸光度變化呈良好的線性關(guān)系，有利于提高分析的特異性和準(zhǔn)確度。 苦味酸法測(cè)定肌酐采用此法。 3連續(xù)監(jiān)測(cè)法 連續(xù)監(jiān)測(cè)法（continuous monitoring essay）又稱速率法（rate essay），是在測(cè)定酶活性或用酶法測(cè)定代謝產(chǎn)物時(shí)，連續(xù)選取時(shí)間-吸光度曲線中線性期的吸光度值，并以此線性期的單位吸光度變化值（A/min）計(jì)算結(jié)果 。3連續(xù)監(jiān)測(cè)法連續(xù)監(jiān)測(cè)法的優(yōu)點(diǎn)即是可以確定線性期并計(jì)算A/min，根據(jù)此

14、值再準(zhǔn)確地計(jì)算酶活性，因而使自動(dòng)生化分析儀在酶活性測(cè)定方面顯著地優(yōu)于手工法。連續(xù)監(jiān)測(cè)法也可用于測(cè)定呈線性反應(yīng)的代謝物濃度，一般是某些基于酶法測(cè)定的代謝物。3連續(xù)監(jiān)測(cè)法對(duì)于酶活性測(cè)定一般應(yīng)選用連續(xù)監(jiān)測(cè)法，如丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶、谷氨氨酰基轉(zhuǎn)移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。一些代謝物酶法測(cè)定的項(xiàng)目如己糖激酶法測(cè)定葡萄糖、脲酶偶聯(lián)法測(cè)定尿素等，也可用連續(xù)監(jiān)測(cè)法。 4透射比濁法 抗原與相應(yīng)的抗體結(jié)合形成的免疫復(fù)合物，在反應(yīng)液中具有一定的濁度，可由一般分光光度法進(jìn)行透射比濁（transmission turbidimetry）測(cè)定，可用于某些蛋白質(zhì)和藥物濃度等的測(cè)定。

15、4透射比濁法該法須做多點(diǎn)校準(zhǔn)，再經(jīng)非線性回歸，求出抗原或抗體的含量。使用散射比濁法（scatter turbidimetry）能更加準(zhǔn)確快速地檢測(cè)抗原抗體形成濁度的大小或其速度，目前專用的特定蛋白分析儀可做此法檢測(cè)。4透射比濁法透射比濁法可用于測(cè)定產(chǎn)生濁度反應(yīng)的項(xiàng)目，多數(shù)屬免疫比濁法，載脂蛋白、免疫球蛋白、補(bǔ)體、抗O、類風(fēng)濕因子，以及血清中的其他蛋白質(zhì)如前白蛋白、結(jié)合珠蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白等均可用此法。 半自動(dòng)生化儀的簡(jiǎn)單使用一、分析參數(shù)介紹（一）必選分析參數(shù)這類參數(shù)是分析儀檢測(cè)的前提條件，沒(méi)有這些參數(shù)無(wú)法進(jìn)行檢測(cè)。1試驗(yàn)名稱 試驗(yàn)名稱（test code）是指測(cè)定項(xiàng)目的標(biāo)示符，常以項(xiàng)目的英文縮寫來(lái)

16、表示。半自動(dòng)生化儀的簡(jiǎn)單使用2方法類型（也稱反應(yīng)模式） 方法類型（assay）有終點(diǎn)法、兩點(diǎn)法、連續(xù)監(jiān)測(cè)法等，根據(jù)被檢物質(zhì)的檢測(cè)方法原理選擇其中一種反應(yīng)類型。半自動(dòng)生化儀的簡(jiǎn)單使用3反應(yīng)溫度 一般有30、37可供選擇，通常固定為37。4主波長(zhǎng) 主波長(zhǎng)（primary wavelength）是指定一個(gè)與被測(cè)物質(zhì)反應(yīng)產(chǎn)物的光吸收有關(guān)的波長(zhǎng)。半自動(dòng)生化儀的簡(jiǎn)單使用5次波長(zhǎng) 次波長(zhǎng)（secondary wavelength）是在使用雙波長(zhǎng)時(shí)，要指定一個(gè)與主波長(zhǎng)、干擾物質(zhì)光吸收有關(guān)的波長(zhǎng)。半自動(dòng)生化儀的簡(jiǎn)單使用6.試劑量及標(biāo)本量。 7孵育時(shí)間 孵育時(shí)間（incubate time）在終點(diǎn)法是樣品與試劑混

17、勻開始至反應(yīng)終點(diǎn)為止的時(shí)間，在兩點(diǎn)法是第一個(gè)吸光度選擇點(diǎn)開始至第二個(gè)吸光度選擇點(diǎn)為止的時(shí)間。8延遲時(shí)間 延遲時(shí)間（delay time）在連續(xù)監(jiān)測(cè)法中樣品與反應(yīng)試劑（第二試劑）混勻開始至連續(xù)監(jiān)測(cè)期第一個(gè)吸光度選擇點(diǎn)之間的時(shí)間。 半自動(dòng)生化儀的簡(jiǎn)單使用9連續(xù)監(jiān)測(cè)時(shí)間 連續(xù)監(jiān)測(cè)時(shí)continuous monitoring time）在延遲時(shí)間之后即開始，一般為60120s，不少于4個(gè)吸光度檢測(cè)點(diǎn)（3個(gè)吸光度變化值）。10校準(zhǔn)液個(gè)數(shù)及濃度 校準(zhǔn)曲線線性好并通過(guò)坐標(biāo)零點(diǎn)的，可采用一個(gè)校準(zhǔn)液（calibrator）；線性好但不通過(guò)坐標(biāo)零點(diǎn)，應(yīng)使用兩個(gè)校準(zhǔn)液；對(duì)于校準(zhǔn)曲線呈非線性者，必須使用兩個(gè)以上校準(zhǔn)液

18、。每一個(gè)校準(zhǔn)液都要有一個(gè)合適的濃度。半自動(dòng)生化儀的簡(jiǎn)單使用11校準(zhǔn)K值或理論K值 通過(guò)校準(zhǔn)得到的K值為校準(zhǔn)K值（calibrate coefficient）或由計(jì)算得出的K值為理論K值。12線性范圍 即方法的線性范圍（linearity range），超過(guò)此范圍應(yīng)增加樣品量或減少樣品量重測(cè)。與試劑/樣品比值有關(guān)。13小數(shù)點(diǎn)位數(shù) 檢測(cè)結(jié)果的小數(shù)點(diǎn)位數(shù)（decimal point digit）。半自動(dòng)生化儀的簡(jiǎn)單使用二、定標(biāo) 校準(zhǔn)液個(gè)數(shù)及濃度 校準(zhǔn)曲線線性好并通過(guò)坐標(biāo)零點(diǎn)的，可采用一個(gè)校準(zhǔn)液（calibrator）；線性好但不通過(guò)坐標(biāo)零點(diǎn)，應(yīng)使用兩個(gè)校準(zhǔn)液；對(duì)于校準(zhǔn)曲線呈非線性者，必須使用兩個(gè)以上

19、校準(zhǔn)液。每一個(gè)校準(zhǔn)液都要有一個(gè)合適的濃度。以上參數(shù)及操作可參考相應(yīng)操作規(guī)程及試劑說(shuō)明書電化學(xué)方法:離子電極法：K/Na/Cl分析儀，常用的EasyLyte K/Na/Cl分析儀。 無(wú)論是全自動(dòng)還是半自動(dòng)生化分析儀無(wú)非都是應(yīng)用上述方法的，差別主要在其自動(dòng)化程度。其分析程序主要是： 1）以標(biāo)準(zhǔn)物測(cè)定取標(biāo)準(zhǔn)曲線 2）測(cè)定待測(cè)物，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出相應(yīng)值 3）結(jié)果合理性分析免疫學(xué)方法 隨著學(xué)科間的相互滲透，免疫學(xué)涉及的范圍不斷擴(kuò)大，新的免疫學(xué)檢測(cè)方法層出不窮。免疫學(xué)方法的應(yīng)用范圍亦在日益擴(kuò)大，不僅成為多種臨床疾病診斷的重要方法，也為眾多學(xué)科的研究提供了方便。放射免疫、酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)、化學(xué)發(fā)光和電化學(xué)發(fā)

20、光。 免疫學(xué)方法 免疫學(xué)檢測(cè)方法是應(yīng)用免疫學(xué)理論設(shè)計(jì)的一系列測(cè)定抗原、抗體、免疫細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子的實(shí)驗(yàn)方法，就是利用抗原抗體結(jié)合反應(yīng)來(lái)完成測(cè)定。 這里主要介紹酶免疫法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)免疫酶技術(shù)(immunoenzymatic technique) 是用標(biāo)記的抗體與標(biāo)本中的抗原發(fā)生特異性結(jié)合，當(dāng)加入酶的底物時(shí)，在酶的作用下經(jīng)一系列生化反應(yīng)產(chǎn)生有色物質(zhì)，借助光鏡作出定位判斷。目前，應(yīng)用最廣泛的是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)該法特異性強(qiáng)，敏感性高，既可檢測(cè)抗體，又能測(cè)定可溶性抗原。主要方法及操作要領(lǐng)見圖。除

21、了圖示的兩種方法外，還有抗原競(jìng)爭(zhēng)法，現(xiàn)較少應(yīng)用。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn) ELISA常采用的酶為辣根過(guò)氧化物酶(hosradish peroxidase，HRP)，其底物是二氨基苯胺(DAB)，底物被分解則呈棕褐色，可目測(cè)或借助酶標(biāo)儀比色。ELISA為非均相免疫測(cè)定。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)由于酶免疫測(cè)定無(wú)需特殊儀器和試劑，且操作簡(jiǎn)便，利于普及。因此，在免疫標(biāo)記技術(shù)中，該法應(yīng)用最為廣泛，并在原有方法基礎(chǔ)上加以改良，使得眾多新的，更敏感的方法應(yīng)運(yùn)而生。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)生物素-親和素放大系統(tǒng)(biotin-avidin system，BAS)，建立于70年代后期，通過(guò)將酶標(biāo)記在生物素或親和素上，借助生物素與親和素

22、的高度親力和生物素能與抗體結(jié)合的特點(diǎn)應(yīng)用于ELISA，顯著提高了檢測(cè)的敏感性。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)雙表位ELISA(two-site ELISA)，其方法同雙抗體夾心法，只是將包被的抗體和酶標(biāo)抗體換成針對(duì)兩個(gè)不同抗原決定簇的單抗，用于檢測(cè)單抗的親和性及表位特異性，亦可用于標(biāo)本中抗原的快速檢測(cè)，即在試驗(yàn)時(shí)可將待測(cè)抗原與酶標(biāo)單抗同時(shí)加入反應(yīng)體系，減少檢測(cè)步驟。 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)斑點(diǎn)免疫滲濾試驗(yàn)(dot immunofiltration assay，DIFA)，其原理與ELISA相同，但以微孔膜(如硝酸纖維素膜、尼龍膜等)代替聚苯乙烯板作載體。試驗(yàn)時(shí)，將包被有抗原或抗體的微孔濾膜貼置于吸水材料上，依次滴

23、加的標(biāo)本、酶結(jié)合物、底物，分別進(jìn)行洗滌，多余的標(biāo)本和酶標(biāo)抗體及洗滌液等可滲濾入吸水材料中，最后陽(yáng)性標(biāo)本在膜上呈現(xiàn)著色斑點(diǎn)。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)酶聯(lián)免疫電轉(zhuǎn)移印漬法(enzyme linked immunoelectrotransferblot，ELIB)，該法將免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)與酶標(biāo)技術(shù)相結(jié)合，有利于分析和檢測(cè)更加復(fù)雜的抗原成分。ELIB分三階段進(jìn)行。第一階段為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，先將抗原分成不同的區(qū)帶(肉眼不可見)；第二階段為轉(zhuǎn)移電泳，即將凝膠上的電泳區(qū)帶經(jīng)電泳轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上；第三階段為酶免疫定位，用特異性抗體和酶標(biāo)抗抗體作間接ELISA，結(jié)果陽(yáng)性區(qū)帶呈顯色反應(yīng)。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn) 目前

24、免疫學(xué)測(cè)定主要以此類方法為主：各類微生物的血清學(xué)常規(guī)檢測(cè)如：HBV、HCV和結(jié)核等其他方法(一)凝集反應(yīng)(agglutination) 指顆粒性抗原(細(xì)菌、細(xì)胞等)與相應(yīng)的抗體，或可溶性抗原(亦可用抗體)吸附于與免疫無(wú)關(guān)的載體形成致敏顆粒(免疫微球)與相應(yīng)的抗體(或抗原)，在有適量電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見的凝集小塊。例如臨床實(shí)驗(yàn)室常用的診斷傷寒或副傷寒的肥達(dá)氏試驗(yàn)(Widal test)；診斷布魯氏菌病的瑞特氏實(shí)驗(yàn)(Wrig test)及診斷斑疹傷寒及恙蟲病的外裴二氏試驗(yàn)(Weil felix test) 等（二）免疫熒光技術(shù)(immunofluorescence techniques) 該

25、法是以熒光素，如異硫氰酸熒光素(fluorescence isothiocyanate，F(xiàn)ITC)、羅丹明等標(biāo)記抗體或抗原，以檢測(cè)標(biāo)本中抗原或抗體的方法。免疫熒光技術(shù)也包括兩種基本類型，即熒光抗體染色(fluorescentantiboby technique)和熒光免疫測(cè)定(fluorescein immunoassay)。有自身抗體的測(cè)定 （三）放射免疫測(cè)定(radioimmunoassay，RIA) RIA是最敏感的免疫標(biāo)記技術(shù)，精確度高且易規(guī)格化和自動(dòng)化。但由于放射性同位素有一定的危害性，使其臨床應(yīng)用受到一定限制。目前主要應(yīng)用于激素(如HCG、胰島素)和藥物濃度的檢測(cè)。 （四）免疫膠體

26、金標(biāo)記技術(shù)(immunologic colloidal gold signature，ICS) 膠體金是分散相粒子的金溶液，經(jīng)凝聚法制成的金溶膠顆粒表面帶有較多電荷，能吸附抗體形成金標(biāo)記的抗體。膠體金標(biāo)記技術(shù)發(fā)展較快，如膠體金斑點(diǎn)滲濾試驗(yàn)和膠體金斑點(diǎn)免疫層析試驗(yàn)，尤其是后者檢測(cè)敏感度高，操作簡(jiǎn)單，時(shí)間短，12分鐘即可出現(xiàn)結(jié)果，已應(yīng)用于HCG和手術(shù)和輸血前的急診檢測(cè)。 *分子生物學(xué)方法 現(xiàn)代分子生物學(xué)是研究生物大分子-核酸及其表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、功能、遺傳、調(diào)控、相互關(guān)系和相互作用，從分子水平上探討生命現(xiàn)象的科學(xué)，其主要研究對(duì)象是核酸（DNA和RNA）和蛋白質(zhì)。 。分子生物學(xué)方法將分子生物學(xué)技

27、術(shù)應(yīng)用到臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)，使疾病診斷深入到基因水平，稱為基因診斷。基因診斷技術(shù)主要包括核酸分子雜交技術(shù)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)、基因多態(tài)性分析技術(shù)、單鏈構(gòu)象多態(tài)性（SSCP）分析技術(shù)、熒光原位雜交染色體分析（FISH）技術(shù)、波譜核型分析（SKY）技術(shù)、DNA測(cè)序技術(shù)、基因芯片技術(shù)以及蛋白質(zhì)組技術(shù)等，一些先進(jìn)的分離和檢測(cè)技術(shù)大大促進(jìn)了上述技術(shù)的完善和發(fā)展，如毛細(xì)管電泳技術(shù)（CE）、液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)（LC/MS/MS）、變性高效液相色譜技術(shù)（DHPLC）、非熒光遺傳標(biāo)記分析技術(shù)等。分子生物學(xué)方法基因診斷在感染性疾病、遺傳性疾病、腫瘤性疾病等的診斷中發(fā)揮越來(lái)越重要的作用。下面，我們就臨床檢驗(yàn)診斷中涉

28、及的主要分子生物學(xué)技術(shù)作一簡(jiǎn)要介紹分子生物學(xué)方法 1核酸分子雜交技術(shù)即基因探針技術(shù)。利用核酸的變性、復(fù)性和堿基互補(bǔ)配對(duì)的原理，用已知的探針序列檢測(cè)樣本中是否含有與之配對(duì)的核苷酸序列的技術(shù)。是臨床應(yīng)用最早的，也是最基礎(chǔ)的分子生物學(xué)技術(shù)，是印跡雜交、基因芯片等技術(shù)的基礎(chǔ)。不少探針已經(jīng)商品化。分子生物學(xué)方法 2 PCR基本原理： PCR技術(shù)實(shí)際上是在模扳DNA、引物和4種脫氧核苷酸存在的條件下，依賴于DNA聚合酶的酶促合成反應(yīng)。變性：加熱使模扳DNA雙鏈間氫鍵斷裂而 形成兩條單鏈。退火：突然降溫后模扳DNA與引物按堿基 配對(duì)原則互補(bǔ)結(jié)合。延伸：在DNA聚合酶及Mg+等存在的條 件下，從引物的3端開始

29、，結(jié)合 單核苷酸，形成與模扳鏈互補(bǔ)的 DNA鏈。PCR擴(kuò)增過(guò)程PCR 循環(huán) 第一步 加熱變性靶序列靶序列靶序列PCR 循環(huán)- 第二步 引物與靶序列退火靶序列靶序列Primer 1Primer 2BiotinBiotin53553533PCR 循環(huán) - 第三步 - 引物延伸靶序列靶序列Primer 1Primer 2BiotinBiotin53553533Taq DNAPolymerase第1個(gè) PCR 循環(huán)完成后 得到兩個(gè)拷貝的靶序列靶序列 靶序列BiotinBiotin 熒光探針標(biāo)記法 TaqMan探針?lè)ㄊ歉叨忍禺惖亩縋CR技術(shù)，其核心是利用Taq酶53外切核酸酶活性，切斷探針，產(chǎn)生熒光信

30、號(hào)。由于探針與模板是特異性結(jié)合，所以熒光信號(hào)的強(qiáng)弱就代表了模板的數(shù)量。熒光探針標(biāo)記法圖示PCR擴(kuò)增過(guò)程圖示分子生物學(xué)方法3基因多態(tài)性分析技術(shù) 在人群中，各個(gè)體基因的核苷酸序列會(huì)存在一定差異，稱為基因多態(tài)性?；蚨鄳B(tài)性位點(diǎn)普遍存在于人的基因組中，并按孟德爾遺傳方式遺傳。如果在某個(gè)家庭中，某一致病基因與特定的多態(tài)性片段緊密連鎖，就可以用這一多態(tài)性片段作為一種“遺傳標(biāo)記”來(lái)判斷家庭成員或胎兒是否攜帶有致病基因。分子生物學(xué)方法目前認(rèn)為基因多態(tài)性是個(gè)體的“身份證”；有的雖然不表現(xiàn)疾病，但也許會(huì)影響對(duì)藥物的反應(yīng)和用藥效果。因此，基因多態(tài)性分析技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于群體遺傳學(xué)研究、疾病連鎖分析和關(guān)聯(lián)分析、疾病遺

31、傳機(jī)制研究、腫瘤易感性研究、個(gè)性化用藥等諸多方面。 主要用于體內(nèi)有形成分的測(cè)定：血液細(xì)胞學(xué)、尿有形成分等的檢測(cè)。 形態(tài)學(xué)方法顯微鏡下形態(tài)學(xué)檢查：通過(guò)特殊的染色方法分析血液、體液有形成分的鏡下形態(tài)。此外常用的還有手工血常規(guī)的測(cè)定，針對(duì)一些血液病患者以及其它不適合靜脈采血的患者。 尿沉渣顯微鏡檢查尿液有形成分有細(xì)胞、管型、結(jié)晶、細(xì)菌、寄生蟲等，這些物質(zhì)雖然具有不同的形態(tài)，但是由于細(xì)胞太小，肉眼不能看見，利用顯微鏡放大的特性能夠?qū)⒛蛞撼猎械挠行纬煞址糯?，根?jù)細(xì)胞形態(tài)加以識(shí)別鑒定。異常白細(xì)胞異常白細(xì)胞1、 中性粒細(xì)胞包括核象變化(核左移、核右移)，毒性變化(細(xì)胞大小不均、毒性顆粒、空泡、奧氏小體和核

32、棘突)與退行性變。2 、異型淋巴細(xì)胞包括空泡型、不規(guī)則型、幼稚型。血液分析儀：基本原理主要關(guān)注細(xì)胞大小。血紅蛋白采用光電比色法， 同分光光度法。有 二分類儀、三分類儀、五分類儀等，分類越多，涉及方法越多，如光散射、細(xì)胞染色等。 注意細(xì)胞的分布狀態(tài)-考慮三分類血液分析儀： 血細(xì)胞計(jì)數(shù)采用電阻抗法，即在細(xì)胞檢測(cè)器微孔的兩側(cè)各有一個(gè)電極，兩電極間通有恒定電流，經(jīng)過(guò)稀釋液(電解質(zhì)溶液)稀釋的血樣(血細(xì)胞)在通過(guò)檢測(cè)器微孔時(shí)，產(chǎn)生廠一個(gè)電脈沖；脈沖的高低代表細(xì)胞體積的大小，脈沖的個(gè)數(shù)代表細(xì)胞的數(shù)量。干擾因素.1嚴(yán)重的黃疸或脂血使血紅蛋白結(jié)果假性增高。.2紅細(xì)胞冷凝集可使紅細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)結(jié)果假性減低，白

33、細(xì)胞假性增高(電阻抗法)和MCV假性增高。干擾因素.3冷凝球蛋白增高使白細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)結(jié)果假性增高。.4有血小板凝集者可使血小板計(jì)數(shù)結(jié)果假性減低。尿液分析方法學(xué)和檢測(cè)方法的類別 化學(xué)成分粗篩 物 理 檢 查 有形成分細(xì)篩尿干化學(xué)分析儀(手工,半自動(dòng)或 全自動(dòng))目視或自動(dòng)分析外觀,顏色,濁度 折射率儀,滲透壓儀尿流式分析儀顯微鏡檢查和染色技術(shù)體外腎活檢尿干化學(xué)檢查的群體模式試帶的檢查結(jié)果 WBC RBC PRO NIT pH7重要提示:上述項(xiàng)目中,只要有一項(xiàng)陽(yáng)性,就要注意病變的可能性,進(jìn)行尿沉渣流式細(xì)胞的定量檢查,及顯微鏡檢查2）尿液分析儀：通過(guò)檢測(cè)尿液的顏色、濁度、pH、比重、蛋白、葡萄糖、

34、酮體、亞硝酸鹽、膽紅素、尿膽原、紅細(xì)胞、白細(xì)胞，不僅能診斷與泌尿系統(tǒng)有關(guān)的疾病，而且能夠?yàn)榕袛嘀委熂膊〉男Ч峁┚€索和依據(jù)。尿液分析儀原理-干化學(xué)校正（空白）尿在試紙塊上分布的狀態(tài)及尿本身的顏色，一般都會(huì)給測(cè)定結(jié)果帶來(lái)誤差，設(shè)空白塊就是為了排除這些產(chǎn)生誤差的因素。除隱血一項(xiàng)外，各項(xiàng)目都使用同一空白塊。pH通過(guò)pH指示劑，測(cè)定理4.59范圍內(nèi)的pH值，正常人的新鮮尿液pH值在57之間。 亞硝酸鹽反應(yīng)依賴于尿中革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌把硝酸鹽還原成亞硝酸鹽，亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯砷酸反應(yīng)生成重氮化合物，重氮化合物再與萘基乙二胺二酸結(jié)合呈現(xiàn)出桃紅色。尿液分析儀原理葡萄糖根據(jù)葡萄糖氧化酶法反應(yīng)原理，葡萄糖氧化酶把-

35、D-葡萄糖進(jìn)行特異性氧化，生成葡萄糖酸和過(guò)氧化氫，過(guò)氧化氫在氧化物酶的作用下，把指示劑氧化而呈現(xiàn)出藍(lán)色（10為紅褐色），如果采集尿液的容器殘留氧化性的消毒劑可能出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。 蛋白質(zhì)根據(jù)染料結(jié)合的蛋白質(zhì)誤差法原理，蛋白質(zhì)與染料結(jié)合形成復(fù)合物產(chǎn)生色變，特別是對(duì)白蛋白的反應(yīng)比對(duì)球蛋白、血紅蛋白、本周氏蛋白更為靈敏，高比重尿會(huì)引起結(jié)果偏高，高比重尿、堿性尿和清洗劑之類物質(zhì)都有可能影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。尿液分析儀原理隱血根據(jù)血紅蛋白接觸活性原理，通過(guò)尿中的過(guò)氧化物酶分解過(guò)氧化物，使鄰聯(lián)甲苯胺氧化呈色，強(qiáng)氧化劑可能造成假陽(yáng)性。尿比重利用多聚電解質(zhì)方法，尿離子的酸濃度與折射率相關(guān)的原理，陽(yáng)離子存在時(shí)，質(zhì)子通

36、過(guò)中和物釋出，對(duì)百里酚藍(lán)指示劑起顏色反應(yīng)，顏色由藍(lán)經(jīng)藍(lán)綠最后變成黃色，一般地尿比重檢測(cè)量不受尿中非離子物質(zhì)的影響。 尿液分析儀原理膽紅素根據(jù)偶氮偶合法的原理，對(duì)氨基苯磺酸重氮肥鹽與膽紅素進(jìn)行特異性反應(yīng)，并與膽紅素的濃度相對(duì)應(yīng)產(chǎn)生不同的色階，在低pH值的情況下，一些藥物代謝物會(huì)給出假陽(yáng)性結(jié)果（如吲哚硫酸等）；當(dāng)Vc達(dá)到14mmol/L以上亦可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果。尿膽素原根據(jù)偶氮偶合法的原理3,3二甲氧聯(lián)苯4,4重氮四氟化硼酸鹽與尿膽原進(jìn)行特異反應(yīng)呈現(xiàn)出桃紅色，某些藥物可導(dǎo)致輕微陽(yáng)性結(jié)果，例如非那吡啶等藥物可導(dǎo)致試紙?jiān)谒嵝越橘|(zhì)中呈紅色尿液分析儀原理酮體根據(jù)硝普酸鈉法原理，硝普酸鈉和酮體（丙酮、乙酰乙

37、酸、羥基丁酸）在堿性條件下相作用而呈現(xiàn)紫色，特別是乙酰乙酸對(duì)此特別靈敏。 白細(xì)胞根據(jù)酯酶法的原理，將尿中的白細(xì)胞轉(zhuǎn)化為酯酶的測(cè)定，這種酶能水解一種3羥基吡咯類底物，釋出酚從而與重氮試劑反應(yīng)生成紫紅色化合物。高比重尿、淋巴細(xì)胞尿、高葡萄糖（1020g/L以上）及室溫較低時(shí)（20以下）可造成白細(xì)胞測(cè)定結(jié)果偏低或假陰性。尿液分析儀原理維生素C根據(jù)Tillmans Reagent的原理,Vc將染料由藍(lán)色還原成紅色，本項(xiàng)目的測(cè)定目的是為了給使用者提供樣本中Vc的含量以判斷其可能存在的干擾。 尿沉渣干擾因素 尿液放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，鹽類結(jié)晶析出、尿膽原轉(zhuǎn)變?yōu)槟蚰懰?、?xì)菌增殖和腐敗、尿素分解，均可使尿液顏色加深和

38、透明度降低。尿液中蛋白和糖對(duì)折射儀法測(cè)定尿液比重產(chǎn)生干擾，按教科書規(guī)定，每增加10gL蛋白質(zhì)，在原測(cè)定值的基礎(chǔ)上減去0.005；每增加l0gL葡萄糖，應(yīng)從原測(cè)定值的基礎(chǔ)上減去0.004?；鞚崮蛞杭凹?xì)胞尿液也可影響尿液比重測(cè)定。 尿液標(biāo)本必須新鮮，變質(zhì)的尿液會(huì)使尿pH發(fā)生變化，或者尿液本身過(guò)酸、過(guò)堿都會(huì)影響尿蛋白檢測(cè)結(jié)果。 尿干擾因素干化學(xué)法對(duì)球蛋白的敏感性較低。尿液中青霉素濃度達(dá)到一定濃度時(shí)，對(duì)干化學(xué)法尿蛋白測(cè)定產(chǎn)生假陰性。 高濃度維生素c、高濃度酮體尿可引起干化學(xué)法測(cè)定尿糖出現(xiàn)假陰性；尿液比重增高，可降低試劑帶對(duì)糖的敏感性；尿液被過(guò)氧化物或次氯酸鹽污染，尿糖測(cè)定可產(chǎn)生假陽(yáng)性。 由于膽紅素、尿

39、膽原不夠穩(wěn)定，尤其在陽(yáng)光照射下更易分解，故留尿標(biāo)本后應(yīng)及時(shí)檢查。尿十一項(xiàng)試劑帶常見產(chǎn)生假陽(yáng)性、假陰性的原因血凝儀 檢測(cè)項(xiàng)目凝血酶原時(shí)間測(cè)定(PT)部分活化凝血酶時(shí)間測(cè)定(APTT) 凝血酶凝固時(shí)間測(cè)定(TT) 血漿纖維蛋白原含量測(cè)定(FIB) 凝血酶原時(shí)間測(cè)定(PT)原理貧血小板血漿中加入組織因子制劑和鈣離子，啟動(dòng)凝血，從而促使血漿凝固。記錄從加入試劑到血漿開始凝固所需要的時(shí)間，即為血漿凝血酶原時(shí)間。部分活化凝血酶時(shí)間測(cè)定(APTT)原理 在貧血小板血漿中加入足量的活化接觸因子激活劑和部分凝血活酶,再加入適量鈣離子，啟動(dòng)凝血，記錄從加入試劑到血漿開始凝固所需要的時(shí)間，即為部分活化凝血酶時(shí)間。凝

40、血酶凝固時(shí)間測(cè)定(TT)原理在血漿中加入凝血酶溶液使纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白，測(cè)定血漿開始凝固所需要的時(shí)間，即為凝血酶凝固時(shí)間。血漿纖維蛋白原含量測(cè)定(FIB)原理在貧血小板血漿中加入凝血酶血漿即凝固,其所需時(shí)間與Fg含量成負(fù)相關(guān)。國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化比值（INR）INR=（患者PT/正常人平均PT）ISIISI為國(guó)際敏感指數(shù)，通常由試劑廠商提供。使用ISI和INR可縮小各實(shí)驗(yàn)室PT測(cè)定在技術(shù)上和試劑上的差異，使抗凝療法監(jiān)測(cè)中各種PT的檢測(cè)結(jié)果有可比性。上述項(xiàng)目操作比較簡(jiǎn)便，手工法和儀器法兩種。常用抗凝劑為0.109mmol/L枸櫞酸鈉，嚴(yán)格按1：9的比例抗凝 。出血時(shí)間測(cè)定 原理 皮膚受到特定條件的外

41、傷后，出血自行停止所需的時(shí)間。 器材 血壓計(jì)、出血時(shí)間測(cè)定器、干凈濾紙、秒表。操作步驟出血時(shí)間測(cè)定器法1. 血壓計(jì)袖帶縛于上臂，加壓。2. 在肘前窩凹下二橫指處常規(guī)消毒，輕輕繃緊皮膚，置出血時(shí)間測(cè)定器使它貼于皮膚表面，按其按鈕，使刀片由測(cè)定器內(nèi)刺入皮膚，啟動(dòng)秒表。3. 每隔半分鐘，用干凈濾紙吸取流出血液，直至出血自然停止，按停秒表計(jì)時(shí)。Ivy法同上，但不使用測(cè)定器，而是直接用刺血刀作皮膚切口。生物參考區(qū)間出血時(shí)間測(cè)定器法：Simplate 型測(cè)定器2.39.5min；Surgicutt型測(cè)定器8min；Ivy法：27min。凝血時(shí)間測(cè)定原理 在體外符合內(nèi)源凝血條件下，血液發(fā)生凝固所需的時(shí)間。操

42、作步驟 硅管法：采用涂有硅油的試管后，試管活化內(nèi)源凝血因子的時(shí)間比采用普通試管法長(zhǎng)。普通試管法：全血注入普通玻璃試管而被激活，從而啟動(dòng)內(nèi)源性凝血。生物參考區(qū)間硅管法：1532min。普通試管法510min。糞便檢驗(yàn) 目的了解消化系統(tǒng)有無(wú)炎癥、出血、寄生蟲感染、惡性腫瘤等情況；間接判斷胃腸、胰腺、肝膽的功能狀況；防治腸道傳染病。糞便的顯微鏡檢查. 直接涂片鏡檢1. 潔凈玻片上加等滲鹽水1-2滴，選擇糞便的不正常部分，或挑取不同部位的糞便做直接涂片檢查。2. 最好取大玻片，制成涂片后，應(yīng)覆以蓋片。涂片的厚度以能透過(guò)印刷物字跡為準(zhǔn)。3. 在涂片中如發(fā)現(xiàn)疑似包囊，則在該涂片上加1滴碘液，在高倍鏡下仔細(xì)

43、鑒別，如仍不能決定時(shí)，可取全量糞便濃縮法檢查。4.一般性狀檢查:顏色 性狀糞便化學(xué)檢查1. 隱血試驗(yàn)原理(鄰甲聯(lián)苯胺法) 血紅蛋白中的亞鐵血紅素有類似過(guò)氧化物酶的活性，能催化過(guò)氧化氫，放出新生態(tài)氧，將受體鄰-甲苯胺氧化成鄰-甲偶氮苯而顯藍(lán)色。 2.試劑10g/L鄰-甲聯(lián)苯胺溶液：取鄰-甲苯胺1g，溶于冰醋酸及無(wú)水乙醇各50ml的混合液中，置棕色瓶中，保存于4冰箱中，可用812周，若變?yōu)榘瞪?，?yīng)重新配制。3%過(guò)氧化氫液。 操作1.用竹簽挑取少量糞便，涂在消毒棉簽上或白瓷板上。2. 滴加0.15L/L鄰甲苯胺冰乙酸溶液23滴于糞便上。3.滴加3%過(guò)氧化氫23滴。4.立即觀察結(jié)果，在2min內(nèi)顯藍(lán)色

44、為陽(yáng)性。結(jié)果判斷陰性：加入試劑2min后仍不顯色。：加入試劑10s后，由淺藍(lán)色變藍(lán)色。2：加入試劑后初顯淺藍(lán)褐色，逐漸呈明顯藍(lán)褐色。3：加入試劑后立即呈現(xiàn)藍(lán)褐色。4：加入試劑后立即呈現(xiàn)藍(lán)黑褐色。干擾因素1. 糞便標(biāo)本必須及時(shí)檢查，以免靈敏度降低。2. 3%過(guò)氧化氫必須有效，應(yīng)進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)，將過(guò)氧化氫滴血片上，產(chǎn)生泡沫，或滴加于重鉻酸鉀硫酸液，顯褐色示有效。3. 強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)前三天內(nèi)禁食動(dòng)物血、肉、肝臟及富含葉綠素食物、鐵劑、中藥，以免假陽(yáng)性反應(yīng)。齒齦出血、鼻出血、月經(jīng)血等均可導(dǎo)致陽(yáng)性反應(yīng)。4. 用具應(yīng)加熱處理（如試管、玻片、滴管等），以破壞污染的過(guò)氧化物酶。二、社區(qū)常見病脂代謝紊亂糖尿病高血壓

45、冠心病呼吸道疾病腦血管疾病傳染病腫瘤等社區(qū)常見病化驗(yàn)項(xiàng)目的組合呼吸道感染： 1 血象：如為病毒引起，白細(xì)胞計(jì)數(shù)正?；蚱?，淋巴細(xì)胞比例升高，常0。35如為細(xì)菌引起。白細(xì)胞計(jì)數(shù)增多，中性粒細(xì)胞比例升高，常0.752.抗“O”：如為溶血性鏈球菌引起感染，ASO常600u,并在感染后3-4周內(nèi)達(dá)到高峰，持續(xù)數(shù)月。3咽拭子細(xì)菌培養(yǎng)：可分離出溶血性鏈球菌，但由于早期使用了抗生素，此種培養(yǎng)陽(yáng)性率并不高。4酶學(xué)檢查：在并發(fā)心肌炎、風(fēng)濕病時(shí)常作心肌酶譜測(cè)定，主要檢查-HBDH,AST,CPK,CKI,LDH,MB,TnT等。5免疫學(xué)檢查：在并發(fā)急性腎炎時(shí)，常做免疫球蛋白、補(bǔ)體和微球蛋白等檢測(cè)，并做尿常規(guī)檢查；

46、在并發(fā)心肌炎時(shí)，還可做抗心肌抗體（AMA），抗心脂抗體（ACA）測(cè)定；在并發(fā)內(nèi)濕病時(shí)，還可做C反應(yīng)蛋白（CRP）IMJ PGH 。肺炎：1WBC計(jì)數(shù)2痰涂片檢查3痰、鼻、咽拭子培養(yǎng)4ESR5冷凝集試驗(yàn)（CAT）6補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn):；在發(fā)病10天后可出現(xiàn)陽(yáng)性（1:40-1:80）肺結(jié)核：1結(jié)核菌的常規(guī)檢查：痰涂片或培養(yǎng)2ESR3. 結(jié)核桿菌的基因檢測(cè)4結(jié)核桿菌的抗原、抗體檢查5機(jī)體免疫功能檢查：免疫球蛋白測(cè)定；T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)；血清白介素2測(cè)定；結(jié)核菌素試驗(yàn)（OT、PPD）6生化檢查：腺苷脫氨酶（ADA）；銅藍(lán)蛋白(CP,CER)（作為結(jié)核病活動(dòng)性治療效果的監(jiān)測(cè)指標(biāo)）；總唾液酸（TSA）；乳酸脫氫

47、酶（LDH）；肝功能檢查（主要用于抗結(jié)核藥物副作用的觀察）。 肺癌1痰液檢查2血沉3神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）4糖類抗原125(CA125)5糖類抗原50(CA50)6糖類抗原72-4(CA72-4)7.糖類抗原15-3(CA15-3)8.癌胚抗原（CEA）9-L-巖藻糖苷酶（AFU）10生長(zhǎng)激素(GH)11.抑癌基因P16和Rb支氣管擴(kuò)張癥：1痰液檢查：痰涂片和培養(yǎng)2血象(WBC，RBC,Hb)肺源性心臟?。? 血?dú)夥治? 血象3 血液黏度（WBV）4 肝腎功能、二氧化碳結(jié)合力及電解質(zhì)高血壓病：1 血脂2 尿糖、血糖及糖耐量試驗(yàn)3 尿常規(guī)4 肌酐尿素氮尿微量白蛋白5 心鈉素（CN、ANP

48、） 6、 同型半胱氨酸 7 尿酸、電解質(zhì)、腎素活性測(cè)定、醛固酮測(cè)定、兒茶酚胺測(cè)定冠心?。?1 血脂及脂蛋白檢查2 尿常規(guī)、血常規(guī)、血糖3 心鈉素（CN、ANP） 4、 同型半胱氨酸心肌梗死： 1 酶學(xué)檢查：AST， CK， CKI， LDH， LDHI， -HBDH，ARS，ALD2 補(bǔ)體檢查：C3，C43 肌鈣蛋白(TnT)4 肌紅蛋白（MB）5 血常規(guī) 6 ESR7 血脂、血糖、尿常規(guī)。 8、凝血項(xiàng) 糖尿?。?必查項(xiàng)目：UG、FBS、BS2h、GTT、IST、SI、CP、PG、AIA、HbA1、GSP、Tch、TG、NBA、GADA BMG mALB1 UG（尿糖）：陽(yáng)性。2 FBS（空腹

49、血糖）：增高。3 BS2h（餐后2 小時(shí)血糖）：可幫助早期發(fā)現(xiàn)糖尿病，若大于6.7mmol/2h，為可疑為是糖尿病，若大于11mmol/L可診斷為糖尿病。4 GTT（葡萄糖耐量試驗(yàn)）：FBS7.8-11.1mmol/L或口服葡萄糖后2 小時(shí)，血糖為7.8-11.1mmol/L。5 IST（胰島素耐量試驗(yàn)）：主要用于糖尿病病人對(duì)胰島素的敏感性，IDDM空腹及餐后胰島素值均明顯低于正常，進(jìn)食后胰島素分泌不增加，NIDDM胰島素及C肽可以正?；虺矢咭葝u素血癥。 糖尿?。? SI（胰島素）：NIDDM增高，IDDM降低。7 CP（C肽）：IDDM減低。8 PG（胰高血糖素）：增高，病情越重，PG越高。

50、9 AIA（抗胰島素自身抗體）：IDDM陽(yáng)性。10 HbA1(糖化血紅蛋白)：增加。能反應(yīng)測(cè)定前1-2個(gè)月的血糖水平。11 GSP（糖化血清蛋白）：增高?？煞磻?yīng)檢查前1-2周內(nèi)平均血糖水平。12 Tch（總膽固醇）：增高。13 TG（甘油三酯）：增高。14 BMG 正?；蛟龈?5mALB 正常或增高高脂血癥及高脂蛋白血癥：1.Tch：增高。2TG：增高。4 Lp(a)：增高（家族性）。5 LE：增高。6 HDL-C：降低或增高（取決于病情變化）。7 LDL-C：增高。8 HDL（1-3）-C：無(wú)顯著變化，但HDL2-C降低。9 ApoA1和ApoB：常顯示ApoA1減低。ApoB增高。10 L

51、PO：在合并脂肪肝時(shí)增高。11 T4：減低。12 FT3和FT4：減低。13 SI：減低。腦出血1. 血液粘度：增高。2 腦脊液：常無(wú)色透明，壓力不高，CSFLac增高，腦脊液AST、CCS、FAST增高，白蛋白增高。3. 血常規(guī)：在并發(fā)感染時(shí)增高。 4.凝血項(xiàng).5同型半胱氨酸腦梗死1. 凝血項(xiàng) 2. 腦脊液：常呈血性，且壓力常增高，蛋白質(zhì)含量增高，免疫球蛋白含量增高而百分比正常，白蛋白增高。3. 血液黏度：常增高。 4.同型半胱氨酸肝硬化 1免疫學(xué)檢查：病毒和非病毒類2 酶學(xué)檢查：代償期ALT及AST可正常或輕度異常，失代償期ALT、AST有不同程度升高，ALT/AST13秒。若用維生素K不

52、能糾正提示預(yù)后不良。肝硬化5 肝臟纖維化的檢查：包括型前膠原肽(PP)、型前膠原(PC)、膠原(PC)、脯氨酰羥化酶、賴氨酸氧化酶、型前膠抗體的Fab片段(Fab PP)、層粘蛋白測(cè)定。肝硬化常顯著增高，各種膠原均增加，但最重要的是構(gòu)成基底膜的膠原增加，常150g/L、PP常120g/L。6 血象檢查：肝硬化失代償期表現(xiàn)為血紅蛋白、紅細(xì)胞減低，PLT減少，伴脾功能亢進(jìn)者RBC、WBC、PLT三系均下降。7 尿液及腎功能：并發(fā)肝腎綜合癥時(shí)，腎功能減損，表現(xiàn)為BUN、Cr、Ccr降低，尿中可發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞、白細(xì)胞、蛋白及管型。肝硬化8 腹水檢查：一般為漏出液，如并發(fā)自發(fā)性腹膜炎時(shí)，透明度降低，比重介于

53、漏出液與滲出液之間，利凡他陽(yáng)性，細(xì)胞數(shù)增加，每微升常在300以上，以中性粒細(xì)胞為主；如并發(fā)結(jié)核性腹膜炎，腹水呈血性，以淋巴細(xì)胞為主。血性腹水尚應(yīng)考慮肝癌，宜做腹水的癌細(xì)胞檢查。9 出凝血時(shí)間測(cè)定：均可延長(zhǎng)。肝硬化10. 甲胎蛋白(AFP)：如發(fā)現(xiàn)持續(xù)升高，應(yīng)疑及肝癌。11. 甘膽酸（CG）：2.0mol/L胃癌1 糞隱血試驗(yàn)：常為陽(yáng)性。2 血常規(guī)：Hb和RBC降低。3 CEA：明顯增高。4 CA19-9：增高。5 CA72-4：增高。6 CA50：增高。7 抗胃壁細(xì)胞抗體：陽(yáng)性者胃癌發(fā)病率高于陰性者。缺鐵性貧血1. 血象：男性Hb120g/L,女性110g/L，孕婦100g/L；MCV80fl

54、，MCH26pg，MCHC310g/L,MCD6m，紅細(xì)胞形態(tài)有明顯低色素表現(xiàn)，白細(xì)胞正?；蜉p度減低，可見很小的紅細(xì)胞、靶形細(xì)胞、橢圓形細(xì)胞和形狀很不規(guī)則的紅細(xì)胞，紅細(xì)胞常減少至3.5*10E12/L以下。網(wǎng)織紅細(xì)胞一般正常。2. 骨髓象：鐵染色顯示骨髓小粒可染鐵消失，鐵幼粒紅細(xì)胞7.76mmol/L為動(dòng)脈粥樣硬化高度危險(xiǎn)水平；3.1mmol/L或2.59mmol/L為低膽固醇血癥11.血清高密度脂蛋白測(cè)定的臨床意義:增高：原發(fā)性高HDL血癥、胰島素、雌激素、運(yùn)動(dòng)、飲酒等。降低：常見于高脂蛋白血癥、腦梗塞、冠狀動(dòng)脈硬化癥、慢性腎功能不全、肝硬化、糖尿病、肥胖等。12.血清低密度脂蛋白測(cè)定的臨床

55、意義:增高：高脂蛋白血癥。血清載脂蛋白AI測(cè)定的臨床意義:載脂蛋白AI是高密度脂蛋白的主要結(jié)構(gòu)蛋白，它是反應(yīng)HDL水平的最好指標(biāo)。降低：常見于高脂血癥、冠心病及肝實(shí)質(zhì)性病變。13.血清載脂蛋白B測(cè)定的臨床意義:載脂蛋白B是低密度脂蛋白的結(jié)構(gòu)蛋白，主要代表LDL的水平，病理狀態(tài)下APOB的變化往往比LDL明顯。增高：常見于高脂血癥、冠心病及銀屑病。降低：常見于肝實(shí)質(zhì)性病變。14.血清尿素（UREA）測(cè)定的臨床意義：升高：大致可分為三個(gè)階段。濃度在8.2-17.9mmol/L時(shí)，常見于UREA產(chǎn)生過(guò)剩（如高蛋白飲食、糖尿病、重癥肝病、高熱等），或UREA排瀉障礙（如輕度腎功能低下、高血壓、痛風(fēng)、多

56、發(fā)性骨髓瘤、尿路閉塞、術(shù)后乏尿等）。濃度在17.9-35.7mmol/L時(shí)，常見于尿毒癥前期、肝硬化、膀胱腫瘤等。濃度在35.7mmol/L以上，常見于嚴(yán)重腎功能衰竭、尿毒癥。 15.血清肌酐（CRE）測(cè)定的臨床意義：升高：常見于嚴(yán)重腎功能不全、各種腎障礙、肢端肥大癥等。降低：常見于肌肉量減少（如營(yíng)養(yǎng)不良、高齡者）、多尿。16.血清肌酸激酶（CK）測(cè)定的臨床意義：升高：心肌梗塞46小時(shí)開始升高，1836小時(shí)可達(dá)正常值的確2030倍，為最高峰，24天恢復(fù)正常。另外，病毒性心肌炎、皮肌炎、肌肉損傷、肌營(yíng)養(yǎng)不良、心包炎、腦血管意外及心臟手術(shù)等都可以使CK增高。 17.血清肌酸激酶同工酶（CKMB）測(cè)

57、定的臨床意義：CKMB主要存在于心肌中，約為心肌總CK的4,血清CK-MB上升先于總活力的升高，24小時(shí)達(dá)峰值，36小時(shí)內(nèi)其波動(dòng)曲線與總活力相平行，至48小時(shí)消失。18.血清a羥丁酸脫氫酶（HBDH）測(cè)定的臨床意義：升高：與LDH大致相同，在急性心肌梗塞時(shí)此酶在血液中維持高值可達(dá)到2同左右。 糖化血紅蛋白 糖化血紅蛋白是血紅蛋白與糖類（如葡萄糖、6-磷酸葡萄糖或1,6-二磷酸果糖）經(jīng)非酶促結(jié)合而成的，它的合成過(guò)程是緩慢的而且是相對(duì)不可逆的，積累并持續(xù)于紅細(xì)胞120天生命期中，其合成速率與紅細(xì)胞所處環(huán)境中糖的濃度成正比。 HbA1c正常參考值（WHO）正常參考值：6.5%臨界值：6.5%7.5%

58、病理狀態(tài)時(shí)7.5一般認(rèn)為，糖尿病患者HbA1c7時(shí)，說(shuō)明血糖水平控制較好。 尿微量白蛋白尿微量白蛋白指高于正常，但常規(guī)方法無(wú)法檢出的白蛋白尿，他的檢測(cè)作為早期腎損害診斷的重要指標(biāo)已受到廣泛重視，測(cè)定方法包括放射免疫法、ELASA法等。應(yīng)用較多的是免疫透射比濁法。易于在常規(guī)實(shí)驗(yàn)室中廣泛應(yīng)用，對(duì)早期腎損害的診斷遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于常規(guī)定性或半定量試驗(yàn)。 2-微球蛋白尿2m減少:意義較少，臨床偶見于鐮狀細(xì)胞貧血性腎病，是由于近端腎小管重吸收增多。尿2m增加是由于近端腎小管重吸收障礙，病因較多。 尿2m增高 :氨基甙抗生素后，在血肌酐增高前46天，可見到尿2m增加2倍以上。尿白蛋白/尿2m比值可揭示病變部位主要在

59、腎小球或腎小管，抑或兩者兼有。腎小管病變時(shí)比值一般10；腎小球病變時(shí)比值300； 慢性腎衰血及尿2m均顯著高于正常，血2m的水平與Scr濃度平行，但系統(tǒng)性紅斑狼瘡腎炎腎衰者血2m增高率相對(duì)較快。 2-微球蛋白腎移植患者血、尿2m明顯增高，提示機(jī)體發(fā)生排異反應(yīng)。糖尿病腎病患者 早期即有腎小管功能改變，2m檢測(cè)被認(rèn)為是衡量糖尿病患者輕度腎功能減退和療效觀察的一項(xiàng)簡(jiǎn)便、精確而敏感的方法。 臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)項(xiàng)目血液常規(guī)檢查出凝血試驗(yàn)?zāi)虺Ｒ?guī)及沉渣檢查其它體液檢查白細(xì)胞1.白細(xì)胞生理變化 ：初生兒白細(xì)胞較高；白細(xì)胞數(shù)在靜息狀態(tài)時(shí)較低，活動(dòng)和進(jìn)食后較高；早晨較低，下午較高；一般的體力勞動(dòng)、冷熱水浴、日光或紫外線

60、照射等，均可使白細(xì)胞輕度增多，而劇烈運(yùn)動(dòng)、劇痛和激動(dòng)可使白細(xì)胞顯著增多；妊娠期常見白細(xì)胞增多，特別是最后1個(gè)月，常波動(dòng)于（1217）109/L之間，分娩時(shí)可高達(dá)34X109/L。分娩后2-5d內(nèi)恢復(fù)正常。因此，由于白細(xì)胞的生理波動(dòng)很大，只有通過(guò)定時(shí)和反復(fù)觀察才有意義。2 .白細(xì)胞病理變化白細(xì)胞數(shù)增高：見于急性感染化膿性炎癥，中毒(尿毒癥、糖尿病酸中毒：急性出血、急性溶血及手術(shù)后等；某些白血病及惡性腫瘤晚期。白細(xì)胞白細(xì)胞數(shù)減低：見于某些傳染病(傷寒、瘧疾等)化學(xué)藥物及放射損害，某些血液病、過(guò)敏性休克、惡病質(zhì)、脾功能亢進(jìn)及自身免疫性疾病等。 3.白細(xì)胞分類結(jié)果異常3. 1中性粒細(xì)胞中性粒細(xì)胞增加：