超聲輔助提取厚樸葉中厚樸酚及和厚樸酚的研究

1、超聲輔助提取厚樸葉中厚樸酚及和厚樸酚的研究【摘要】目的研究超聲輔助提取厚樸葉中厚樸酚及和厚樸酚的方法。方法采用正交實驗進展提取方法的研究，用HPL法測定厚樸酚及和厚樸酚的含量，流動相為甲醇-水-冰醋酸85150.25，流速為1.0l/in，檢測波長為294n，柱溫為23。結果用超聲強度中等、酒精濃度100%、提取時間為24h以及料液比140的提取條件可很好地提取厚樸葉中的厚樸酚及和厚樸酚，和厚樸酚、厚樸酚以及總酚的提取率分別為92.15%，70.83%和85.27%；RP-HPL方法較好，結果理想。結論研究得到了很好的超聲輔助提取厚樸葉中厚樸酚及和厚樸酚的方法。【關鍵詞】厚樸酚和厚樸酚超聲提取

2、反相高效液相色譜法Abstrat：bjetiveTdevelpanultrasniextratingethdfragnllandHnkilinleavesfagnliaffinalisRendetils.ethdsTheextratinethdasptiizedbyrthgnalexperientandthententseredeterinedbyHPL.Results100%ethanl,extrating24hurs,ratinfaterialstliquid140andiddleintensityfultrasniastheptialextratingethd.Theextratingr

3、atefagnllas92.15%.TheextratingratefHnkilas70.83%.TheRP-HPLfrdeteriningethdassiple,rapidandaurate.nlusinTheultrasniextratingethdispratiablefragnllandHnkilinleavesfagnliaffinalisRendetils.Keyrds：agnll；Hnkil；Ultrasniextratin；RP-HPL中藥材厚樸為木蘭科植物厚樸agnliaffinalisRendetils的干皮、根皮或枝皮，性溫味苦辛，無毒，入脾、胃、大腸經(jīng)，能溫中下氣，燥濕

4、消痰。厚樸是一種極為重要的中藥材。厚樸在我國已有兩千多年藥用歷史，用于治療多個系統(tǒng)和器官的疾病，我國很多民間驗方如厚樸三物湯、平胃散、大承氣湯、四七湯和梔子厚樸湯中都含有生藥厚樸；2022版?中國藥典?部中有包括藿香正氣水、香砂養(yǎng)胃丸、開胸順氣丸、柴胡舒肝丸等二十多個常用中成藥的主要原料藥均含厚樸1?，F(xiàn)代藥理學研究說明,厚樸具有抗菌、抗病毒、抗過敏、影響胃腸活動、肌肉松弛和中樞抑制等作用2。厚樸為落葉喬木，是重要的林業(yè)資源，多年生，生長周期長，一般要十多年才能供剝皮藥用；現(xiàn)今厚樸藥材的來源是伐樹剝皮，為掠奪式取材，不利于環(huán)境。厚樸葉含有厚樸的主要有效成分3，但厚樸葉是否可以替代厚樸皮入藥，需要

5、進一步研究。目前尚沒有用超聲法提取厚樸葉中厚樸酚以及和厚樸酚的報道。本研究利用正交實驗，進展了超聲法提取厚樸葉中厚樸酚及和厚樸酚的研究。報告如下。1器材與方法1.1材料與試劑厚樸葉取自湖北恩施市雙河鄉(xiāng)，為紫油厚樸的自然落葉。提取用無水乙醇、甲醇為分析純，HPL甲醇為色譜純，厚樸酚、和厚樸酚標準品由中國藥品生物制品檢定所提供。1.2儀器JY96-超聲波細胞粉碎機；美國DINEX公司P680LPG型高效液相色譜儀；RE-52型旋轉蒸發(fā)儀。1.3方法1.3.1厚樸葉中酚類物質的全提取取枯燥的厚樸葉，粉碎，過60目篩，取適量用無水乙醇于索氏抽提器中提取至無色為止；用旋轉蒸發(fā)儀濃縮后定容，取樣用甲醇稀釋

6、10倍后進展HPL測定含量，3次重復。1.3.2厚樸葉中酚類物質的超聲提取采用正交實驗L934進展超聲提取厚樸葉中厚樸酚及和厚樸酚的研究，正交實驗的因素程度表見表1。超聲處理后，進展提取，提取過程中進展磁力攪拌，提取完畢后過濾、3次淋洗、濃縮及定容取樣，用甲醇稀釋后進展HPL測定含量。表1因素程度略1.3.3色譜條件色譜柱為DiansilT182504.6，5；流動相為甲醇-水(7921)，流速1.0l/in，檢測波長294n，柱溫23，進樣量20l。1.3.4線性范圍考察精細稱取厚樸酚、和厚樸酚對照品適量，加甲醇制成每毫升含厚樸酚標準品360，180，90，45，22.5，11.25，5.6

7、g以及每毫升含和厚樸酚標準品440，220，110，55，27.5，13.75，6.875g的濃度梯度，分別汲取溶液20l，注入HPL儀測定。以對照品濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，進展線性回歸。1.3.5精細度實驗取厚樸酚90g/l以及和厚樸酚濃度為110g/l的對照品溶液，重復進樣6次，記錄色譜峰面積，計算RSD。1.3.6重復性實驗取索氏提取的一個樣品，依法平行測定5次，記錄厚樸酚與和厚樸酚的色譜峰面積，計算RSD。1.3.7穩(wěn)定性實驗取索氏提取的一個樣品，每隔2h進樣1次，共進樣5次，考察供試品溶液的穩(wěn)定性。1.3.8回收率實驗取已測知含量的樣品5份，分別精細參加對照品適

8、量，依RP-HPL法測定，計算回收率，RSD。2結果2.1HPL結果及標準品線性關系在前述色譜條件下，厚樸酚與和厚樸酚與其他成分可以很好地別離(圖1)；以對照品濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，進展線性回歸。厚樸酚濃度在5.6360g/l，和厚樸酚濃度在6.875440g/l范圍內(nèi)與峰面積線性關系良好?；貧w方程為：厚樸酚Y=0.634724X-3.02791，R=0.99775；和厚樸酚Y=0.579992X-5.02817，R=0.996795。2.2超聲提取正交實驗結果各因素對和厚樸酚提取的重要性為ABD,對厚樸酚提取的重要性為DAB,對總酚提取的重要性為ABD；綜合考慮，超聲

9、提取最優(yōu)方法為：超聲強度中等，酒精度100%，提取時間為24h，料液比140。2.3優(yōu)選提取方法的驗證采用上述最優(yōu)方法提取3次，和厚樸酚、厚樸酚以及總酚的提取率分別平均為92.15%，70.83%和85.27%，說明本方法的提取效果較好。2.4精細度實驗結果取厚樸酚以及和厚樸酚濃度為100g/l的對照品溶液，重復進樣6次，記錄色譜峰面積，計算得厚樸酚與和厚樸酚的RSD分別為1.24%，1.47%。2.5重復性實驗取索氏提取的一個樣品，依法平行測定5次，記錄厚樸酚與和厚樸酚的色譜峰面積，計算得厚樸酚與和厚樸酚的RSD分別為1.05%，1.33%。2.6穩(wěn)定性實驗取索氏提取的一個樣品，每隔2h進樣

10、1次，共進樣5次，結果供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定，厚樸酚與和厚樸酚的RSD分別為1.31%，1.81%。2.7回收率實驗取已測知含量的樣品5份，分別精細參加對照品適量，依RP-HPL法測定，結果見表3，表4，和厚樸酚的平均回收率為97.89%，RSD為0.83%；厚樸酚的平均回收率為97.58%，RSD為1.2%；本研究的RP-HPL測定法的回收率較好,方法是可行的。表2超聲提取正交實驗結果略表3和厚樸酚回收率略表4厚樸酚回收率略3討論厚樸是一種應用較廣的重要中藥材，最近的研究說明，其中厚樸酚4與和厚樸酚5有抑制癌細胞的潛能,厚樸藥材將會有更加廣泛的醫(yī)藥用處；尋找適宜的厚樸皮替代品將具有較大的研

11、究價值。本文首次報道了用超聲法提取厚樸藥材中的厚樸酚與和厚樸酚的研究，超聲有助于厚樸酚與和厚樸酚的提取，適用于工業(yè)化消費的放大工藝正在進一步研究中。厚樸葉中總酚的含量是未發(fā)汗厚樸皮的1/4，提示厚樸葉有替代厚樸皮入藥的潛能，今后如有進一步的藥理學研究證實厚樸葉可替代厚樸皮入藥，在很大程度上有利于保護厚樸樹資源；然厚樸葉中的厚樸酚與和厚樸酚的含量組成與皮有差異，入藥時應綜合考慮。【參考文獻】1國家藥典委員會.中國藥典,部S.北京：化學工業(yè)出版社,2022:359,525,563,660.2沈映君.中藥藥理學.上海：上?？茖W技術出版社,1997：82.3瞿京紅.厚樸皮與葉及不同炮制法酚性成分的比擬J.中國醫(yī)院藥學雜志,2000,20(l2)：76.4LinShyr-Yi,LiuJean-Dean,hangHui-hiu,etal.agnllsuppressesprliferatinfulturedhuanlnandliveranerellsbyinhibitingDNAsynthesisandativatingapptsisJ.Jurnalfe