基因工程的基本操作程序(上課)

1、專題1基因工程1.1DNA重組技術(shù)的基本工具1.2基因工程的基本操作程序1.3基因工程的應(yīng)用1.4蛋白質(zhì)工程的崛起本節(jié)知識體系基因工程的基本操作程序：一、目的基因的獲取二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞四、目的基因的檢測與鑒定1.2基因工程的基本操作程序?qū)ｎ}1基因工程原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)原核細(xì)胞基因編碼區(qū)（編碼序列）：能指導(dǎo)有關(guān)蛋白質(zhì)的合成，即能夠編碼蛋白質(zhì)非編碼區(qū)（調(diào)控序列）：位于編碼區(qū)上游和編碼區(qū)下游的DNA序列，不能轉(zhuǎn)錄并不能編碼蛋白質(zhì)，但有調(diào)控遺傳信息表達(dá)的核苷酸序列，如啟動子、終止子等它山之石原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu) RNA聚合酶的作用是催化DNA轉(zhuǎn)錄為RNA。它能夠識別調(diào)控序

2、列中的結(jié)合位點，并與其結(jié)合。轉(zhuǎn)錄開始后，RNA聚合酶沿DNA分子移動，并與DNA分子的一條鏈為模板合成RNA。它山之石 RNA聚合酶是催化以DNA為模板（template）、三磷酸核糖核苷為底物、通過磷酸二酯鍵而聚合的合成RNA的酶。因為在細(xì)胞內(nèi)與基因DNA的遺傳信息轉(zhuǎn)錄為RNA有關(guān)，所以也稱轉(zhuǎn)錄酶。 真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)真核細(xì)胞基因編碼區(qū)（間隔、不連續(xù)）外顯子：能編碼蛋白質(zhì)的DNA序列內(nèi)含子：不能編碼蛋白質(zhì)的DNA序列非編碼區(qū)：與原核生物具有相似功能的啟動子、終止子它山之石真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)與原核細(xì)胞比較，真核細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)的主要特點是： 編碼區(qū)是間隔的、不連續(xù)的。也就是說，能夠編碼蛋白質(zhì)的序列

3、被不能夠編碼蛋白質(zhì)的序列分隔開來，成為一種斷裂的形式。 其中，能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做外顯子，一般不能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做內(nèi)含子。它山之石原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)比較原核細(xì)胞真核細(xì)胞不同點編碼區(qū)是連續(xù)的編碼區(qū)是間隔的、不連續(xù)的相同點都由能夠編碼蛋白質(zhì)的編碼區(qū)和具有調(diào)控作用的非編碼區(qū)組成的它山之石編碼相同數(shù)目氨基酸的蛋白質(zhì)，原核細(xì)胞與真核細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)一樣長嗎？思考？基因的種類（1）編碼蛋白質(zhì)的基因：包括結(jié)構(gòu)基因和調(diào)節(jié)基因。（2）沒有翻譯產(chǎn)物的基因：如rRNA基因和tRNA基因。（3）不能轉(zhuǎn)錄的DNA片段：如操縱基因。它山之石啟動子與終止子 啟動子是在非編碼區(qū)內(nèi)緊靠轉(zhuǎn)錄起點，調(diào)控遺傳信息表達(dá)

4、的脫氧核苷酸序列，它能引導(dǎo)RNA聚合酶與正確的基因部位結(jié)合，使轉(zhuǎn)錄從起點開始，沿編碼區(qū)進(jìn)行。 終止子是在非編碼區(qū)內(nèi)緊靠轉(zhuǎn)錄終點，調(diào)控遺傳信息表達(dá)的脫氧核苷酸序列，它能阻礙RNA聚合酶的移動，并使其從DNA模板鏈上脫離下來，使轉(zhuǎn)錄終止。它山之石基因工程的基本操作程序一、目的基因的獲取新 授 將含有某種生物不同基因的許多DNA片斷，導(dǎo)入到受體菌的群體中儲存，各個受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫。1. 從基因文庫中獲取目的基因基因文庫 基因組文庫部分基因文庫（cDNA文庫）1. 從基因文庫中獲取目的基因某生物體內(nèi)全部DNA 許多DNA片段受體菌群體 限制酶 與表達(dá)載體連接 導(dǎo)入基因組文

5、庫某種生物某個時期的mRNAcDNA 反轉(zhuǎn)錄受體菌群體 與表達(dá)載體連接 導(dǎo)入部分基因文庫（cDNA文庫）基因工程的基本操作程序一、目的基因的獲取cDNA為具有與某RNA鏈呈互補的堿基序列的單鏈DNA即complementary DNA之縮寫 某種生物某個時期的mRNAcDNA反轉(zhuǎn)錄受體菌群體與運載體連接 導(dǎo)入cDNA文庫基因工程的基本操作程序一、目的基因的獲取1. 從基因文庫中獲取目的基因比較：部分基因文庫和基因組文庫原理：前提：過程：PCR擴(kuò)增儀DNA雙鏈復(fù)制的基本原理一段已知目的基因的核苷酸序列目的基因DNA受熱變性解鏈為單鏈；引物與單鏈互補結(jié)合；合成鏈在DNA聚合酶作用下進(jìn)行延伸?；蚬?/p>

6、程的基本操作程序一、目的基因的獲取2.利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因由穆里斯等人于1988年發(fā)明，并于1993年獲得諾貝爾化學(xué)獎。PCR全稱為多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction)反應(yīng)過程：1.變性：加熱至9095 目的基因DNA解鏈;2.復(fù)性：冷卻至5560，引物結(jié)合到互補DNA鏈;3.延伸：加熱至7075，熱穩(wěn)定DNA聚合酶從引物起始互補鏈的合成 基因工程的基本操作程序一、目的基因的獲取2.利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因動畫演示PCR技術(shù)擴(kuò)增與DNA復(fù)制的比較PCR技術(shù)DNA復(fù)制相同點原理原料條件不同點解旋方式場所酶結(jié)果堿基互補配對四種脫氧核

7、苷酸模板、能量、酶高溫下變性解旋解旋酶催化體外復(fù)制(PCR擴(kuò)增儀內(nèi))主要在細(xì)胞核內(nèi)熱穩(wěn)定的DNA聚合酶（Taq酶）大量的DNA片段形成整個DNA分子解旋酶、普通的DNA聚合酶等基因工程的基本操作程序一、目的基因的獲取3. 人工合成：反轉(zhuǎn)錄法等基因比較小已知其核苷酸序列已知其mRNA 的序列已知其翻譯產(chǎn)物的氨基酸序列 生物材料DNA目的基因的獲取mRNAcDNAPCR反轉(zhuǎn)錄cDNA文庫DNA一定大小范圍的DNA基因組文庫人工合成限制酶切自然界中分離人工方法合成自然界分離后再人工合成歸納小 結(jié)基因比較小，且已知核苷酸序列基因工程的基本操作程序一、目的基因的獲取 構(gòu)建基因文庫是獲取目的基因的方法之一

8、，并不是惟一的方式。如果所需要的目的基因序列已知，就可以通過PCR方式從含有該基因的生物的DNA中，直接獲得，也可以通過反轉(zhuǎn)錄，用PCR方式從mRNA中獲得，不一定要構(gòu)建基因文庫。但如果所需要的目的基因的序列完全不知，或只知道目的基因序列的一段，或想從一種生物體內(nèi)獲得許多基因，或者想知道這種生物與另一種生物之間有多少基因不同，或者想知道一種生物在個體發(fā)育的不同階段表達(dá)的基因有什么不同，或者想得到一種生物的全基因組序列，往往就需要構(gòu)建基因文庫?；蚬こ痰幕静僮鞒绦蛞弧⒛康幕虻墨@取尋根問底深度思考為什么要構(gòu)建基因文庫？直接從含目的基因的生物體內(nèi)提取不行嗎？基因工程的基本操作程序二、基因表達(dá)載體

9、的構(gòu)建-基因工程的核心使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并遺傳給下一代同時使目的基因能表達(dá)和發(fā)揮作用。1.構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的2. 基因表達(dá)載體的組成a、目的基因b、啟動子c、終止子d、標(biāo)記基因e、復(fù)制原點它們各有什么作用？基因工程的基本操作程序二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建-基因工程的核心2. 基因表達(dá)載體的組成a、目的基因b、啟動子c、終止子d、標(biāo)記基因e、復(fù)制原點一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的尾部，起終止轉(zhuǎn)錄的作用為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來（如抗氨芐青

10、霉素基因，綠色熒光基因） 它們各有什么作用？外來的編碼特定蛋白質(zhì)的基因DNA復(fù)制起點，即DNA聚合酶結(jié)合位點 用一定的_切割 質(zhì)粒，使其出現(xiàn)兩個切 口，露出_。用_切斷目 的基因，使其產(chǎn)生_ _。3.基因表達(dá)載體的構(gòu)建的步驟將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的_ _處， 再加入適量_，形成了一個重組 DNA分子（重組質(zhì)粒）限制酶黏性末端同一種限制酶的黏性末端切口DNA連接酶相同基因工程的基本操作程序二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建質(zhì)粒一個切口兩個黏性末端兩個切口獲得目的基因DNA 連接酶重組DNA分子（重組質(zhì)粒）同一種 限制酶 目的基因與運載體的結(jié)合過程，實際上是不同來源的基因重組的過程。DNA分子基因工程的

11、基本操作程序二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建-基因工程的核心尋根問底深度思考作為基因工程表達(dá)載體，只需含有目的基因就可以完成任務(wù)嗎？為什么？不可以。因為目的基因在表達(dá)載體中得到表達(dá)并發(fā)揮作用，還需要有其他控制元件，如啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。必須構(gòu)建上述元件的主要理由是：（1） 生物之間進(jìn)行基因交流，需要使用啟動子和終止子才能比較有利于基因的表達(dá)。通過cDNA文庫獲得的目的基因沒有啟動子，只將編碼序列導(dǎo)入受體生物中無法轉(zhuǎn)錄；（2） 目的基因是否導(dǎo)入受體生物中需要有篩選標(biāo)記；（3）為了增強(qiáng)目的基因的表達(dá)水平，往往還要增加一些其他調(diào)控元件，如增強(qiáng)子等；（4） 有時需要確定目的基因表達(dá)的產(chǎn)物存在于細(xì)胞的什么

12、部位，往往要加上可以標(biāo)識存在部位的基因（或做成目的基因與標(biāo)識基因的融合基因），如綠色熒光蛋白基因等?；蚬こ痰幕静僮鞒绦蚨⒒虮磉_(dá)載體的構(gòu)建-基因工程的核心尋根問底深度思考將生物的所有DNA直接導(dǎo)入受體細(xì)胞不是更簡便嗎？如果這么做，結(jié)果會怎樣？提示：有人采用總DNA注射法進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，即將一個生物中的總DNA提取出來，通過注射或花粉管通道法導(dǎo)入受體植物，沒有進(jìn)行表達(dá)載體的構(gòu)建，這種方法針對性差，完全靠運氣，也無法確定什么基因?qū)肓耸荏w植物。此法目前爭議頗多，嚴(yán)格來講不算基因工程?；蚬こ痰幕静僮鞒绦蛉⒛康幕?qū)胧荏w細(xì)胞轉(zhuǎn)化目的基因進(jìn)入 內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持 和 的過程受體細(xì)胞穩(wěn)

13、定表達(dá)方法將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（最常用80%）基因槍法花粉管通道法顯微注射法Ca2+ 處理法1.將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（1）農(nóng)桿菌感染特點：（2）轉(zhuǎn)化原理：基因工程的基本操作程序三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 易感染雙子葉植物和裸子植物(對大多數(shù)單子葉植物沒有感染能力）。 當(dāng)植物體受到損傷時，傷口處的細(xì)胞會分泌大量的酚類化合物，吸引農(nóng)桿菌移向這些細(xì)胞，這時農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA（插入目的基因也可轉(zhuǎn)移）可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞的染色體DNA上。1.將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（3）轉(zhuǎn)化過程：基因工程的基本

14、操作程序三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA上 農(nóng)桿菌導(dǎo)入植物細(xì)胞 整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上 目的基因的遺傳特性得以維持穩(wěn)定和表達(dá) 根據(jù)農(nóng)桿菌可將目的基因?qū)腚p子葉植物的機(jī)理，你能分析出農(nóng)桿菌不能將目的基因?qū)雴巫尤~植物的原因嗎？原因：根瘤農(nóng)桿菌具有趨 化性，即植物的受傷組織會產(chǎn)生一些糖類和酚類物質(zhì)吸引根瘤農(nóng)桿菌向受傷組織集中。研究證明，主要酚類誘導(dǎo)物為乙酰丁香酮和羧基乙酰丁香酮，這些物質(zhì)主要在雙子葉植物細(xì)胞壁中合成，通常不存在于單子葉植物中，這也是單子葉植物不易被根瘤農(nóng)桿菌侵染的原因。 酚類物質(zhì)和糖類物質(zhì)既可以作為根瘤農(nóng)桿菌的趨化物，又可以作為農(nóng)桿菌中Ti質(zhì)粒上

15、Vir區(qū)（毒性區(qū)）基因的誘導(dǎo)物，使Vir區(qū)基因活化，導(dǎo)致T-DNA的加工和轉(zhuǎn)移，從而侵染植物細(xì)胞。尋根問底深度思考 基因槍法又稱微彈轟擊法，是利用壓縮氣體產(chǎn)生的動力，將包裹在金屬顆粒表面的表達(dá)載體DNA打入受體細(xì)胞中，使目的基因與其整合并表達(dá)的方法。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的其他方法：單子葉植物中常用的一種基因轉(zhuǎn)化方法 植物花粉在柱頭上萌發(fā)后，花粉管要穿過花柱直通胚囊。花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管還未愈合前，剪去柱頭，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道進(jìn)入受體細(xì)胞。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的其他方法：2.將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞（1）方法：顯微注射技術(shù)（最常用

16、、最有效）（2）轉(zhuǎn)化過程：基因工程的基本操作程序三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞發(fā)育成新性狀動物顯微注射取卵（受精卵）目的基因表達(dá)載體提純受精卵發(fā)育、移植3.將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞（1）原核生物作受體細(xì)胞的優(yōu)點（2）轉(zhuǎn)化過程：基因工程的基本操作程序三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對較少。（應(yīng)用最為廣泛-大腸桿菌）受體細(xì)胞（大腸桿菌）感受態(tài)細(xì)胞表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子完成轉(zhuǎn)化過程Ca2+處理細(xì)胞細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)1.檢測與鑒定的目的2.基本思路基因工程的基本操作程序四、目的基因的檢測與鑒定-檢查基因工程是否做成功 確定目的

17、基因進(jìn)入受體細(xì)胞后，是否可以穩(wěn)定維持和表達(dá)其遺傳特性。檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA 上是否插入了目的基因檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA個體生物學(xué)水平的鑒定檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)方法DNA分子雜交方法分子雜交（RNA/DNA雜交）方法抗原-抗體雜交抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等檢測鑒定基因工程的基本操作程序四、目的基因的檢測與鑒定-檢查基因工程是否做成功DNA分子雜交技術(shù)檢測 被檢測的轉(zhuǎn)基因生物的基因組DNA被放射性標(biāo)記的含目的基因DNA片段的探針如果最后出現(xiàn)“雜交帶”，則表明目的基因已插入受體DNA中基因工程的基本操作程序四、目的基因的檢測與鑒定-檢查基因工程是否做成功RNA/DNA分

18、子雜交技術(shù)檢測與被檢測的轉(zhuǎn)基因生物的提取出的mRNA混合被放射性標(biāo)記的含目的基因DNA片段的探針如果最后出現(xiàn)“雜交帶”，則表明目的基因轉(zhuǎn)錄出了mRNAWestern雜交：蛋白質(zhì)分子（抗原抗體）之間的雜交。它是檢測目的基因是否表達(dá)出蛋白質(zhì)的一種方法。具體做法是：第一步，將目的基因在大腸桿菌中表達(dá)出蛋白質(zhì)；第二步，將表達(dá)出的蛋白質(zhì)注射動物進(jìn)行免疫，產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，并提取出抗體（一抗）；第三步，從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，走凝膠電泳；第四步，將凝膠中的蛋白轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上；第五步，將抗體（一抗）與硝酸纖維素膜上的蛋白雜交，這時抗體（一抗）與目的基因表達(dá)的蛋白（抗原）會特異結(jié)合。由于這種抗原抗體的結(jié)

19、合顯示不出條帶，所以加入一種稱為二抗的抗體，它可以與一抗結(jié)合，二抗抗體上帶有特殊的標(biāo)記。如果轉(zhuǎn)基因生物的目的基因表達(dá)出了特定蛋白質(zhì)，則結(jié)果為陽性?；蚬こ痰幕静僮鞒绦蛩摹⒛康幕虻臋z測與鑒定-檢查基因工程是否做成功抗原-抗體雜交技術(shù)檢測基因工程的基本操作程序四、目的基因的檢測與鑒定-檢查基因工程是否做成功個體生物學(xué)水平的鑒定鑒定個體生物學(xué)特性是否達(dá)到預(yù)期：如植物個體的抗蟲性或抗病性如：通過抗蟲或抗病的接種實驗， 確定植物個體是否具有抗性以及抗性的程度。又如：通過生物個體產(chǎn)品功能活性的比較實驗， 確定轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的功能活性是否與天然產(chǎn)品相同。基因工程的基本操作流程小結(jié)歸納: 基因工程的基本操作程

20、序獲取目的基因從基因文庫利用PCR化學(xué)方法人工合成構(gòu)建基因表達(dá)載體目的基因、啟動子、終止子、標(biāo)記基因?qū)⒛康幕驅(qū)胧荏w細(xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、顯微注射法、Ca2+處理法目的基因的檢測與鑒定檢測：是否插入、轉(zhuǎn)錄、翻譯鑒定：個體生物學(xué)水平的鑒定1.作為基因工程表達(dá)載體，只需含有目的基因就可以完成任務(wù)嗎？為什么？不可以。因為目的基因在表達(dá)載體中得到表達(dá)并發(fā)揮作用，還需要有其他控制元件，如啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。必須構(gòu)建上述元件的主要理由是：（1） 生物之間進(jìn)行基因交流，需要使用啟動子才能比較有利于基因的表達(dá)。如通過cDNA文庫獲得的目的基因沒有啟動子，只將編碼序列導(dǎo)入受體生物中，此目的基因無法進(jìn)行轉(zhuǎn)錄

21、；（2） 目的基因是否導(dǎo)入受體生物中需要有篩選標(biāo)記；（3） 為了增強(qiáng)目的基因的表達(dá)水平，往往還要增加一些其他調(diào)控元件，如增強(qiáng)子等；（4） 有時需要確定目的基因表達(dá)的產(chǎn)物存在于細(xì)胞的什么部位，往往要加上可以標(biāo)識存在部位的基因，如綠色熒光蛋白基因等 深度思考2.若想將一個抗病基因?qū)雴巫尤~植物（如小麥），從理論上說，你認(rèn)為應(yīng)該怎樣做？深度思考 如果想將一個抗病基因轉(zhuǎn)入小麥，也可以用農(nóng)桿菌，但要注意兩點：要選擇合適的農(nóng)桿菌菌株，因為不是所有的農(nóng)桿菌菌株都可以侵染單子葉植物；要加趨化和誘導(dǎo)的物質(zhì)，一般為乙酰丁香酮等，目的是使農(nóng)桿菌向植物組織的受傷部位靠攏（趨化性）和激活農(nóng)桿菌的Vir區(qū)（誘導(dǎo)性）的基因

22、，使T-DNA轉(zhuǎn)移并插入到染色體DNA上。3.利用大腸桿菌可以生產(chǎn)出人的胰島素，聯(lián)系前面有關(guān)細(xì)胞器功能的知識，結(jié)合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生產(chǎn)人的糖蛋白，可以用大腸桿菌嗎？ 有些蛋白質(zhì)肽鏈上有共價結(jié)合的糖鏈，這些糖鏈?zhǔn)窃趦?nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體上加工完成的，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體存在于真核細(xì)胞中，大腸桿菌不存在這兩種細(xì)胞器，因此，在大腸桿菌中生產(chǎn)這種糖蛋白是不可能的。深度思考基本操作如下：（1）從小鼠中克隆出-珠蛋白基因的編碼序列（cDNA）。（2）將cDNA前接上在大腸桿菌中可以適用的啟動子，另外加上抗四環(huán)素的基因，構(gòu)建成一個表達(dá)載體。（3）將表達(dá)載體導(dǎo)入無四環(huán)素抗性的大腸桿菌中

23、，然后在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)大腸桿菌。如果表達(dá)載體未進(jìn)入大腸桿菌中，大腸桿菌會因不含有抗四環(huán)素基因而死掉；如果培養(yǎng)基上長出大腸桿菌菌落，則表明-珠蛋白基因已進(jìn)入其中。（4）培養(yǎng)進(jìn)入了-珠蛋白基因的大腸桿菌，收集菌體，破碎后從中提取-珠蛋白。深度思考4.-珠蛋白是動物血紅蛋白的重要組成成分。當(dāng)它的成分異常時，動物有可能患某種疾病，如鐮刀形細(xì)胞貧血癥。假如讓你用基因工程的方法，使大腸桿菌生產(chǎn)出鼠的-珠蛋白，想一想，應(yīng)如何進(jìn)行設(shè)計？1. 有關(guān)基因工程的敘述正確的是 （ ） A、限制酶只在獲得目的基因時才用 B、重組質(zhì)粒的形成在細(xì)胞內(nèi)完成 C、質(zhì)粒都可作為運載體 D、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)可為合成目的基因提供資料D練習(xí)練習(xí)2基因工程的操作步驟（ ）使目的基因與運載體相結(jié)合將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞檢測目的基因的表達(dá)是否符合特定性狀要求提取目的基因，正確的操作順序是ABCD3多聚酶鏈反應(yīng)可表示為 （ ）A、PECB、PERC、PDR D、PCR練習(xí)P