核酸檢測(cè)全覆蓋后仍需關(guān)注 或探討的問(wèn)題

1、核酸檢測(cè)全覆蓋后仍需關(guān)注 或探討的問(wèn)題關(guān)注或探討的問(wèn)題:血液篩查實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù) 改進(jìn)問(wèn)題？核酸檢測(cè)全覆蓋后的血液篩查策略問(wèn) 題？核酸檢測(cè)全覆蓋后ELISA檢測(cè)的灰區(qū)設(shè) 置問(wèn)題？化學(xué)發(fā)光檢測(cè)技術(shù)引入血液篩查的必 要性？實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)2016年全國(guó)血液安全技術(shù)核查(一般 血站)1-是否建立血液核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量 管理體系和工作制度,明確相關(guān)責(zé)任人并 將實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制和監(jiān)督管理納入日常 質(zhì)量管理實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系和工作制 度不完善;血液篩查實(shí)驗(yàn)室(酶免與核酸檢測(cè))質(zhì)量 管理體系的有機(jī)融合(檢驗(yàn)科)；核酸血液篩查納入整個(gè)血液質(zhì)量管理體 系:過(guò)

2、程檢查、內(nèi)審、外審、管理評(píng)審（ 質(zhì)量管理科）實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)核酸血液篩查的過(guò)程檢查及內(nèi)審的依據(jù)血站實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理規(guī)范血站技術(shù)操作規(guī)程（2015版）實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn) 4.3儀器設(shè)備使用要求4.3.1新的或者經(jīng)過(guò)維修后可能影響檢測(cè)結(jié)果 的檢測(cè)設(shè)備在正式投入正常使用之前應(yīng)經(jīng)過(guò) 確認(rèn)。新設(shè)備的確認(rèn)應(yīng)包括安裝確認(rèn)、運(yùn)行 確認(rèn)和性能確認(rèn)。經(jīng)過(guò)大修的設(shè)備根據(jù)需要 進(jìn)行適當(dāng)確認(rèn)，必要時(shí)應(yīng)進(jìn)行計(jì)量檢定或校 準(zhǔn)。核酸檢測(cè)系統(tǒng)正式投入使用之前，還應(yīng) 進(jìn)行分析靈敏度驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)4.5核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室防污染控制4.5.1核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室分區(qū)及功能要求。原 則上可以設(shè)置3個(gè)獨(dú)立的

3、工作區(qū)域: 試劑耗 材儲(chǔ)存與準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本處理和標(biāo)本制備區(qū)（ 核酸純化）、擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)，各區(qū)域空間完全 相互獨(dú)立，不能直接相通。其中試劑耗材儲(chǔ) 存與準(zhǔn)備區(qū)必須獨(dú)立設(shè)置；如果單機(jī)檢測(cè)設(shè) 備可以實(shí)現(xiàn)混樣、核酸純化、擴(kuò)增檢測(cè)中的 兩項(xiàng)或多項(xiàng)功能，相關(guān)區(qū)域可以根據(jù)設(shè)備功 能進(jìn)行相應(yīng)合并。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)條款解讀各區(qū)的功能要求試劑耗材儲(chǔ)存與準(zhǔn)備區(qū)：該區(qū)必須獨(dú)立設(shè)置。用于試劑的制備、分裝和擴(kuò)增反應(yīng)混合液 的準(zhǔn)備；離心管、吸頭等耗材的貯存和準(zhǔn)備。試劑盒中的陽(yáng)性對(duì)照品及質(zhì)控品不能保存 在該區(qū)，應(yīng)保存在標(biāo)本處理和標(biāo)本制備區(qū)。標(biāo)本處理和標(biāo)本制備區(qū)：核酸純化前標(biāo)本的 保存、開(kāi)蓋和混合；核酸的提取和純化擴(kuò)增檢

4、測(cè)區(qū)：cDNA合成、DNA擴(kuò)增及檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)條款解讀分區(qū)要求各區(qū)必需獨(dú)立設(shè)置,不能直接相通。物理上完全分開(kāi)的各自獨(dú)立的區(qū)域；分區(qū)裝修隔斷必需密封，不能留有門(mén)縫；不能有通過(guò)連通各區(qū)的中央空調(diào)（室內(nèi)機(jī)為 自循環(huán)除外）；如設(shè)置傳遞窗必需為雙開(kāi)門(mén)密封嚴(yán)實(shí)的有連 鎖裝置的傳遞窗；實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)條款解讀非單機(jī)檢測(cè)設(shè)備必須分3個(gè)獨(dú)立的工作區(qū):試劑耗材儲(chǔ)存與準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本處理和標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)單機(jī)檢測(cè)設(shè)備可以分2個(gè)獨(dú)立的工作區(qū)試劑試劑耗材儲(chǔ)存與準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本處理制備、擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)常用的核酸檢測(cè)系統(tǒng)的分區(qū)設(shè)置按照“4.5.1條款”的分區(qū)要求基立福的Pro

5、cleix TIGRIS系統(tǒng)，至少設(shè)2個(gè) 區(qū)，試劑耗材儲(chǔ)存與準(zhǔn)備區(qū)，標(biāo)本處理和標(biāo) 本制備區(qū)（核酸純化）區(qū)、擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)合并。（建議也設(shè)3個(gè)區(qū)）羅氏COBAS s201系統(tǒng)、科華、浩源、達(dá)安、 華益美、萬(wàn)泰核酸檢測(cè)系統(tǒng)，設(shè)3個(gè)區(qū)，試 劑耗材儲(chǔ)存與準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本處理和標(biāo)本制備 區(qū)（核酸純化）、擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)系統(tǒng)（4.5.2條款） 實(shí)驗(yàn)室實(shí)施空氣流向控制，擴(kuò)增前和擴(kuò)增 后區(qū)域應(yīng)具有獨(dú)立通風(fēng)系統(tǒng)，擴(kuò)增后區(qū)域 保持負(fù)壓狀態(tài)，其它區(qū)域保持正壓或常壓 狀態(tài)，防止擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)入擴(kuò)增前的區(qū)域。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)條款解讀標(biāo)本處理和標(biāo)本制備區(qū)和擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)， 要有獨(dú)立通

6、風(fēng)系統(tǒng)；試劑耗材儲(chǔ)存與準(zhǔn)備區(qū)和標(biāo)本處理和標(biāo) 本制備區(qū)最好為正壓狀態(tài)，也可為常壓 狀態(tài)；擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)必須為負(fù)壓狀態(tài)；控制空氣流向：從試劑耗材儲(chǔ)存與準(zhǔn)備 區(qū)標(biāo)本處理和標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增檢測(cè) 區(qū)的方向流動(dòng)。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)條款解讀控制空氣流向的目的：在物理空間完全相互獨(dú)立的基礎(chǔ)上，各區(qū) 域無(wú)論在空間上還是在使用中，始終處于 完全的分隔狀態(tài)，不能有空氣的直接相通。防止擴(kuò)增產(chǎn)物順空氣氣流進(jìn)入上游擴(kuò)增前 的“潔凈”區(qū)域。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)條款解讀實(shí)驗(yàn)室空氣流向的控制手段：通過(guò)緩沖間正壓進(jìn)風(fēng)控制空氣流向：在緩沖間頂上安設(shè)進(jìn)風(fēng)裝置，經(jīng)通風(fēng)管道 進(jìn)行送風(fēng)，當(dāng)進(jìn)風(fēng)裝置運(yùn)行時(shí)，緩沖間內(nèi) 即為正壓狀態(tài)

7、，形成一個(gè)“風(fēng)簾”，使實(shí) 驗(yàn)區(qū)域內(nèi)的空氣不能流向?qū)嶒?yàn)室外。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)條款解讀通過(guò)相對(duì)正壓控制空氣流向?qū)嶒?yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)條款解讀通過(guò)緩沖間負(fù)壓排風(fēng)控制空氣流向：在緩沖間頂上安設(shè)排風(fēng)裝置，經(jīng)通風(fēng)管道 向大氣外進(jìn)行排風(fēng)，當(dāng)排風(fēng)裝置運(yùn)行時(shí)， 緩沖間即為負(fù)壓狀態(tài)，一旦有實(shí)驗(yàn)區(qū)外的 風(fēng)進(jìn)入，其在緩沖間內(nèi)即被抽走，從而實(shí) 驗(yàn)室外的空氣不會(huì)到實(shí)驗(yàn)區(qū)域內(nèi)。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)條款解讀通過(guò)相對(duì)負(fù)壓控制空氣流向?qū)嶒?yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)條款解讀通過(guò)在不同區(qū)內(nèi)安裝獨(dú)立的通風(fēng)系統(tǒng)， 通過(guò)控制各區(qū)的給排風(fēng)強(qiáng)度，形成負(fù)壓 差，控制空氣從試劑耗材儲(chǔ)存與準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本處理和標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)

8、 的方向流動(dòng)，避免空氣的反向流動(dòng)，將 后區(qū)的擴(kuò)增產(chǎn)物帶向前區(qū)的潔凈區(qū)域?？赏ㄟ^(guò)在房間內(nèi)安裝不同功率或數(shù)量的 排風(fēng)扇來(lái)滿(mǎn)足要求，簡(jiǎn)便易行。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的清潔、消毒及環(huán)境監(jiān) 控。（4.5.3條款） 核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具有清潔、消毒設(shè)施，在 試驗(yàn)結(jié)束后對(duì)實(shí)驗(yàn)室地面、實(shí)驗(yàn)臺(tái)面和空氣 實(shí)施清潔和消毒。消毒時(shí)應(yīng)使用各區(qū)域?qū)Ｓ?的清潔用具，遵循從清潔區(qū)域向污染區(qū)域?qū)?施消毒的原則，防止交叉污染。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)條款解讀實(shí)驗(yàn)室須配備的清潔、消毒設(shè)施。各區(qū)緩沖間、工作區(qū)域內(nèi)應(yīng)有固定于房頂?shù)淖?外燈，便于工作后區(qū)域內(nèi)的空氣照射；傳遞窗內(nèi)應(yīng)有紫外照射裝置；各工作區(qū)域內(nèi)應(yīng)配備可

9、移動(dòng)紫外燈，便于工作 后實(shí)驗(yàn)臺(tái)面的照射；70%的乙醇，用于儀器設(shè)備的擦拭；濃的次氯酸鈉溶液（5g/100ml)，次氯酸鈉溶液 應(yīng)用液配制器具，如塑料量筒或量杯等。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)條款解讀試驗(yàn)結(jié)束后的實(shí)驗(yàn)室清潔、消毒方法各區(qū)域清潔、消毒用具專(zhuān)用（有區(qū)別標(biāo)志）；順序：從試劑耗材儲(chǔ)存與準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本處理和 標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)；地面使用2%10%的次氯酸鈉，實(shí)驗(yàn)臺(tái)面使用 10%的次氯酸鈉清潔，作用一定時(shí)間后，用清 水洗去次氯酸鈉。次氯酸鈉新鮮配制。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)條款解讀實(shí)驗(yàn)室的清潔、消毒方法儀器設(shè)備用一次性紙巾或無(wú)紡布和70%的乙醇 擦拭；可移動(dòng)紫外燈近距離照射可能受污染的實(shí)驗(yàn)

10、臺(tái) 面(1小時(shí)以上)；空氣消毒：紫外線(xiàn)照射；實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室污染的控制(4.5.4條款)單向工作流向制度。防止實(shí)驗(yàn)室核酸擴(kuò)增產(chǎn)物污染和交叉污染的 措施。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)條款解讀單向工作流向制度標(biāo)本處理區(qū)不能兼做標(biāo)本接收，防止過(guò)多人員 進(jìn)入標(biāo)本處理區(qū)域造成污染；實(shí)驗(yàn)室人員和物品的工作流向：試劑耗材儲(chǔ)存 與準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本處理和標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增檢測(cè) 區(qū)的方向，不得逆向流動(dòng)；需要逆向流動(dòng)的非一次性的試管架、載架等實(shí) 驗(yàn)器材，必需經(jīng)清潔、消毒后才能返回上個(gè)工 作區(qū)。剩余試劑和耗材不能再返回試劑耗材儲(chǔ)存與準(zhǔn) 備區(qū)。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)條款解讀防止實(shí)驗(yàn)室核

11、酸擴(kuò)增產(chǎn)物污染和交叉污染的 措施。嚴(yán)格執(zhí)行實(shí)驗(yàn)室分區(qū)制度；各區(qū)域只用于特定的操作，不得從事其它工 作；（注意核酸提取試劑的儲(chǔ)存和準(zhǔn)備）各區(qū)域的試劑、儀器、設(shè)備及各種物品包括 試驗(yàn)記錄、標(biāo)記筆等均為該區(qū)專(zhuān)用，不得交 叉使用。（各區(qū)可移動(dòng)物品的標(biāo)識(shí)）實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn) 4.6.3 血液標(biāo)本管的選擇4.6.3.1 核酸檢測(cè)標(biāo)本管應(yīng)使用無(wú)菌、無(wú)DNA 酶、無(wú)RNA酶的真空采血管，宜采用含惰性 分離膠的乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗 凝真空采血管。采血管的保存溫度應(yīng)不高于 25C。標(biāo)本因運(yùn)輸或檢測(cè)頻次等原因不能在 72小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)時(shí)，標(biāo)本需要進(jìn)行冷凍保 存，冷凍保存的采血管應(yīng)經(jīng)過(guò)性能驗(yàn)

12、證，包 括采血管材質(zhì)耐低溫性能、惰性分離膠耐低 溫性能。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn) 4.6.4 血液標(biāo)本的采集與標(biāo)識(shí)4.6.5.2 核酸檢測(cè)標(biāo)本采集后，應(yīng)在4小時(shí)內(nèi) 離心，分離細(xì)胞和血漿。如不能按上述要求 處理采集的標(biāo)本，應(yīng)對(duì)所采集標(biāo)本的處理方 式進(jìn)行確認(rèn)，應(yīng)定期進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)控。標(biāo)本需 要冰凍運(yùn)輸或保存的，宜采用水平離心機(jī)， 以防止二次離心時(shí)膠面不平整發(fā)生斷裂；離 心后24小時(shí)內(nèi)在-40C -18C凍存。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn) 4.6.8 標(biāo)本接收后的處理及保存4.6.8. 1 核酸檢測(cè)標(biāo)本的開(kāi)蓋應(yīng)在生物安全 柜或正壓環(huán)境中，或者全自動(dòng)開(kāi)蓋系統(tǒng)中進(jìn) 行，自動(dòng)開(kāi)蓋和手工開(kāi)蓋均應(yīng)有防止標(biāo)本交

13、 叉污染的措施。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn) 4.6.8 標(biāo)本接收后的處理及保存4.6.8. 2核酸檢測(cè)標(biāo)本加樣（匯集）前和加 樣（匯集）后轉(zhuǎn)移在2-8中保存。用于血 清學(xué)檢測(cè)的標(biāo)本，應(yīng)于采樣后1周內(nèi)完成檢 測(cè)；用于核酸檢測(cè)的標(biāo)本應(yīng)于采樣后72小 時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)，因特殊情況不能在上述時(shí)限 內(nèi)完成檢測(cè)的標(biāo)本應(yīng)在-20以下凍存。凍 存的標(biāo)本應(yīng)在2-8C或18-25C條件下復(fù)融。 完全復(fù)融后標(biāo)本輕輕顛倒混勻3-5次，如有 纖原析出，應(yīng)在標(biāo)本采集時(shí)的離心條件下進(jìn) 行再次離心，同時(shí)檢查標(biāo)本條碼是否破損。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn) 4.8試驗(yàn)性能監(jiān)控反映試驗(yàn)系統(tǒng)變化的參數(shù)：核酸檢測(cè) 系統(tǒng)初篩陽(yáng)性率（混檢或

14、聯(lián)檢陽(yáng)性率）、鑒 別陽(yáng)性率、拆分陽(yáng)性率等。用于實(shí)時(shí)監(jiān)控試驗(yàn)性能的試驗(yàn)對(duì)照和 質(zhì)控品若由試劑廠商提供，其檢測(cè)值應(yīng)滿(mǎn)足 試劑說(shuō)明書(shū)的有效性判定標(biāo)準(zhǔn)。在此基礎(chǔ)上，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)增加使用第三方提供的質(zhì)控品（ 外部質(zhì)控品）實(shí)時(shí)監(jiān)控試驗(yàn)性能。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)CT羅氏A機(jī)HIV-RNA 2月質(zhì)控圖393837363534333231日期室內(nèi)質(zhì)控及CT值變化趨勢(shì)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)CT羅氏C機(jī)HIV-RNA 2月質(zhì)控圖42.041.040.039.038.037.036.035.034.033.032.0日期室內(nèi)質(zhì)控及CT值變化趨勢(shì)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn) 4.9 試驗(yàn)結(jié)果的判定4.9.4

15、對(duì)基于PCR檢測(cè)原理的核酸檢測(cè)系統(tǒng)，應(yīng)觀察整體擴(kuò)增曲線(xiàn)，對(duì)結(jié)果的有效性 進(jìn)行判定。對(duì)非特異擴(kuò)增曲線(xiàn)，應(yīng)分析原 因，必要時(shí)對(duì)該標(biāo)本重新進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)異常擴(kuò)增曲線(xiàn)的分析實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)異常擴(kuò)增曲線(xiàn)的分析實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)異常擴(kuò)增曲線(xiàn)的分析實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)異常擴(kuò)增曲線(xiàn)的分析實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)異常擴(kuò)增曲線(xiàn)的分析異常擴(kuò)增曲線(xiàn)的分析實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)異常擴(kuò)增曲線(xiàn)的分析實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)異常擴(kuò)增曲線(xiàn)的分析實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)異常擴(kuò)增曲線(xiàn)的分析陰性對(duì)照呈陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)實(shí)

16、驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)COBASs201 一代試劑樣本 CT=24.7, IC部分被抑制，為HCV陽(yáng)性樣本實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn)COBASs201 一代試劑樣本病毒載量濃度過(guò)高， CT=19.2, IC完全被抑制，為HIV陽(yáng)性樣本實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的持續(xù)改進(jìn) cobas s 201二代試劑：采用多色熒光檢測(cè)技術(shù)， 1管 同時(shí)檢測(cè)并鑒別3種病毒。在病毒高拷貝情況下的內(nèi)標(biāo)被 抑制也有所改進(jìn)。CH1為HIV、CH2為HBV CH3為HCV、CH4為內(nèi)標(biāo)血液篩查策略問(wèn)題血站技術(shù)操作規(guī)程(2015版)4.1.2.2 檢測(cè)策略（1）HIV、HBV和HCV:實(shí)施核酸檢測(cè)試劑批簽 發(fā)之前，應(yīng)采用2遍

17、血清學(xué)檢測(cè)和1遍核酸 檢測(cè)；試劑批簽發(fā)之后，應(yīng)采用核酸和血 清學(xué)檢測(cè)2種方法各進(jìn)行1次檢測(cè)。對(duì)于酶 免檢測(cè)陽(yáng)性的標(biāo)本可不再進(jìn)行核酸檢測(cè)， 直接視為該項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果不合格。血液篩查策略問(wèn)題血站技術(shù)操作規(guī)程(2015版)4.1.2.2 檢測(cè)策略（1）HIV、HBV和HCV:實(shí)施核酸檢測(cè)試劑批簽 發(fā)之前，應(yīng)采用2遍血清學(xué)檢測(cè)和1遍核酸 檢測(cè)；試劑批簽發(fā)之后，應(yīng)采用核酸和血 清學(xué)檢測(cè)2種方法各進(jìn)行1次檢測(cè)。對(duì)于酶 免檢測(cè)陽(yáng)性的標(biāo)本可不再進(jìn)行核酸檢測(cè)， 直接視為該項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果不合格。血液篩查策略問(wèn)題血站技術(shù)操作規(guī)程(2015版)4.1.2.2 檢測(cè)策略（1）HIV、HBV和HCV:實(shí)施核酸檢測(cè)試劑批簽 發(fā)

18、之前，應(yīng)采用2遍血清學(xué)檢測(cè)和1遍核酸 檢測(cè)；試劑批簽發(fā)之后，應(yīng)采用核酸和血 清學(xué)檢測(cè)2種方法各進(jìn)行1次檢測(cè)。對(duì)于酶 免檢測(cè)陽(yáng)性的標(biāo)本可不再進(jìn)行核酸檢測(cè)， 直接視為該項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果不合格。血液篩查策略問(wèn)題樣本總 數(shù)復(fù)檢所用 試劑結(jié)果 為陰性復(fù)檢出現(xiàn)1 家或以上試 劑陽(yáng)性確認(rèn)結(jié)果陰性不確定陽(yáng)性1028204824138635511.600.321.280.220.990.08摘自王露楠課件抗HCV酶免單試劑陽(yáng)性的結(jié)果(2010年核酸 檢測(cè)試點(diǎn)單位數(shù)據(jù)641,482血液篩查策略問(wèn)題126457份獻(xiàn)血者樣本檢出ELISA單試劑 反應(yīng)性、NAT陰性標(biāo)本352例：抗-HCV：A試劑反應(yīng)性79例，確證試驗(yàn)（R

19、IBA）陽(yáng)性1例，隨訪(fǎng)3個(gè)月后仍為 陽(yáng)性；B試劑反應(yīng)性36例，RIBA陽(yáng)性4 例，隨訪(fǎng)3個(gè)月后，4例中RIBA試驗(yàn)1例 轉(zhuǎn)為陰性，1例轉(zhuǎn)為不確定，2例仍為 陽(yáng)性。血液篩查策略問(wèn)題HBsAg：A試劑反應(yīng)性112例，確證 試驗(yàn)（中和試驗(yàn)）陽(yáng)性11例，有8例實(shí) 現(xiàn)成功隨訪(fǎng)，3個(gè)月后2例轉(zhuǎn)為陰性，1 例轉(zhuǎn)為A和C雙試劑反應(yīng)性，但NAT陰 性、中和試驗(yàn)陽(yáng)性，5例仍為A試劑反應(yīng) 性及中和試驗(yàn)陽(yáng)性、但4例NAT轉(zhuǎn)為陽(yáng) 性；C試劑反應(yīng)性37例，中和試驗(yàn)陽(yáng)性 1例，3個(gè)月后隨訪(fǎng)仍為陽(yáng)性。血液篩查策略問(wèn)題抗-HIV-1/2：ELISA單試劑反應(yīng)性、 NAT陰性88例，確證試驗(yàn)（WB）均為 陰性。HBsAg ELI

20、SA A試劑反應(yīng)性、NAT陽(yáng)性 5例（5/11）；未檢出抗-HIV-1/2、 抗-HCV ELISA單試劑反應(yīng)性伴NAT陽(yáng) 性標(biāo)本。血液篩查策略問(wèn)題雖然血站實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理水平有了很大的提 高，但實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)能力受到：不同ELISA試劑廠家檢測(cè)HBsAg突變株的能力 及檢測(cè)靈敏度的不同各廠家anti-HCV的ELISA檢測(cè)試劑質(zhì)量差別;各廠家Anti-HIV的ELISA檢測(cè)試劑質(zhì)量差異 較小，檢測(cè)靈敏度和特異性普遍較高；再者 幾乎沒(méi)有Anti-HIV陽(yáng)性而核酸陰性感染者;血液篩查策略問(wèn)題HBV和HCV仍采用2遍ELISA檢測(cè)和1遍 核酸檢測(cè);HIV采用1遍ELISA檢測(cè)和1遍核酸檢 測(cè);血站技術(shù)

21、操作規(guī)程（2015版）檢測(cè)方法檢測(cè)方法包括：核酸擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)，包括轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的核酸擴(kuò) 增檢測(cè)技術(shù)（TMA）、實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）；血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)，包括酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、化學(xué)發(fā)光免疫分析試驗(yàn)（CLIA）?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)引入血液 篩查的必要性化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)CLEIA直接CLIAECLIA標(biāo)記物Apase/HRP吖啶酯三聯(lián)吡啶釕反應(yīng)類(lèi)型夾心法 競(jìng)爭(zhēng)法夾心法 競(jìng)爭(zhēng)法夾心法 競(jìng)爭(zhēng)法發(fā)光底物魯米諾NaOH-H2O2電激發(fā)光信號(hào)輝光閃光電激發(fā)閃光簡(jiǎn)便快速較快速快速最快速影響因素較多少少檢測(cè)成本低高高化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑的評(píng)價(jià)國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委臨檢中心評(píng)估項(xiàng)目樣本總數(shù)為3448份,來(lái)

22、自國(guó)家衛(wèi)計(jì) 委臨床檢驗(yàn)中心和14家血站ElISA篩查HBsAg反應(yīng)性樣本896份HCV抗體反應(yīng)性樣本724份HIV抗體反應(yīng)性樣本453份TP抗體反應(yīng)性樣本793份陰性樣本582份樣本總數(shù)HBsAgHCVHIVTPELISAELISA試劑廠家 代碼230032300123021230892310723081230432300323001230212308923107230812308523043230432300123003230812308923085231072300323001230432308123016參與評(píng)估血站 數(shù)量均為3個(gè)血站23001有4個(gè)血站參與評(píng)估，其 他為3個(gè)血站2308

23、9、23085試劑有4個(gè)血站的參與評(píng)估， 其他為3個(gè)血站23043試劑有5個(gè)血站參與評(píng)估 其他為3個(gè)血站，試劑評(píng)價(jià)范圍和方法廠家試劑檢測(cè)結(jié)果的確定：參與血站實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性時(shí)，結(jié)果判 定為陽(yáng)性；檢測(cè)結(jié)果均為陰性時(shí)，結(jié)果判定為陰性；檢測(cè)結(jié)果不一致時(shí)，以多數(shù)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果 為準(zhǔn)；檢測(cè)結(jié)果不一致且不同結(jié)果數(shù)為1:1時(shí)，請(qǐng)實(shí) 驗(yàn)室進(jìn)行雙孔復(fù)檢。試劑評(píng)價(jià)范圍和方法各項(xiàng)目每個(gè)樣本最終結(jié)果的確定 :國(guó)家衛(wèi)計(jì)委臨床檢驗(yàn)中心使用兩個(gè)廠家化學(xué)發(fā)光試劑 進(jìn)行檢測(cè)；各參與血站使用各廠家的ELISA試劑常規(guī) 檢測(cè)，以S/CO1作為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)，S/CO1 作為 陰性判定標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)報(bào)告樣本檢測(cè)的S/CO值。所有廠

24、 家檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性時(shí)即確定為真陽(yáng)性，所有廠家檢 測(cè)結(jié)果均為陰性時(shí)即判為真陰性，結(jié)果不一致時(shí)，采 用確認(rèn)的方法。剔出結(jié)果不確定的樣本,不納入數(shù)據(jù) 統(tǒng)計(jì)。試劑評(píng)價(jià)范圍和方法各個(gè)項(xiàng)目的確認(rèn)方法：HBsAg:中和試驗(yàn)采用對(duì)應(yīng)的化學(xué)發(fā)光的中和試劑進(jìn)行，有任何 一家確認(rèn)試劑確認(rèn)為陽(yáng)性的，該樣本檢測(cè)結(jié)果即為陽(yáng)性 ?？笻CV:所有檢測(cè)結(jié)果不一致的樣本均作單人份核酸檢測(cè)和RIBA 實(shí)驗(yàn)，核酸陽(yáng)性或RIBA陽(yáng)性均判定為該樣本為陽(yáng)性，核酸陰性 且RIBA陰性判為該樣本檢測(cè)結(jié)果為陰性。核酸陰性且RIBA結(jié)果 不確定時(shí)，該樣本不用于產(chǎn)生試劑評(píng)估的數(shù)據(jù)。抗HIV: 所有檢測(cè)結(jié)果不一致的樣本均作單人份核酸檢測(cè)，核酸陽(yáng)性即

25、最終結(jié)果為陽(yáng)性，核酸陰性即最終結(jié)果為陰性。TP: 作TPPA、WB(IgG IgM)檢測(cè)，任何一個(gè)方法確認(rèn)陽(yáng)性即為陽(yáng) 性結(jié)果。各方法確認(rèn)均為陰性時(shí)結(jié)果為陰性。試劑評(píng)價(jià)范圍和方法ELISA血篩試劑盒灰區(qū)界點(diǎn)值的確定數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)利用SSPS軟件分析試劑評(píng)估數(shù)據(jù)。計(jì)算在 不同S/CO值下試劑的約登指數(shù)，約登指數(shù)=（靈敏度+特異性）-1，以S/CO值為橫坐標(biāo)，約登指數(shù)為縱坐標(biāo)，繪制曲線(xiàn)?；瘜W(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑與ELISA試劑的評(píng)價(jià)HBsAg檢測(cè)試劑的靈敏度和特異性比較試劑代碼靈敏度（）特異性（）約登指數(shù)2300190.5897.710.882300384.4298.510.832302191.6197.020.892304381.5197.020.782308184.5998.240.832308986.9992.570.802310791.2795.420.87羅氏發(fā)光99.6698.720.98Y家發(fā)光96.4099.310.95化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑與ELISA試劑的評(píng)價(jià)HCV抗體檢測(cè)試劑的靈敏度和特異性比較試劑代碼靈敏度（）特異性（）約登指數(shù)2300146.6882.120.292300350.5778.160.292302049.4377