活體染色實(shí)驗(yàn)精品課件

1、活體染色實(shí)驗(yàn)課件第1頁，共11頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)45分，星期四活體染色法顯示巨噬細(xì)胞第2頁，共11頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)45分，星期四 定義：活體染色(vital staining)一般是指用無毒或毒性很小的染料,在不影響細(xì)胞的正常生命活動(dòng)的前提下而使活細(xì)胞的某些結(jié)構(gòu)著色的一種實(shí)驗(yàn)方法。 最早進(jìn)行活體染色的是Paul Ehrlich (1885)他把剛切下的新鮮組織浸泡在亞甲基藍(lán)(美藍(lán))溶液中,再用顯微鏡來觀察尚處在生活狀態(tài)下的活細(xì)胞結(jié)構(gòu)。 第3頁，共11頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)45分，星期四實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1、練習(xí)并掌握動(dòng)物組織活體染色方法。 2、學(xué)習(xí)大鼠腸系

2、膜鋪片制作方法。 3、學(xué)習(xí)大鼠皮下結(jié)締組織鋪片制作方法。 4、了解大鼠肝臟石蠟切片制片方法，觀察Kupffer細(xì)胞。第4頁，共11頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)45分，星期四實(shí)驗(yàn)原理 要顯示巨噬細(xì)胞多采用活體染色法，即將一種對動(dòng)物無毒害或毒性很小的染料，用注射器注入動(dòng)物體的腹膜腔或血管內(nèi)，體內(nèi)有吞噬能力的細(xì)胞會將注入的活體染料吞噬入細(xì)胞內(nèi)。然后將動(dòng)物殺死取材，經(jīng)固定、浸洗、復(fù)染、脫水、透明、封固等手續(xù)制成玻片標(biāo)本。 活體染色一般選用的燃料有臺盼藍(lán)、中性紅、鋰洋紅、墨汁等。第5頁，共11頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)45分，星期四實(shí)驗(yàn)材料與器材實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：成年大白鼠實(shí)驗(yàn)試劑與器材：1%臺盼

3、藍(lán)染液，乙醚，福爾馬林，酒精（梯度），harris蘇木精染液、曙紅染液，二甲苯，中性樹膠；手術(shù)器械一套， 5ml注射器，載玻片，蓋玻片，臥式染缸，單面刀片。第6頁，共11頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)45分，星期四實(shí)驗(yàn)步驟1、活體注射 大白鼠麻醉、稱重，按8ml每千克體重動(dòng)物，注射1%的臺盼藍(lán)溶液。每天注射一次，注射45天。第7頁，共11頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)45分，星期四注射前大鼠注射后大鼠第8頁，共11頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)45分，星期四2、取材 動(dòng)物斷頭處死，取皮下結(jié)締組織、腸系膜、肝臟或大網(wǎng)膜為材料。取小塊結(jié)締組織或腸系膜，置于載玻片上，用解剖針盡量將其鋪平，干燥后浸入10%福爾馬林中固定。3、固定 用10%福爾馬林固定1224h。第9頁，共11頁，2022年，5月20日，10點(diǎn)45分，星期四4、浸洗 用70%酒精浸洗數(shù)小時(shí)，中間更換數(shù)次新液，再用蒸餾水浸洗片刻，即可進(jìn)行染色。也可直接進(jìn)入70%酒精中保存。5、染色 固定好的鋪片進(jìn)行常規(guī)HE染色（詳細(xì)過程見石蠟切片制作介紹）。 注意：鹽酸酒精分色要適度，過量會導(dǎo)致巨噬細(xì)胞脫色。第10頁，共1